基质金属蛋白酶抑制剂—1、—2在人牙髓组织和细胞中表达的免疫组化研究

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1、-2）在人正常、炎症牙髓组织及体外培养的人牙髓成纤维细胞中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法,观察TIMP-1、-2在体外培养的牙髓成纤维细胞和正常、炎症牙髓组织中的表达。结果 TIMP-1、-2在体外培养的人牙髓成纤维细胞呈阳性表达;TIMP-1在正常及炎症牙髓的成牙本质细胞及牙髓细胞表达阳性;TIMP-2在正常牙髓的成牙本质细胞及血管内皮细胞呈阳性表达,在炎症组织表达减弱,炎症区淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞TIMP-1、-2均未见阳性表达。结论 TIMP-1、-2在人牙髓成纤维细胞及牙髓组织均有表达,为进一步研究TIMP在牙髓组织 的作用机理提供实验依据。     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中表达和意义。方法:用免疫组化方法检测碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中的表达。结果:碱性成纤维细胞生长因子在成牙本质细胞层强阳性表达, 在牙髓其它细胞和血管内皮细胞阳性表达;碱性成纤维细胞生长因子受体在成牙本质细胞层弱阳性表达,牙髓其它细胞为阴性。结论:碱性成纤维细胞生长因子及其受体在反应性及修复性牙本质形成过程中可能起重要作用。     

Smad1,4,5在人牙髓组织中的表达分析

目的：观察骨形态发生蛋白（BMP）下游信号转导分子Smad1,4,5在正常、龋坏和炎症人牙髓组织中的表达及表达差异,探讨Smad1,4,5在牙髓损伤修复过程中的作用。方法：制备正常、龋坏和炎症人牙髓组织标本,采用免疫组化方法检测Smad1,4,5在各类牙髓组织中的表达。结果：Smad1,4,5在正常和龋坏牙髓的成牙本质细胞层呈强阳性表达,在下方的富细胞区及牙髓中心部位为阳性或弱阳性表达,炎症牙髓浸润的炎细胞中Smad1,4,5呈强阳性表达。其中Smad4在各类牙髓中表达最强,Smad1次之,Smad5最弱。结论：观察到Smad1,4,5在正常、龋坏和炎症人牙髓组织中的表达及其差异,提示Smad1,4,5作为BMP的胞内信号转导分子,可能参与牙髓组织的自身修复过程。     

脂多糖信号受体CD14、TLR4在人牙髓组织和牙髓成纤维细胞中的表达

目的研究人牙髓组织和牙髓成纤维细胞中脂多糖（LPS）信号受体CD14、TLR4的表达特点,探讨牙髓炎症组织中LPS的信号转导途径.方法采用免疫组化染色法观察健康和炎症牙髓组织中CD14、TLR4的表达情况;应用直接免疫荧光标记法,采用流式细胞术检测体外培养人牙髓成纤维细胞在LPS刺激前后的CD14、TLR4阳性细胞率和细胞表面平均荧光强度.结果正常牙髓组织中未见CD14、TLR4阳性细胞;炎症牙髓组织中可见大量CD14、TLR4阳性细胞,CD14、TLR4阳性细胞率差异无统计学意义（P＞0.05）.牙髓成纤维细胞经LPS刺激后,TLR4平均荧光表达强度和TLR4阳性细胞率均显著增高（P＜0.05）,而CD14在LPS刺激前、后均无表达.结论炎症牙髓组织中CD14、TLR4的阳性表达,提示LPS可能通过CD14、TLR4信号受体在牙髓炎症组织中发挥作用,而牙髓成纤维细胞在LPS刺激后仅表达TLR4,表明LPS可能通过TLR4对牙髓成纤维细胞发挥作用.     

转录因子Klf4在人牙髓组织和牙髓成纤维细胞中的表达研究

目的研究转录因子Klf4在人牙髓组织和体外培养的牙髓成纤维细胞中的表达特点。方法采用免疫荧光技术检测Klf4和增殖标记物ki67在人牙髓组织及体外培养的牙髓成纤维细胞中的表达情况;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Klf4在人牙髓细胞和矿化诱导14 d的表达情况。结果人牙髓中,Klf4主要表达在成牙本质样细胞和血管内皮细胞中;在体外培养的牙髓成纤维细胞中,与诱导前相比,Klf4在矿化诱导14 d时的表达明显增强。结论 Klf4在成牙本质细胞中呈特异性表达,可能与成牙本质细胞分化相关。     

基质金属蛋白酶在牙髓炎症中的活性及表达

目的探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶在牙髓炎发病机制中的作用。方法利用免疫组化和明胶酶谱法,检测健康和炎症牙髓中MMP-2、MMP-9的表达定位及酶活性。结果MMP-2、MMP-9在正常和炎症牙髓中均有表达,定位于成牙本质细胞及牙髓成纤维细胞,炎症浸润区表达强阳性。明胶酶谱分析,MMP-9酶原在正常和炎症牙髓均被检测到,且炎症组表达高于正常组。结论MMP-9可能参与牙髓组织破坏过程,在炎症牙髓组织降解过程中起重要作用。     

Toll样受体4在大鼠炎症牙髓表达的免疫组化研究

目的研究内毒素(LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中Toll样受体4(TLR4)的表达特点,以探讨TLR4在牙髓炎症中的可能作用,推测它在牙髓炎发生发展中的意义。方法通过对LPS诱导的大鼠磨牙牙髓炎组织切片,同时采用免疫组化方法检测大鼠牙髓炎中TLR4的表达情况。结果 1 d组:成牙本质细胞呈中度阳性表达,牙髓成纤维细胞为中度至强阳性表达;3⁷ d组:成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞阳性表达减弱;2周组:坏死区扩大呈均质弱阳性表达,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞减少,呈阳性,修复牙本质呈弱阳性表达;3周组:大部分坏死牙髓组织呈均质弱阳性表达。结论 TLR4在大鼠牙髓炎发生、发展呈动态表达,TLR4可能参与调节牙髓炎发生、发展及修复过程。     

炎症信号受体TLR4在大鼠正常牙髓和牙周组织中的分布及意义

目的:研究大鼠正常牙髓和牙周组织中炎症信号受体TLR4表达特点,探讨其在健康牙髓及牙周组织天然免疫防御中的可能作用.方法:采用石蜡及冰冻切片和免疫组化技术检测大鼠健康牙髓及牙周组织中TLR4的表达情况.结果:正常牙髓组织中成牙本质细胞、血管内皮细胞及参与先天免疫的巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等细胞TLR4免疫反应阳性,牙髓成纤维细胞不表达TLR4.TLR4表达于牙周结缔组织,可见与上皮层临近的固有层结缔组织强阳性染色.结论:TLR4可能参与了牙髓牙周组织的先天免疫反应,在牙髓牙周组织抵御外来病原微生物入侵中可能起重要作用.     

Smad2、3在人牙髓组织中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β特异的细胞内信号转导分子Smad2、3在牙髓组织中的表达及其变化,探讨Smad2、3在牙髓损伤修复中的作用。方法：用免疫组化方法检测Smad2、3在正常、龋坏及炎症牙髓组织中的表达。结果：Smad2,3在正常和龋环牙髓的成本本质细胞层呈强阳性表达,在下方的多细胞区及中心部牙髓有阳性或弱阳性表达,炎症牙随浸润的炎细胞中Smad2、3呈强阳性表达,各类牙髓中Smad2的表达较Smad3略强。结论：Smad2、3在正常、龋坏及炎症牙髓组织中有表达,提示Smad2、3可能在TGF－β调节牙髓细胞增殖、分化的信号转导途径中发挥一定的作用。     

转化生长因子-β受体在人牙髓中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子β受体在人牙髓中的表达和牙髓细胞对 Ｔ Ｇ Ｆβ作用的反应机理。方法：用免疫组化方法检测转化生长因子βⅠ型受体（ Ｔβ Ｒ Ｉ）和Ⅱ型受体（ Ｔβ ＲⅡ）在健康及龋坏人牙髓中的表达。结果：转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体在成牙本质细胞层强阳性表达,其中Ⅰ型受体较Ⅱ型受体表达量多,两种受体在成牙本质细胞层下方的富细胞区及中心部牙髓有表达或弱表达,龋坏牙髓与正常牙髓有相同的反应模式。结论：转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体在健康及龋坏人牙成牙本质细胞及牙髓其它细胞皆有表达,提示成牙本质细胞及牙髓其它细胞在牙髓损伤修复过程中具有重要作用。     

Toll样受体4在人成牙本质细胞和牙髓组织中的表达

目的 探讨人牙髓组织和成牙本质细胞中Toll样受体4（TLR4）的表达与分布特点，及其在牙髓组织天然免疫防御中的可能作用。方法从新鲜拔除的人第三磨牙获取牙髓组织和成牙本质细胞，扫描电镜观察牙髓摘除后髓腔壁成牙本质细胞形态和附着情况；RT—PCR检测人牙髓组织以及成牙本质细胞中TLR4mRNA的表达情况：采用免疫印迹技术和免疫组织化学方法检测TLR4蛋白的表达与定位。结果扫描电镜观察牙髓摘除后成牙本质细胞大部存留在髓室壁上，细胞形态良好：RT-PCR结果发现健康牙髓、成牙本质细胞均可表达TLR4mRNA，产物大小为278bp；免疫印迹法检测正常牙髓、成牙本质细胞在相对分子质量89000附近出现蛋白条带；免疫组化显示牙髓组织中的成牙本质细胞、血管内皮细胞TLR4免疫反应阳性。正常牙髓中牙髓成纤维细胞不表达TLR4。结论成牙本质细胞通过表达TLR4参与牙髓牙本质复合体的先天免疫反应，TLR4在牙髓抵御外来病原微生物入侵的宿主免疫防御中起重要作用。     

正常人牙髓中血红素氧合酶-1的免疫组化研究

研究血红素氧合酶-1(HO-1)在正常人牙髓组织中的表达,探讨其分布与功能的关系。方法临床因阻生或正畸拔除的健康第三磨牙或前磨牙的牙髓,用免疫组织化学SABC法进行染色,检测HO-1在牙髓组织中的表达情况。结果 HO-1在牙髓血管内皮细胞和成牙本质细胞呈现阳性表达,在部分牙髓成纤维细胞和幼稚牙髓细胞中呈阳性或弱阳性表达。结论提示HO-1在牙髓血流调控、牙本质形成及牙髓细胞代谢和分化中可能起一定的作用。     

Production of colony-stimulating factor in human dental pulp fibroblasts

Class II major histocompatilibity complex (MHC)-expressing cells are usually distributed in dental pulp, and it was postulated that the colony-stimulating factor (CSF) derived from dental pulp fibroblasts contributes to the migration of class II MHC-expressing cells into pulp tissue. This study aimed to investigate the CSF production of human dental pulp fibroblasts. In pulp tissue sections, granulocyte (G)-CSF was detected from normal teeth, while G-CSF, macrophage (M)-CSF, and granulocyte-macrophage (GM)-CSF were detected from teeth with dentinal caries. In cultured dental pulp fibroblasts, G-CSF was detected by immunostaining, immunoprecipitation, and ELISA, and mRNAs of G-CSF, M-CSF, and GM-CSF were detected by RT-PCR. The dental pulp fibroblasts cultured with TNF-alpha were found to increase the G-CSF expression and to produce M-CSF and GM-CSF. These findings suggest that dental pulp fibroblasts usually produce G-CSF. In the presence of TNF-alpha, dental pulp fibroblast express M-CSF and GM-CSF.     

Effect of IL-1ra on human dental pulp cells and pulpal inflammation

AIM: This study was conducted to investigate the effect of interleukin-1 receptor antagonist (IL-1ra) on the LPS-induced interleukin-1beta (IL-1beta) synthesis in human dental pulp cells and to assess the role of IL-1ra in pulpal inflammation. METHODS: IL-1beta from human dental pulp cells (HDP) was measured by sandwich ELISA; IL-1ra expression in pulpal tissue was detected by immunohistochemical staining. RESULTS: Stimulation of HDP with increasing concentrations of FnLPS resulted in dose-dependent IL-1beta production. The addition of IL-1ra reduced FnLPS-induced IL-1beta synthesis in human dental pulp cells. Significant inhibition of the FnLPS-induced IL-1beta synthesis was observed when IL-1ra was added before treating with FnLPS for 60 min. Large numbers of IL-1ra positive neutrophils, plasmacytes, endothelial cells and lymphocytes were observed in inflamed pulp tissue. CONCLUSIONS: IL-1ra could reduce LPS-stimulated IL-1beta synthesis, suggesting that IL-1ra may play a role in pulpitis.     

血管内皮生长因子在人牙髓中的表达

目的：研究血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor VEGF） 在正常、深龋或炎症牙髓中的表达及其意义。方法：采用免疫组化SABC法，对牙髓中的VEGF的表达进行组织学定位，并通过Image pro-plus 5.1图像分析软件对成牙本质细胞和牙髓成纤维细胞中VEGF染色进行平均光密度值（optical density OD）测定。利用SPSS13．0统计软件对各组数据进行单因素方差分析或秩和检验。结果：人牙髓中，VEGF主要表达在血管内皮细胞、成牙本质样细胞和牙髓成纤维细胞的胞浆中。正常组成牙本质细胞的VEGF表达较其它两组弱（P〈0.01）。与正常组相比，牙髓成纤维细胞中VEGF的表达在深龋组明显增强（P〈0．05），而在炎症组明显减弱（P〈0．05）。此外，VEGF在炎症组的某些炎细胞如中性粒细胞、浆细胞的胞浆中也有表达。结论：VEGF在龋病、牙髓炎中的变化可能与牙髓炎的发生、炎症发展有关，并且可能参与了成牙本质样细胞对牙髓损伤的修复过程。     

FGF-2对体外培养人牙髓细胞FGFR和OPN表达活性的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对体外培养的人牙髓细胞表面成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法:以改良组织块培养法体外获得人牙髓细胞,采用Western blotting法检测不同浓度FGF-2作用下牙髓细胞FGFR的表达情况;应用Real Time-PCR法,检测不同浓度FGF-2作用下牙髓细胞OPN mRNA的表达。结果:与对照组相比,FGF-2在1～50 ng/mL浓度下均可促进牙髓细胞FGFR的表达(P<0.05),最佳显效浓度为10 ng/mL。FGF-2在1～50 ng/mL浓度下均可诱导牙髓细胞OPN mRNA表达(P<0.05),OPN mRNA的表达在10 ng/mL的FGF-2作用下达到高峰。结论:FGF-2可促进体外培养人牙髓细胞FGFR和OPN的表达,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

牙髓干细胞对皮肤成纤维细胞衰老及增殖能力的影响

目的：研究牙髓干细胞对皮肤成纤维细胞衰老及增殖能力的影响,并初步探讨其机制。方法：从人牙髓中提取,培养牙髓干细胞,与皮肤成纤维细胞分组共培养,分为3组：对照组（单纯皮肤成纤维细胞培养）、条件培养基组（利用牙髓干细胞条件培养基培养成纤维细胞）、直接共培养组（采用Transwell共培养小室）。共培养后,进行 β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色,检测成纤维细胞的衰老情况;利用 CCK-8 法检测各组成纤维细胞的活性;流式细胞仪分析成纤维细胞的细胞周期变化;采用RT-PCR和 Western免疫印迹检测各组成纤维细胞衰老相关蛋白 p21、p53以及pRb 的mRNA和蛋白表达水平。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：与空白组相比,后2组的皮肤成纤维细胞表达β半乳糖苷酶降低、增殖能力增强、G1期细胞减少而S期和G2期增多, p53、p21 mRNA和蛋白表达水平降低而PRb表达升高。结论：牙髓干细胞及其条件培养基具有抗皮肤成纤维细胞衰老的作用,为牙髓干细胞在抗皮肤衰老方面的临床应用提供了依据。