褪黑素对人肝癌SMMC—7721细胞的抑制作用

观察褪黑素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长抑制作用及其作用机理。方法采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、ＭＴＴ显色技术研究其抑制作用,以流式细胞仪和电子显微镜技术观察其作用机理。结果褪黑色素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞具有抑制作用,其ＩＣ３０、ＩＣ５０分别为１．１０和２．００ｍｍｏｌ／Ｌ。以ＩＣ３０的褪黑素处理ＳＭＭＣ－７７２１细胞,使其倍增时间由２１．１ｈ延长到３８．４ｈ。流式细胞仪观察到     

乙酰咪唑修饰对高密度脂蛋白结合人肝癌SMMC—7721细胞的影响

利用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）研究其对ＨＤＬ３结合肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞能力的影响。结果：ＨＤＬ３乙酰咪唑修饰降低其竞争结合作用。这一抑制作用取决于乙酰咪唑浓度，在１ｍｏｌ／Ｌ时达最大抑制。结果提示ＨＤＬ３中酪氨酸残基存在于ＨＤＬ３结人合确认部位，参与ＨＤＬ３的受体结合过程。     

多西紫杉醇对缺氧人肝癌细胞株SMMC7721化疗药物的敏感性及其作用机制

目的研究多西紫杉醇缺氧对人肝癌细胞株SMMC7721的化疗药物的敏感性及其作用机制。方法多西紫杉醇加入化疗药物干预过的人肝癌细胞株SMMC7721中,培养2 d后,MTT法检测SMMC7721中多西紫杉醇对人肝癌细胞株SMMC7721化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测人肝癌细胞株SMMC7721凋亡情况,应用RT-PCR和Western-blot检测人肝癌细胞株SMMC7721中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA和蛋白水平的表达变化。结果缺氧对多西紫杉醇对化疗药物具有协同增效作用,200μmol/L多西紫杉醇增敏指数为2.58。多西紫杉醇诱导的人肝癌细胞株SMMC7721凋亡增加,且表现明显的浓度依赖效应。此外随着多西紫杉醇用药剂量增加,能显著降低HIF-1α的表达。200μmol/L多西紫杉醇组与对照组基因表达比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论缺氧对多西紫杉醇可以通过某种机制下调核转录因子HIF-1α表达,提高缺氧环境中人肝癌细胞株SMMC7721对化疗药物的敏感性。     

声化学疗法对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤作用初探

[目的]观察体外超声波是否可激活光敏剂血卟啉,对体外培养的肝癌细胞发挥抑制增殖及杀伤作用.[方法]将体外培养的SMMC-7721肝癌细胞株随机分为单独血卟啉、单独超声、超声加血卟啉及空白对照四组,分别给予相应处理,观察细胞变化.[结果]超声加血卟啉组肝癌细胞于7 d后全部溶解死亡,单独血卟啉组、单独超声组肝癌细胞仍呈增殖状态,与空白对照组差异无显著性.[结论]运用超声波可以激活光敏剂血卟啉,发挥对肝癌细胞的抑制和杀伤作用.     

腺正态的急性毒性及其对人肝癌SMMC 7721的抑制作用

1 材料和方法 1.1 主要试剂和仪器酶联免疫检测仪,型号DG3022(华东电子医疗装备集团有限公司);MTT(美国Sigma公司);腺正态(XZT,民间验方),加冷水煮沸3 h,定量浓度为0.125 g*mL-1,高速离心后取上清高压灭菌;MTT;实验动物由第四军医大学实验动物中心提供.     

奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721的体外抗肿瘤作用

目的研究奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于SMMC7721细胞,应用MTT法检测奥沙利铂对SMMC7721细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用分光光度法检测caspase-3、cas-pase-8、caspase-9的活性。结果奥沙利铂可抑制SMMC7721细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和SubG1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株SMMC7721增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

地榆鞣质抗肝癌细胞SMMC—7721的MTT及FCM分析

探讨中药成分地榆鞣质的抗癌活性，并试图建立一种筛选抗癌药物的方法，方法：运用ＭＴＴ法测定ＳＴＭ及ＳＴＬ对体外培养人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞的杀伤率并通过流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象ＤＮＡ变化。结果；ＳＴＭ与ＳＴＬ均有明显抗癌活性，与阴性对照组相比有显著差异，并具有剂量效应关系，ＳＴＭ，ＳＴＬ与ＭＭＣ联合用药抗癌活性增强，与单独用药组相比差异显著；     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的 研究姜黄素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的影响。方法 应用ＭＴＴ方法、流式细胞术及透射是超微结构观察来分析姜英素对ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长的作用及细胞周期的形态学改变。结果 姜黄素明显抑制人肝ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长,半数旧（ＩＣ５０）为５．４ｍｇ．Ｌ＾－１、流式细胞术证实,姜黄素能将肿瘤细胞聚集Ｓ期,透射电镜超微结构观察发现姜黄素可使肿瘤细胞超微结构改变。结论 姜黄素通过改变ＳＭ     

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo（下向bcl-2核酶真核表达载体）导入SMMC7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP-PCR-ELISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测SMMC7721/PMTr-neo细胞凋亡=细胞端粒酶活性及P16,P12的改变。结果 较对照组SMMC7721/PMTr-neo细胞Bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象;同时端粒酶活性下降,P16,P21表达水平显著增加。结论 bcl-2核酶可促进SMMC7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,提示Bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

重组人TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人7721肝癌细胞凋亡的增敏作用

目的 :探讨新的人凋亡相关基因产物TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人 772 1肝癌细胞凋亡的增敏作用。方法 :将不同浓度的rhTFAR19蛋白单独或与羟基喜树碱 (hydroxycamptothecin ,HCPT)同时加入处于指数生长期的 772 1肝癌细胞中共同培养 ,通过透射电镜、DNA片段化分析、PI及AnnexinV标记进行流式细胞仪分析 ,观察细胞的形态学和细胞凋亡的变化。结果 :不同质量浓度的rhTFAR19蛋白单独作用于 772 1肝癌细胞未见明显凋亡 ,但同时加 5mg·L-1的羟基喜树碱后 ,各质量浓度组均观察到细胞凋亡 ,并且显示了明确的量效关系 :5mg·L-1的HCPT加 5mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为 2 9.5 8% ,而加 2 0mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为6 3 .77%。结论 :rhTFAR19蛋白对HCPT诱导的细胞凋亡有明显的剂量依赖性促进作用 ,临床用HCPT行局部化疗时 ,若加rhTFAR19蛋白 ,可能会在不增加化疗药物毒性的情况下 ,提高化疗效果     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD~(133)肿瘤干细胞增殖的影响

目的:探讨大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD133肿瘤干细胞增殖的影响。方法:取对数生长期的肝癌SMMC7721细胞,分别加入不同浓度的大豆黄酮,在24、48和72 h的时间点上,用MTT法测定大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞的抑制生长率。另外,将培养的细胞与CD133蛋白荧光素一抗标记混合,37℃孵育反应20 min,在525 nm波长下进行流式细胞仪检测。结果:大豆黄酮对于肝癌SMMC7721细胞在24、48和72 h内均有明显的抑制作用,并且抑制率随浓度的增加而增加。经大豆黄酮处理24 h后,CD133肿瘤干细胞的数量也显著减少。结论:大豆黄酮不仅具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,而且也具有抑制CD133肿瘤干细胞增殖的作用。     

热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响

目的探讨热疗对SMMC-7721肝癌细胞的影响。方法将SMMC-7721肝癌细胞置恒温循环水浴锅中(42.5±0.5)℃孵育1h,然后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养,分别于热处理后0、6、12、24h采用倒置显微镜(LM×400)观察细胞形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,予Annexin V/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡,予366EC和FITC-羊抗鼠IgG处理细胞后用流式细胞仪检测细胞DR5表达,用Fluo-3/AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度的变化。结果热疗可导致肿瘤细胞形态改变,表现为细胞变小,变圆,脱落,出现空泡;热疗可抑制细胞增殖,细胞热疗后0、6、12、24h细胞抑制率分别为22.18%、26.76%、31.30%、36.62%。热疗后0h细胞凋亡率为15.00%,其中早期凋亡率为2.00%,晚期凋亡率为13.00%;热疗后6h细胞凋亡率为65.45%,其中早期凋亡率为43.23%,晚期凋亡率为22.22%;热疗后12h细胞凋亡率为12.32%,其中早期凋亡率为4.60%,晚期凋亡率为7.72%;热疗后24h细胞凋亡率为22.58%,其中早期凋亡率为7.15%,...     

苦参碱对SMMC-7721细胞系的诱导分化作用

目的：研究苦参碱对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１的诱导分化作用．方法：用细胞培养方法，观察细胞增殖、形态、功能和代谢等方面指标，研究苦参碱（Ｍａ）对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１在体外的诱导分化作用．结果：各处理组细胞均出现细胞增殖抑制，亚细胞结构趋于正常，ＡＦＰ分泌量明显低于培养天数相同的对照组细胞，γ－ＧＴ活力逐日下降，酪氨酸－α－酮戊二酸转移酶（ＴＡＴ）活力始终高于对照组细胞．处理６ｄ后，细胞ＤＮＡ含量降低，Ｓ期细胞数增加．结论：Ｍａ可使ＳＭＭＣ－７７２１细胞聚集于Ｓ期，诱导其向正常肝细胞分化     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

RNAi cyclin E对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨RNAi cyclin E对肝癌细胞生长的影响。方法:肝癌细胞系HepG2采用体外培养,选取siRNA合成双链发卡样DNA;将其重组入pGFP-V-RS得到重组子pGFP-V-RS-siCE951和pGFP-V-RSsiCE1122;两重组子分别进行DNA序列测定、同源性比较;将两重组子和pGFP-V-Con分别转入人肝癌HepG2细胞中,同时设空白对照组(不转染任何质粒,仅加转染试剂)。检测4组HepG2细胞cyclin E mRNA表达情况及细胞的增殖情况。结果:经过同源性检索和优选确定cyclin E基因的siRNA载体pGFP-V-RSsiCE951和pGFP-V-RS-siCE1122;干扰1组(转染pGFP-V-RS-siCE951)和干扰2组(转染pGFP-V-RSsiCE1122)细胞cyclin E mRNA的相对表达量显著低于空白对照组和无关siRNA对照组(P<0.05);干扰1组和干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组比较,在3、4、5 d细胞孔内的吸光度值显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:siRNA载体pGFP-V-RS-siCE951和pGFP-V-RS-siCE1122转染人肝癌HepG2细胞能显著降低细胞cyclin E基因的表达,是理想的siRNA靶区段。抑制肝癌HepG2细胞cyclin E基因表达,可以降低肝癌HepG2细胞的生长速度。