黄芩苷对内毒素作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察野黄芩苷对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响.方法:原代培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,采用酶联免疫方法检测培养上清液中的TNF-α水平.结果: 100 μg/ ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性、刺激人牙周膜细胞分泌肿瘤坏死因子-α.加入LPS同时分别给予0.001～10 μg/ ml不同浓度野黄芩苷,能促进人牙周膜细胞的增殖活性并能抑制LPS刺激人牙周膜细胞肿瘤坏死因子-α的分泌,其中在1 μg/ ml时作用达到最强.结论:野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞具有保护作用.     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

中药黄芩苷对脂多糖介导人牙周膜细胞增殖的时间效应和细胞周期的影响

目的:观察中药黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导体外培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cell,PDLC)增殖的时间效应和细胞周期的影响.方法:采用细胞培养技术培养PDLC,应用噻唑盐比色测定法(MTT)和流式细胞仪技术测定黄芩苷对LPS介导PDLC增殖的时间效应和细胞周期.结果:加入0.01 μg/ml黄芩苷3 h后,明显促进人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05);加入100 μg/ml LPS 3 h后,即明显抑制人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05),抑制作用随时间的延长而增强,而同时加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS 3 h后,其抑制作用则显著减弱(P＜0.05).加入0.01μg/ml黄芩苷后12 h,DNA合成前期细胞所占百分比(G1%)较对照组降低,而DNA合成期细胞所占百分比(S%)较对照组增高;加入100 μg/ml LPS后12 h,G1%较对照组增高,而s%则降低;加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS后12 h,G1%较LPS组显著降低(P＜0.01),S%则有显著提高(P＜0.01).结论:中药黄芩许能显著促进PDLC增殖分化,对LPS抑制PDLC的活性关系到有保护作用,原理可能足LPS抑制静止态的G1期细胞进入S期,从而抑制细胞的增殖;而黄芩苷则相反促进细胞由G1期细胞进入S期,从而促进细胞的增殖.     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞 MMP-1、MMP-2表达的影响

目的：观察茶多酚（TP）在脂多糖（LPS）介导下对人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）MMP-1、MMP-2表达的影响。方法：体外培养 HPDLCs,在培养液中添加 TP（200μg/ml）作用于脂多糖（100μg/ml）介导的 HPDLCs,培养24、48、72 h,ELISA法检测 HPDLCs 分泌 MMP-1和 MMP-2的量。荧光实时定量 PCR 法检测 HPDLCs 中 MMP-1和 MMP-2 mRNA 的表达。结果：在 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2分泌量和基因表达升高,TP 可抑制 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2表达。结论：TP 可抑制 LPS 介导的人牙周膜细胞的胶原降解。     

中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖（LPS）抑制人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响，并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐（MTT）比色试验和透射电子显微镜技术（TEM）。结果LPS浓度为100μg／ml时明显抑制细胞活性，同时加入LPS和黄芩苷后，细胞活性明显增强（P〈0．05）。100μg／ml LPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤，特别是线粒体损伤严重，同时加入LPS扣黄芩苷（10μg／ml）后，与LPS组比较，超微结构损伤减轻，细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖，对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用，其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。     

乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

目的：观察乳铁蛋白（lactoferrin,LF）对体外培养的人牙周膜细胞（HPDLCs）增殖、迁移和成骨分化的影响。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,稳定传代后用 MTT 比色法、Transwell 法及划痕试验检测浓度分别为0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白对牙周膜细胞增殖和迁移的影响;矿化条件下,0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白作用牙周膜细胞后,茜素红染色法和实时荧光定量 PCR 检测矿化能力及成骨相关基因的表达。结果：10、20μg／ml 乳铁蛋白均能促进 HPDLCs 增殖、迁移（P ＜0．05）。10、20μg／ml 乳铁蛋白组矿化结节数量增多（P ＜0．05）,碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）表达量均有升高（P ＜0．05）。结论：乳铁蛋白能够促进人牙周膜细胞增殖、迁移与成骨分化。     

四环素和多西环素对人牙周韧带细胞生物学活性的影响

目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用。方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500滋g/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1～100滋g/ml的浓度范围内,2种药物对细胞形态无影响。在20～100滋g/ml的浓度范围内,四环素显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P﹤0.01),而多西环素只在20滋g/ml时,能显著促进细胞DNA的合成(P﹤0.01)。当2种药物的浓度增至2500滋g/ml时,不仅使细胞的镜下形态发生明显改变,而且严重抑制细胞的生物学活性。结论在合适的浓度范围内,四环素能显著促进HPDLCs的增殖及生物合成,多西环素的促进作用不明显,而浓度过高时两者均具有细胞毒性。     

LPS刺激对体外培养人牙周膜细胞产生IL-8和MCP-1的影响

目的:检测脂多糖(LPS)刺激对体外培养人牙周膜细胞分泌炎症趋化因子IL-8和MCP-1改变的影响.方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,MTT法观察不同浓度LPS对其增殖的影响;取第4代牙周膜细胞在10 μg/mL LPS刺激条件下进行培养,分别于培养后4、8、12、24 h用酶联免疫吸附(ELISA)法检测牙周膜细胞培养上清中IL-8和MCP-1的含量;结果采用单因素方差进行统计分析.结果:10 μg/mL LPS刺激可使牙周膜细胞的增殖速度略减低,刺激后24 h内细胞形态和数量未见明显变化.ELISA结果显示LPS刺激后牙周膜细胞在10 μg/mL培养上清中IL-8和MCP-1含量均明显高于对照组(P＜0.05);且两种蛋白含量均随培养时间延长而增加(P＜0.05),呈时间依赖性.结论:10μg/mL LPS刺激可使牙周膜细胞培养上清中IL-8和MCP-1含量呈时间依赖性增加,提示牙周膜细胞具有免疫调节功能.     

羧甲基壳聚糖锌多肽复合材料对人牙周膜成纤维细胞的毒性

目的:研究羧甲基壳聚糖锌多肽复合材料(carboxymethyl chitosan zinc and peptide,CMC-Zn+-P)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)的细胞毒性,为材料的安全使用提供依据.方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,并进行形态学及免疫组织化学鉴定.使用含不同浓度材料浸提液的细胞培养液培养细胞,并进行分组,1～4组为实验组,材料浸提液浓度分别为100％、75％、50％和25％,第5组为对照组,不含材料浸提液.采用CCK-8法测定复合材料不同浓度浸提液对细胞增殖活性的影响,通过细胞相对增殖率进行细胞毒性评级.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:原代培养的细胞呈成纤维细胞形态,免疫组织化学染色结果显示细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,属中胚层组织来源.不同浓度材料浸提液对细胞均有促进增殖的作用,相对增殖率均大于100％,细胞毒性分级为0级.结论:CMC-Zn+-P复合材料对体外培养的HPDLCs无细胞毒性,符合国家标准的要求.     

中间普氏菌和脆弱类杆菌内毒素对人牙周膜细胞增殖和超微结构的影响

目的：观察中间普氏菌和脆弱类杆菌的内毒素对人牙周膜细胞增殖和超微结构的影响。方法：体外培养人牙周膜细胞，MTT法测定中间普氏菌和脆弱类杆菌的内毒素对人牙周膜细胞增殖的影响，找出显效浓度，并应用透射电镜技术观察该浓度下两种内毒素对人牙周膜细胞超微结构的影响。结果：两种内毒素在10μg/mL浓度时即能显著抑制人牙周膜细胞的增殖，该抑制作用随内毒素浓度增高而增大。10μg/mL浓度的内毒素使人牙周膜细胞的线粒体、内质网、高尔基氏体肿胀，溶酶体增多，核质浓集；甚至造成部分细胞死亡。结论：中间普氏菌和脆弱类村 的内毒素可对人牙周膜细胞产生毒害作用，二者之间无明显差异。     

中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨

目的研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据。方法人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg／ml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液12．5μg／ml、LPS 50μml＋补肾固齿丸水提液25μml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液50μg／ml共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况。结果LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长（OD=0．198±0．097）,并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高（1．122±0．370pg／ml）（P〈0．01）;而补肾固齿丸水提液25μg／ml和50μg／ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用（OD=0．354±0．055,OD=0．368±0．029）、细胞IL-1β泌量也显著降低（0．685±0．168pg／ml,0．525±0．143pg／ml）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关。     

釉基质衍生物对脂多糖作用下牙周膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的研究釉基质衍生物（enamel matrix derivatives,EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）作用下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）增殖和凋亡的影响。方法从正畸治疗需拔除的前磨牙中,分离培养人hPDLFs,传至第4代;实验组培养液中分别加入100μ/mLEMD、10μg／,mL Pg-LPS或者100μ/mL EMD＋10 μg／mL Pg-LPS,对照组不加入刺激物;以四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethy1-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl．2H-tetrazoliumbromide,MTT]法检测hPDLFs的增殖,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法分析细胞凋亡。结果原代hPDLFs生长良好,加入刺激后第3天时,第4代hPDLFs的Mrrr值由高至低分别是：EMD组、对照组、EMD＋LPS组、LPS组。刺激48h后,LPS组凋亡率（12．10％±2．80％）大于EMD＋LPS组（8．07％±2．04％）、EMD组（3．68％±1．73％）和对照组（3．87％±1．27％）（P〈0．05）。结论EMD能减弱Pg-LPS对hPDLFs增殖的影响,并且降低Pg-LPS所导致的hPDLFs凋亡,可能是其促进牙周组织再生的重要机制。     

淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素表达的影响

目的 探讨不同浓度淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素（OPG）表达的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,用四唑盐（MTT）法检测不同浓度淫羊藿苷（0、0.001、0.01、0.1、1 μg/ml）及50μg/ml牙龈卟啉单胞菌超声提取物,不同时间（24、48、72h）作用下人牙周膜细胞的增殖水平.用RT-PCR及Western blot检测48h人牙周膜细胞骨保护素mRNA和蛋白的表达.结果 淫羊藿苷从0.01～1μg/ml对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白的表达有促进作用（P＜0.01）,浓度为0.1μg/ml作用最显著.结论 淫羊藿苷可抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,促进人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达.     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

牵张应力对人牙周膜细胞MMP-2表达的影响及相关信号通路的研究

目的：探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞（HPDLCs）中MMP-2表达的影响.方法：按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组：非加力对照组（A组）;12％形变率,3h组（B组）;12％形变率,6h组（C组）;12％形变率,12h组（D组）;12％形变率＋PDTC干预,12h组（E组）,通过细胞牵张应力加载系统施加机械牵张应力,结束后收集细胞提取蛋白,用蛋白印迹法检测MMP-2蛋白表达的变化.结果：B、C、D组MMP-2表达大于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着作用时间的延长蛋白表达增加;NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加.结论：持续机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2表达的增加,从而影响牙周组织细胞外基质代谢,机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人牙周韧带细胞增殖作用的研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对人牙周韧带细胞(human periodontal liga-ment cells,hPDLC)体外培养是否存在增殖作用。方法 在体外培养的hPDLC中分别加入50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml和800μg/ml不同浓度的EGCG作为实验组,对照组在普通培养基中培养。两组均在孵育24 h、48 h、72 h后通过MTT法测定细胞增殖情况。结果 在各时间段中,50μg/ml浓度组细胞的吸光度与对照组相比无明显差异(P>0.05),100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml和800μg/ml 4个浓度EGCG组细胞的吸光度较高,显著高于对照组(P<0.05)。说明EGCG对人牙周韧带细胞的最小显效浓度是100μg/ml,在100～800μg/ml浓度范围内可明显促进hPDLC的增殖活动。结论 EGCG对hPDLC的增殖具有明显的促进作用。     

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目的研究盐酸米诺环素对脂多糖（LPS）作用下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。方法本研究于2011年10月至2012年2月在井冈山大学医学院重点实验室进行。培养HPDLF并分为以下5组：对照组（未加药）、高剂量组（0．01g／LLPS＋0．2班盐酸米诺环素）、低剂量组（0．0lg／LLPS＋0．05g/L盐酸米诺环素）、中剂量组（0．01g／LLPS＋0．1g／L盐酸米诺环素）、模型组（0．0lg／LLPS）,每组均复种3孔。实时荧光定量PCR检测各组HPDLF中的IL-6mRNA表达情况。结果对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组、模型组的IL-6mRNA相对表达量分别为：0．61±0．08、0．62±0．10、0．88±0．17、0．49±0．21、1．88±0．07。模型组IL-6mRNA的相对表达量高于对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组,且差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组及低、中、高剂量组的IL-6mRNA相对表达量两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下HPDLF中的IL-6mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炙的作用机制之一。     

Etanercept作用下糖尿病Wistar大鼠牙周炎变化的实验研究

[摘要] 目的 观察肿瘤坏死因子α抑制剂Etanercept对实验性糖尿病Wistar大鼠牙周炎的影响。方法 12周龄Wistar大鼠45只,腹腔内一次性注射STZ诱导糖尿病。结扎糖尿病大鼠牙颈部建立牙周炎模型。将实验糖尿病大鼠分为糖尿病组,糖尿病牙周炎组和糖尿病牙周炎+Etanercept组。观察大鼠的牙龈指数、牙周袋深度、松动度。免疫组化观察IL-1β、IL-6在牙周组织中的表达。结果 糖尿病组大鼠牙龈指数、牙周袋深度、松动度与糖尿病牙周炎组和糖尿病牙周炎+Etanercept组有差别(P<0.05);糖尿病牙周炎组和糖尿病牙周炎+Etanercept组相比有差别(P<0.05)。糖尿病牙周炎组中IL-1β、IL-6表达高于糖尿病组(P<0.05),各时间段糖尿病牙周炎+Etanercept组牙周组织中IL-1β、IL-6表达低于糖尿病牙周炎组(P<0.05)。结论 肿瘤坏死因子α抑制剂Etanercept对实验性糖尿病Wistar大鼠牙周炎有抑制作用。