辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制

目的探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞G1期的分子水平的变化,以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0／G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖。方法体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化。结果辛伐他汀能使K562细胞停滞在G1／G0期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达。结论辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

红芪总黄酮对慢性粒细胞系K562细胞周期及凋亡影响研究

目的观察中药红芪总黄酮对K562细胞周期及凋亡的影响。方法以不同剂量的药物处理K562细胞，MTT法检测红芪总黄酮对细胞的抑制作用，流式细胞仪检测其周期及凋亡的改变。结果与对照组比较，不同浓度红芪总黄酮作用K562细胞24h、48h和72h，K562细胞增殖表现为明显抑制；有一定的时间剂量依赖关系。IC50分别为263．757μg,／ml、120．502μg／ml、117．075μg／ml。药物作用48小时，各药物组与对照组相比吸光度值（A值）均明显降低，有统计学意义（P〈0．01），但无明显凋亡现象，表现为K562细胞阻滞于G0／G1、G2／M期时相。结论红芪总黄酮对K562细胞生长有抑制作用，但其抑制机制不是通过诱导细胞凋亡，而是通过诱导K562细胞的G0／G1、G2／M期阻滞。     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响

目的：探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用．方法：采用四唑蓝比色试验（MTT）检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT—PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平．结果：大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol／L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0／G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性（P〈0．01）;大黄素可触发Caspase-3的活性增高（P〈0．01）,并呈现剂量依赖性;RT—PCR结果显示,Caspase-3 mRNA表达上调．结论：大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关．     

地塞米松对柔红霉素诱导K562细胞核因子kappa B活化及凋亡的影响

目的探讨地塞米松（DXM）对柔红霉素（DNR）诱导K562细胞核因子kappaB（NF—κB）活化及凋亡的影响。方法采用免疫组化二步法检测K562细胞的NF—κB活化,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率。结果DNR同时具有诱导K562细胞凋亡和NF—κB活化的作用;DXM50μg／L能显著抑制DNR诱导的K562细胞的NF—κB活化和增强DNR诱导的K562细胞凋亡,NF—κB活化抑制率为20．17％（P〈0．01）,细胞凋亡增强率为25．44％（P〈0．01）。结论DNR诱导K562细胞凋亡的同时激活NF—κB p65活化;DXM通过抑制NF—κB活化,增强其诱导K562细胞凋亡的作用。     

太白楤木总皂苷对K562细胞增殖抑制及其作用机制的研究

目的 以人慢性髓系白血病细胞株K562细胞为模型,研究太白楤木的体外抗肿瘤活性及其作用机制.方法 MTT法检测太白楤木总皂苷对K562细胞的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳检测K562细胞DNA损伤;流式细胞术检测K562细胞细胞周期的改变.结果 太白楤木总皂苷对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性;能显著诱导K562细胞DNA损伤;促进凋亡的发生;细胞周期阻滞于S期.结论 太白楤木总皂苷能抑制K562细胞的增殖,诱导凋亡发生,其机制可能与通过诱导K562细胞DNA损伤来改变细胞周期时相的分布有关.     

P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.     

三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2／M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

三氧化二砷增强ST1571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨ST1571联合三氧化二砷(arsenie trioxide，ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察ST1571和ATO对CMI，细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 ST1571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡，并使细胞阻滞于G2／M期；当两药物联合运用时，明显增强对K562细胞增殖的抑制作用，细胞凋亡率也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强ST1571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

高三尖杉酯碱诱导K562和CML细胞凋亡及分化的实验研究

目的 明确三尖杉酯碱（HHT）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的机理。方法 应用细胞长曲线、克隆形成能力、细胞内血红蛋白含量测定、细胞形态,结合DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法,观察HHT对K562细胞株及CML慢性期细胞的作用方式。进一步用RT－PCR方法研究bcr-abl、c-myc 、max基因在转录水平的改变。结果 低浓度HHT抑制K562细胞的克隆形成能力并使K562细胞内血红蛋白含量增加;0.1umol /L 及以上浓度HHT可诱导K562细胞及CML细胞凋亡;细胞周期分析发现细胞阻滞于G1期。c-myc基因在加药24h开始下凋; bcr-abl和max基基的表达未见明显改变。结论 低浓度HHT可抑制K562 细胞增殖并诱导其向红系分化;超过一定“ 阈浓度”HHT可诱导K562细胞和CML慢性期细胞凋亡;HHT可通过抑制c-myc/max 表达来阻 滞细胞周期。     

二烯丙基二硫对K562细胞生长抑制和促凋亡的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病K562细胞增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响。方法采用CCK-8技术检测细胞存活率,进行细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测DADS对细胞凋亡及周期的影响。结果 DADS能有效地抑制人白血病K562细胞增殖,15、30、60、120和240μmol/L DADS作用于K562细胞48h后,抑制率分别为26.3%、58.2%、44.7%、62.6%和75.6%。Hoechst形态学观察呈现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现出凋亡特征性的梯状条带,流式细胞仪检测可见亚二倍体峰并阻滞细胞于G2/M期,30、60和120μmol/L DADS作用于K562细胞12h后,Annexin V/PI双标记法检测早期凋亡细胞率分别为18.59%±0.81%、20.85%±0.65%、23.5%±1.1%（P〈0.05）。结论 DADS呈浓度依赖性抑制K562细胞生长,其机制与诱导细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期有关。     

KA2012MBL复合提取液体外抗肿瘤活性评价及相关机制研究

目的：系统评价KA2012 MBL复合提取液的抗肿瘤活性及对P-gp介导的肿瘤多药耐药的克服能力,并初步探讨KA2012 MBL复合提取液的抗肿瘤机制。方法应用SRB法测定KA2012 MBL复合提取液对K562/A、K562/S和HGC-27的细胞毒活性,应用流式细胞术检测KA2012 MBL复合提取液对K562/S细胞的细胞周期阻滞作用、凋亡诱导作用和对其线粒体膜电位的影响作用。结果 KA2012 MBL复合提取液对肿瘤细胞株K562/A、K562/S和HGC-27均具有细胞毒活性,IC50值分别为（1．12±0．15）％（v/v％）、（1．18±0．04）％（v/v％）、（1．21±0．17）％（v/v％）,并可有效克服P-gp介导的肿瘤多药耐药。流式细胞术检测结果显示KA2012MBL复合提取液可有效降低K562/S细胞的线粒体膜电位,并可使 K562/S 细胞阻滞在 G0/G1期,从而诱导其凋亡。结论KA2012 MBL复合提取液通过诱导肿瘤细胞凋亡而杀死肿瘤细胞,同时能克服P-gp介导的肿瘤多药耐药。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

As203联用华蟾素对K562细胞Bcr—Abl磷酸化的影响

目的研究As2O3,联用华蟾素对K562细胞Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响,探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和华蟾素联合应用治疗CML提供理论依据。方法采用细胞增殖实验检测细胞生长;采用Annexin—V／PI双染实验、DNAPI染色及DNA电泳等方法测定细胞凋亡;运用Westernblot检测K562细胞Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果在As2O3,和华蟾素作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,1．0pmol／LAs：O,、0．125肛g／mL华蟾素、0．25斗g／mL华蟾素、1．0卜mol／LAs20,＋0．125肛g／mL华蟾素、1．0斗mol／LAs20,＋0．25斗g／mL华蟾素作用K562细胞24h和48h后,增殖抑制率分另0为（24-4-1．3）％、（21±1．5）％、（38-4-3．1）％、（57±2．7）％、（66±3-3）％及（49±2．9）％、（48±2．7）％、（61±2．1）％、（77±3．8）％、（82±4．2）％,细胞凋亡率分别为（4_8±0．5）％、（5．6±0．7）％、（9．8±0．6）％、（11．9-4-1．2）％和（15．2±1．5）％及（11．0±0．9）％、（12．9±1．1）％、（18．4±1．5）％、（21．0±2．0）％、（28．0±1．9）％,凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系;DNA电泳出现“梯”状条带;Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论As,O,和华蟾素能诱导K562细胞凋亡和抑制其增殖,两药联用具有协同作用,机制与下调K562细胞Ber—Abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞株凋亡的时程效应

目的研究不同时间蛋白酶体抑制剂MG-132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562的干预作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测16μmol／LMG-132作用不同时间（0、24、48、72、96h5个时间点）对K562细胞株增殖的影响,免疫细胞组织化学法检测MG-132作用不同时间后核因子-κB（NF—κB）及糖皮质激素受体（GR）的表达,采用流式细胞术检测MG-132不同作用时间对凋亡的影响。结果MTT：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的抑制率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时抑制率最高,为（63．33±1．52）％。免疫细胞组织化学法：MG-132干预K562细胞不同时间后,K562细胞株中的NF—κB、GR的表达水平均表现为对时间的依赖性;对于NF—κB,实验组明显低于对照组（均P〈0．05）,以干预96h时表达最低,为51．15±1．64;对于GR,以干预72h时表达最高,为89．21±3．49。流式细胞术：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的凋亡率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时,凋亡率最高,为（17．57±1．45）％。结论MG-132可能是通过下调NF—κB、上凋GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,并表现出对时间的依赖性。     

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶（PI）染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C蛋白）表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖（P〈0.05）;流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为（3.23±1.43）%、（9.71±2.20）%、（14.15±2.34）%、（23.65±2.58）%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。     

rhIFN-γ对白血病K562细胞CD123表达的影响

［摘要］目的　检测重组人γ-干扰素（recombination human interferon gamma,rhIFN-γ）对白血病K562细胞生长的抑制作用及其对CD123表达的影响. 方法　应用MTT法检测白血病K562细胞在不同浓度rhIFN-γ作用72 h的增殖活力以及用流式检测其CD123的表达．结果　5×104～108 U/L rhIFN-γ作用K562细胞72 h,细胞生长抑制率随剂量增大而增高,而2×105 U/L rhIFN-γ使其抑制率降低．rhIFN-γ 2×105 U/L、107 U/L孵育K562细胞72 h, 流式检测到CD123在K562细胞的表达量分别为（7.2±2.50）%和（21.6±1.17）%;107 U/L rhIFN-γ组与对照组（4.10±1.46）%比较,其差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论　rhIFN-γ对白血病K562细胞生长有双向作用（抑制或促增殖）,诱导CD123表达增加.     

丙戊酸钠抑制肺癌细胞株A549增殖的研究

目的研究丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法体外不同浓度VPA不同作用时间处理人肺癌细胞株A549,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变。结果2.0 mmol/L VPA作用72 h细胞形态明显改变、细胞数明显减少。1.0mmol/L VPA作用72 h后,细胞增殖被抑制,抑制率为（15.8±2.8）%,与同期对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;提高处理浓度或延长作用时间,抑制作用有加强趋势。1.0 mmol/L VPA作用72 h后可改变细胞周期分布,G1期细胞比例为（72.2±3.4）%,与同期对照组相比差异显著;2.0 mmol/LVPA处理24～72 h后G1细胞比例由（64.5±3.7）%增加至（79.8±4.4）%,而S期细胞由（30.7±5.17）%降低至（14.2±3.37）%;提高处理浓度或延长作用时间均使G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少。2 mmol/L VPA作用24～72 h可提高细胞凋亡率,由（7.30±1.87）%增加到（19.85±2.40）%。结论VPA可抑制肺癌A549细胞生长,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。     

钨多酸化合物对A549细胞增殖的抑制作用

目的研究钨磷酸盐化合物K6[P2W18O62].14H2O的抑制肿瘤细胞作用。方法培养A549细胞,用不同浓度的K6[P2W18O62].14H2O处理后,应用MTT还原法分析细胞增殖,用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果 25、50、100、200和400μmol/L的K6[P2W18O62].14H2O作用于A549细胞72 h后,对应的抑制百分率分别为（37.89±9.12）%、（55.29±8.84）%、（73.50±2.72）%、（82.02±5.72）%和（91.84±3.98）%。该化合物也可降低A549细胞S期和G2/M期百分率,同时增加细胞凋亡百分率,与对照组（1.35%）相比,25μmol/L的K6[P2W18 O62].14H2O作用24、48和72 h后,诱导细胞凋亡百分率分别为6.57%、13.24%和21.35%。结论该钨多酸化合物对A549细胞有抑制作用。