胃肠道间质瘤c—kit及PDGFRA基因突变及其临床意义

目的探讨胃肠道间质瘤（GIST）中c-kit及PDGFRA基因突变的分子生物学特点及与临床参数间的关系。方法对141例GIST进行基因检测,用PCR扩增和基因测序的方法检测肿瘤c-kit基因第9、11、13和17外显子及PDGFRA基因第12和18外显子的序列,分析基因突变与GIST临床参数之间的关系。结果在141例GIST中共检测到c—kit基因突变108例（76．6％）,其中11号外显子突变99例（70．2％,99／141）;9号外显子突变8例（5．7％,8／141）;13号外显子突变1例（0．7％,1／141）;未检测到17号外显子突变病例。97．0％为杂合性突变,3．0％为纯合性突变,11外显子突变方式以缺失突变最常见65．7％（65／99）,其次为点突变（24．2％）和插入突变（串联重复）（10．1％）;突变位点多集中在5’端的经典热区,其次为3’端的框内串联重复。共检测到4例PDGFRA基因的突变．占无c—kit突变病例的12．1％（4／33）,占CD117阴性GIST的40％（4／10）,均为外显子18的突变。基因突变的发生率在GIST不同原发部位间差异有统计学意义（χ^2=7．229,P=0．027;χ^2=7．000,P=0．03）,而与患者年龄、性别、肿瘤大小、核分裂、恶性潜能分级等均差异无统计学意义。结论GIST中存在c-kit及PDGFRA基因的突变;基因突变的发生率在不同原发部位间有差异。     

胃肠道间质瘤c-kit和PDGFRA基因突变检测及临床诊断意义

目的 观察c-kit基因和PDGFRA基因在胃肠道间质瘤(GIST)中的突变.方法 分析23例GIST患者的临床病理资料,检测23例GIST c-kit基因9、11、13和17号外显子突变以及PDGFRA基因12和18号外显子突变.结果 23例GIST中kit基因突变率为70.0%,其中11、9、13号外显子突变分别为56.5%、8.7%、4.3%,未检测到17号外显子的突变.PDGFRA基因突变率为13.0%,其中18、12号外显子突变分别为8.7%、4.3%.结论 GIST病例大多数存在c-kit基因和PDGFRA基因的突变,CD117阳性GIST主要表现为c-kit突变,以11号外显子突变最为常见,PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST.

Abstract：

Objective To explore the starus of activating mutations of c-kit and PDGFRA in gastrointestinal stromal tumor (GIST) of Chinese patients.Methods The clinic and pathological data of a series of patients with gastrointestinal stromal tumors in 2008-2009 yrs were analyzed retrospectively.Exon 9,11,13,17 of c-kit and exon 12,18 of PDGFRA were analyzed by direct sequencing.Results c-kit mutations were detected in 70.0% of patients as follows :56.5% in exon 11 ,8.7% in exon 9,4.3% in exon 13 and none in exon 17.PDGFRA mutations were present in 13.0% of CD1 17-negative GIST,8.7% in exon 18,4.3% in exon 12.Conclusion The vast majority of GIST in this study harbored c-kit and PDGFRA mutation.Most CD117 expressing GIST show c-kit mutations that are preferentially in exon 11.PDGFRA genic mutations are more likely seen in kit-negative GISTs.     

伊马替尼在进展期胃肠间质瘤的应用分析

目的探讨伊马替尼治疗进展期胃肠间质瘤（GIST）患者的临床疗效及其影响因素。方法回顾性分析2004年4月至2010年1月间在中山大学附属第一医院接受伊马替尼治疗的73例成人进展期GIST患者的临床资料。分析其治疗效果和影响疗效的因素。结果73例GIST患者接受伊马替尼治疗后完全缓解1例,部分缓解53例,疾病稳定14例,疾病进展5例。全组均获随访,随访时间12～76（中位随访32）个月,中位无进展生存期45．0个月（95％CI：34．2～55．8个月）,1、3、5年无进展生存率（PFS）分别为87．7％、63．6％和39．6％。多因素分析显示,基因突变情况和治疗前体力状态评分是伊马替尼治疗疗效的独立影响因素：c-kit外显子11突变患者PFS优于外显子9突变者;治疗前体力状态低评分者优于高评分者（均P〈0．01）。结论伊马替尼治疗进展期GIST疗效肯定,c-kit外显子9突变和体力状态不良的患者接受伊马替尼治疗效果不佳。     

肝转移胃肠道间质瘤c-kit、PDGFRA基因突变研究

目的 探讨肝转移胃肠道间质瘤( GIST)发生的机制.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和基因测序法检测12例肝转移GIST c-kit基因第9、11、13、17号外显子和PDGFRA第12、18号外显子序列,总结基因突变规律,分析其与临床病理的关系.结果 本组5例胃部,1例小肠,其他6例.本组c-kit基因突变率为91.7％ (11/12),外显子11为83.3％ (10/12).未检测到PDGFRA基因突变.本组性别、年龄、原发部位、肿瘤大小、核分裂相、NIH危险度分级、肝转移时间、细胞形态、细胞丰富程度、核异型对c-kit基因外显子11突变率及突变形式影响差异无统计学意义(P＜0.05).结论 肝转移GIST基因突变主要集中在c-kit第11号外显子.突变方式有缺失、点突变和缺失伴点突变.缺失突变多见.肝转移GIST临床病理与外显子11突变率、突变形式无明显相关.     

KRAS与BRAF基因在胃肠间质瘤中的突变情况及临床意义

目的检测KRAS与BRAF基因在胃肠间质瘤(GIST)中的突变情况并探讨其在伊马替尼耐药中的意义。方法回顾性选择2002–2012年期间在北京大学肿瘤医院就诊的519例GIST患者,其中381例c-kit或PDGFRA突变型GIST,119例c-kit或PDGFRA野生型GIST,19例含伊马替尼耐药前后配对标本病例;检测全部肿瘤组织的KRAS外显子2与BRAF外显子15的突变情况,并收集突变患者的临床特征与生存状况。结果 KRAS基因在119例c-kit或PDGFRA野生型GIST中突变率为1.7%(2/119),突变类型分别为G12D与G12C;BRAF~(V600E)突变率也为1.7%(2/119);在c-kit或PDGFRA突变型GIST与19对耐药前后GIST配对标本中均未能检测到KRAS与BRAF基因错义突变。2例KRAS基因突变的GIST患者中1例伊马替尼原发耐药,另1例伊马替尼治疗仅获得8个月的无进展生存期;2例BRAF基因突变患者均接受肿瘤完整切除,1例中危患者术后未接受辅助治疗,截至末次随访时间获得47个月的无复发生存,另1例高危患者接受伊马替尼辅助治疗2年,截至末次随访时间,已获得7年无复发生存。结论野生型GIST患者可发生KRAS与BRAF基因低频率的突变,KRAS基因突变可能与伊马替尼原发耐药有关;继发耐药患者中未见新发的KRAS与BRAF基因突变。     

原癌基因c-kit突变在胃肠道基质瘤临床预后中的意义

目的 探讨c—kit基因突变对胃肠道基质瘤（GIST）的发病及在临床病理和预后中的意义。方法 采用聚合酶链反应单链构象多态性技术（PCR—SSCP）方法检测106例GIST中c-kit基因突变的情况，并对其中的57例进行临床随访。结果全组基因突变率为45．3％（48／106）；良性GISTc-kit基因突变率为4．9％（2／41），恶性GISTc—kit基因突变率为70．8％（46／65），c-kit基因突变阳性组的1，3，5年生存率及中位生存期均明显低于突变阴性组。对肿瘤大小、肿瘤性坏死、浸润程度、核分裂象计数、核异型性等指标的比较，突变阳性组和阴性组均存在显著差异（P〈0．005）。邻近组织的侵袭及肿瘤的转移、复发的发生率突变阳性组均明显高于突变阴性组。结论 c—kit基因突变在GIST的发生发展中可能发挥着重要作用，可以作为判断GIST患者临床预后的一个重要指标。     

胃肠道间质瘤中c-kit和血小板衍生生长因子受体α基因的突变及其表达研究

目的探讨c-kit和血小板衍生生长因子受体α（PDGFR—α）基因突变及其蛋白表达在胃肠道问质瘤（GIST）发病中的作用及与其临床病理、预后的关系。方法应用免疫组织化学EnvisionTM二步法检测了119例GIST中CD117和PDGFR-α蛋白的表达情况。用PCR扩增和基因测序的方法，检测50例GIST c—kit基因第9、11、13、17号外显子以及PDGFR—α基因第12、18号外显子的突变情况。结果本组119例GIST中CD-117的阳性表达率为87．4％，PDGFR-α的阳性表达率为65．5％。50例GIST中c—kit基因突变率为42％。突变均位于11号外显子近膜区的5’端第556～560密码子之间，即所谓的突变“热点”。50例GIST中PDGFR-α基因突变率为20％，最常见的突变为第18号外显子D842V点突变，2例为第12号外显子突变。c-kit基因突变主要见于CD117阳性的GIST，与GIST生物学侵袭行为无明显关系；而PDGFR-α基因突变主要见于CD117阴性的GIST，具高度侵袭危险性。未发现1例GIST有c—kit和PDGFR-α基因同时突变。结论PDGFR-α作为一种GIST特异而敏感的标记物，对一些CD117表达阴性的GIST的诊断及鉴别诊断具有重要的临床意义。作为GIST发病的两种分子机制，c—kit和PDGFR—α基因突变是相互排斥，不共存的。     

胃肠道间质瘤患者87例病理学改变及其与预后的关系

目的探讨胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor,GIST）患者病理学改变特征、临床分期及其与预后的关系。方法收集2000年6月至2009年1月本院收治的87例GIST患者临床病理、病理组织免疫组化及随访资料。Kaplan－Meier法计算生存率并进行单因素分析,COX回归法进行多因素分析。结果87例患者5年的无瘤生存率（disease－free survival,DFS）为65．8％;5年的总体生存率（overall survival,OS）为67．4％。免疫组化结果：CDll7阳性率：86．8％;CD34阳性率：88．1％;SMA阳性率：25％;S-100阳性率：5．26％。CDll7、CD34、SMA和S-100表达与无瘤生存期和总生存期间无相关关系。单因素分析结果提示：细胞密集程度、核异型程度、肿瘤原发部位、肿瘤大小、有丝分裂数目、NIH分级、Miettinen分级和TNM分期等因素与患者的无瘤生存期间有相关关系（P〈0．05）。多因素分析结果提示：细胞密集程度、有丝分裂数目、原发部位和TNM分期是影响无瘤生存的独立因素（P〈0．05）。TNM分期是影响患者无瘤生存率和总生存率的独立影响因素（P〈0．05）。结论细胞密集程度、核异型程度、肿瘤原发部位、肿瘤大小、有丝分裂数目以及NIH分级、Miettinen分级和TNM分期均可影响GIST患者的预后。细胞密集程度、有丝分裂数目、发病部位和TNM分期是影响GIST患者无瘤生存率的独立因素。     

腹腔内胃肠道外间质瘤基因突变和预后因素的研究

目的 探讨腹腔内胃肠道外间质瘤(EGIST)中c-kit和血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α)基因突变、临床病理特征和预后的影响因素.方法 应用免疫组织化学方法检测23例EGIST中CD117、CD34和Ki-67蛋白的表达,应用PCR扩增和基因测序的方法检测c-kit和PDGFR-α基因突变,结合临床病理特征分析影响EGIST患者预后的相关因素.采用Kaplan-Meier法和COX比例风险模型比较不同因素对生存的影响.结果 本组c-kit基因的突变率为44%,均为第11号外显子突变;PDGFR-α基因的突变率是13%,均为第18号外显子的突变(D842V点突变).CD117表达阳性率是100%,CD34表达阳性率为74%.Ki-67指数:＜1%者占30%,1%～5%者占44%,＞5%者占26%.生存分析显示,核分裂象数目(P=0.025)和Ki-67指数(P=0.032)与疾病相关生存时间相关.结论 EGIST有着与GIST相似的c-kit和PDGFR-α基因突变位点,并且c-kit基因突变频率也相近,但是PDGFR-α基因突变频率较GIST稍高.可以将EGIST作为GIST的一个特殊亚型.结合核分裂象和Ki-67指数对EGIST进行分级是判断预后的一个较好的标准.     

十二指肠胃肠间质瘤80例临床分析

目的：探讨十二指肠胃肠间质瘤（GIST）的临床特点、治疗方法及其预后影响因素。方法对上海复旦大学附属中山医院2000年1月至2013年12月收治的80例十二指肠GIST患者的临床资料和随访资料进行回顾性分析。结果80例十二指肠GIST患者中,男38例,女42例,中位年龄54岁;临床以腹痛[30例（37．5％）]和出血[29例（36．3％）]为主要症状。所有患者术前均未行靶向药物治疗,39例行十二指肠局部切除,18例行十二指肠肠段切除,23例行胰十二指肠切除术;手术均为R0切除。有30例患者术后服用伊马替尼,其中11例患者为术后转移复发者。中位随访时间为52．5（9~166）月,1、3和5年总生存率（OS）分别为100％、98．3％和96．1％;无复发生存率（RFS）分别为96．2％、90．6％和78．6％。Cox回归分析结果显示：肿瘤最大直径大于5 cm、核分裂像大于5／50 HPF以及NIH危险度分级为中危和高危是影响预后的危险因素。不同手术方式的RFS和OS差异并无统计学意义（P＞0．05）。结论十二指肠GIST仍以外科治疗为主。应根据肿瘤的大小和位置选择最佳的手术方式,必要时辅以靶向药物治疗。     

山东省胃肠间质瘤多中心回顾性调查

目的探讨山东省胃肠间质瘤（GIST）手术患者的临床病理学特征、预后及其影响因素。方法回顾性收集2001年1月至2013年6月山东省4家大学的教学医院GIST手术患者的临床病理学资料,对所有病例进行病理学复核及随访,对其预后影响因素进行单因素和多因素分析。结果共收集1039例GIST病例,其中男509例,女530例,年龄18。87（中位数58）岁。术后随访时间1—150（中位数34）月,期间93例因肿瘤进展死亡,1、3、5年生存率分别为94．6％、91．7％和87．8％。R0手术患者5年总体生存率高于R1手术患者（88．8％比69．0％,P〈0．叭）。中度复发风险患者术后是否服用伊马替尼,其5年总体生存率的差异无统计学意义（94．4％比89．2％,P〉0．05）;高复发风险患者术后服用伊马替尼,其5年总体生存率明显高于未服药者（76．8％比67．7％,P〈0．05）。预后因素分析结果显示,肿瘤大小（P〈0．01,RR=1．988,95％CI：1．497—2．641）、核分裂象（P〈0．01,RR=2．326,95％CI：1．686—3．208）和肿瘤是否破裂（P〈0．01,RR=3．032,95％CI：1．732～5．308）是GIST手术患者的独立预后因素。结论肿瘤大小、核分裂象和肿瘤是否破裂是GIST术后患者预后的独立影响因素;Ro手术是原发局限性GIST首选治疗方式;伊马替尼可改善术后高复发风险患者的预后。     

Kinase Mutations and Imatinib Mesylate Response for 64 Taiwanese with Advanced GIST: Preliminary Experience from Chang Gung Memorial Hospital

Purpose Most gastrointestinal stromal tumors (GISTs) express constitutively activated mutation of kit or platelet-derived growth factor receptor alpha (PDGFRA), which are therapeutic targets for imatinib. Results of 64 Taiwanese with advanced GIST treated with imatinib were reported. Method and materials Between 2001 and May 2006, a prospective, non-randomized, and a single center trial containing 64 Taiwanese patients with advanced GIST treated with imatinib was conducted. Each tumor was investigated for mutations of kit or PDGFRA. Results The median follow-up time after imatinib administration was 16.1 months. 12 patients (18.8%) had complete response (CR), 24 (37.5%) had a partial response (PR), 12 stationary disease (18.8%), 16 progressive disease (25.0%). The 64 Taiwanese with advanced GIST had an estimated median survival of 48.0 months and 4-year survival rate for 76.1%. Kit mutation was found in 49 of 54 (90.7%) test patients and five of them had no mutation (9.3%). No PDGFRA mutant was identified. In 40 patients harboring kit exon 11 mutations, the CR and PR rates (ORR) were 57.5% , nine patients with tumors containing kit exon 9 mutation had ORR rates of 22.2%, and five patients with no mutation had ORR rates of 60.0% (not significant; P = 0.149). Conclusions Activated mutation of kit constituted 90.7% genetic alteration of Taiwanese with advanced GIST and no PDGFRA mutation was detected. Imatinib induced a sustained objective response in more than half of Taiwan advanced GIST patients. ORR did not differ between patients whose GISTs had no mutation, kit exon 9, and 11 mutations.     

胃肠间质瘤术后247例预后分析

目的探讨胃肠间质瘤（GIST）手术患者的预后影响因素。方法回顾性分析2003年1月至2012年11月青岛大学医学院附属医院收治的247例GIST术后患者的临床病理资料,采用Log．rank检验和Cox比例风险模型分别对其预后影响因素进行单因素和多因素分析。结果随访1～113（中位26）个月,26例出现复发或（和）转移,18例死亡,1、3、5年生存率分别为94％、91％和83％。单因素预后分析显示,年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、核分裂像及肿瘤是否破裂与患者预后有关（均P〈0．01）。对于中、高风险患者,术后服用伊马替尼者5年总体生存率明显高于未服用者（85．7％比81．0％。P〈0．05）。多因素预后分析显示,肿瘤大小（P-0．030,RR=2．248,95％CI：1．081-4．677）、核分裂像（P=0．041,RR=2．220,95％C1：1．032—4．776）和肿瘤是否破裂（P=0．004,RR=5．183,95％CI：1．677—16．017）是影响术后患者预后的独立因素。结论肿瘤大小、核分裂像及肿瘤是否破裂是G1sT术后患者预后的独立影响因素：伊马替尼可改善GIST术后中、高风险患者总体生存。     

c-kit and PDGFRA mutations in extragastrointestinal stromal tumor (gastrointestinal stromal tumor of the soft tissue)

Extragastrointestinal stromal tumor (EGIST) is a unique tumor that occurs outside the gastrointestinal tract. EGIST shows a c-kit expression and histologic appearance similar to those of gastrointestinal stromal tumor (GIST). Most GISTs have gain-of-functional mutation of the c-kit gene, and some have mutation of the platelet-derived growth factor receptor-alpha (PDGFRA) gene. However, the frequency of mutation of those genes in EGISTs remains unclear. We examined the clinicopathologic features, prognostic factors, and c-kit and PDGFRA mutation in 39 cases of EGIST. Tumors with high mitotic counts (>or=5/50 high power fields) or a high Ki-67 labeling index (>or=10%) were significantly correlated with worse prognoses. The c-kit mutation was found in the juxtamembrane domain (exon 11) and the extracellular domain (exon 9) in 12 of 29 cases (41.4%) and 2 of 29 cases (6.9%), respectively. The PDGFRA gene mutation was found at the juxtamembrane domain (exon 12) and the tyrosine kinase domain (exon 18) in one case each. The pattern of kit and PDGFRA mutation in EGIST was essentially similar to that in GIST. Our results suggest that the c-kit and PDGFRA mutations play an important role in the tumorigenesis of EGIST. High mitotic counts and a high Ki-67 labeling index may be useful for predicting the aggressive biologic behavior in EGIST. Furthermore, STI-571, targeting c-kit and PDGFR tyrosine kinase, seems to be a possible therapeutic strategy for EGISTs, especially advanced cases.     

K-ras基因突变与结直肠癌肝转移及其预后关系的研究

目的探讨结直肠癌肿瘤原发灶中K-ras基因突变情况与肝转移及其预后的关系。方法回顾性选取2003年1月至2008年12月间经复旦大学附属中山医院普通外科手术治疗的结直肠癌病例,根据术时诊断和术后随访肝转移情况分为同时性肝转移、异时性肝脏转移和未发生肝脏转移的患者3组,每组各100例。运用PCR及Pyrosequencing法检测石蜡标本中肿瘤原发灶K-ras第2外显子突变情况．分析其与结直肠癌肝转移的发生及其预后的关系。结果300例样本中肿瘤原发灶K-1-as突变者120例（40．0％）,其中K-ras第2外显子G13D突变32例,而异时性肝转移组中K-ras的第2外显子G13D突变较同时性肝转移组多（17．0％比8．0％,P=0．041）。多因素回归模型提示,K-ras第2外显子的G13D突变是结直肠癌异时性肝转移的独立危险因素（P=0．048,HR=1．108．95％CI：1．032-5．062）。结直肠癌无肝转移组中K-ras基因突变者较无突变者总体生存期短（中位生存时间65比72个月,P=0．039）,而在结直肠癌肝转移切除的患者中,K-ras基因突变者无复发生存期短（中位时间18比24个月,P=0．048）,多因素分析提示,K-ras基因突变（HR=1．561,95％CI：1．022-6．422,P=0．045）是影响结直肠癌无肝转移组总体生存的独立危险因素。结论检测结直肠癌原发灶中的K-ras基因状态可以为预测肝脏的转移和预后情况提供参考。     

61例直肠胃肠间质瘤临床分析

目的探讨直肠胃肠间质瘤（GIST）的临床特征和治疗及其预后因素。方法对中山大学肿瘤防治中心1990年1月至2012年10月收治的61例直肠GIST患者的临床资料和随访资料进行回顾性分析,并对病理标本进行复核;应用Kaplan。Meier法计算生存率,分别应用Log．rank检验和Cox回归模型对影响预后的因素进行单因素和多因素分析。结果61例直肠GIST患者中,男42例,女19例,中位年龄59岁。18例（29．5％）为术前活检确诊为GIST;46例首次病理诊断为GIST,另15例（24．6％,15／61;其中14例原诊断为平滑肌瘤或肉瘤,1例诊为神经鞘膜瘤）经复核病理标本后修正为GIST。肿瘤位于腹膜反折以上12例（19．7％）,反折以下49例（80．3％）。经手术治疗52例．其中扩大切除术（同时作淋巴结清扫或联合脏器切除）21例,局部切除术（肿瘤剔除或直肠壁部分切除）31例。11例术前予以伊马替尼400mg／d新辅助治疗,41例患者术后或活检诊断后以伊马替尼治疗,其中25例为术后复发姑息治疗。中位随访时间为55（6～391）月,52例手术者1、2、3和5年生存率分别为98．0％、95．6％、86．0％和73．7％;扩大切除术组5年生存率为82．6％,局部切除术组则为77．3％,两组差异无统计学意义（P=0．947）;单因素分析结果显示,生存率仅与复发转移相关（辟0．038）。多因素cox回归分析显示,各项因素均与术后生存率无关（均P〉0．05）。但术后复发及远处转移患者口服伊马替尼治疗者的3年生存率优于未服药者（82．7％比71．4％）。结论直肠GIST多见于直肠下段。外科手术仍是治疗的核心,原则上施行局部完全切除即可,广泛切除或扩大淋巴结清扫不能提高生存率。伊马替尼有助于改善复发转移患者的预后。     

围手术期伊马替尼治疗在可切除原发中高危胃肠间质瘤患者中的应用

目的探讨围手术期应用伊马替尼对可切除原发中高危胃肠间质瘤（GIST）患者凡切除率及预后的影响。方法回顾性分析2001年12月至2012年2月在北京大学肿瘤医院诊断为可切除中高危GIST、并进行手术切除加围手术期伊马替尼治疗的48例患者的临床资料．根据伊马替尼治疗方式分为新辅助治疗组（术前加术后伊马替尼治疗,15例）及辅助治疗组（术后伊马替尼治疗,33例）。比较两组患者R。切除率、术后并发症发生率、无病生存率及总体生存率。结果新辅助治疗组的肿瘤最大径（11．2cm）和平均径（9．1em）均明显大于辅助治疗组（7．7cm和6．2cm,P．0．005和P=0．014）。新辅助治疗组术前治疗疾病控制率为93．3％（14／15）。新辅助治疗组和辅助治疗组患者R0切除率分别为86．7％（13／15）和84．8％（28／33）（P=1．000）。手术并发症发生率分别为13．3％（2／15）和9．1％（3／33）（P=-0．642）。两组患者术后3年无病生存率分别为55％和41％,5年总体生存率分别为83％和75％,差异均无统计学意义（P=0．935,P=0．766）。结论对于可切除的原发中高危GIST,围手术期应用伊马替尼的治疗模式具有潜在优势。