人白细胞介素24真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的 构建人白细胞介素24(human interleukin-24,hIL-24)真核表达载体,并在HepG2细胞中稳定表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),从植物血凝素活化的人外周血单个核细胞中克隆得到hIL-24基因目的 片段.应用DNA重组技术将IL-24PCR产物双酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DHSα获得重组载体,进行PCR、酶切及测序鉴定.应用脂质体将鉴定正确的重组质粒转染至HepG2细胞,用G418筛选稳定转染细胞株.采用RT-PCR检测稳定转染细胞HepG2中IL-24 mRNA的表达.结果 通过RT-PCR获得与预期大小一致约600 bp的IL-24基因片段;重组载体pcDNA3.1(+)-IL-24经PCR、双酶切及测序证实,IL-24 eDNA片段已正确插入真核表达载体中;在稳定转染的HepG2细胞株中可见到IL-24 mRNA表达.结论 成功构建了hIL-24真核表达载体pcDNA3.1(+)-IL-24,并获得了稳定转染该重组质粒的HepG2细胞株.     

吉非替尼通过调控hPTTG1表达抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡的机制研究

目的：吉非替尼和人垂体瘤转化基因1（hPTTG1）对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法：以不同浓度吉非替尼干预A2780细胞,MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪、qRT-PCR和Western blot实验检测20 μmol·L^-1吉非替尼对A2780细胞凋亡及细胞中hPTTG1表达的影响。敲减hPTTG1或过表达hPTTG1联合20 μmol·L^-1吉非替尼处理,qRT-PCR和Western blot、MTT和流式细胞术检测细胞中hPTTG1表达及细胞增殖、凋亡情况变化。结果：吉非替尼能够有效抑制A2780细胞增殖（P<0.05）,呈浓度依赖性。以20 μmol·L^-1吉非替尼干预A2780细胞,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中hPTTG1在mRNA和蛋白水平的表达显著下调（P<0.05）。将hPTTG1 siRNA转染至A2780细胞后,细胞hPTTG1表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖抑制率和凋亡率增大（P<0.05）;过表达hPTTG1可减弱吉非替尼对A2780细胞增殖的抑制及凋亡的促进作用。结论：吉非替尼可抑制A2780细胞增殖并诱导凋亡,这一结果可能是通过抑制hPTTG1表达来完成。     

周期蛋白D1正反义表达质粒的构建鉴定及其对哮喘大鼠气道平滑肌增殖的影响

观察哮喘大鼠气道平滑肌周期蛋白D1的表达，并构建大鼠周期蛋白D1 (CyclinD1)正反义表达质粒，转染支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)，探讨CyclinD1在哮喘大鼠ASMC增殖过程中的影响。大鼠雾化吸入卵清蛋白建立哮喘模型，免疫荧光检测CyclinD1的表达。以气道平滑肌条总RNA为模板，通过RT-PCR获取大鼠CyclinD1全长cDNA，插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，构建CyclinD1正义表达质粒(pcDNA3.1-CyclinD1)和反义表达质粒(pcDNA3.1-asCyclinD1)。用脂质体介导的基因转染方法，将正反义重组体和空质粒(vector)分别转染哮喘大鼠和正常大鼠ASMC，用Western blotting方法鉴定CyclinD1基因的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察构建质粒对哮喘大鼠ASMC增殖的影响。结果表明：(1)与对照组相比，哮喘组CyclinD1表达显著增高；(2)酶切鉴定和测序分析证实，试验成功构建了CyclinD1正反义表达质粒。与转染pcDNA3.1-CyclinD1组和vector组相比，转染pcDNA3.1-asCyclinD1组大鼠ASMC中CyclinD1表达水平下降(P<0.01)；(3)与vector组S+G₂M期比例、吸收度(A)值、PCNA阳性表达率相比，转染pcDNA3.1-CyclinD1组增殖指标均明显增加(P<0.01)。转染pcDNA3.1-asCyclinD1组增殖指标均明显下降(P<0.01)。正常组大鼠转染质粒后各组间变化趋势与哮喘组一致。pcDNA3.1-CyclinD1可促进哮喘大鼠ASMC增殖，pcDNA3.1-asCyclinD1可抑制哮喘大鼠ASMC增殖，提示CyclinD1在哮喘ASMC增殖的信号转导中具有重要作用。     

核心蛋白聚糖协同白细胞介素24对人外周血单个核细胞作用的体外研究

目的 探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)联合白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)对人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖及分泌干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-DCN和pcDNA3.1(+)-IL-24,并利用脂质体将两种质粒转染PBMC.根据转染质粒的不同将PBMC分为空白对照组、脂质体组、空质粒组、DCN组、IL-24组、DCN与IL-24联合组.采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测PBMC的增殖,ELISA测定细胞培养上清中IFN-γ的表达,流式细胞技术检测PBMC表面程序性死亡分子1(PD-1)的表达.采用LSD-t检验进行统计学分析.结果 重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-24构建成功.与其他组相比,DCN与IL-24联合能显著提高PBMC增殖率和IFN-γ分泌量,同时也能上调PD-1的表达水平.结论 DCN与IL-24双基因联合在体外能促进PBMC的增殖,并能增强PBMC的功能.     

乳腺癌细胞的HER2过表达降低其对紫杉醇的药物敏感性

目的紫杉醇的耐药性由多种因素引起,本文研究乳腺癌细胞中的HER2蛋白水平是否影响细胞对紫杉醇的药物敏感性。方法以HER2低表达的MCF-7/pcDNA3.1细胞和经稳定转染获得的HER2高表达的MCF-7/HER2细胞为研究对象,MTT方法测定紫杉醇对这两种细胞的生长抑制作用,流式细胞仪测定紫杉醇对细胞周期分布的影响,An-nexin V-FITC/PI实验测定紫杉醇诱导的细胞凋亡,两种细胞的裸鼠移植瘤实验测定紫杉醇的抑瘤率。结果紫杉醇对MCF-7/HER2细胞的IC50值是MCF-7/pcDNA3.1细胞的6.2倍;紫杉醇诱导细胞G2/M期阻滞,且是HER2非依赖性的;0.01、0.1和1.0μmol.L-1紫杉醇诱导MCF-7/pcDNA3.1细胞凋亡的百分比分别是15.1%±2.1%、21.0%±2.9%和35.7%±3.8%,诱导MCF-7/HER2细胞凋亡的百分比分别是7.5%±1.7%、14.1%±2.3%和24.2%±3.4%,同一浓度的紫杉醇诱导两细胞的凋亡百分比差异有显著性;5、10和20 mg.kg-1的紫杉醇对裸鼠移植MCF-7/pcDNA3.1肿瘤生长抑制率分别是36.9%、58.7%和75.4%,对裸鼠移植MCF-7/HER2肿瘤生长抑制率分别是20.1%、33.3%和67.3%。在相同剂量下紫杉醇对裸鼠移植的两种肿瘤的抑瘤率差异有显著性。结论HER2蛋白的高表达可降低乳腺癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

S100A11过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响

目的探讨钙囊素(S100A11)过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响。方法构建S100A11过表达载体质粒pcDNA3.1-S100A11,并转染人胰腺癌细胞PANC-1细胞。Western blot检测转染效果;CCK-8检测转染后PANC-1细胞增殖活力;流式细胞术检测PANC-1细胞的凋亡和细胞周期的变化。结果 S100A11蛋白表达量与pcDNA3.1-S100A11的转染量成正相关。过表达S100A11基因可明显提高PANC-1细胞增殖速度,降低凋亡细胞比例,并使PANC-1细胞S期细胞比例增加,G1期细胞减少(P<0.05)。结论S100A11过表达能调控PANC-1细胞周期,并促进PANC-1细胞的增殖。     

miR-214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-214的真核表达载体,研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:以A549细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-214前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-214。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214转染到A549细胞中,并采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对其表达情况进行验证。采用MTT和transwell小室等方法分别检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-214对A549细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了miR-214稳定过表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214;real-time PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-214后A549细胞中miR-214过表达(P<0.05)。miR-214过表达后A549细胞的增殖和侵袭能力均明显降低。结论:miR-214在A549细胞中过表达能够抑制细胞的增殖和侵袭能力,为进一步深入研究miR-214在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

STC 1 过表达抑制人宫颈癌CaSki 细胞增殖

目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组：实验组转染pcDNA3.1（＋）-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1（＋）空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高（P﹤0.01）,CaSki细胞存活率下降（P﹤0.05）,G1期细胞比例显著上升（P﹤0.05）,细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。     

小鼠ORMDL3表达质粒的构建

目的构建小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因的表达质粒,并在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞)中检测其过表达效果。方法根据小鼠ORMDL3蛋白的编码序列设计引物,以NIH3T3细胞cDNA为模板,PCR扩增ORMDL3的编码序列,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ酶切位点之间,并测序鉴定。由脂质体介导将pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1-ORMDL3质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞中,24h后收取细胞,抽取细胞全蛋白,Western blot检测ORMDL3蛋白的相对表达量。结果成功构建小鼠ORMDL3表达质粒pcDNA3.1-ORMDL3,该质粒瞬时转染至NIH3T3细胞内可有效增加ORMDL3蛋白表达2倍左右(P<0.05)。结论成功构建小鼠ORMDL3表达质粒,为后续小鼠动物模型研究ORMDL3基因的功能及致病机制提供依据。     

普洱茶水提取物体外抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖并诱导凋亡的研究

 目的   研究普洱茶水提取物（Pu-erh tea extract,PTE）对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用及其作用机制。 方法   采用四甲基偶氮唑盐比色法检测PTE对Tca8113细胞和牙周膜成纤维细胞生长和增殖的抑制作用,用倒置相差显微镜观察PTE作用后细胞的形态变化,利用流式细胞术分析PTE对舌鳞癌细胞的作用机制。实验数据采用GraphPad Prism 5.01软件进行统计分析,应用单因素方差分析对数据进行比较。 结果   在PTE作用时间相同的情况下,随着其浓度的增加,Tca8113细胞存活率明显降低,当PTE浓度为125.00 μg/ml时,细胞存活率下降最为显著（F=1 283,P<0.000 1）。而当PTE浓度相同的情况下,随着作用时间的增加,Tca8113细胞存活率也随之降低,并且在作用12 h时差异最显著（F=111.6,P<0.000 1）。PTE对正常牙周膜成纤维细胞无明显抑制作用。显微镜观察发现,舌鳞癌细胞经PTE处理后出现皱缩、变圆、脱离贴壁状态;而牙周膜成纤维细胞形态无变化。流式细胞术检测发现,舌鳞癌细胞经浓度为125.00 μg/ml的PTE作用12 h后,细胞凋亡率为27.65%±0.47%。 结论   PTE能通过诱导细胞凋亡抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖,提示其具有防治舌鳞癌的作用。     

当归挥发油对吗啡依赖小鼠戒断症状及单胺类神经递质的影响

目的:观察当归挥发油对吗啡依赖小鼠戒断症状及单胺类神经递质的影响.方法:90只昆明小鼠随机均分为空白组、模型组、可乐定组(0.6 mg·kg^-1)和当归挥发油低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg^-1).采用剂量递增法建立小鼠吗啡依赖模型,观察纳洛酮催促戒断后30 min内的小鼠的戒断症状(跳跃数、扭体次数、抓脸次数和体重减少值);采用酶联免疫吸附法测量下丘脑和血浆中NE、DA和5-HT的含量.结果:当归挥发油呈剂量依赖地降低吗啡依赖小鼠戒断后跳跃次数(F=22.1,P <0.01)、扭体次数(F=15.1,P <0.01)、抓脸次数(F=16.4,P <0.01)及体质量减少百分值(F=11.1,P <0.01),同时显著性降低下丘脑和血浆中NE、DA和5-HT水平[(F=14.7,P <0.01;F=16.3,P <0.001;F=11.7,P <0.01);(F=10.4,P <0.001;F=13.5,P <0.001;F=9.4,P <0.01)].结论:当归挥发油能够有效缓解小鼠吗啡戒断症状,其机制可能与抑制下丘脑和血浆中单胺类神经递质的过度释放有关.     

TAK-242通过调控JAK2/STAT3通路抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤炎症反应

目的：探讨Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠心肌缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）炎症反应的分子机制。方法：选用48只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组（sham）、模型组（I_30min /R_24h）、给药组[I/R+TAK-242（3 mg·kg^-1）]、干预组[I/R+TAK-242+AG490（15 mg·kg^-1）]。再灌注24 h后心脏超声检测小鼠心功能,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理改变,WB检测心肌JAK2/STAT3磷酸化水平,ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度。结果：与sham组比较,I/R组小鼠左心室收缩期直径（LVIDs）延长（P<0.01）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）显著降低（P<0.001或P<0.01）,心梗面积明显增加并出现心肌炎性浸润,心肌p-JAK2/p-STAT3表达明显升高（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6、IL-10、TNF-α和HMGB1水平显著升高（P<0.001或P<0.01）。与I/R组比较,TAK-242给药组小鼠LVIDs缩短（P<0.05）,LVEF和LVFS显著升高（P<0.01或P<0.05）,心梗面积缩小（P<0.01）,心肌炎症浸润减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6和TNF-α水平明显下降（P<0.001或P<0.01）,而IL-10和HMGB1浓度进一步升高（P<0.01）。与TAK-242给药组比较,AG490干预可显著加强TAK-242治疗作用,包括心肌收缩功能增强,心梗面积缩小及炎性浸润程度减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α浓度下降而IL-10、HMGB1浓度升高（P<0.01或P<0.05）。结论： Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠I/R炎症反应与JAK2/STAT3信号通路失活有关。     

银翘散治疗小儿肺炎的临床研究

目的:探讨银翘散对小儿肺炎的治疗作用并对其机制进行研究。方法:收集某院肺炎患儿160例,均满足诊断标准,按完全随机法均分为观察组和对照组,分别以各组方案进行相应治疗。经7 d治疗,计算2组患儿治愈的有效率,观察症状好转程度,酶联免疫(ELISA)法检测患儿治疗前及治疗后血清肿瘤坏死因子、白介素-1β、白介素-6、白介素-8(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8)水平。结果:治疗7 d后,观察组患儿高热、咳嗽症状显著轻于对照组及治疗前,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);观察组治愈总有效率为96.25%,显著高于对照组81.25%,差异有统计学意义(χ²=7.574,P<0.05)。治疗后观察组患儿血清各因子水平均显著低于对照组及治疗前,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:银翘散对小儿肺炎有较好的治疗作用,可能与其降低TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平有关。     

川芎嗪对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应的调节作用

目的：探索川芎嗪对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应的影响及其机制。方法：大鼠随机分为5组：对照组、LPS模型组、LPS+川芎嗪（50,100,200 mg·kg^-1）组。苏木素伊红（HE）染色观察肺组织病变。Masson染色分析肺纤维化。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测白细胞介素（interleukin,IL）-6,IL-1β,肿瘤坏死因子（tTNF-α）和IL-18水平。蛋白印记检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,转化生长因子β1（TGF-β1）,Ⅰ型胶原蛋白（collagen type Ⅰ）,Ⅲ型胶原蛋白（collagen type Ⅲ）,PI3K,P-PI3K,AKT,P-AKT,mTOR和P-mTOR的蛋白水平。结果：LPS模型组大鼠肺组织湿/干重之比高于对照组（P<0.01）。与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪（100,200 mg·kg^-1）组大鼠肺组织湿/干重之比降低（P<0.01）。川芎嗪处理可改善LPS模型组大鼠肺组织病变及纤维化。LPS模型组大鼠α-SMA,TGF-β1,collagen type Ⅰ和collagen type Ⅲ表达高于对照组（P<0.01）。与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪（50,100,200 mg·kg^-1）组大鼠α-SMA、TGF-β1、collagen type Ⅰ和collagen type Ⅲ表达降低（P<0.01）。与对照组相比,LPS模型组大鼠IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-α水平升高（P<0.01）。LPS+川芎嗪（50,100,200 mg·kg^-1）组大鼠IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-α水平低于LPS模型组（P<0.01）。LPS模型组大鼠P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT和P-mTOR/mTOR比值高于对照组（P<0.01）。与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪（50,100,200 mg·kg^-1）组大鼠P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT和P-mTOR/mTOR比值下降（P<0.01）。结论：川芎嗪可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化减轻内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应。     

异型南五味子醇提物对D-半乳糖胺/脂多糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究异型南五味子对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法：ICR小鼠按体质量随机分为 6组,即正常组、模型组、联苯双酯（200 mg·kg^-1）组,异型南五味子醇提物低、中、高剂量（200、400、800 mg·kg^-1）组。每天给药一次,连续给药14 d,末次给药1 h后,除正常组外其余各组用600 mg·kg^-1 D-半乳糖胺和40 μg·kg^-1脂多糖腹腔注射以复制小鼠急性肝损伤模型,末次给药12 h后,摘眼球取血,取材。用生化法测定血清中ALT、AST水平,用酶联免疫法测定各组小鼠肝匀浆中SOD、MDA、MPO及GPx-2含量,测定血清及肝组织中 TNF-α、IL-6、IL-10炎性因子表达水平,并于光镜下检查肝组织病理变化。结果：与模型组比较,异型南五味子200、400、800 mg·kg^-1剂量均能显著降低血清中ALT、AST水平（P<0.05或P<0.01）,明显降低肝匀浆中MDA、MPO含量,显著升高SOD、GPx-2水平（P<0.05或P<0.01）,并能降低肝脏及血清中TNF-α、IL-6含量,升高IL-10的表达水平（P<0.05或P<0.01）。病理观察显示异型南五味子组能明显减轻肝脏灶性坏死、水肿,减少肝脏炎性细胞浸润。结论：异型南五味子对腹腔注射600 mg·kg^-1D-半乳糖胺和40 μg·kg^-1脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。     

重组腺病毒-血管内皮生长因子受体在结肠癌治疗中的应用

 目的   研究以复制缺陷型重组腺病毒（adenovirus,Ad）为载体的血管内皮生长因子受体1和2（vascular endothelial growth factor receptor-1 and -2,VEGFR1R2）对新生血管的抑制作用,以达到治疗结肠肿瘤的目的。方法   利用Ad载体质粒pCA13构建携带VEGFR1R2基因的质粒,在293A细胞中表达并扩增。用蛋白质印迹法检测细胞中Ad-VEGFR1R2的表达。观察Ad-VEGFR1R2对人脐静脉内皮细胞、兔角膜新生血管、小鼠结肠癌生长和肿瘤血管生成的抑制作用。采用重复测量的方差分析对实验结果进行比较。 结果   Ad-VEGFR1R2在293A细胞内成功表达出相对分子质量为62 000的蛋白。体外实验显示其可强烈抑制静脉内皮细胞生长;体内实验表明其对兔角膜新生血管的生长具有抑制作用。结肠癌小鼠模型注射Ad-VEGFR1R2后,第32天肿瘤平均体积为（400±12） mm³,明显小于对照组〔（1 200±90） mm³〕（F=135.54,P<0.01）;与对照组相比,注射Ad-VEGFR1R2的小鼠肿瘤组织中的血管生成也较少。 结论   以复制缺陷型重组Ad为载体的VEGFR1R2能明显抑制新生血管形成,并抑制小鼠结肠癌生长。       

川芎嗪联用环孢素A抗皮肤移植排斥反应的作用机制研究

目的：探讨川芎嗪（TMPZ）联用亚剂量环孢素A（CsA）对同种异体小鼠皮肤移植的抗排斥反应作用。方法：将BALB/c小鼠作为供体,C57BL/6小鼠作为受体,行背-背皮肤移植术。随机分为模型组、TMPZ组（50 mg·kg^-1）、CsA组（10 mg·kg^-1）、TMPZ+亚剂量CsA组（TMPZ 50 mg·kg^-1+CsA 5 mg·kg^-1）、假手术组,腹腔注射给药10 d。观察受体鼠移植皮片的存活情况,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中白介素-2（IL-2）、IL-4、IL-10、γ-干扰素（IFN-γ）含量,流式细胞术分析脾脏CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞亚群的比例。结果：各给药组小鼠移植皮片的存活天数均有不同程度的延长,与模型组相比差异均有显著性（P<0.01）。TMPZ+CsA组的移植皮片存活天数比TMPZ组或CsA组均有显著延长（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,TMPZ+CsA组以及TMPZ单用组均可明显减少血浆Th1类细胞因子（IL-2、IFN-γ）的表达（P<0.01）,明显增高Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）的表达（P<0.01）。与模型组相比,各给药组均可明显增高脾脏CD4⁺ CD25⁺T淋巴细胞的比例（P<0.05或P<0.01）。结论：TMPZ具有抑制同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的效果,与CsA联合应用可能具有协同作用,其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子、刺激CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞的表达等有关。     

Apelin-13抑制I/R损伤引起的肾小管上皮细胞炎症

目的：在I/R（肾缺血再灌注）刺激的肾小管上皮细胞HK-2中研究Apelin-13抑制I/R引起的细胞炎症。方法：在I/R刺激的HK-2细胞中给予不同剂量的Apelin-13,通过细胞免疫组化实验技术检测HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。MTT检测各组的细胞增殖情况,Real time-PCR（实时定量荧光PCR）技术检测各实验组HK-2细胞中HIF1A（缺氧诱导因子1A）、APJ（G蛋白偶联受体）、ICAM1（细胞间黏附分子-1）和MCP1（单核细胞趋化蛋白-1）基因的mRNA水平变化。结果：（1）I/R刺激引起HK-2细胞中Apelin表达量显著性下降,给药Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）能够上升HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。（2）MTT检测结果显示I/R刺激的HK-2细胞生长速度明显低于NC组（P<0.01）,同时给予Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）后细胞的生长速度明显上升（P<0.05）,差异有统计学意义。（3）与CT组细胞相比,I/R组HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平显著性上升（P<0.05）;给药Apelin-13（300 pmol·L^-1）能显著性抑制I/R刺激的HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平（P<0.05）。另外,在I/R刺激的HK-2细胞中Apelin受体APJ的基因和蛋白水平显著性下降,而给予Apelin-13后能显著性上调HK-2血细胞中APJ的基因和蛋白水平。结论：在I/R刺激的HK-2细胞中给予Apelin-13能I/R引起的炎症基因的表达,从而抑制细胞死亡。