急性肝衰竭时肠源性内毒素血症对肝脏能量代谢的影响

目的:研究急性肝衰竭时肠源性内毒素血症对肝脏能量代谢的影响。方法:以硫代乙酰胺(TAA)染毒建立急性肝损伤大鼠模型;应用酶荧光法测定动脉血酮体(乙酰乙酸、β-羟基丁酸)浓度及肝细胞线粒体ATP含量;采用结肠切除术并观察血浆内毒素水平与血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)活性的变化。结果:TAA组大鼠血浆内毒素水平与血清ALT活性均显著高于正常对照组(P＜0.01),动脉血酮体比(AKBR)降至0.4以下,动脉血中总酮体浓度显著低于正常对照组(P＜0.01)。切除结肠的TAA染毒组大鼠未发生内毒素血症,肝细胞线粒体ATP含量显著高于TAA组(P＜0.01),血清ALT活性虽高于正常对照组(P＜0.05),但显著低于TAA组(P＜0.01)。结论:肠源性内毒素血症可损伤肝脏能量代谢,使肝脏代谢和功能发生严重障碍,在急性肝衰竭的发生过程中具有关键性作用。     

内毒素血症在肝癌发生发展中的作用

目的:探讨内毒素血症在肝癌发生发展中作用。方法:利用饮水中加入0.03%TAA,4个月形成肝硬化,6个月形成肝癌动物的模型。TAA+LPS组从第5个月开始皮下注射内毒素,至实验结束。在肝癌发生发展过程中进行血浆内毒素水平、γ-GT活性、DNA指数、增殖指数,并对N-ras、p53基因点突变进行分析。结果:内毒素可增加bcl-2与p53蛋白过度表达与增加N-ras、p53基因的点突变,增加自由基生成与降低抗氧化酶活性,加重DNA损伤。结论:内毒素能够促进TAA诱发肝癌变的过程。     

赛庚啶对内毒素血症小鼠氧化损伤的对抗作用

目的:研究赛庚啶对内毒素(LPS)血症小鼠氧化损伤的对抗作用。方法:小鼠尾静脉注射LPS,造成内毒素血症模型,观察赛庚啶能否提高小鼠24h存活率,并测定血浆NO的水平,心、肝、肾和脑组织中SOD和GSH-Px活力以及脂质过氧化产物MDA含量。结果:赛庚啶预防给药能够显著提高致死量LPS攻击后小鼠24h的存活率,使血浆NO2-/NO3-的水平显著降低,其中高剂量组SOD和GSH-Px活力增高,MDA含量降低。低剂量组SOD活力增高,但肝和脑组织中MDA含量下降不明显,肝和肾组织GSH-Px活力无明显增高。结论:赛庚啶预防给药能够防治LPS血症,改善小鼠LPS血症时重要脏器氧化性损伤状态,抑制血浆NO水平过度升高。     

iNOS抑制剂SMT对内毒素血症大鼠淋巴管动力学的影响

目的 :研究一氧化氮 (NO)在急性内毒素血症中对淋巴管运动的调节作用及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂硫酸甲基异硫脲(SMT)对内毒素血症中淋巴微循环的作用。方法 :用倒置显微镜和图像处理系统对肠系膜淋巴管进行动态观测 ,并用硝酸还原酶法测定血清中NO的含量。结果 :LPS组肠系膜淋巴管管径比正常扩大 ,运动频率降低 ,淋巴管运动指数下降。LPS +SMT组则有显著改善。随时间延长LPS组血清NO含量显著升高 ,LPS +SMT组则有明显下降。结论 :内毒素血症中NO过量产生 ,使肠系膜淋巴管扩张 ,收缩减弱。内毒素血症早期应用iNOS抑制剂SMT可维持淋巴微循环于正常水平。     

诱生型一氧化氮合酶抑制剂硫酸甲基异硫脲对内毒素血症大鼠肠系膜淋巴管一氧化氮合酶表达的影响

目的 :研究内毒素血症中诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesyhthases,iNOS)抑制剂硫酸甲基异硫脲(S Methy1isothioureasulfate,SMT)对大鼠肠系膜淋巴管一氧化氮合酶 (nitricoxidesyhthase,NOS)表达的影响。探讨在内毒素血症中一氧化氮 (nitricoxide,NO)对肠系膜淋巴微循环的影响。方法 :利用NADPH 黄递酶组织化学染色方法观察NOS在大鼠肠系膜淋巴管的表达 ,用硝酸还原酶法测定血清中NO的含量。结果 :脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组大鼠随时间延长肠系膜淋巴管染色强度明显加深 ,血清NO含量显著升高。LPS SMT组染色强度比LPS组降低 ,血清NO含量显著下降。结论 :在内毒素血症中 ,SMT可能通过抑制NOS的活性而起保护作用。     

四毒清防治脂多糖性心肌损伤的机制研究

目的:观察中药复方四毒清对LPS引起的心肌损伤以及心肌TNFα和自由基生成的影响,探讨四毒清防治内毒素性心功能障碍的机制。 方法:将小鼠随机分成4组:对照组、LPS组、四毒清防治组和四毒清组,分别用蒸馏水和四毒清(0.2 mL/10 g)灌胃3 d,每天2次,最后1次灌胃后2 h,腹腔注射 LPS(30 mg/kg)或生理盐水(0.2 mL/10 g)。测定小鼠血浆肌酸激酶(CK)、心肌超氧化物歧化酶 (SOD)的活性以及心肌TNFα和丙二醛(MDA)的含量,并观察心肌组织结构和超微结构的改变。 结果:LPS注射后12 h和24 h,小鼠心肌组织出现明显水肿,肌原纤维肿胀、排列稀疏,心肌间质可见少数红细胞;电镜观察显示,心肌细胞核皱缩、染色质边集,部分肌丝断裂,线粒体肿胀。四毒清防治组小鼠心肌病理改变明显轻于LPS组;LPS组小鼠血浆 CK的活性和心肌TNFα含量明显高于对照组和四毒清防治组,心肌SOD活性明显低于四毒清防治组,而心肌 MDA的含量没有显著差别;四毒清组和对照组比较,除心肌MDA含量外,上述其它指标没有明显差别。结论:四毒清能减轻内毒素诱导的心肌损伤,其机制可能与四毒清抑制心肌TNFα生成有关。     

iNOS-GC-cGMP信号活化参与了内毒素血症大鼠血管低反应性的发生机制

目的: 探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-鸟苷酸环化酶(GC)-环磷酸鸟苷(cGMP)信号活化在内毒素血症大鼠血管低反应中的作用。方法: 采用腹腔注射脂多糖(LPS)诱导大鼠内毒素血症模型,24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、内毒素血症组(LPS组)、内毒素血症+多黏菌素B组(LPS +PMX-B组)和多黏菌素B组(PMX-B组)。颈总动脉插管记录大鼠平均动脉血压(MABP);检测各组大鼠血清中NO、iNOS和TNF-α的水平;用离体血管灌流方法,生物信号处理系统测定大鼠胸主动脉环的张力。结果: 与sham组相比,LPS组大鼠MABP显著降低(P<0.01),LPS+PMX-B组大鼠明显高于LPS组(P<0.05),而PMX-B组与sham组比无统计学意义(P>0.05);生化检测发现LPS组大鼠血浆中NO、iNOS以及TNF-α水平显著高于sham组和LPS+PMX-B组(P<0.01)。同sham组相比,LPS组大鼠离体胸主动脉环对去氧肾上腺素(Phe)刺激的收缩反应及其对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应均明显低下(P<0.01);与LPS组相比,LPS+PMX-B组的反应明显改善(P<0.01);氨基胍(AMG)预处理后,同sham组和PMX-B组相比,LPS组与LPS+PMX-B大鼠离体胸主动脉环对Phe(10^-7~10^-5 mol·L^-1)诱导下的各组血管环的收缩反应明显改善(P<0.05或P<0.01);亚甲蓝(MB)预处理后,同sham组和PMX-B组相比,LPS组与LPS+PMX-B组大鼠离体胸主动脉环对Phe(10^-7~10^-5 mol·L^-1)诱导下的各组血管环的收缩反应均得到改善(P<0.05或P<0.01);PMX-B组与sham组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论: iNOS-GC-cGMP信号活化参与了内毒素血症大鼠血管低反应性;多黏菌素B改善内毒素血症大鼠血管低反应性,可能与中和内毒素、减少炎症因子释放、抑制iNOS-GC-cGMP信号活化有关。     

心房钠尿肽对脂多糖所致大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对脂多糖(LPS)血症大鼠急性肺损伤的作用和机制。方法: 大鼠静脉给予LPS(2 mg·kg^－1)后立即静脉给予ANP(2 μg·kg^－1),记录动物平均动脉血压(MAP)、检测血浆一氧化氮(NO)和内皮素(ET)浓度、测定肺水含量并做肺组织病理学检查。结果: 给予LPS的大鼠,MAP持续下降,至4 h MAP(8.1±2.6)kPa;血浆NO和ET浓度均显著升高(P<0.01 vs control);4 h肺湿干比(5.15±0.43),显著高于对照组(P<0.05);大鼠肺组织病理学检查呈现肺间质水肿。LPS＋ANP组大鼠MAP在给药初期的短暂下降后逐步回升,至4h MAP(13.4±2.9)kPa(P<0.05 vs LPS);4 h血浆NO水平和ET浓度均显著下降(P<0.05 vs LPS),但仍明显高于对照组(P<0.01 vs control);肺湿干比(4.57±0.35)与对照组没有显著差异;肺组织病理学改变较LPS组明显减轻。结论: ANP对LPS引起的急性肺损伤有治疗作用,能调节LPS引起的动脉血压的持续下降,上述作用可能与ANP拮抗ET的产生、降低NO的分泌有关。     

不同剂量内毒素刺激枯否细胞分泌肿瘤坏死因子-α及内皮素-1的体外观察

目的:探讨体外脂多糖(LPS)刺激枯否细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内皮素-1(ET-1)的作用。方法:采用大鼠肝KC分离与培养技术,动态观察LPS刺激KC分泌TNF-α和ET-1的作用。结果:LPS具有明显活化KC作用,在一定LPS浓度范围内对KC分泌的TNF-α及ET-1有促进作用。结论:LPS可促进体外培养的KC分泌TNF-α及ET-1,这可能与内毒素血症导致的肝损伤有关。     

内毒素血症大鼠肠系膜淋巴循环动力学及iNOS抑制剂SMT作用的实验研究

本实验主要研究内毒素、iNOS抑制剂硫酸甲基异硫脲(SMT)对活体淋巴管运动及iNOS的表达的影响,探讨iNOS、iNOS抑制剂SMT在急性内毒素血症中对淋巴微循环的作用。 动物选用雄性Wistar大鼠54只,体重200-300g。将动物分为3组control组(n＝18)股静脉一次推注生理盐水(5mL／kg体重)作对照。分别在注药后l、3、6h各处死6只;LPS组(n＝18)股静脉一次推注LPS(5mg／kg体重),其它处理同control组;LPS+SMT组(n＝18)股静脉一次推注LPS(5　mg／kg体重)和SMT(10　mg／kg体重);其它处理同control组。 动物用20％乌拉坦(7ml／kg体重)肌肉注射麻醉。腹正中部开腹,取出肠系膜,找出一条理想的游离淋巴管,置于观察盒中,保温(32℃左右),并定时于肠管上滴加37℃左右的台氏液以维持一定湿度,在倒置显微镜下观察并录像。将每只需观察6h的动物镜下先稳定5-10min,作为正常录像,再按分组注药,观察录像6h后,处死。 根据录像资料,利用微机图像处理系统,定淋巴管、定部位测量实验用药前及用药后l、2、3、4、5、6h各时段各动物淋巴管管径的大小,求得平均口径(d)、最大舒张口径(b)、最小收缩管径(c)、淋巴管收缩频率(a),计算淋巴管运动指数［收缩指数IndexI＝(b2-c2)／b2,总收缩活性指数IndexII＝(b2-c2)a／b2,淋巴管动力学指数LD-Index＝(b-C)100a／d2］。 所有动物在处死后,取血静置,取血清,用一氧化氮试剂盒测定血清中NO合量。并取肠系膜进行免疫组化染色。 结果(1)LPS组的收缩频率、运动指数均比注药前显著降低(P＜0.05),免疫组化染色阳性细胞数明显增多(P＜0.05)。阳性细胞为巨噬细胞和内皮细胞。血浆NO合量显著升高(P＜0.01)。(2)SMT+LPS组的收缩频率、运动指数均与注药前相比,无显著差异(P＞0.05)。免疫组化染色阳性细胞数及血浆NO含量与LPS组相比,均显著降低(P＜0.01)。 结果说明正常条件下,肠系膜淋巴管运动不但受自身节律的调节,还受NO的调节。LPS作用下,肠系膜淋巴管随时间延长明显扩张,运动减弱,渗出增多,与NO的生成量呈正相关。SMT能抑制iNOS的活性,内毒素血症早期应用选择性iNOS抑制剂,可维持淋巴循环于正常水平。内毒素血症中,由于iNOS过度表达,导致过量的NO产生,使淋巴管的运动异常。SMT由于能抑制iNOS,从而抑制了NO的过量产生,使淋巴管运动恢复。这可能为临床上淋巴管循环障碍及内毒素血症的治疗提供理论基础和实验依据。     

纤维连接蛋白对内毒素血症小鼠保护作用的实验研究

目的:研究纤维连接蛋白对内毒素血症小鼠的保护作用及其意义。方法:采用明胶亲和层析从正常人血浆纯化纤维连接蛋白, 观察纤维连接蛋白处理的半乳糖胺敏化内毒素小鼠的生存率, 用病理组织学、电镜观察超微结构、DNA片段化分析、RT-PCR检测小鼠肝脏损害及TNFα、IL-1β、IL-6mRNA表达水平。结果:①纤维连接蛋白处理的半乳糖胺敏化内毒素小鼠的死亡率明显低于对照组。②病理组织学表明半乳糖胺敏化内毒素小鼠肝脏发生广泛变性坏死, 而治疗组小鼠肝脏发生轻微变性坏死。③电镜观察半乳糖胺敏化内毒素小鼠肝脏发现多数肝细胞呈凋亡性改变, 而纤维连接蛋白治疗组小鼠多数肝细胞大小形态结构正常, 未见凋亡细胞。④DNA片段化分析半乳糖胺敏化内毒素小鼠肝脏细胞DNA呈现凋亡特征性梯状条带。而纤维连接蛋白治疗组则无。⑤RT-PCR研究发现纤维连接蛋白治疗组小鼠肝脏TNFα、IL-1β、IL-6mRNA的表达水平低于对照组。结论:纤维连接蛋白可能通过降低半乳糖胺敏化内毒素小鼠肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6的过度表达而起保护作用, 其将成为防止败血症肝功能衰竭的方法之一。     

封闭枯否细胞和脾切除对急性肝损伤影响的实验性研究

目的:探讨封闭枯否细胞与脾切除对肠源性内毒素血症形成及肝实质细胞损伤的影响。方法:采用硫代乙酰胺(TAA)给大鼠灌胃,同时分别采用GdCl₃封闭枯否细胞及脾脏切除作为实验组,观察吞噬指数、ALT、TNF-α、内毒素等指标。结果:GdCl₃封闭及脾脏切除组吞噬指数下降,内毒素水平明显升高(P<0.05),TNF-α水平减少(P<0.05),ALT、TB水平明显下降(P<0.05)。结论:抑制枯否细胞功能与脾切除均可使肠源性内毒素水平升高,由于分泌功能同时受到抑制,使TNF-α水平下降,肝损伤减轻。     

肠源性内毒素血症对肝组织细胞间粘附分子-1表达的影响

目的:探讨肠源性内毒素血症对肝组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:采用Western blot 的方法检测硫代乙酰胺(TAA)诱导的肠源性内毒素血症大鼠肝组织中ICAM-1表达的变化。结果:ICAM-1的分子量为95 kD,正常对照组与注射TAA 6 h组ICAM-1的表达很弱,而在注射TAA 12 h以后的表达有增强,且与血浆内毒素水平及反映肝损伤程度的ALT活性变化相一致。结论:肠源性内毒素血症可诱导肝组织中ICAM-1表达的上调,后者与肝损伤程度相一致。     

脂多糖对化学诱癌大鼠抗氧化系统的选择性损害作用

目的：观察脂多糖对化学诱癌大鼠抗氧化系统的影响。方法：用０３ｇ／Ｌ硫代乙酰胺给大鼠饮用６个月,诱发肝硬化癌变模型。大鼠在实验前作脾切除造成肠源性内毒素血症或／和在肝硬化形成时给予外源性脂多糖。结果：无论是外源性或／和肠源性内毒素均可提高肝硬化大鼠内毒素血症水平和肝癌发生率增加趋势。肝内丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性不同程度地增高、而谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性呈降低趋势,并与ＭＤＡ浓度呈明显负相关（Ｐ＜００５）。结论：抗氧化酶类代谢紊乱、特别是ＣＡＴ活性降低可能与肝硬化癌变的发生发展有关     

人血浆高密度脂蛋白对大鼠内毒素血症的治疗及防护作用研究

目的:观察人血浆高密度脂蛋白(HDL)对大鼠内毒素血症的治疗和防护效果。方法:采用鲎试剂法和放射免疫分析法于3个时点动态测定对照组、治疗组和防护组大鼠血浆内毒素(ET)水平和肿瘤坏死因子(TNF)浓度并观察血压及存活时间。结果:①输注ET后对照组大鼠血压进行性下降(P<0.01);治疗组大鼠输注HDL后其血压虽也降低但下降程度明显弱于对照组(P<0.01);防护组大鼠在输注ET后血压无明显下降(P>0.05)。治疗组及防护组大鼠存活时间均明显长于对照组(P<0.01)。②3组大鼠血浆ET水平在各时点均无明显变化(P>0.05)。③治疗组及防护组大鼠血浆TNFα水平于第3时点均明显降低(P>0.05)。结论:人血浆HDL能减轻或抑制内毒素血症大鼠血压下降并明显延长其存活时间,对内毒素血症具有良好的治疗和防护作用,此作用可能与其抑制TNF释放有关。     

糖调节蛋白78在大鼠肠源性内毒素血症促进肝硬化形成中的作用

目的:探讨糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肠源性内毒素血症(IETM)促进肝硬化形成过程中的作用。方法:51只雄性Wistar大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组及同期正常对照组。采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化,HE染色和VG染色分别观察肝损伤和肝纤维化情况;RT-PCR法和免疫组化法分别检测肝组织GRP78 mRNA及蛋白表达;同时测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、同型半胱氨酸(HCY)以及肝组织匀浆中TNF-α、丙二醛(MDA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)水平。结果:(1)随病程进展,各模型组血浆中ALT、内毒素、TNF-α、HCY以及肝组织中GRP78 mRNA、蛋白表达水平、MDA、TNF-α、PⅢP含量和肝组织纤维化指数均逐渐升高并显著高于正常对照组(P0.05)。(2)血浆中升高的内毒素水平分别与GRP78蛋白、血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P0.01);表达增高的GRP78蛋白分别与血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P0.01)。结论:GRP78可能在肝硬化形成过程中发挥重要作用;内质网应激很可能是IETM促进肝纤维化乃至肝硬化发生的重要机制。     

内毒素血症大鼠脑底动脉内皮素-1能神经纤维表达与分布的变化

目的:探讨内毒素血症大鼠脑底动脉内皮素-1(ET-1)能神经纤维诱发脑血管痉挛发生与发展的关系,为深入阐明内毒素血症诱发脑血管痉挛的发病机制提供形态学依据。方法:96只Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素血症组(注射内毒素第3、6、12、24、48h),分别采用放射免疫法检测血浆内皮素-1水平的变化,采用免疫组织化学ABC法对大鼠脑底动脉内皮素-1能神经纤维进行观察。结果:内毒素血症后3、6、12h大鼠血浆内皮素-1水平较对照组明显升高(P0.05),内毒素血症后24h和48h已趋于正常(P0.05)。此外,对照组和内毒素组大鼠脑底动脉可见棕褐色,呈细线状分布的内皮素-1能免疫反应阳性纤维,其中内毒素血症后第6h和12h大鼠脑底动脉内皮素-1能神经纤维密度显著增高(P0.05)。结论:内毒素血症大鼠血浆内皮素-1水平升高,脑底动脉内皮素-1能神经纤维密度增加,提示内皮素-1参与了内毒素血症诱发脑血管痉挛的病理生理过程,为脑血管痉挛的神经-体液调节机制提出了新思路,同时为临床预防和治疗脑血管痉挛提供了理论依据。     

脂多糖诱导山羊肝脏TNF-α分泌特点的研究

目的:为了研究肝脏在实验性内毒素血症中的免疫调节作用。方法:采用17只雄性去势山羊,外科手术方法装置颈静脉插管、肝静脉插管和门静脉插管。手术4 d后,分3个组进行实验:组①经门静脉灌注20 EU/kg体重的LPS;组②经颈静脉灌注20 EU/kg体重的LPS;组③经颈静脉灌注1 500 EU/kg体重的LPS。灌注前和灌注8 h内定时采集颈静脉、肝静脉和门静脉血样,采用放射免疫测定法测定血样中TNF-α的含量变化。结果:在组①肝静脉和门静脉血TNF-α水平于5 h上升到峰值,颈静脉动血则基本无变化。在组②颈静脉、肝静脉血于1 h和3 h上升达到峰值,而门静脉血TNF-α水平则在0-8 h期间持续上升。在组③肝静脉、门静脉和颈静脉血中TNF-α在1h同步迅速达到峰值。结论:肝脏在内毒素血症时TNF-α的分泌依脂多糖进入的途径和剂量而有不同的分泌特点。