5'-核苷酸酶的研究进展

胞外-5'-核苷酸酶(CD73)是通过糖基-磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜外表面的一种糖蛋白,其分布广,功能多,不仅参与嘌呤核苷酸的补救合成途径,生成腺苷与腺苷受体相互作用,还作为一种重要的免疫信号分子,参与跨膜信号转导及细胞黏附.近年来,CD73的基因表达、调控及其功能,尤其是CD73、腺苷、腺苷受体、效应物的代谢途径及其与疾病的关系等越来越引起人们的关注.     

应用离体细胞不同组合分析法来研究获得性低γ球蛋白血症的多种淋巴细胞缺损

病人周围血液用Ficoll-Hypaque液分离单核细胞,再用S-(2-Aminoethyl)isothiouronium bromide hydrobromide(AET)处理的羊红细胞与T细胞形成玫瑰花而分别得到T细胞与B细胞。将用上法分离的正常人与病人的B细胞、T细胞和经放     

小鼠胸腺皮质5′-核苷酸酶的细胞化学定位

用Robinson和Kamovsky法,以腺苷-5′-单磷酸或紐?5′-单磷酸为底物,铈为捕获剂,显示BALB/c小鼠胸腺皮质的5′-核苷酸酶。同时使用左旋咪唑抑制非特异性碱性磷酸酶活性。腺苷-5-单磷酸酶和紐?5′-单磷酸酶活性反应产物的细胞化学定位基本相似。此酶活性定位于上皮性网状细胞和某些胸腺细胞的质膜外层,特别是两者的相邻面。5′-核苷酸酶活性也见于巨噬细胞溶酶体和上皮性网状细胞的囊泡、靠近质膜的小泡及一些溶酶体内。本研究就胸腺皮质内5′-核苷酸酶的生物学意义进行了讨论。     

脓毒血症时大鼠肾脏Gq/11蛋白的变化

目的 :观察脓毒血症时大鼠肾脏Ｇｑ/1 1蛋白的变化。方法 :采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠腹膜炎脓毒血症模型 ,免疫印迹法测定大鼠肾Ｇｑ/1 1蛋白的含量。结果 :早期脓毒血症时肾脏Ｇｑ/1 1蛋白的含量无明显变化 ,晚期脓毒血症肾脏Ｇｑ/1 1的含量与对照组比较 1 45 6%± 1 6 48% (Ｐ <0 0 5)。结论 :大鼠肾脏Ｇｑ/1 1的增加是脓毒血症时肌醇磷脂信号转导系统功能异常的重要机制。讨论 :由受体、Ｇｑ/1 1蛋白和磷脂酶Ｃ组成的细胞膜信号转导系统可能对肾脏有重要的调控作用。本实验选用大鼠腹膜炎模型 ,此时动物血压虽在正常范围 ,但脓毒血症…     

遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征的研究进展

遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征是一种较为罕见的常染色体显性遗传病,主要表现为血清中铁蛋白的持续性升高但不伴有铁负荷改变及其他血液学方面的异常,同时患者伴有双眼早发性白内障,除此之外无其他特征性的临床改变。本文将从该综合征的流行病学及发病机制、临床表现、鉴别诊断、治疗及预后等方面对该综合征进行综述。     

5-氟尿嘧啶诱导人淋巴细胞免疫耐受的作用观察

药物诱导免疫耐受中,用环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓ－ｐｈａｍｉｄｅ,ＣＰ）诱导最具代表性,它是一种选择性杀伤增殖细胞ＤＮＡ的抗细胞有丝分裂药物。将供体小鼠的脾细胞（１０８）注射到受体小鼠体内,２天后将２００ｍｇ／ｋｇ的ＣＰ注射给受体小鼠,就可以成功地...     

前列腺良性增生的5′-核苷酸酶和硫胺素焦磷酸酶定位及其活性的观察

用光镜和电镜研究了人类前列腺增生的上皮细胞内5′-核苷酸酶(5′-Nase)和硫胺素焦磷酸酶(TPPase)的活性。5′-Nase活性定位分布在上皮细胞的溶酶体、高尔基大泡、小泡、分泌泡以及游离面的质膜,腺腔内分泌物质也呈阳性反应。经克念菌素治疗后,酶活性无明显改变;然而用乙烯雌酚治疗后,酶活性稍弱;睾丸切除后的则完全呈阴性反应。TPPase活性定位在高尔基扁平囊泡的凹面,除睾丸切除后的酶反应完全阴性外,其他各种治疗,对酶活性没有明显改变。     

去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏5’-核苷酸酶的保护作用

目的 :在在体大鼠模型上从生化和酶组化的角度观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血 /再灌注大鼠心脏的保护作用及 5’ 核苷酸酶 (5’ ＮＴ)活性的影响 ,以期为一种非创伤性预处理方式提供实验依据并探讨其机制。方法 :将 2 4只体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ的雄性ＳＤ大鼠分为 4组 ,即 :Ⅰ组 ,假手术组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注组 ,左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血 30ｍｉｎ后恢复再灌 2 0ｍｉｎ ;Ⅲ组 ,经典缺血预处理组 ,按Ｍｕｒｒｙ法进行 ;Ⅳ组 ,去甲肾上腺素预处理组 ,在缺血前 15ｍｉｎ开始由舌静脉在 5ｍｉｎ内缓慢滴入ＮＥ 1.6…     

正常人和先天性性联无丙种球蛋白血症患者T和B淋巴细胞内5′—核苷酸外切酶的活性

现在知道能分别引起严重混合型免疫缺陷和T细胞免疫缺陷的腺苷脱氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷化酶(PNP)缺乏,是嘌呤代谢的两种遗传差错。有报告先天性性联无丙种球蛋白血症(CAG)患者的淋巴细胞缺乏5′—核苷酸外切(ecto-5′-NT)酶活性,它可能是与龟疫缺陷状态有关的嘌呤代谢的第三种遗传差错,而ADA或PNP缺乏的免疫缺陷患者,其酶活性水平严重降低     

Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡

目的：研究Bcl-2家族成员在5-氟尿嘧啶(5-FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用，阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制，为相关肿瘤的治疗提供依据。方法：用CD3ε特异的单克隆抗体(200μg/ml)和5-FU(2．5μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞，诱导细胞凋亡，用MTS比色法检测细胞死亡率，用Western blot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果：CD3ε特异的单克隆抗体和5-FU分别单独处理TJK细胞，都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化，二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl-2过表达可明显降低TJK细胞对5-Fu的敏感性。结论：Bcl-2家族成员参与CD3ε和5-FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节，Bcl-2过表达能显著抑制T淋巴细胞对5-FU的敏感性。     

5-氟脲嘧啶与γ-干扰素作用于Lovo细胞的实验观察

目的观察5-氟脲嘧啶与γ-干扰素联合应用对人结肠癌Lovo细胞株的影响。方法采用Lovo结肠癌细胞体外培养,流式细胞仪检测细胞生长、增殖和凋亡的变化。结果 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用后,细胞增殖率下降指数为0.82～1.99,而细胞凋亡率增加指数为2.48～4.89。结论 5-氟尿嘧啶与γ-干扰素联合应用可降低肿瘤细胞的增殖和提高肿瘤细胞的凋亡。     

一个高铁蛋白血症-白内障综合征家系的基因变异检测

目的 分析一个侗族遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征（HHCS）家系的临床表型和致病变异。方法 采用家系调查研究,收集于怀化市第一人民医院就诊的1个侗族HHCS家系,对部分家系成员进行眼科检查和血清铁蛋白含量测定,抽提DNA,对该家系先证者（Ⅲ3）和患者（Ⅳ1）进行全外显子组测序,寻找致病基因。并用Sanger测序对家系所有成员进行验证。结果 该家系符合常染色体显性遗传。先证者,男,37岁,自初中时发现视力低下,右眼裸眼视力0.5,左眼裸眼视力0.6,双晶状体在位,呈核、后囊下型混浊,核颜色淡黄,血清铁蛋白含量检测为1869μg/L。其余家系成员患者与先证者临床表型相似。基因检测结果显示,该家系铁蛋白的L亚基（FTL）基因5′-UTR中存在1个杂合变异c.-167C>T。经对家系中其他患者和正常亲属Sanger测序验证,该致病变异与家系疾病表型共分离。结论 FTL基因+33C>T(c.-167C>T,chr19-49468598)变异可能是该HHCS家系的致病变异,该变异位点在中国侗族家系中首次报道,为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了可靠的依据。     

内毒素体外诱导巨噬细胞炎症蛋白-2γ的表达

目的：体外研究内毒素对巨噬细胞炎症蛋白—2γ(MIP-2γ)表达的作用。方法：选用小鼠单核-巨噬细胞株RAW264．7及原代培养的BALB／c小鼠肾脏细胞用LPS刺激，以实时荧光定量RT—PCR检测不同时间点MIP-2γ mRNA表达水平的变化。结果：RAW264．7细胞在LPS刺激后2h，MIP-2γ mRNA表达水平快速到达峰值(较正常水平增加约7倍)，以后缓慢下降，至刺激后16h基本恢复正常水平。原代培养肾脏细胞经LPS刺激后12h，MIP-2γ mRNA表达水平增长约50倍。结论：LPS在体外可明显诱导单核-巨噬细胞和肾脏细胞MIP-2γ mRNA的表达，提示MIP-21参与了炎症过程。     

融合蛋白TAP-SSL5对激活的血小板与人淋巴细胞结合的影响

目的:研究抗炎、抗凝双效融合蛋白蜱抗凝血肽(TAP)-金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白5(SSL5)对激活的血小板与人淋巴细胞结合作用的影响。方法:采用免疫磁珠分选法筛选人外周血总淋巴细胞;CCK-8法检测TAP-SSL5对细胞活力的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞株)表面CD162(PSGL-1)的表达及TAP-SSL5对小鼠抗人CD162单抗(KPL-1)与Jurkat细胞结合的抑制作用。以20μmol/L ADP激活人血小板,流式细胞术检测血小板与Jurkat细胞或人淋巴细胞的结合情况,并研究TAP-SSL5的干预作用。结果:30mg/L及以下浓度的TAP-SSL5对Jurkat细胞的活力无明显影响。流式细胞术检测显示,10 mg/L的TAP-SSL5能显著抑制KPL-1与Jurkat细胞的结合;20μmol/L ADP激活的血小板与Jurkat细胞或淋巴细胞的结合率分别为(11.86±4.49)%和(8.32±1.00)%;细胞经10 mg/L TAP-SSL5预先处理后,结合率分别降至(6.73±2.71)%和(5.51±0.70)%,差异有统计学意义。结论:TAP-SSL5可与淋巴细胞表面的PSGL-1结合,从而抑制激活的血小板与人淋巴细胞的结合,这可能是抗炎、抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5发挥其抗炎作用的机制之一。     

无胸腺小鼠体内的T淋巴细胞——胸腺外T细胞的发育途径

胸腺在T细胞发育方面的中枢作用,经廿多年的研究已经证实.研究T-系列细胞在胸腺内发育的细胞学及分子生物学机理,可以用正常有胸腺动物进行,另外也可用无胸腺纯系裸鼠(athymic nude mice,nu/nu)进行,以探讨在无胸腺条件下是否有T细胞存在,及引导发育的机理.裸鼠的突变表现为胚胎发育期颈囊(外胚层结构)不发育,在胚胎第12-13天时,胸腺只剩一厚纤维囊,而无淋巴样前体细胞存在.正常小鼠此时的胸腺内,则有淋巴样     

转移因子、丝裂霉素、5-氟脲嘧啶对淋巴细胞转化的影响

<正> 转移因子(TF)具有增加淋巴细胞转化的作用。多数化疗药物能抑制免疫功能。TF能否拮抗化疗药物的免疫抑制作用尚未见报道。本文观察了TF、丝裂霉素(MMC)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)及TF与MMC或5-Fu合用时对淋转的影响。旨在为TF的临床应用提供实验依据。     

γ-干扰素诱导蛋白10与风湿性疾病关系的研究进展

γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)是CXC类趋化因子之一,CXCR3是其唯一受体.研究表明:IP-10具有重要的生物学功能,参与多种疾病的发生,与多种风湿性疾病关系密切,主要介导Th1型炎症反应,还可抑制新生血管形成.另外,测定IP-10水平也可对某些风湿性疾病进行活动度评价、预后判断以及治疗决策指导.     

室间隔缺损新的相关基因-蛋白酪氨酸激酶的实验研究

目的:了解蛋白酪氨酸激酶在心脏发育中的作用,探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号转导途径。方法: 使用基因芯片(microarray)的方法筛选ALK3下游基因,并用RT-PCR和定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果: 在心脏特异的ALK3基因敲除下,11.5 d小鼠胚胎心脏中,蛋白酪氨酸激酶(PTK)基因的表达水平比正常对照组高3.7倍。结论: 蛋白酪氨酸激酶基因是骨形态形成蛋白信号途径的调控因子,并与室间隔缺损的形成有关。     

阿霉素磁性蛋白微球联合外磁场对恶性肿瘤细胞的毒性试验

为了观察恒定磁场诱导下阿霉素磁性蛋白微球体外对恶性肿瘤细胞生长的抑制作用,将体外培养的Waleker-256细胞分为阿霉素磁性微球联合磁场组,阿霉素磁性微球组及阿霉组三组,倒置显微镜观察细胞的生长状态,改良MTT法检测各组细胞的抑制率,结果表明：阿霉素磁性微球组与游离阿霉素组抑制率（P＞0．05）,联合磁场组抑制率明显提高（P＜0．01）,细胞形态出现显著变化,显示阿霉素磁性蛋白 球与游离阿霉素对恶性肿瘤细胞具有相似的抑制作用,联合恒定磁场可增强其抑瘤效应。     

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。