bFGF及TGF-β与良性前列腺增生关系的研究进展

良性前列腺增生(benign prostatic hyperplaaia BPH)是老年男性的常见病和多发病,随着社会人口老年化,BPH的发病率将会越来越高.多肽生长因子bFGF及TGF-β以旁分泌及自分泌方式作用于前列腺上皮及间质细胞,在BPH发病过程中发挥着重要作用.b-FGF/TGF-β比例的平衡及两者的精细调控,可能是维持前列腺增殖与凋亡的机制之一.     

FGFs和TGF—βs在前列腺增生发病机制中作用研究进展

多肽类生长因子是一组强有力的细胞生长调节物质，它足多细胞生物进行细胞间信息交流的物质基础。它们组成复杂的生物信息网络，通过自分泌、旁分泌或内分泌形式刺激细胞生长、抑制细胞增殖或促进细胞分化与恶变。作为前列腺细胞正向、双向调节生长因子．成纤维生长因子族（fibroblast growth factors，FGFs）、转化生长因子β族（transforming growth factor betas，TGF-βs）在前列腺增生（benign prostate hyperplasia，BPH）发病中发挥重要作用。本文就FGFs、TGF—βs在BPH发病机制中研究进展做一综述。     

良性增生前列腺组织中TGFβ1mRNA和蛋白的表达

目的：在转录和翻译水平探讨转化生长因子β1（TGFβ1）在良性前列腺增生症（BPH）前列腺组织中的表达及意义。方法：应用原位杂交和 免疫组织化学法对22例BPH和10例正常前列腺（NP）组织标本中TGFβ1的表达进行定性、定位检测。结果：BPH前列腺和NP组织的上皮和间质都有明显的TGFβ1mRNA表达,其表达在BPH和NP间差异无显著性意义（P＞0．05）;在两组间,基质细胞TGFβ1mRNA表达明显高于上皮细胞（P＜0．01）。BPH前列腺和NP的上皮组织中TGFβ1蛋白表达较弱,且两者之间差异无显著性意义（P＞0．05）;间质中TGFβ1表达均为阳性,BPH前列腺间质中阳性表达显著强于NP的间质（P＜0．01）,以基质为主要成分的增生结节中表达更高。结论：TGFβ1是导致BPH前列腺间质增生的重要物质,启动BPH发生发展的因素在转录后水平调控TGFβ1的表达。     

良性增生前列腺组织中TGF_(β1)mRNA和蛋白的表达

目的 :在转录和翻译水平探讨转化生长因子 β1(TGFβ1 )在良性前列腺增生症 (BPH)前列腺组织中的表达及意义。方法 :应用原位杂交和免疫组织化学法对 2 2例 BPH和 10例正常前列腺 (NP)组织标本中 TGFβ1的表达进行定性、定位检测。结果 :BPH前列腺和 NP组织的上皮和间质都有明显的 TGFβ1 m RNA表达 ,其表达在 BPH和 NP间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;在两组内 ,基质细胞 TGFβ1 m RNA表达明显高于上皮细胞 (P<0 .0 1)。 BPH前列腺和 NP的上皮组织中 TGFβ1 蛋白表达较弱 ,且两者之间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;间质中 TGFβ1 表达均为阳性 ,BPH前列腺间质中阳性表达显著强于 NP的间质 (P <0 .0 1) ,以基质为主要成分的增生结节中表达更高。结论 :TGFβ1 是导致 BPH前列腺间质增生的重要物质 ,启动 BPH发生发展的因素在转录后水平调控 TGFβ1 的表达。     

多沙唑嗪诱导前列腺增生细胞凋亡

为研究肾上腺素活性与良性前列腺增生（BPH）的发病机理的相关性，Yang G等建立了大鼠BPH模型，应用多沙唑嗪（一种α1肾上腺素能受体阻滞剂）进行实验。在大鼠前列腺重建模型系统（MPR）应用逆转录病毒（BabeTGF-β1Neo）转导转化生长因子β—1（TGFβ—1）建立类似于良性前列腺增生的病变，并增加儿茶酚胺神经元的数量。这些老鼠每天腹膜内的注射3mg／kg的多沙唑嗪。结果显示，多沙唑嗪能够明显减少通过BabeTGF-β1感染的MPRs的湿重。PCNA阳性的上皮细胞在多沙唑嗪组和蒸馏水对照组的比例相似。     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的机制研究

目的 用Y染色体追踪移植细胞在骨折愈合不同时相的存活、转归，及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF—p1)的动态表达。方法 将SD雄性乳鼠体外培养成骨细胞移植到96只SD雌性鼠骨质疏松性骨折部位(实验组48只；对照组48只)，用原位杂交、免疫组织化学检测骨折愈合不同时相标本的Y染色体；以及VEGF、TGF—β1和VEGFmRNA、TGF—β1RNA的动态表达。结果 实验组大鼠：成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存、生长繁殖，促进骨质疏松性骨折愈合。移植84d后仍存活。实验组大鼠：VEGF、VEGF—mRNA在7d见阳性细胞，14d有分泌高峰。TGF-β1mRNA在3d见阳性细胞，7～10d有分泌高峰。对照组均未见明显分泌高峰。结论 移植的成骨细胞参与骨质疏松性骨折修复，至少存活84d。VEGF、TGF—β1的动态表达对促进骨折愈合起一定作用。     

非剥脱性激光嫩肤作用机制的实验研究

目的 探讨激光非剥脱性嫩肤的作用机制。方法 昆明小鼠分A、B、C三组，分别以1320nm激光照射小鼠背部左侧皮肤1、2和3次，背部右侧作自身对照，共4个疗程。免疫组化法检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和转化生长因子β1（TGF—β1）在受照射小鼠皮肤中的表达。体外培养人成纤维细胞，随机分对照组及低、中、高三个照射能量组。用1320nm激光以15J/cm^2、20J/cm^2和24J／cm^2能量照射，于0、24、48和72h ELISA法检测上清液bFGF和TGF—β1的分泌水平。结果 照射后bFGF和TGF-β1在组织中的表达增加，激光照射3次组与各组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；成纤维细胞计数增加（P〈0．05）；bFGF分泌的量，20J／cm^2、24J／cm^2能量组增加，24h达高峰，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。TGF—β1分泌的量在照射的各能量组均下降，24h达峰底（P〈0．01）。结论 ①激光对成纤维细胞的直接作用是促进bFGF分泌，抑制TGF—β1分泌；而对组织的综合作用是两者分泌均增加；②非剥脱性激光通过光或热的作用直接刺激成纤维细胞分裂增殖；使成纤维细胞自分泌bFGF增加并通过血管因素的作用使bFGF及TGFβ1增加，促进成纤维细胞分裂增殖并使胶原合成增多。     

雄激素和转化生长因子β1协同调节前列腺基质细胞增殖和分化

目的：探讨双氢睾酮（DHT）和转化生长因子β1（TGF－β1）对体外培养的前腺基质细胞增殖和分化的影响及前列腺基质增生的机制。方法：体外培养人前列腺基质细胞，加入DHT和TGF－β1，采用MTT法检测细胞增殖，免疫组化、RT－PCR方法检测平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达。结果：对平顶期的前列腺基质细胞，单独应用DHT或TGF－β1无显著刺激增殖作用（P＞0．05）；DHT和TGF－β1联合应用时，可显著刺激基质细胞增殖（P＜0．01），TGF－β1可使前列腺基质细胞中平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达增加（P＜0．05），与DHT联合应用时这种作用更强。结论：DHT和TGF－β1具有协同促进前列腺基质细胞增殖和分化的作用。TGF－β1和雄激素可能是前列腺基质增生和平滑肌细胞过度增殖的重要诱因。     

血管紧张素Ⅱ通过JNK-c-Jun/AP-1信号通路调控系膜细胞转化生长因子β1表达

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)-c—Jun／活化蛋白(AP)-1信号转导通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球系膜(MC)细胞转化生长因子β1(TGF—β1)表达中的调控作用。方法 应用核酸酶保护法检测系膜细胞TGF—β1mRNA表达。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)、超迁移实验和非放射性激酶活性检测法检测系膜细胞内AP—1活化、AP-1的组成及JNK活性。应用ELISA法检测培养上清中纤连蛋白(FN)。结果 AngⅡ可诱导MC内JNK活化，刺激30min后，JNK活性达到高峰，1h后几乎恢复至正常水平。AngⅡ刺激后MC内AP-1活性显著增强，活化的AP-1主要含有c-Jun和c—Fos亚基。AngⅡ可促进MC表达TGF—βl及分泌FN，抗TGF—β1抗体显著抑制AngⅡ促进的FN分泌。JNK特异性抑制剂SP600125显著抑制AngⅡ诱导AP-1活化、TGF—β1表达及FN分泌。结论 AngⅡ-JNK—c-Jun／AP-1-TGF—β1-FN信号转导通路在肾小球硬化中发挥一定作用，SP600125能部分抑制AngⅡ诱导的AP-1活化、TGF—β1表达及FN的合成，可能具有一定的治疗作用。     

反义转化生长因子β1表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞增殖活性的影响

目的：构建反义TGFβ1基因，探讨阻断肿瘤细胞TGFβ1自分泌环对细胞增殖活性的影响。方法：采用RT-PCR获取人TGFβ1cDNA后，构建反义TGFBl表达载体pcDNA3-TGFβ1(-)。将pcDNA3-TGFβ1(-)转染骨肉瘤细胞MG-63，采用流式细胞仪检测阻断TGFβ1自分泌环对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果：pcDNA3-TGFβ1(-)转染骨肉瘤细胞后，反义基因转染细胞MG—TGFβ1(-)的G0／G1期细胞从56．2％和60．1％增至71．6％，S期细胞从19．1％和17．8％降至12．9%，细胞增殖活性明显降低。结论：通过阻断TGFβ1自分泌环以降低骨肉瘤细胞表达的TGFβ1，可以明显抑制肿瘤细胞增殖活性。进一步的深入研究，必将为骨肉瘤疗效的提高开辟新的研究方向。     

正常前列腺基质细胞抑制前列腺癌细胞系PC-3增殖的体外实验研究

目的 探讨前列腺癌发病的基质－上皮相互作用机制。方法 体外培养前列腺基质细胞和前列腺癌（Pca)细胞系PC－3。分别取已用于培养液作为另一种细胞的条件培养液,观察条件培养液对细胞增殖的影响。用双层软琼脂分析法混合培养前列腺基质细胞和PC－3细胞。用MTT法检测不同浓度TGFβ1对PC－3细胞增殖率的影响。用免疫组化SP法研究基质中平滑肌细胞的比例。用RT－PCR方法检测基质细胞TGFβ1的表达。结果 PC－3细胞的增殖在混合培养时受到抑制。混合培养3周PC－3细胞的增殖率对照组的41％（P＜0．01）。PC－3细胞的增殖在加入TGFβ1后受到抑制,随TGFβ浓度的增加,对PC－3细胞的抑制作用增强。随TGFβ1作用时间的延长,相同浓度的TGFβ1抑制效应更显著（P＜0．01）。前列腺基质细胞表达大量的TGFβ1。结论 前列腺基质细胞可以通过分泌TGFβ1抑制PC－3的增殖。前列腺癌的基质可能存在病变,使癌变的上皮逃脱基质的抑制作用。     

转化生长因子β1缓释载体诱导骨髓基质干细胞成软骨分化

目的探讨转化生长因子β1（TGF—β1）缓释对骨髓基质干细胞诱导成软骨分化的影响。方法乳化交联法制备TGF—β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合，将骨髓基质干细胞置于复合载体中立体培养，通过HE染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色、扫描电镜观察复合载体对细胞的增殖、分化及功能的影响。结果骨髓基质干细胞于复合载体中培养，细胞形态类似软骨细胞，并可见细胞增殖及细胞外基质分泌，Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示基质中有Ⅱ型胶原表达，其细胞增殖率及Ⅱ型胶原分泌功能均较对照组明显增强。结论复合载体能够控制TGF-β1的释放并保持其活性，可促进骨髓基质干细胞的增殖并诱导其向软骨细胞分化。     

前列腺组织中EGF、bFGF的表达

目的：研究EGF、bFGF在前列腺组织中的表达。方法：应用mRNA斑点杂交、原位杂交、免疫组织化学及原位杂交与免疫组织化学双染法检测6例正常前列腺（NP）、27例良性前列腺增生症（BPH）前列腺组织中EGF及bFGF的表达。结果：BPH前列腺组织和NP组织中无均无EGF mRNA表达,EGF蛋白表达呈弱阳性,两组间差异无显著性意义（P＞0.05）;NP组织上皮细胞有较多bFGF mRNA表达,但无bFGF翻译,基底基质细胞有少量mRNA及蛋白表达,二者表达水平基本一致;BPH前列腺组织上皮细胞无bFGF mRNA表达,但局灶性增殖上皮细胞细胞膜上有bFGF,基底基质细胞有大量bFGF mRNA转录及蛋白质翻译,以局灶性增殖区最为明显。结论：NP及BPH的前列腺组织中无EGF分泌细胞;bFGF在前列腺基底基质细胞过度表达,以自分泌、旁分泌方式促进了基质和上皮的非均一性增殖。     

5α-还原酶在良性前列腺增生发展中的作用

良性前列腺增生(BPH)是老年男性的常见病，51-60岁和80岁以上的男性分别有50％和90％有前列腺组织学增生。有功能的睾丸和高龄是BPH发病的必备条件。男性从青春期开始体内雄性激素分泌增加，经过40-50年漫长的过程，前列腺细胞在雄性激素的持续作用下发生变化，到老年形成BPHo体内的主要雄激素睾酮在BPH的发生发展中起着重要的作用，     

TGF-β1在慢性肾脏疾病中的作用

在众多促纤维化的因子中，TGF—β1被认为是最重要的促纤维化因子之一，它能增加ECM的合成、抑制ECM的降解。而ECM在肾小球的异常沉积是引起肾小球硬化的主要原因之一。测量尿中TGF—β1的水平可能反映了肾脏TGF—β1的净生成量，不失为一种间接测量肾内TGF—β1的好方法。AngⅡ能刺激TGF—β1增加，而这个过程可被AngⅡ阻断剂(ACEI／ARB)阻断。ACEI与ARB减少肾纤维化均有效，联合使用没有显示相加作用，它们不能完全阻断TGF—β1过表达，只能缓慢而不能完全阻滞肾衰竭的进展。     

雄激素对大鼠前列腺细胞凋亡与生长因子表达的影响

目的：探讨雄激素去势对大鼠前列腺侧叶LP1、LP2细胞凋亡与生长因子TGFα、KGF、bFGF、TG-Fβ1mRNA表达的影响。方法：将健康成年雄性Wistar大鼠,随机分成正常对照组、雄激素去势组及雄激素替代组。应用TUNEL法及半定量PCR方法分别检测大鼠前列腺侧叶LP1和LP2细胞凋亡及各生长因子表达变化。结果：在去势和雄激素替代治疗前后,前列腺腹、侧叶LP1的TGFβ1和TGFα表达变化,与前列腺LP1细胞凋亡、增殖密切相关;而LP1的KGF、bFGFmRNA表达与雄激素并不呈简单的正相调节关系。在侧叶,雄激素对LP2四种生长因子的表达无明显影响。结论：大鼠前列腺不同分叶的细胞对雄激素调节敏感忡与其生长因子表达的调节方式不同有关：TGFβ1和TGFα是前列腺生长调节中最重要的抑制和促分裂生长因子,KGF、hFGF可能主要参与雄激素介导的生长因子的平衡调节。     

TGF-β/Smad信号通路及其在肾纤维化中的作用

转化生长因子-β（transforming growth factor—β,TGF—β）是介导肾小球硬化和肾间质纤维化关键的细胞因子，其作用包括趋化和活化炎性细胞，介导肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化，以及刺激细胞外基质蛋白的合成及降低基质金属蛋白酶的活性和／或增加蛋白酶抑制剂的合成来促进细胞外基质的沉积。smad蛋白是TGF—β受体的胞内激酶底物，介导了TGF—β的胞内信号转导。Smad7是负反馈调节TGF—β功能的细胞分泌因子，其过度表达可能改变R—Smads和I—Smads对TGF—β诱导纤维化的应答或阻断的病理生理平衡。深入研究Smads介导的TGF—β胞内信号转导，将有助于对肾脏纤维化发病机制的理解，为探索新的治疗途径、开发临床新药提供理论依据。     

阻断转化生长因子-β受体信号转导降低瘢痕疙瘩细胞转化生长因子-β1自分泌的研究

目的 研究瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子－β1（TGF－β1）的自分泌现象和阻断TGF－β受体信号转导对TGF－β1自分泌的调控。方法 组织块法体外培养瘢痕疾疙瘩成纤维细胞，加入重组人源（rh）TGF－β1（5mg/L）或含缩短型TGF－βⅡ型体的重组腺病毒（50pfu/cell），并用Northern印迹观察它们对TGF－β1极其Ⅰ、Ⅱ型受体的基因调控。结果 rhTGF－β1能上调TGF－β1（30％－50％）和Ⅰ型受体（30％－90％）的基因表达，但不影响Ⅱ型受体的基因表达。短型TGF－βⅡ型受体在瘢痕疙瘩细胞的过度表达减少细胞TGF－β1（50％－65％）和Ⅰ型受体（21％－55％）的基因表达，但不影响Ⅱ型受体的基因表达。结论 瘢痕疙瘩细胞存在TGF－β1的自分泌现象，而缩短型TGF－βⅡ型受体的过度表达可以通过阻断TGF－β的信号转导来降低TGF－β1的自分泌。     

TGF-β1缓释载体体外构建组织工程软骨

目的制备负载TGF—β1壳聚糖缓释微球的三维多孔壳聚糖支架，检测TGF—β1缓释载体对软骨细胞功能的影响．方法乳化交联法制备TGF—β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合，检测其体外降解并通过ELISA法检测微球的载药、释药性能。将软骨细胞置于复合载体中立体培养，通过苏木素伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色、扫描电镜观察复合载体对细胞的增殖、功能的影响。结果缓释微球的TGF—β1包封率达90．1％，并具有良好的药物缓释性能，软骨细胞在复合载体中增殖良好，并能够保持其表型及Ⅱ型胶原分泌功能。结论负载TGF—β1壳聚糖缓释微球的壳聚糖支架作为软骨细胞的载体在组织工程软骨的构建及软骨损伤的修复中有良好的应用前景。     

低频微动后转化生长因子β1与胰岛素样生长因子Ⅰ在新骨组织中的表达研究

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF—β1）与胰岛素样生长因子Ⅰ（insulinlike growth factor Ⅰ，IGF—Ⅰ）在低频微动引起骨折间接愈合过程中的表达与意义。方法 山东雌性高腿绵羊15只，行双侧胫骨中段横形截骨，形成2mm骨缺损，用带有微动装置的单边外固定支架固定。术后10d，随机选择一侧肢体为微动组，以频率1Hz，幅度0．25mm（30min／d）微动，4周结束；另一侧后肢不微动，为对照组。术后3、4和6周分别处死5只动物，应用免疫组织化学与RT—PCR检测骨痂组织中TGF—β1与IGF—Ⅰ的表达。结果免疫组织化学：术后3周，微动组TGF—β1在骨痂边缘的新生软骨细胞各区均有阳性表达，以增殖区最为显著；IGF—Ⅰ主要表达于软骨内骨化带边缘的成骨细胞，钙化并转化为新骨的软骨细胞与骨细胞中。对照组的相应区域，TGF—β1有少量表达，IGF—Ⅰ几乎无表达。4周，微动组新骨组织逐渐成熟，TGF—β1表达强度减弱，阳性信号主要位于细胞外基质与骨化带周围成骨细胞中；IGF—I的表达趋于高峰，主要集中在新骨表面的成骨细胞、趋于成熟的骨细胞及趋于钙化的类骨质。对照组TGF—β1与IGF—Ⅰ仅有少量表达。6周，微动组TGF—β1的表达显著衰退，IGF—Ⅰ仍有适量表达，主要在新生骨小梁骨细胞中。对照组TGF—β1与IGF—Ⅰ仅有微量表达。微动组术后3、4周TGF—β1，3、4、6周IGF—Ⅰ吸光度（A）值与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR电泳示：术后3、4周，微动组骨痂中TGF—β1与IGF—Ⅰ的mRNA有较高的表达量；对照组骨痂中TGF—β1、IGF—Ⅰ的mRNA有轻度表达。术后6周，微动组TGF—β1、IGF—Ⅰ的mRNA表达量显著降低，但仍略高于对照组。微动组术后3、4周TGF—β1，3、4、6周IGF—Ⅰ A值与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论低频微动在骨折愈合早期，可以促进TGF—β1与IGF—Ⅰ的表达。它们协同调节软骨内骨化的进程；后期主要由IGF—Ⅰ调节骨细胞的分化与类骨质的矿化，其可能更多的参与调节微动各个时期的细胞生物行为。