低频电磁场对兔动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用研究

目的:探讨不同场强、不同作用时间的低频电磁场对兔主动脉平滑肌细胞增殖的调控作用,以观察磁场是否能用于 PTCA支架后冠脉再狭窄的防治.方法:用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液体外培养新西兰白兔的主动脉平滑肌细胞至3～7代,将含5％小牛血清的RPMI-1640培养液与动脉平滑肌细胞的混悬液100 靗加入96孔培养板中培养.按照实验分组,每日磁场作用一次,共二日.用MTT法检测动脉平滑肌细胞的增殖数量.结果:磁场作用时间大于10分钟时,20 mT、40 mT和60 mT磁场对动脉平滑肌细胞的增殖均有显著的抑制作用(P<0.05),其中作用时间为30分钟的40 mT磁场对动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用最显著(P<0.001).结论:磁场对动脉平滑肌细胞增殖有显著的抑制作用,磁场的这种抑制作用具有强度敏感性、时间依赖性和空间距离性;磁场对PTCA支架后的冠脉再狭窄可能具有防治作用.     

磁场抑制动脉平滑肌细胞增殖作用的研究

目的 :探讨不同场强、不同作用时间的低频电磁场对兔主动脉平滑肌细胞增殖的调控作用。　　方法 :体外培养的新西兰白兔主动脉平滑肌细胞 3～ 7代与含 5 %小牛血清的 RPMI- 16 40培养液的混悬液 10 0 μl加入 96孔板中培养 ,按照实验分组 ,每日磁场作用 1次 ,共 2日。 72 h后用四唑盐比色法和氚标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- Td R)掺入法检测动脉平滑肌细胞的增殖数量。　　结果 :2 0 m T、40 m T和 6 0 m T各磁场组动脉平滑肌细胞的增殖数量显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,其中 30 min、40m T磁场组动脉平滑肌细胞增殖数量的降低最显著 (P<0 .0 0 1)。　　结论 :磁场对动脉平滑肌细胞增殖有显著的抑制作用 ,这种抑制效应具有强度敏感性和时间依赖性。     

钾对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察生理范围钾范围钾浓度变化对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养血管平滑肌细胞，置于不同K~＋浓度（3－7mmol／L）培养液中培养，收集细胞分别作细胞计数，细胞~3H－TdR掺入量及细胞周期测定。结果K~＋浓度为3mmol／L时第6天细胞生长率为218．2％，K~＋浓度在4～7mmol／L时细胞生长率分别为150％、91％、80％和60％；当K~＋浓度从3mmol／L升至7mmol／L时~3H－TdR掺入量分别下降28％、35％、40％和46％；K~＋浓度为3mmol／L时处于C_2／M．S期细胞较多（7．19％），[K~＋]。浓度为4．5mmol／L和6mmol／L时，细胞处于C_1／G_0期比例较多（85．22％～91．51％）。K~＋浓度升高所引起的抑制效应在K~＋浓度为4mmol／L和5mmol／L已具显著性，随K~＋浓度增加作用越明显。结论：生理范围内K~＋浓度增加，可明显抑制平滑肌细胞增殖，并呈剂量依赖性。     

水蛭素对培养的兔动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：动脉的中膜平滑肌细胞（ＳＭＣ）向内膜移行和增殖是经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的主要原因。为探讨水蛭素预防再狭窄的可能性，本文观察了水蛭素对培养的兔胸主动脉ＳＭＣ增殖的影响。方法：用４只兔的胸主动脉ＳＭＣ传代培养（５～６代），将水蛭素（１～２５μｇ／ｍｌ）加入ＳＭＣ培养液中，于１、２、３天后进行细胞计数并于６小时后测定氚－胸腺嘧啶脱氧核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）参入的放射性强度每分钟次数（ｃｐｍ）值。求出各组均数及标准差，采用方差分析及ｑ检验进行统计分析。结果：各浓度组的水蛭素均抑制ＳＭＣ的增殖及对３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，且呈剂量依赖性，与对照组相比Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１。结论：水蛭素抑制培养的兔动脉ＳＭＣ的增殖，这为水蛭素可能用于预防以ＳＭＣ增殖为基础的再狭窄提供实验依据。     

TGF-SAP对平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用

目的　探讨生物导向药物TGFα SAP对平滑肌细胞增殖及动脉损伤后内膜增生的特异性抑制作用。方法　用SPDP化学联结的方法合成TGFα SAP ,采用细胞计数方法观察TGFα SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用 ,并以3H leucine渗入法进一步了解TGFα SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响 ;在体实验中将Sprague Dawle大鼠随机分为治疗组和对照组 ,均行右颈总动脉球囊内膜剥脱术 ,治疗组术后局部注射TGFα SAP ,对照组予以生理盐水 ;于不同时间点处死动物取动脉段行光镜观察及计算机图像分析。结果　从体外实验可见TGFα SAP能明显抑制SMCs的生长增殖及蛋白质合成 ;在体实验中图像分析结果显示 :动脉损伤后TGFα SAP治疗组在第 3 ,9和 2 8天内膜 /内膜加中膜面积显著小于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　TGFα SAP与Saporin相比对增殖平滑肌细胞具有明显增强的细胞毒性 ,在体实验中亦可见其对损伤后的内膜增生具有明显的抑制作用     

干扰素-γ对兔动脉损伤后平滑肌细胞增殖和迁移的作用

目的　探讨干扰素 -γ(IFN-γ)对动脉损伤后平滑肌细胞 (SMC)增殖和迁移的作用及其作用机制。方法　建立兔髂动脉球囊损伤动物模型 ,培养损伤后动脉 SMC,实验分 4组 :对照组、转化生长因子 -β1(TGF-β1)组、IFN-γ组、TGF-β1+ IFN-γ组。每组细胞加培养液或加入 10μg/L TGF-β1或 (和 ) 50 0 k U/L IFN-γ刺激 72 h,细胞计数和四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定各组 SMC的增殖 ,同时测定 SMC迁移。明胶酶谱分析 SMC中基质金属蛋白酶 -2 (matrix metalloproteinase-2 ,MMP-2 ,66k D蛋白 )的活力。结果　与对照组比较 ,72 h后 TGF-β1组细胞数和迁移距离增加 (P <0 .0 1) ,MTT A值检测细胞增殖抑制率为 -19.4% ;IFN-γ组细胞数和迁移距离减少(P <0 .0 1) ,细胞增殖抑制率为 15.8% ;TGF-β1+ IFN-γ组细胞数和迁移距离低于 TGF-β1组 ,细胞增殖抑制率为 -9.1%。明胶酶谱分析显示各组细胞均可检测到 MMP-2。,TGF-β1组还可检测 MMP-2酶原 (pro-MMP-2 ,72k D蛋白 )的表达。与对照组 (10 0 % )比较 ,TGF-β1组 MMP-2相对活力为 14 3 % ,IFN-γ组为 95% ,TGF-β1+ IFN-γ组为 10 9%。结论　 IFN-γ可抑制动脉损伤后的 SMC增殖和迁移并减轻 TGF-β1的促 SMC增殖和迁移的作用。并且 ,IFN -γ可以抑制 SMC MMP-2活力     

低频电磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响

目的观察不同磁场强度,不同作用时间的低频电磁场(LFEMF)对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响,以探讨磁场是否能用于经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)及冠脉内支架植入术后冠脉再狭窄(RS)的防治.方法用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC,随机分为对照组,LFEMF不同磁场强度(20,40,60mT)及时间(10,20,30min)干预组,运用MMP-2活性酶图分析法结合光密度扫描分析,观察LFEMF对VSMC的MMP-2表达的影响.结果不同磁场强度组均明显抑制MMP 2的活性,且具有剂量依赖性,但抑制作用不随时间延长而变化,不具有时间依赖性.结论适当强度和作用时间的LFEMF抑制VSMC的MMP-2活性的表达,磁场对PT-CA及支架植入术后的RS可能具有防治作用.     

γ射线对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :了解γ射线对血管平滑肌细胞 (SMC)增殖的影响及剂量—效应关系。方法 :在无菌条件下取猪的胸主动脉 ,用组织块贴壁法培养SMC ,取进入指数生长期的猪主动脉SMC分别用 0Gy、3 5Gy、7 0Gy、14 0Gy、2 8 0Gyγ射线照射 ,用3 H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)掺入试验分别在照射后 12h、2 4h、36h、48h测SMC的3 H TdR掺入量 (以每分闪烁计数值表示 ) ,同时观察细胞形态的变化。结果 :不同照射剂量在各时点3 H TdR掺入量均较照射剂量为 0Gy时明显减少 (P <0 0 5 ) ,γ射线对SMC增殖的抑制作用为 7 0Gy及 14 0Gy >3 5Gy ,而 2 8 0Gy抑制作用最强。形态学观察发现各组细胞轮廓明显增强 ,胞浆中可见颗粒状物质 ,14 0Gy照射细胞时出现空泡样变 ,照射剂量 2 8 0Gy可见大量细胞死亡。结论 :γ射线 ( 3 5Gy～ 2 8 0Gy)能明显抑制SMC增殖 ,且抑制作用随剂量增大而增强 ;照射剂量 <14 0Gy时以细胞抑制作用为主 ,照射剂量 2 8 0Gy时以致死效应为主     

TGFα—SAP对平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用

目的：探讨生物导向药物TGFα－SAP对平滑肌细胞增殖及动脉损伤后内膜增生的特异性抑制作用。方法：用SPDP化学联结的方法合成TGFα－SAP,采用细胞计数方法观察TGFα－SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用。并以^3H-leucine渗入法进一步了解TGFα－SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响;在体实验中将Sprague-Dawle大鼠随机分为治疗组和对照组,均行右颈总动脉球囊内膜剥脱术,治疗组术后避部注射TGFα－SAP,对照组予以生理盐水,于不同时间点处死动物取动脉段行光镜观察及计算机图像分析。结果：从体外实验可见TGFα－SAP能明显抑制SMCs的生长增殖及蛋白质合成;在体实验中图像分析结果显示：动脉损伤后TGFα－SAP治疗组在第3,9和28天内膜／内膜加中膜面积显著小于对照组（P＜0．05）,结论：TGFα－SAP与Saporin相比对增殖平滑肌细胞具有明显增强的细胞毒性,在体实验中亦可见其对损伤后的内膜增生具有明显的抑制作用。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ预处理的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察恒磁场对离体人脐动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激人VSMC建立细胞增殖模型 ,置于 1mT和 5mT的恒磁场中培养 48h ,用四唑盐比色法和3H TdR参入法检测两组VSMC的增殖数量 ,流式细胞仪分析细胞周期。结果　恒磁场能逆转AngⅡ所致的人VSMC增殖数量增多 ,阻止VSMC由静止期 (G0 G1 期 )进入DNA合成期 (S期 )和有丝分裂期 (G2 M期 )。结论　平均磁感应强度为 1、5mT的恒磁场抑制VSMC增殖。     

胰岛素对SHR大鼠血管平滑肌细胞体外增殖相关基因表达的影响

目的　探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖相关基因表达的影响。方法　用贴块法分离培养VSMC ,应用含 4 4 8个与细胞增殖相关基因靶基因芯片分析大鼠血管平滑肌细胞在胰岛素干预后基因表达的差异 ,RT PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGFβ、PDGF、MatrixGla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平 ,采用免疫组织化学检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白 (α SMactin)。结果　胰岛素组VSMC的3 H TdR掺入值 (cpm)比对照组高 5 4 .6 % (P <0 0 1) ;基因芯片分析发现与细胞增殖相关等 36个基因的mRNA胰岛素干预前后培养的细胞表达差异 (8 0 4 % ) ;RT PCR检测MatrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量 ,胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,同时bFGF、TGFβ、PDGF的表达也是胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;α SMactin免疫组化结果显示对照组的α SMactin比胰岛素组染色深。结论　提示胰岛素介导大鼠血管平滑肌细胞增殖是多基因效应 ,胰岛素促进了VSMC的增殖与VSMC表型转换有关。     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞周期和增殖能力的影响

目的探讨姜黄素对肺微血管平滑肌细胞增殖的影响,及其分子机制。方法原代SD雄性大鼠肺微血管平滑肌细胞的培养、鉴定、传代,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,RT-PCR检测mRNA的表达,Westernblot检测蛋白表达。结果姜黄素以浓度依赖的方式抑制肺微血管平滑肌细胞增殖,使细胞周期停滞在G0/G1期。姜黄素处理后细胞内p21和p53的mRNA、蛋白水平表达增高、p300的蛋白表达以及p300介导的乙酰化H3和p53蛋白表达降低。结论姜黄素能够抑制肺微血管平滑肌细胞的增殖,使细胞周期停滞在G0/G1期。其作用可能是通过下调p300活性和上调p53相关信号通路来实现的。     

卡托普利对人离体动脉平滑肌细胞肾素－血管紧张素系统的影响

采用高血压患者（ＥＨ）的离体动脉血管，并分离、培养动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）．观察卡托普利对人ＡＳＭＣ合成和分泌肾素的影响。结果表明：体外培养的ＡＳＭＣ能合成和分泌肾素和血管紧张承Ⅱ（ＡｎｇⅡ）。ＥＨ组ＡＳＭＣ及培养液中的肾素活性（ＲＡ）和ＡｎｇⅡ显著高于正常血压组（ＮＴ）；ＲＡ和ＡｎｇⅡ与血压呈显著正相关（ｒ＝０．８４，０．９；Ｐ＜０．０１）。应用卡托普利后，ＥＨ组的ＡＳＭＣ内ＲＡ显著升高，而ＡｎｇⅡ则明显下降。结果提示血管存在着独立的肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ），高血压时血管ＲＡＳ异常活跃，卡托普利长期抗高血压的主要机理之一是抑制血管壁血管紧张素转换酶活性，减少局部ＡｎｇⅡ的产生。     

Production of Angiotensinogen by Cultured Rat Aortic Smooth Muscle Cells

This study was conducted to further investigate angiotensinogen synthesis in rat aortic smooth muscle cells (SMC) grown in culture. Tissue cultures maintained in defined medium neither grew nor synthesized angiotensinogen. However, in the presence of 5% homologous serum both cell proliferation and angiotensinogen synthesis became apparent. Substitution of normal control serum with that of bilaterally nephrectomized rats or animals given dexamethasone (10mg/kg, ip) led to a further significant increase in angiotensinogen production. In contrast, serum from adrenalectomized rats suppressed angiotensinogen synthesis below the rate observed with normal serum. A positive linear correlation (r=0.96, p0.01) was evident between the serum angiotensinogen level and the rate of de novo synthesis of this protein. No correlations were found between cell proliferation and either angiotensinogen synthesis or serum angiotensinogen levels. Dexamethasone added to serum did not stimulate the rate of angiotensinogen synthesis and appeared to inhibit cell proliferation. Stimulation or suppression of angiotensinogen synthesis was not accompanied by a statistically significant change in angiotensinogen specific mRNA. The data indicate a complex regulation of angiotensinogen in vascular smooth muscle cells in culture.     

银杏叶提取物对豚鼠结肠平滑肌细胞的直接作用

目的 :探讨银杏叶提取物 (ExtractofGinkgobiloba,EGb)对豚鼠游离结肠平滑肌细胞的直接作用机制。方法 :用含 1g/LⅠ型胶原酶及 0 .1g/L大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液 ,消化获得游离的豚鼠结肠平滑肌细胞 ,将不同浓度EGb加入细胞悬液中 ,用显微镜测微尺随机观察 50个细胞长轴变化情况 ,计算用药前后细胞平均长度。如果 :EGb对结肠平滑肌细胞具有舒张作用 ,在 0 .1 1～ 3 .5g/L浓度范围内 ,EGb对结肠平滑肌细胞的作用呈剂量 -效应关系 ,最大反映浓度为 1 .75g/L ,其舒张效应为 1 2 .79% (P <0 .0 5)。EGb预先孵育 1min ,可抑制乙酰胆碱 (ACh)效应的 44 .1 3 % (P <0 .0 1 )。腺苷酸环化酶激动剂Forskolin可增强EGb的舒张效应 ,与单独应用EGb组相比较 ,舒张百分数增加 8.87% (P <0 .0 5)。结论 :EGb对豚鼠游离结肠平滑肌细胞具有直接作用 ,这种作用可能与cAMP信号传导通路相关     

人胰岛素样生长因子-I 对高血压病人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

目的在细胞水平研究高血压病人动脉血管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的生长特性和体外血管活性物质对ＡＳＭＣ增殖作用的影响。方法应用复合酶法进行高血压病人ＡＳＭＣ分离，并用人胰岛素样生长因子Ｉ（ＨＩＬＧＦ－Ｉ）干预以观察人ＡＳＭＣ的增殖情况。结果经低浓度的ＨＩＬＧＦ－Ｉ作用，高血压病人ＡＳＭＣ呈典型的“谷”与“峰”样生长，经历了１０多个月传代培养至３５代。发现该细胞生长分裂活性活跃，与人胎儿脐动脉增殖活性相似。结论复合酶法能使高血压病人的ＡＳＭＣ的静止期缩短，传代后生长特征稳定性强，高血压病人体外培养ＡＳＭＣ的增殖有赖于ＨＩＬＧＦ－１的存在。