高效液相色谱/质谱/质谱联用法测定人血浆中贝那普利及贝那普利拉浓度

目的建立二级质谱与高效液相色谱联用的方法测定人血浆中贝那普利及其活性代谢产物贝那普利拉浓度的新方法。方法色谱柱为ZorbaxC18(5μm,4.6mm×150mm)。流动相为乙腈-10mmol/L乙酸胺(含0.08%NH3)(70∶30,v/v),流速1mL/min,柱后分流4∶1。样品经乙腈沉淀蛋白后直接进样。用选择离子分别对贝那普利、贝那普利拉和内标依拉普利进行检测。结果测定贝那普利及贝那普利拉的线性范围均为0.5～600μg/L,最低检测浓度为0.1μg/L。日内精密度<2.6%,日间精密度<3.5%。方法回收率范围为100.9%～110.2%。结论本方法精密、准确,适用于贝那普利及贝那普利拉的药物动力学及生物等效性研究。     

RP-HPLC测定注射用硫普罗宁的有关物质

建立一种高效液相色谱法测定注射用硫普罗宁有关物质的方法。色谱柱为C₁₈柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸(8∶92)，流速为1.0 mL/min。光电二极管阵列检测器的波长为210 nm。采用该方法共检测到硫普罗宁中7种有关物质，并用质谱法对其进行了结构推测。该方法具有良好的系统适用性、专属性，在0.3~50 μg/mL质量浓度范围内具有良好的线性(r≥0.999)，检测限和定量限分别为0.10和0.31 μg/mL，准确度在98.7%~103.7%之间，该方法的日内、日间精密度较好(RSD≤4.4%)，耐用性好(RSD≤6.4%)。该方法成功地应用于注射用硫普罗宁中有关物质的测定，揭示了巯基化合物和甘氨酸类似物在高效液相色谱上的保留行为以及流动相pH对待测物色谱行为的影响。     

分析高效液相色谱法测定中药中甘草酸的含量

通过高效液相色谱法对重要中甘草酸含量进行检测。甘草酸提取于0.3%的氨水超声中,将其置于Syncronis C18色谱柱上,流动相及流速分别设置为55%乙腈和1.0 mL/min,柱温及检测波长分别设置为30℃和256 nm。1.5-50μg/mL范围内,甘草酸具备良好的线性关系(r=0.9991),检测限及方法精密度RSD分别是0.19μg/mL和0.88%(n=5)。高效液相色谱法具有操作简单、灵敏度高、分析速度快等特点。     

HPLC法同时测定人血清中氯硝西泮、硝西泮、三唑仑浓度

目的建立单步萃取-HPLC法同时测定人血清中硝西泮、氯硝西泮、三唑仑浓度。方法血清样品采用二氯甲烷单步萃取,采用Ultimate XB-C18色谱柱（250.0mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇∶水∶乙腈=10∶56∶34,流速为1mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃,卡马西平为内标物。结果硝西泮、氯硝西泮、三唑仑的线性范围分别为32.5～650.0μg/L（r=0.9997）、31.5～630.0μg/L（r=0.9999）、74～1480μg/L（r=0.9997）,最低检测限分别为8.13μg/L、7.88μg/L、18.5mg/L,日内精密度和日间精密度良好,回收率较高。结论本法操作简便,结果准确可靠。可满足临床快速监测的需要。     

高效液相色谱法测定复合维生素胶囊中叶酸含量

目的：建立高效液相色谱法测定复合维生素胶囊中叶酸含量。方法：KR100-5 C18柱分离,以甲醇：水（含2%冰醋酸、0.1%辛烷磺酸钠、0.2%乙二胺,25：75）为流动相,流速0.5 mL/min,二极管阵列检测器检测波长：285 nm。结果：叶酸在0.5μg/mL～50μg/mL有良好的线性关系,相关系数为0.9997。检出限为7.3 ng,最低检出浓度为1.5 mg/kg。样品测定的精密度为2.8%～3.0%;样品加标回收率为94.7%～97.7%,平均回收率为96.2%。结论：建立的高效液相色谱法具有良好的精密度和准确度,适用于复合维生素胶囊中叶酸含量的测定。     

人胃癌SGC-7901细胞内新藤黄酸含量测定HPLC法的建立及应用

目的建立高效液相色谱法测定人胃癌SGC-7901细胞内新藤黄酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法,选取人胃癌SGC-7901细胞(贴壁细胞),色谱条件:色谱柱采用COSMOSIL C18,检测波长为360 nm,流动相为乙腈-0.1%乙酸水溶液(9:1),流速1 mL/min,柱温30℃。并对线性、稳定性、精密度、加样回收率和SGC-7901细胞内样品进行考察。结果新藤黄酸在(0.5～16)μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程Y=3256X+517(r2=0.9995,n=6),稳定性实验5 d、10 d后RSD分别为1.73%、1.42%,精密度实验0.5、1.0、2.0、4.0μg/m L浓度的RSD分别为1.33%、1.75%、0.76%、1.28%,平均加样回收率为100.11%(RSD=0.57%,n=4)。每毫克蛋白含药量为1.22、1.17、1.24、1.19、1.21μg/mg,RSD=2.24%。结论本实验方法简便可靠、精密度高、重复性好,适用于人胃癌SGC-7901细胞内新藤黄酸含量的测定。     

高效液相色谱法测定清开灵胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定清开灵胶囊中绿原酸和黄芩苷含量分析方法。方法用C18硅胶柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,甲醇-0.4%的磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速为1mL/min,紫外检测波长为323nm。结果绿原酸和黄芩苷的线性范围分别为4.248-106.2μg/mL,9.224-203.6μg/mL;相关系数分别为0.999 7和0.999 8;加样回收率分别为101.23%和100.72%;检出限分别为0.048μg,0.034μg;精密度实验RSD分别为0.75%,1.88%;重现性实验RSD分别为1.99%,2.73%;稳定性实验RSD分别为1.8%,0.52%。4批样品中绿原酸的含量为0.2215%-0.2594%,黄芩苷的含量为4.0947%-4.3743%。结论该方法简便、快速、准确,灵敏度高,重现性好,成本低,可用于清开灵胶囊的质量控制。     

新型二维高效液相色谱测定人血清伏立康唑浓度方法的建立与应用

目的建立全自动二维高效色谱法(2D-HPLC)测定血清中伏立康唑的浓度并应用于临床。方法第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6mm×25mm,5μm),流动相为20mmol/L磷酸铵∶乙腈∶甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶10∶50(V∶V∶V∶V),流速1.0mL/min;中间柱为ASTON SH柱(3mm×10mm,5μm),辅助流动相为纯水。样品由一维色谱柱萃取,经中间柱捕获并转移至第二维色谱柱分析,检测波长256nm,柱温40℃,进样量200μL。结果伏立康唑在0.28～22.56μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限为0.28μg/mL,方法回收率为99.01%～104.62%,提取回收率为85.81%～89.82%,日内、日间精密度RSD均小于9%。结论该方法操作简单、准确、灵敏,符合血清样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定。     

大黄酸的HPLC-荧光检测及其在人体药代动力学中的应用

建立大黄酸在健康志愿者血浆及尿粪中的HPLC-荧光检测方法(HPLC-FLD),色谱柱为Hypersil C18(25 cm×4.6 mm,2.5μm),流动相为甲醇-乙腈-1%冰醋酸(61∶15∶24),柱温为40℃,内标为1,8-二羟基蒽醌,检测激发波长为440 nm,发射波长为520 nm。在所建立的色谱条件下,大黄酸与各杂质分离良好,在血浆、尿、粪中线性范围分别为0.05～10.00μg/mL,0.10～25.00μg/mL,0.20～100.00μg/mL,最低定量限分别为0.05,0.10和0.20μg/mL。健康受试者单次口服200 mg大黄酸后,血药浓度-时间曲线呈二房室模型。主要药代动力学参数cmax,tmax,AUC0-∞,t1/2以及MRT分别为(16.0±3.4)μg/mL,(4.0±0.6)h,(152.7±45.7)μg.h/mL,(5.5±1.1)h以及(8.9±2.2)h;原药大黄酸在尿、粪中累积排泄分数分别为(8.19±1.84)%和11.00%。该法操作简便、灵敏,适用于对微量生物样品进行大批量测定。     

高效液相色谱法同时测定人血浆中唑尼沙胺、苯妥英、卡马西平及环氧卡马西平的浓度

目的建立同时测定人血浆中抗癫癎药物唑尼沙胺(ZNS)、苯妥英(PHT)、卡马西平(CBZ)及其活性代谢物环氧卡马西平(CBZE)浓度的高效液相色谱法。方法以氯唑沙宗为内标,血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,取上清液直接进样测定。色谱柱采用Phenomenex SynergiTMFusion-RP C18柱(250mm×4.6mm,4μm),柱温:40℃;流动相为甲醇∶乙腈∶0.1%三氟乙酸水溶液(27∶15∶58,V/V/V),流速为1.2mL/min,双波长双通道检测,215nm测定PHT和CBZE,235nm测定ZNS和CBZ。结果血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,色谱峰分离良好。ZNS、PHT、CBZ和CBZE的最低定量限为1.0μg/mL,线性范围分别是1~80μg/mL,1~50μg/mL,1~25μg/mL和1~10μg/mL,相关系数(r)均大于0.999 1。平均方法回收率分别为94.77%~113.41%,各组分的日内、日间RSD均小于7.21%。样品在25℃放置4h,4℃放置24h,反复冻融3次均保持稳定。结论该方法具有良好的准确性、精密性和灵敏性,且操作快速、简便,适用于临床抗癫癎药物血药浓度的监测。     

高效液相色谱法测定胆汁中头孢美唑

开发一个可用于定量测定胆汁中头孢美唑浓度的高效液相色谱分析方法。方法：取０．２ｍＬ胆汁用水稀释至１ｍＬ，并转移至已准备好的Ｃ１８固相萃取柱中进行固相萃取。用１ｍＬ１０％乙腈水溶液洗脱吸附在固相萃取柱上的头孢美唑，并收集于样品瓶中用高效液相色谱法进行分析测定。流劝相为２０：８０的乙腈：缓冲溶液（０．０１ｍｏｌＬ／Ｌ磷酸盐，０．０１％ＴＢＡ，ＰＨ７．０）检测波长为２７２ｎｍ。结果：本分析方法在（１．２     

高效液相色谱一质谱联用法测定人血浆中非索非那定的浓度

目的：建立以高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中非索非那定浓度的方法。方法：以苯乙双胍为内标物,采用C18柱,流动相由乙腈及30 mmol/ml NH4Ac（含0.1%甲酸,0.01%三氟乙酸）组成,采用梯度洗脱程序,测定血浆中非索非那定浓度。结果：非索非那定在2.26～676.46 ng/ml线性关系良好（r=0.999 6,n=7）,定量下限浓度为2.26 ng/ml,RSD为0.7%,高、中、低浓度测定的相对回收率分别为（109.9±1.7）%、（103.1±7.2）%和（101.5±13.4）%,日内RSD分别为2.1%、2.5%和9.8%,日间RSD分别为1.3%、5.7%和7.1%。结论：所建方法预处理简单﹑专属性强、灵敏度高,适合测定非索非那定的血药浓度。     

反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统分析维生素D3软胶囊(油性基质)

 目的   开发维生素D3软胶囊(油性基质)在反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)系统中的含量测定和杂质分析方法。方法   RP-HPLC系统的色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长265 nm,柱温25 ℃,流速1 mL/min。以乙腈混合不同比例的甲醇、水、乙醇为流动相,探究这4种流动相组分对维生素D3及其3种同分异构体在C18柱上保留行为的影响。根据保留行为研究选择合适的流动相进行含量测定和杂质分析。结果   以纯乙腈为流动相时,含量测定方法回收率仅为80.55%~84.37%;而以V(乙腈)∶V(水)=90∶10为流动相时回收率显著改善(98.07%~103.23%,RSD<1.69%),同时可改善峰形,适用于含量分析。该方法呈现良好的线性［(0.52~5.2)×10-4 μmol/L,R2>0.999］和精密度(RSD<2.32%)。以V(乙腈)∶V(水)=95∶5为流动相能够排除空白油性基质峰对杂质峰的干扰,可用于杂质分析。结论   本方法能在RP-HPLC系统中简单而准确地进行维生素D3软胶囊(油性基质)的含量测定和杂质分析。     

HPLC测定复方盐酸去氧肾上腺素喷鼻液中盐酸去氧肾上腺素、地塞米松磷酸钠和盐酸林可霉素的含量

 目的 建立一种同时测定复方盐酸去氧肾上腺素喷鼻液中盐酸去氧肾上腺素、地塞米松磷酸钠和盐酸林可霉素含量的HPLC方法。方法 采用Agilent C18（150 mm×4.6 mm,5 μm） 色谱柱,流动相：0.02 mol/L磷酸氢二铵：乙腈=75：25（V/V）;柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长240 nm,外标法计算含量。结果 在该色谱条件下,盐酸去氧肾上腺素、地塞米松磷酸钠和盐酸林可霉素线性良好（r>0.999,n=5）,加样回收率为97%~103%（n=3）,RSD<2.0%（n=3）。8 h内可获得稳定的测量结果,测得样品含量合格,为标示量的97%~103%。结论 经方法学实验验证,该方法简便、快速,结果准确、可靠、重现性好。     

高效液相色谱法测定杏苏咳水中柚皮苷的含量

【目的】建立测定杏苏咳水中柚皮苷含量的高效液相色谱(HPLC)方法。【方法】在室温条件下萃取柚皮苷．HPLC法测定其含量,选用ODS色谱柱,以乙腈-8％冰醋酸(V乙腈：V冰醋酸=15：85)为流动相,检测波长283nm。【结果】按照本法测定柚皮苷在1．6～9．6mg／L范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98．62％,RSD=0.754(n=5)。【结论】HPLC法可用于杏苏咳水的质量控制。     

HPLC法测定复方芩兰口服液中连翘苷的含量

目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定复方芩兰口服液中连翘苷含量的方法。方法采用Agilent Extend-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-水（25∶75）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为278 nm,柱温为30℃。结果连翘苷在20.64～206.40μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（r=1.000 0,n=5）,平均回收率为97.85%,RSD为0.93%（n=6）。结论本方法简便、准确,重复性好,可用于复方芩兰口服液中连翘苷的测定。     

HPLC测定生地黄浓缩颗粒中梓醇的含量

建立测定中药生地黄浓缩颗粒中有效成分梓醇含量ＨＰＬＣ方法。方法：以Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋＣＬＣ－ＯＤＳ－Ｃ１８柱为固定相;０．６％乙腈为流动相,检测波长为２１０ｎｍ。结果：梓醇进样量在２－１０μｇ范围内与峰面积呈线性关系。平均回收率为９９．１％。结论ＨＰＬＣ测定中药生地黄浓缩颗粒中梓醇含量方法简便,结果准确。     

高效液相色谱法测定布洛芬注射液中精氨酸的含量

目的建立布洛芬注射液中精氨酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Global APS-NH2(4.6mm×250mm,5μm),流动相为磷酸盐缓冲液(pH=3.5)-乙腈(45:55);检测波长为205 nm。结果精氨酸在0.074mg/mL-0.37mg/mL范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.9998,回收率为100.19%。结论该方法简便、准确可靠、精密度良好,可作为布洛芬注射液中精氨酸的含量测定方法。     

高效液相色谱法测定青皮药材中橙皮苷的含量

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定青皮中橙皮苷含量的方法.方法 采用色谱柱为kromasilC 18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5％磷酸(75∶25);检测波长285nm;流速1.0 mL/min,测定青皮中橙皮苷.结果 橙皮苷的进样量在11.2～89.6 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9997).橙皮苷平均回收率为99.07％(n=6),RSD为1.08％.结论 建立的HPLC法简便、快速、准确,重现性、稳定性好,回收率高,可为青皮药材的质量控制提供依据.     

Development and validation of RP-HPLC and RP-UPLC methods for quantification of erythropoietin formulated with human serum albumin

Rapid and sensitive reverse phase high performance liquid chromatography (RP–HPLC) and ultra performance liquid chromatography (UPLC) methods with UV detection for quantification of erythropoietin (EPO) in presence of human serum albumin (HSA) as a stabilizer in a pharmaceutical formulation of EPO have been developed and validated. Chromatography was performed with mobile phase containing 0.1% Trifluoroacetic acid (TFA) in MilliQ water and 0.1% TFA in acetonitrile with gradient program and a flow rate of 1.5 mL/min for HPLC and 0.35 mL/min for UPLC. Quantification was accomplished with internal reference standard (qualified using EP reference standard). The methods were validated for linearity (correlation coefficient=0.99), accuracy, precision and robustness. Robustness was confirmed by considering three factors; percentages of TFA in mobile phase, age of test sample and mobile phase and column temperature. Intermediate precision was confirmed by different analysts, different equipments and on different days. The relative standard deviation (RSD) value (<2%, n=30) indicated good precision of the developed method. The proposed RP-HPLC method had retention time less than 20 min while the developed UPLC method had retention time less than 4 min. Both the RP-HPLC and UPLC methods were simple, highly sensitive, precise and accurate, suggesting that the developed methods are useful for routine quality control.