睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)凋亡的影响。方法 :15只生后 2～ 3dWistar大鼠 ,视网膜采用胰酶消化法制成细胞悬液后接种于 2 4孔培养板 (每孔 1× 10 5个细胞 ) ,取培养 72h的细胞行免疫细胞化学鉴定。将培养的细胞随机分为对照组、三种浓度CNTF组 (10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/ml) ,培养 72h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的变化。结果 :培养 72h的细胞 90 %以上为视网膜神经节细胞 ,TUNEL法检测显示培养细胞有凋亡细胞存在 ,流式细胞仪检测结果显示对照组凋亡率为 (11.95± 4 .4 0 0 ) % ,10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/mlCNTF组凋亡率分别为(7.883± 2 .14 6 ) % ,(6 .4 17± 3.317) % ,(8.0 33± 2 .0 2 3) % ,CNTF组凋亡率显著降低 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,其中2 0ng/mlCNTF组差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :CNTF能降低培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡率 ,其促视网膜神经节细胞存活可能是通过减少视网膜神经节细胞凋亡来起作用 ,而高浓度CNTF对视网膜神经节细胞有毒副作用。     

睫状神经营养因子对大鼠脊髓损伤后GFAP表达的影响

目的 研究磊鼠脊髓损伤后睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和脊髓损伤后大鼠功能的恢复情况。方法 将动物分为脊髓 务＋ＣＮＴＦ注射组（Ａ组）、脊髓损伤＋灭活的ＣＮＴＦ注射组（Ｂ组）。手术后１、３、７、１４、２８ｄ应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,彩和计算机图像分析蜓一量分析,并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况。结果 大鼠脊髓 务后ＧＦＡ     

睫状神经营养因子单克隆抗体制备

目的：制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)单克隆抗体。方法：将CNTF免疫的BALB/c小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次克隆化培养,获得分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株;然后进行体内诱生获取含大量CNTF单克隆抗体的腹水和血清;再进行CNTF单克隆抗体鉴定和效价测定。结果：获得5株分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a;腹水和血清中该抗体效价分别为1∶107-1∶108和1∶106;该抗体能特异性地显示SD大鼠脑内表达CNTF的神经元,其中1株单克隆抗体能抑制CNTF促进体外培养新生SD大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论：制备成功高效且特异的CNTF单克隆抗体,为CNTF结构、功能和机制的研究提供了有效工具。     

睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用

目的 探讨睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用。方法 采用ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ测定，观察急性和慢性足底电击应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为变化，及双侧海马注射睫状神经营养因子对其影响。结果 急性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动增加，慢性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动减少；睫状神经营养因子对对照组大鼠和急性应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为无明显作用，但可显著改善慢性应激大鼠的行为障     

睫状神经营养因子与视网膜神经节细胞

睫状神经营养因子作为神经营养因子家族中的重要成员,广泛分布于中枢神经系统。视神经与视网膜是中枢神经系统的一部分。视网膜神经节细胞在视觉通路中起着重要的传导作用。睫状神经营养因子作为一种非靶源性神经营养因子,在视网膜神经节细胞的生长发育过程中,起着重要的调控作用;同时睫状神经营养因子对于损伤的视网膜神经节细胞有促进其存活及轴突再生的作用。     

睫状神经营养因子对面神经再生影响的实验研究

目的：以新西兰白兔面神经损伤为动物模型,研究睫状神经营养因子（CNTF）对损伤后面神经再生的作用,为临床上选择高效的神经营养因子提供实验依据。方法：选用28只新西兰白兔,将其双侧面神经上颊支离断后套入硅胶管,吻合神经断端,并将硅胶管两站与神经外膜吻合后,向套管内注射CNTF液（实验组）以及生理盐水（对照组）。于术后1,2,4,8周采用电生理、光镜、透射电镜等手段来检测。结果：术后2周、4周,实验组不论是神经传导速度还是组织学形态均明显优于对照组。8周以后,实验组和对照组无明显差别。结论：局部应用外源性CNTF短期内可明显促进损伤面神经的再生,有很大的临床应用价值。     

睫状神经营养因子对脊髓神经元的保护作用

目的：研究脊髓操作后脊髓神经元内酶学的变化,并探索睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用,方法：用Ａｌｌｅｎ改良法打击摸型致ＳＤ大鼠Ｔ８脊髓操作分别于术前及术后３,７,１０ｄ测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的含量。结果：ＡＣｈＥ于术后持续下降;ＡＣＰ在术后第３天开始上升,第７天至最高,以后逐渐下降;用ＣＮＴＦ处理的大鼠上述两种酶变化的幅度较小,且整个过程也比较平     

睫状神经营养因子对损伤脊髓神经元酶学的影响

目的：研究脊髓损伤后脊髓神经元的酶学变化,并探索睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓神经元的保护作用。方法：用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤,分别于术术前术后第3、7、14天测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（AChE)和酸性磷酸酶（ACP）的含量。结果：AChE于手术持续下降,ACP在术后3天开始上升,第7天升至最高,以后逐渐下降,经CNTF治疗后上述峡谷种酶变化的幅度较小,且整个过程比较平衡,结论：CNTF对脊髓损伤的神经元具有一定的保护作用。     

睫状神经营养因子对脊髓神经元离子内环境的影响

目的 :研究脊髓损伤前后脊髓组织内离子含量的变化 ,探索睫状神经营养因子 (CNTF)对损伤脊髓神经元保护作用的可能机制。　方法 :采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤 ,分别于术前及术后 3天用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Na 、K 、Ca2 、Mg2 的含量。　结果 :脊髓损伤后局部组织Na 、Ca2 含量均显著增加 ,K 、Mg2 含量均降低 (P <0 .0 1)。用CNTF治疗后Na 、Ca2 含量明显下降 ,同时 ,K 、Mg2 含量明显回升(P <0 .0 1) ,但与正常组相比 ,仍有明显差异。　结论 :CNTF可能是通过调节损伤细胞内外离子水平、稳定细胞内外离子平衡而起到保护损伤的脊髓神经元的作用     

中药脑脊液药理学研究方法的初建——对中药影响星形胶质细胞神经营养 …

目的：探求一种合理有效的中药作用于中枢神经系统药效研究的方法。方法：利用体外细胞培养的方法，以３种不同浓度观察血清、中药血清、脑脊液、中药脑脊液对于星形胶质细胞和神经元的影响。结果：苔盼蓝染色和ＬＤＨ检测证明正常血清和中药血清在３种浓度均出现坚细胞的毒害作用，尤以１００，２００μＬ为重，且在同一浓度时，两组之间没有明显的差异。而正常脑脊液组和中药脑脊液进行中药对中枢神经系统的药效观察明显优于血清，     

睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

探讨局部应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法３４只大鼠分为４组,１～３组每组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入生理盐水对照。术后１、３、４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行ＨＲＰ逆行示踪检查。结果ＣＮＴＦ治疗组术后１、３、４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对照组。相应节段脊髓前角标记辣根过氧化物酶的神经元明显多于对照组。结论ＣＮＴＦ可促进周围神经特别是运动神经损伤后的再生。     

人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定

目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。     

地塞米松对星形胶质细胞细胞周期的影响

目的　研究地塞米松 (Dex)对星形胶质细胞细胞周期的影响。方法　纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为 4组 ,分别加入不同浓度的Dex (0、 10 -5、 10 -4、 10 -3 mol/L)培养 18h后 ,经流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果　 10 -3 mol/L的Dex诱发了星形胶质细胞的凋亡。 4个组的细胞周期各时相的细胞指数 :G0 /G1期依次为86 2 9± 0 2 8、 88 0 6± 0 0 3、 91 2 2± 1 14和 83 10± 2 39,前 3组随浓度增加而增加 ,第 4组例外 ;S期依次为 2 6 7±0 14、 3 5 9± 0 30、 2 97± 0 4 4和 6 0 6± 0 2 5 ,前 3组间无显著差异 ,第 4组明显增加 ;G2 /M期依次为 11 0 3± 0 5 1、8 35± 0 75、 5 81± 0 4 9和 10 84± 1 2 9,前 3组随浓度增加而减少 ,第 4组例外。S期细胞指数与G2 /M期细胞指数之比 ,分别为 1∶4 13、 1∶2 33、 1∶1 96和 1∶1 79,后 3组与第 1组有明显的差异。结论　Dex对星形胶质细胞的细胞周期进程有明显的抑制。治疗剂量的Dex抑制星形胶质细胞由S期向G2 期的转换 ,10 -4mol/L以下的浓度同时抑制其由G1期向S期的转换。大剂量的Dex可引起星形胶质细胞凋亡。     

中药脑脊液药理学研究方法的初建--对中药影响星形胶质细胞神经营养作用的观察

目的 :探求一种合理有效的中药作用于中枢神经系统药效研究的方法。方法 :利用体外细胞培养的方法 ,以 3种不同浓度观察血清、中药血清、脑脊液、中药脑脊液对于星形胶质细胞和神经元的影响。结果 :苔盼蓝染色和L DH检测证明正常血清和中药血清在 3种浓度均出现对细胞的毒害作用 ,尤以 10 0 ,2 0 0 μL 为重 ,且在同一浓度时 ,两组之间没有明显的差异。而正常脑脊液组和中药脑脊液组与空白对照组相比 ,未见明显差异 ,MTT检测证明中药脑脊液组吸光度 (A)明显高于其余各组。结论 :利用脑脊液进行中药对中枢神经系统的药效观察明显优于血清 ,提出“脑脊液药理学”的概念 ;中药可诱导星形胶质细胞产生神经营养作用。     

CNTF对视神经损伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响。方法：采用中号显微血管夹建立视神经中度损伤模型后,取左眼作为治疗组,在即时、1、37、d时分别向玻璃体腔内注入2μl（1μg/μl）CNTF溶液;取右眼作为实验对照组,同治疗组在每个时间点向玻璃体腔内注入2μl双蒸水。于伤后1、3、71、4 d时分别做HE染色、原位末端标记法（TUNEL）检测。结果：光镜下观察治疗组细胞形态明显好于实验对照组。TUNEL显示凋亡RGCs数随视神经损伤时间延长而变化（P〈0.05）。伤后1 d,治疗组和实验对照组凋亡RGCs数两组间相比较无统计学意义（P〉0.05）。伤后3、7、14 d时治疗组的凋亡RGCs数明显比实验对照组少（P〈0.05）。结论：玻璃体腔内注射外源性CNTF可以减少RGCs的凋亡,对视神经中度损伤后RGCs具有明显保护作用。     

脑源性神经生长因子促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的 探索脑源性神经生长因子（BDNF）在诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞过程中的作用。方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养细胞,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含β-巯基乙醇（BME）、BDNF及碱性成纤维细胞因子（bFGF）的条件培养基使培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定。结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs的形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星型胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶（NSE）、和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结论 BMSCs在体外具有分化为神经元样细胞的能力,BDNF具有促进分化的作用。     

CDK抑制剂olomoucine对星形胶质细胞增殖活化的影响

目的 观察体外培养的星形胶质细胞(astrocyte，AS)对物理损伤的反应，探讨细胞周期调控对AS活化及增殖的影响。方法 建立体外培养大鼠纯化的AS机械损伤模型，利用免疫细胞化学方法观察损伤区的细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)的动态变化；以及周期素依赖的蛋白激酶(CDK)选择性抑制剂olomoucine干预后PCNA、BrdU表达的变化。结果 物理损伤后24h，损伤边缘区AS明显活化，细胞数目增加、胞体肥大，且交织成网状；PCNA表达增强，BrdU阳性细胞比率增加，大量AS进入增殖期。特异性细胞周期抑制剂olomoucine干预后，AS的PCNA表达增强被抑制，胞体肥大程度减轻，BrdU阳性细胞比率减少。结论 损伤刺激可促使胶质细胞细胞周期(cell cycle)启动、反心性增殖活化：olomoucine可以通过抑制CDK调控反应性AS的肥大、增殖。     

人眼睫状肌细胞的培养与鉴定

为了提供从细胞水平研究葡萄膜、巩膜途径房水引流的实验材料 ,分离死亡后 8～ 2 0h眼库角膜取材后的人眼睫状肌组织 ,用D MEM进行培养 ,用光镜、电镜、免疫荧光法分别进行鉴定。发现 :光镜、电镜下培养的细胞具有典型的睫状肌形态和结构 ,Smoothmuscleα actin染色呈强阳性 ,Desmin染色呈弱阳性。提示 :选择死亡后 8～ 2 0h的睫状肌组织用D MEM可以成功地培养出睫状肌细胞     

雪旺细胞源神经营养因子对端侧吻合后神经再生的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后神经再生的影响.方法取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照.术后于实验组端侧吻合侧小腿外侧肌肉注射雪旺细胞源神经营养因子(10 μg/ml),而于对照组注射等量的生理盐水,隔天一次,共用2周;术后12周,行腓总神经传导速度测定、组织学检查及胫前肌湿重测定.结果实验组再生的腓总神经纤维质量、数目、运动神经传导速度和胫前肌湿重均优于对照组,但不如正常的腓总神经和胫前肌.结论雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后的再生具有一定的促进作用.