LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞IL—8的表达及对PMN趋化作用影响的研究

目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、0.5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,ELISA和原位杂交试验分别检测培养基上清液中分泌的IL -8及PMVEC内IL -8mRNA的表达 ,同时琼脂糖平板法检测对PMN的趋化作用 ,并通过抗IL -8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8 ,包括促进IL -8mRNA的表达及IL -8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL -8分泌。LPS能促进PMVEC对PMN的趋化 ,随刺激作用的持续 ,诱导的PMVEC对PMN的趋化作用加强。抗IL -8抗体能显著抑制对PMN的趋化作用(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导能促进PMVEC高效表达和分泌IL -8 ,从而为PMN的迁移提供必需的物质条件 ,发挥对PMN的趋化作用而参与导致肺损伤     

脂多糖对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及其调控机理

目的探讨脂多糖(LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子κB(NF-κB)的调控机理。方法肺微血管内皮(PMVEC)细胞生长至80 %以上融合度时用于实验。加入LPS以100ng/ml浓度刺激细胞分别至0、0.5、1、2、4、6、8h ,或LPS分别以1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml刺激细胞至1h或6h为检测时相点 ,每组6个标本。至预定时相点离心收集培养液上清 ,行IL -8ELISA检。用原位杂交试验检测培养液上清中分泌的IL -8及PMVEC内IL-8mRNA的表达 ;凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测NF-κB的活化 ,以积分灰度值表示NF-κB的活性变化。观察NF -κB活化抑制 (PDTC)对IL-8表达的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8,随刺激时间延长IL -8水平逐渐升高 ,与0h相组比 ,100ng/mlLPS刺激后从2小时开始即有明显上升 (P<0.05) ,8h达到峰值 ,为5.86±0.68ng/ml(P<0.01)。与对照组比 ,1ng/mlLPS刺激6h即能显著诱导IL-8的表达(P<0.05) ,10ng/ml、100ng/ml的诱导作用非常显著(P<0.01) ,随着LPS浓度的增加而增加。LPS刺激后能明显地诱导IL -8mRNA的表达。100ng/mlLPS刺激后从1h开始即在胞浆中显示IL-8mRNA的强阳性表达 ,随作用时间延长 ,IL-8mRNA表达增加。至6h达到高峰 ,8hIL -8mRNA表达略有下降。同时显示IL -8mRN     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及对PMN黏附作用影响的研究

目的探讨内素毒(Endotoxin LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)ICAM-1表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)黏附作用的影响。方法100ng/m l LPS刺激PMVEC 0、2、4、6、8 h或10、50、100 ng/m l LPS刺激6 h,同时检测PMVEC ICAM-1的表达(免疫细胞化学法)、PMVEC-PMN黏附率及抗ICAM-1抗体对黏附作用的影响,并进行PMVEC与PMN黏附作用的扫描电镜观察。结果LPS的直接刺激可诱导PMVEC ICAM-1的表达增加,且表现为随LPS刺激的时间、剂量增加而增加;同时LPS直接刺激也促进了PMVEC对PMN的黏附率增加,其变化在时间与方式上几乎与ICAM-1的表达增加同步。Anti-ICAM-1抗体可以显著地抑制LPS诱导的PMVEC-PMN黏附(P<0.01)。扫描电镜可以直观地显示PMVEC-PMN黏附的超微结构表现,并且首次通过这种方式观察到了“间接系链”现象的存在。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导可以促进PMVEC表达ICAM-1,从而为PMVEC-PMN的黏附提供物质基础,而“间接系链”的发生更扩大和巩固了黏附效果。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及NF-κB作用的实验研究

目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞 (PWVEC)ICAM -1的表达及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM -1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM -1表达的影响。结果PMVECICAM -1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM -1的表达 (P<0 .01)。结论LPS刺激诱导NF-κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及 NF-κ B作用的实验研究

目的研究 LPS诱导的肺微血管内皮细胞( PWVEC) ICAM- 1的表达及调控机制.方法 100ng/ml LPS刺激 PMVEC 0h、2h、4h、6h、8h或 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激 6h,免疫细胞化学检测 PMVEC ICAM- 1的表达.凝胶电泳迁移率变化分析检测 NF- κ B的活化.并通过加入活化阻断剂 PDTC观察对 PMVEC ICAM- 1表达的影响.结果 PMVEC ICAM- 1的表达与 LPS的刺激呈时相 - 剂量依赖方式.LPS的刺激迅速活化 NF- κ B,60min达到高峰,后逐渐下降.PDTC能显著降低 ICAM- 1的表达( P<0. 01).结论 LPS刺激诱导 NF- κ B的活化,启动 ICAM- 1的合成表达.     

LPS诱导肺微血管内皮细胞与PMN的粘附作用及核调控机理的实验研究

目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)与(PMN)的粘附作用及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、2、4、6、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,检测PMVEC -PMN粘附率、PMVECICAM -1的表达(免疫细胞化学)。EMSA方法检测NF -κB的活化。并通过加入An ti_ICAM -1抗体或活化阻断剂观察对PMVEC -PMN粘附率的影响。结果PMVECICAM -1的表达及与PMN的粘附与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。Anti-ICAM -1抗体、PDTC能显著降低PMVEC -PMN粘附(P<0.001)。结论LPS刺激诱导NF -κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达 ,从而导致PMVEC -PMN的粘附增加     

低氧肺微血管内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞的作用

慢性阻塞做肺病作为临床上的常见病，严重危害人们健康，对其病理进程已有多年研究，认识到低氧可以导致肺血管平滑肌细胞增生，肺腺泡及微血管的构型改建。既往人们注意到肺内皮细胞可以分泌一些物质调节一滑肌细胞增生。关于肺做血管内皮细胞（pulmonarymicrovascularendotheliacell，PMEC低氧状态下与平滑肌细胞的关系研究甚少，然而，肺做血管内皮细胞却是最早感受低氧的细胞之一。本研究通过离休培养的大鼠PMH：和大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecellPASMC），从细胞相互作用的角度研究低氧对PASMC的作用…     

大鼠肺微血管内皮细胞的培养

目的建立简单有效地获取大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)的培养方法。方法从实验动物、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改进,应用W istar雄性大鼠的肺组织,进行PMVEC的原代培养并传代培养;通过倒置显微镜、扫描、透射电镜观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定。结果体外培养的大鼠PMVEC呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列,获得的血管内皮细胞纯度较高,抗Ⅷ因子阳性反应,成功建立了PMVEC的原代培养方法。结论改进的植块培养法简便、可靠,获得的PMVEC纯度高,生长状态良好,保持了内皮细胞的结构和功能,可用于其功能特性的进一步研究。     

爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞损伤作用的病理学观察

目的 :通过观察爆炸冲击波对肺微血管内皮细胞的损伤 ,了解伤后微循环功能变化的病理学基础。方法 :采用爆炸冲击波对兔损伤动物模型以及对培养肺微血管内皮细胞损伤体外模型 ,从光镜、电镜水平上观察内皮细胞病理学变化。结果 :光镜下的主要表现为肺泡出血、肺泡隔断裂、肺大泡形成以及肺间质水肿 ,电镜下可见肺微血管内皮细胞肿胀致使血管腔狭窄 ,内皮细胞间裂隙增宽 ,核肿胀、异染色质增多 ,以及线粒体肿胀、嵴排列混乱等病理变化。体外实验主要表现为爆炸冲击波对培养的肺微血管内皮细胞的剥脱性损伤。结论 :爆炸性冲击伤后肺微内皮细胞的损伤严重且广泛 ,是伤后肺微血管通透性变化与肺微循环功能障碍发生的重要病理基础。     

LPS对人胚胎胰岛分泌IL-6的调控效应

目的：为了探讨免疫介质ＬＰＳ对胚胎胰岛分泌ＩＬ－６以及对胰岛功能的影响，以便为研究免疫系统与内分泌系统的内在联系提供依据。方法：采用用常规消化方法分离人胚胎胰岛并对其进行原代培养，加入浓度为１０ｍｇ／Ｌ ＬＰＳ，经不同时相收获上清，测定ＩＬ－６、胰岛素、胰高血糖素含量和ＩＬ－６ ＭＣ或的试验，对ＬＰＳ刺激和对照一胰岛进行ＩＬ－６ ＲＮＡ斑点杂交。结果：１．人胚 ＬＰＳ刺激分泌ＩＬ－６的能力明显加强     

铜绿假单胞菌活菌诱导不同分化状态的U937细胞表达IL-8的研究

目的探讨铜绿假单胞菌（Pseudomonas aenginasa，Pα）活菌对不同分化状态的U937细胞表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C（PKC）和核因子κB（NF-κB）的调控机理。方法采用ELISA和RT-PCR法，分别对Pα诱导不同分化状态的人单核白血病细胞系U937细胞分泌IL-8及U937细胞IL-8 mRNA表达进行研究，应用Western blot检验IκB及NF-κB的蛋白表达，观察PKC和NF-κB活化抑制剂对IL-8表达的影响。结果Pα可促进U937细胞及佛波酯（PMA）分化的U937细胞IL-8 mRNA的表达及IL-8的分泌，而且具有明显的量效和时效关系。Pα能直接诱导并迅速活化NF-κB，1h达到高峰，以后逐渐下降。PKC阻断剂calphostin C及NF-κB阻断剂PDTC均能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达（P〈0．01）。结论IL-8的产生可能与U937细胞的分化状态有关；Pα可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化，从而启动IL-8的高效表达和分泌。     

谷氨酰胺、地塞米松对内毒素血症大鼠血清IL-8,IL-10的影响

目的通过观察谷氨酰胺、地塞米松对内毒素血症大鼠血清IL-8,IL-10的影响,探讨地塞米松、谷氨酰胺对内毒素血症大鼠的保护途径.方法选健康18日龄Wistar大鼠120只,随机取8只腹腔注射生理盐水作对照组(0h),余大鼠按腹腔注射药物不同分成内毒素(L)、谷氨酰胺预防(Gln)地塞米松治疗(D1)组,每组40只,各组于加LPS后2、4、6、24及72h分别断头取血,用放免法测定IL-8,IL-10.结果(1)L组IL-8在2、24h出现两次升高,前者升高程度更明显,差异显著,P<0.01;D1和C1n组各时间点IL-8均低于L组,尤其以2h抑制作用更强,差异显著,P<0.01;Gln组第一次高峰在6h.(2)L组IL-10在2、72h出现两次升高,后者升高程度更明显,差异显著,P<0.01;D1和Gln组第二次升高均提前至24h,增幅最高的为D1组,而其它各时间点IL-10均以Gln组升高明显,差异显著,P<0.01.结论细胞因子IL-8/IL-10在内毒素血症中起主要的损害与抗损害作用,地塞米松治疗对机体能抑制损伤/促进修复;谷氨酰胺不仅有与地塞米松相似的作用,而且可使损伤延迟,二者都能使修复作用提前.     

IL-8诱导血管内皮细胞迁移的实验研究

为了探讨不同浓度IL-8诱导的血管内皮细胞迁移从而为进-步研究IL-8引起血管内皮细胞迁移的分子机理选择最佳的IL-8浓度。采用内皮细胞transwell小室迁移率分析法和刮除-迁移分析法，考察IL-8对血管内皮细胞迁移的影响。结果表明，各种浓度的IL-8均可促进血管内皮细胞迁移，其中以IL-8浓度为100ng／ml时内皮细胞迁移率最高。     

大鼠主动脉血管内皮细胞受刺激后IL-8的产生

为了研究内毒素及炎症因子对血管内皮细胞分泌IL - 8的影响 ,分别用内毒素、IL - 1、TNFα刺激体外培养的Wister大鼠主动脉内皮细胞 ,并用放射免疫分析检测IL - 8的含量。经内毒素、IL- 1、TNFα刺激后 ,内皮细胞体外培养液内IL - 8的分泌量分别为 :3.1± 0 .6,6.8± 1.2 ,5.8± 1.6;空白对照为 0 .6± 0 .3,单位为ng/mL。内毒素、IL - 1、TNFα能促进内皮细胞分泌IL - 8,内皮细胞在机体炎症过程中起重要作用。