Ade ABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

目的探索AdeABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用。方法随机收集复旦大学附属中山医院临床标本鲍氏不动杆菌40株,以琼脂稀释法测定其对美罗培南、亚胺培南的最低抑菌浓度,按不同的耐药表型分组,进行羰基氢氯苯腙抑制试验,普通PCR扩增外排泵基因adeB,实时荧光定量PCR检测adeB基因表达水平;超声物理法提取外膜蛋白,12%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析外膜蛋白。结果 40株鲍氏不动杆菌中,对亚胺培南、美罗培南均敏感检出15株,检出率37.5%,亚胺培南敏感美罗培南耐药检出6株,检出率15.0%,亚胺培南、美罗培南均耐药检出19株,检出率47.5%;中山医院鲍氏不动杆菌中,adeB外排泵基因广泛存在,在敏感菌株中存在率也很高;碳青霉烯类耐药组外排泵adeB基因的表达量相对高于敏感组,统计学分析3组之间差异无统计学意义;外膜蛋白分析发现,部分菌株有29 kd的条带丢失。结论主动外排系统和外膜蛋白缺失在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中可能发挥一定的作用。     

多药耐药鲍氏不动杆菌adeABC外排系统研究

目的 调查临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC和调控基因adeS、adeR分布情况及与抗菌药物耐药的关系.方法 在全国范围21所医院选择同期多药耐药鲍氏不动杆菌101株和敏感菌12株进行研究；测定其对6种抗菌药物的MIC值；PCR筛选外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeS、adeR,克隆测序明确基因型.结果 101株多药耐药鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、米诺环素、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星耐药率分别为52.5％、62.4％、71.3％、80.2％、94.1％、95.0％,其中对以上6种抗菌药物全部耐药的菌株36株；adeA、adeB、adeC、adeS、adeR基因阳性菌株分别为74、76、75、73、77株；以上5种基因均阳性(基因型命名为组Ⅰ)的菌株检出64株,检出率为63.4％,为分布最广且最主要的基因型；根据脉冲场凝胶电泳菌株的同源性分析结果发现,克隆A、B、C、E中以组Ⅰ为主,而D克隆中以组Ⅶ(5种基因均阴性)为主；12株敏感鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC阳性率也均＞40.0％,但调控基因adeS、adeR阳性率较低.结论 鲍氏不动杆菌临床分离株中,adeABC外排泵基因在耐药菌和敏感菌中阳性率均高,而且地区分布和克隆分布十分广泛,其与多耐药的获得有极大的相关性,其基因的播散可能主要通过菌株的克隆播散得以实现.     

生物膜形成促进临床耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达

目的通过生物膜对苯唑西林酶(OXA)和AdeABC外排泵基因表达的影响研究,揭示生物膜的形成对OXA和AdeABC外排泵相关耐药机制的影响,探讨生物膜在鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药方面的作用机制及作用方式。方法微量滴定板法制备生物膜模型及定量实验;多重PCR技术对OXA及AdeABC外排泵基因进行检测;实时荧光定量PCR技术对不同状态下OXA-23、AdeB基因表达量进行检测;E-test方法对产膜与非产膜菌株亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)进行测定。结果106株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中产生物膜和不产生物膜菌株分别占67.9%和32.1%;各耐药基因检出率分别为OXA-23:99.1%;OXA-24:0.1%;OXA-51:100%;OXA-58:0;AdeA、AdeB和AdeC均为98.1%;生物膜状态下的OXA-23、AdeB基因的相对表达量明显高于普通肉汤培养和浮游状态下基因的相对表达量(P0.05);产膜比非产膜菌株亚胺培南MIC更高,P0.05。结论鲍曼不动杆菌的生物膜形成能够促进OXA-23和AdeABC外排泵基因的表达,从而增强鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性。     

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系

目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系。方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序。结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%。59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%。不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P0.05)。adeABC外排泵的调控基因adeR、adeS的碱基序列未出现基因突变或插入序列。结论 RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中adeB、adeJ基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关。     

鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制研究

目的探讨临床分离的鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为医院感染控制、临床合理用药提供依据。方法收集山西医学科学院(山西大医院)临床分离的鲍氏不动杆菌株共84株,其中亚胺培南耐药鲍氏不动杆菌(IRAB)63株,亚胺培南敏感鲍氏不动杆菌(ISAB)21株。用K-B纸片法检测以上细菌对常用抗菌药物的敏感性。PCR法分析10种β-内酰胺酶基因和carO、oprD膜孔道蛋白基因,adeB外排泵基因,并对扩增阳性的基因进行测序,同时应用DNASTAR软件对耐药和敏感菌株的carO、oprD序列进行对比分析。结果 63株亚胺培南耐药鲍氏不动杆菌对替加环素较敏感,对头孢哌酮/舒巴坦(28.6%)和米诺环素(30.2%)耐药率较低外,对其他抗菌药物耐药率均较高,而21株亚胺培南敏感鲍氏不动杆菌对多数抗菌药物较敏感;IRAB与ISAB检出TEM、OXA-23、adeB基因阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),而ADC阳性率差异无统计学意义;84株细菌中carO、oprD和OXA-51均为阳性。亚胺培南耐药株carO编码基因序列与亚胺培南敏感株相比存在有意义突变。结论本研究中耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌耐药机制主要与β-内酰胺酶、adeB外排泵、carO孔道蛋白突变有关。     

鲍曼不动杆菌耐药性分析及其主动外排基因adeB的分子检测

目的了解临床鲍曼不动杆菌的多重耐药状况及主动外排基因adeB的检测情况。方法对南华大学附一医院所分离的鲍曼不动杆菌在不同类型标本中的分布与科室来源进行分析,利用ATB药敏系统对所分离菌株进行药物敏感试验;通过Primer Premier软件设计特异性扩增引物,采用聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌主动外排基因adeB在不同类型标本中的分布情况进行检测,探讨鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排基因adeB之间可能存在的关系。结果所分离的50株鲍曼不动杆菌耐药率较高,对美罗培南和亚胺培南的耐药率达76.0%和74.0%,对其它抗菌药物的耐药率均在80%以上;50株鲍曼不动杆菌经PCR检测,主动外排基因adeB阳性者42株,检出率为84.0%。结论本地区鲍曼不动杆菌耐药率及主动外排基因adeB检出率较高,主动外排基因adeB可能介导了鲍曼不动杆菌的多重耐药。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵基因adeB关系的分析

目的探讨耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌的耐药性与外排泵基因adeB的关系,为临床合理使用抗生素提供依据,防止和抑制鲍曼不动杆菌耐药菌株的增加。方法收集本院2017年1月-12月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌122株,其中亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)96株,亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(ISAB)26株。采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性分析试验;应用PCR及序列分析的方法分析外排泵基因adeB。结果 IRAB对大多数抗生素最小抑制浓度(MIC)值均较高,但对替加环素仍保持较高的敏感性,而ISAB对多数抗生素均较敏感。PCR扩增结果显示IRAB的adeB检出率为96.8%。adeB基因与GenBank注册号CP026943.1基因相似性为99%。结论本院分离到的鲍曼不动杆菌对亚胺培南有较高的耐药性,与adeB基因关系密切。     

多药耐药鲍氏不动杆菌耐药性研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRABA)的耐药性与抗菌制剂外排泵基因的存在情况。方法收集医院2009年6-9月住院患者中分离的MDRABA共20株,菌株耐药性采用纸片扩散法测定,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析3种抗菌制剂外排泵基因:adeB、mdf A、qacE△1。结果β-内酰胺类药物中头孢菌素类耐药率达100%,亚胺培南耐药率也达80%;20株MDRABA中adeB、mdf A、qacE△1均有检出,阳性率分别为85%、90%、65%;除6、9号菌株外,大多数菌株携带2~3种外排泵基因。结论该组20株MDRAB抗菌制剂外排泵基因高阳性率是这些菌株高耐药原因之一。     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因及同源性分析

目的分析临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeR、adeS分布与抗菌药物耐药的关系,为ICU感染鲍氏不动杆菌的同源性有效应对医院感染。方法 2012年ICU检出鲍氏不动杆菌102株,采用K-B法进行药敏试验,PCR测定所有菌株的药物外排泵基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果 94株耐药鲍氏不动杆菌对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0%,对亚胺培南和氨苄西林/舒巴坦的耐药率为75.8%和95.0%,对其他抗菌药物耐药率均>85.0%;102株鲍氏不动杆菌中adeA、adeB、adeC、adeR、adeS基因型的阳性株分别为78、79、76、77、74株;5种基因均以阴性为主;敏感株中调控基因adeR、adeS表达率较低分别为37.5%和25.0%。结论 ICU分离的鲍氏不动杆菌中呈现严重的多药耐药,adeABC外排泵耐药基因相对于敏感株在耐药菌株中大量存在,外排泵基因的高表达与鲍氏不动杆菌的多药耐药存在相关性关系,而且其基因的播散主要通过克隆播散得以传播。     

主动外排在铜绿假单胞菌耐药中的作用研究

目的 观察外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对铜绿假单胞菌耐药水平的影响,并扩增外排泵蛋白编码基因.以探讨细胞膜主动外排作用与铜绿假单胞菌耐药的关系.方法 用琼脂二倍稀释法测定150株铜绿假单胞菌对四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素,头孢噻肟、亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC),并观察在含5 mg/L CCCP存在条件下MIC值的变化;用PCR法扩增外排泵编码基因oprM、mexB和mexR.结果 150株铜绿假单胞菌中,有56.0%的菌株外排泵表型试验阳性,以四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟、亚胺培南和美罗培南作为底物,分别有17、6、12、29、35、18、31株菌在5 mg/L CCCP的条件下MIC值降低≥4倍,其中有56.0%的菌株同时对2种的药物有明显的外排作用;主动外排机制不仅存在耐药菌株,而且也存在于敏感菌株,但CCCP对耐药菌株的影响更大;oprM、mexB和mexR外排泵基因普遍存在于铜绿假单胞菌中.结论 主动外排作用是铜绿假单胞菌多药耐药的重要原因之一,主动外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC,外排泵抑制剂在克服细菌的耐药性方面有一定的应用前景.     

鲍曼不动杆菌的耐药分析及主动外排基因adeB的检测

目的了解临床分离不动杆菌属对16种抗菌药物的耐药性,为耐药菌的抗菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因adeB,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法随机收集40株不重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验。后采用聚合酶链反应(PCR)方法筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeB,并进行序列分析。结果 40株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南最为敏感,耐药率为0;其次对氨苄西林/舒巴坦,耐药率仅为27.5%;对其余抗菌药物的耐药率在52.5%～75.0%之间;根据PCR产物片段大小,40株鲍曼不动杆菌共有adeB基因阳性菌株26株(65.0%)。序列分析显示adeB基因与参考序列AF37088599%相同,与参考序列AJ971416100%相同。结论鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌,对多种抗生素的耐药率高,且呈多重耐药。主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的机制研究

目的探索多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株对替加环素敏感性降低的机制。方法应用E-test方法测定菌株对替加环素的敏感性,然后使用PCR和测序技术确定菌株中adeB、adeR和adeS外排泵基因的分布,最后运用实时荧光逆转录PCR技术测定adeB基因的表达水平。结果替加环素对46株受试菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory con-centration,MIC)范围为0.094～8μg/ml,MIC50=2μg/ml,MIC90=3μg/ml。菌株中adeB、adeS和adeR泵基因广泛分布,但adeB的相对表达量并一定随着MIC值的增加而增加。结论多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株对替加环素敏感性下降可能存在adeB基因表达调控以外的机制。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染暴发的分子流行病学研究

目的分析某院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）的分子流行病学特征和耐药机制,为预防和控制医院感染提供依据。方法对该院2010年1月-2012 年5月临床分离的32株CRAB,采用随机扩增多态性DNA法进行基因分型,并进行流行病学分析;通过改良Hodge试验和EDTA协同试验对碳青霉烯酶进行表型分析;检测外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙（CCCP）对美罗培南最低抑菌浓度（MIC）的影响,筛选外排泵表型阳性菌株。结果32株CRAB检测出9种基因型,其中以A（10株）、H（7株）两种基因型为主,其次为I型（4株）,B和E基因型各3株,其他基因型各有1或2株。2012年3-5月分离11株CRAB,10株为H(7株)和I(3株)两种基因型,1株为A型。21株（65.63%）CRAB检测到OXA 23特异性条带,且其在改良Hodge试验中均为阳性（包括2012年3-5月分离的11株CRAB）;除1株CRAB检测到NDM 1外,其余金属β 内酰胺酶基因检测均为阴性;CRAB在CCCP存在的条件下对美罗培南MIC仅有轻微改变,均为外排泵表型阴性。CRAB主要分布在重症监护室（13株）和神经外科（7株）。结论该院2012年3-5月间暴发了CRAB同一基因型克隆株的医院感染,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的主要机制是表达OXA 23;鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药与外排泵无关,产NDM 1菌株已在该院出现。     

鲍曼不动杆菌耐药性及产β-内酰胺酶分析

目的调查我院分离鲍曼不动杆菌的耐药性及产β-内酰胺酶情况。方法用K-B法进行药物敏感性检测,表型确证试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,表型筛选法检测高产AmpC酶。结果86株鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为25.6%、9.2%、17.4%和15.1%。对其他10种抗菌药物耐药率（39.5%～67.4%）较高。21株菌（24.4%）检出ESBLs、31株菌（36.0%）检出AmpC酶。结论我院鲍曼不动杆菌耐药率高,应加强药敏检测,指导临床合理应用抗菌药物;其对β-内酰胺类药物耐药与ESBLs、AmpC酶有关。     

普通外科病房病原体分布及其耐药性

目的调查某院普通外科病房病原体分布及其耐药性，为临床医生合理选择抗菌药物提供依据。方法对该院普通外科2011年1月-2012年12月临床送检各类标本分离的病原体种类、分布及耐药性进行回顾性分析。结果共分离病原体859株，其中革兰阴性（G-）菌563株(占65.54%)，革兰阳性（G+）菌233株(占27.12%)，真菌63株(占7.33%)；G-菌以大肠埃希菌(40.40%) 居多，G+菌以粪肠球菌(3.96%) 居多，真菌主要为白假丝酵母菌。病原体标本来源主要为腹腔引流/抽出液（65.43%，562株），其次为伤口或切口分泌物（10.94%，94株）、痰液（9.90%，85株）、胆汁（6.75%，58株）等。肠杆菌科细菌对亚胺培南、美罗培南不耐药，对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均＜20%，对头孢菌素的耐药率较高。鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率高达51.85%、47.37%，对其他大部分抗菌药物的耐药率均＞60%，耐药率较低的是左氧氟沙星、阿米卡星，耐药率均＜20%。G+球菌对万古霉素的耐药率＜3.40%。结论该院普通外科住院患者医院感染主要病原体以G-菌为主，了解普通外科病房病原菌分布及加强细菌的耐药性监测，对临床医生合理选择抗菌药物，提高疗效，防止耐药菌株的产生及传播具有重要意义。     

1546株鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性监测

目的监测2005-2006年湖北地区16所医院临床分离鲍曼不动杆菌的分布及耐药性。方法收集自患者分离的非重复鲍曼不动杆菌1 546株,对其标本来源、病区分布、检出率进行调查,采用K-B法测定所有菌株对阿米卡星等14种抗菌药物的敏感性,数据采用WHONET5.3进行分析。结果标本主要来源于痰（76.7%）;病区集中于内科（34.2%）,ICU（26.6%）居第三位;1 546株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为15.7%。其次为亚胺培南18.0%,美洛培南31.7%,对其余11种抗生素的耐药率均在50.3%～79.8%之间。共检出亚胺培南耐药株263株,泛耐药株（PDRS）6株。结论应加大对鲍曼不动杆菌耐药性的监测力度,强调根据药敏结果选择用药。采取限制或防止细菌产生耐药性的一系列措施,重视医院环境和人员消毒,防止鲍曼不动杆菌在医院内播散。     

医院获得性肺炎中鲍曼不动杆菌耐药性变化

目的研究医院获得性鲍曼不动杆菌(AB)肺炎的细菌耐药情况,以指导临床规范用药,降低耐药率。方法回顾性分析某院2009—2012年发生的医院获得性AB肺炎患者临床资料,采用统一的方案、方法和判断标准进行AB耐药性数据汇总和统计分析。结果共有284例医院获得性AB肺炎患者,主要分布于综合重症监护病房(ICU,45.07%)、呼吸科(19.01%)、神经外科(9.15%)、神经内科(5.99%)。医院获得性AB肺炎的感染发病率及多重耐药AB(MDR-AB)、泛耐药AB(XDR-AB)的感染发病率呈上升趋势。总体耐药率以头孢哌酮/舒巴坦(9.51%)和米诺环素(9.86%)较低,左氧氟沙星(43.66%)和环丙沙星(45.42%)较高;对亚胺培南的耐药率为16.20%,美罗培南为20.42%。AB对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦的耐药率呈逐年上升趋势,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 AB耐药现象严重,应加强AB耐药性监测,防止医院内传播。