Survivin、Caspase-3表达对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的探讨Survivin、Caspase-3表达对鼻咽癌发生、发展及放疗后复发的影响,并研究两者间的相互关系。方法采用免疫组化SP法检测31例放疗后复发鼻咽癌、30例鼻咽非角化型鳞癌、30例鼻咽粘膜慢性炎标本中Survivin及Caspase-3的表达情况。结果 Survivin、Caspase-3表达的阳性率,鼻咽粘膜慢性炎分别为23.33%和96.67%,在鼻咽非角化型鳞癌中分别为73.33%和16.67%,在放疗后复发鼻咽癌分别为83.87%、22.58%,两者在三组中的表达,差异有统计学意义（P〈0.001）,在鼻咽非角化型鳞癌组与放疗后复发组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。在放疗后复发鼻咽癌中,Survivin与Caspase-3的表达有显著负相关性（r=-0.398,P〈0.05）。结论 Survivin的激活以及Caspase-3的失活参与了鼻咽癌的发生发展过程,Survivin在胞核的阳性表达可能与放射抗性相关。     

SIRT1基因沉默对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响

目的 探究SIRT1基因沉默对人鼻咽癌细胞CNE-1放射敏感性的影响,为鼻咽癌临床治疗提供新的思路.方法 通过Western blot检测鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中SIRT1蛋白的表达情况.通过脂质体转染SIRT1 siRNA至CNE-1细胞;利用CCK-8法和流式细胞术检测不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)的X射线放...     

Bcl-2预测鼻咽癌放射敏感性异质性的实验研究

目的 探讨Bcl-2与鼻咽癌放射敏感性异质性的相关性.方法 用RT-PCR、Western-blot分别检测H5和S1细胞 Bcl-2凋亡抑制基因的表达及其蛋白表达的差异.结果 照射后H5、S1两种细胞都表达Bcl-2;S1细胞在各个照射剂量组Bcl-2表达无明显差异,而H5细胞的各个照射剂量组Bcl-2表达随照射剂量的增加而递减,差异有显著性(P＜0.05).结论 Bcl-2能预测鼻咽癌放射敏感性.     

放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响

目的 探讨放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响.方法 以低放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1、高放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-2为研究对象,采用析因设计的方法,分别给予CHE-1、CNE-2假照(0 Gy)、低剂量照射(2Gy)、高剂量照射(8Gy).Trizol法提取总RNA,设计特异性茎环引物逆转录miR-7,随机六引物逆转录18 s rRNA,所得cDNA进行染料法荧光定量PCR,以0 Gy照射的CNE-1细胞为参照样本,△△Ct法计算各组细胞miR-7的相对表达值,SPSS13.0行析因设计资料方差分析.结果 CNE-1和CNE-2的miR-7表达量有显著差异(F=135.483,P<0.001),CNE-1的miR-7表达量(x=4.49±3.62)高于CNE-2(x=1.29±1.10),不同剂量照射后,鼻咽癌细胞株miR-7表达量也有显著性差异(F=39.565,P<0.001),CNE-1接受2 Gy X线照射后miR-7表达最高,8 Gy照射组次之,0Gy照射组最低.CNE-2接受2GyX线照射后miR-7表达最低,8Gy照射组次之,0Gy照射组最高.结论 放射敏感性不同导致细胞受X线辐射后,miR-7表达调整方向不同,即低放射敏感细胞上调,而高放射敏感性细胞下调;X线辐射剂量将影响miR-7的表达调整幅度,即低剂量照射后miR-7调整幅度大,高剂量照射后调整幅度小.抑制miR-7表达可能会提高鼻咽癌细胞的放射敏感性.     

尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 初步探讨尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用.方法 MTT法检测尼妥珠单抗对CEN-2细胞的半数抑制浓度（IC50）,集落形成实验计算细胞存活率,多靶单击模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比,流式细胞仪检测尼妥珠单抗联合放疗的凋亡率及细胞周期分布.结果 尼妥珠单抗对CNE-2细胞有增殖抑制作用,24h IC50为945μg/ml,0.2×IC50及0.3×IC50剂量下的放射增敏比分别为1.26和1.38,尼妥珠单抗联合放疗组凋亡率、G0/G1期细胞比例较对照组增多（P＜0.05）.结论 尼妥珠单抗联合照射可提高鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性并阻碍细胞增殖、促进凋亡和干扰细胞周期分布.     

P53mRNA、Fas mRNA、Bcl-2与鼻咽癌放射敏感性异质性的关系

目的：探讨鼻咽癌放射敏感性异质性与P53 mRNA、Fas mRNA、Bcl-2的相关性。方法：用RT-PCR检测人鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株H5和S1的P53 mRNA、Fas mRNA表达;用Western-blot检测两鼻咽癌亚克隆株的Bcl-2蛋白表达。结果：两鼻咽癌亚克隆株Fas mRNA、P53 mRNA的表达与鼻咽癌放射敏感性异质性相关性不明显;两鼻咽癌亚克隆株Bcl-2蛋白的表达与鼻咽癌放射敏感性异质性呈负相关。结论：53 mRNA、Fas mRNA的表达对鼻咽癌放射敏感性没有预见性,而Bcl-2与其异质性机理有关。     

干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制。方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化。结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P<0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P<0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点。     

小剂量顺铂连续化疗对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性影响的体外研究

目的以小剂量顺铂连续化疗模拟节律化疗方式,采用细胞培养方法研究此种给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1细胞放射敏感性的影响,为临床鼻咽癌同步放化疗探索一种新的高效低毒的治疗模式。方法 MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量。细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96h后进行放疗;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h后立即给予放疗;C组为IC70作用3h后间隔93 h进行放疗;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96h后进行放疗。克隆形成实验计算细胞存活率,采用单击多靶模型绘制剂量存活曲线,比较各处理组辐射敏感性变化。结果顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72h的IC50值为0.26μg/ml,1/5IC50为0.05μg/ml,IC70为0.72μg/ml。采用单击多靶模型计算各处理组的SF2值与SER值如下:A组SF2为(0.414±0.008),SER值为(1.429±0.110);B组SF2值为(0.502±0.010),SER值为(1.012±0.129);C组SF2值为(0.411±0.014),SER值为(1.400±0.169);D组SF2为(0.603±0.100)。结论采用类似节律化疗方式给药,与放疗联用可以引起CNE-1细胞株放射敏感性增高。     

Survivin siRNA提高人结肠癌HT-29细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的 以siRNA抑制结肠癌HT-29细胞内survivin的表达,探讨HT-29细胞对顺铂(cisplatin,cDDP)的增敏效果.方法 转染siRNA于HT-29,检测survivin siRNA处理对survivin、Bax、Bcl-2蛋白表达及胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响.cDDP处理后,...     

香菇多糖通过细胞凋亡和细胞周期阻滞增强食管癌细胞的放射敏感性

目的 观察香菇多糖(LNT)对人食管癌细胞Eca109放射敏感性的影响及机制。方法 常规培养Eca109细胞,MTT实验检测不同质量浓度(0、6.125、12.5、25、50、100、200、400、800μg·mL^-1)LNT对Eca109细胞增殖的影响,并筛选后续实验浓度;LNT+放疗组和单纯放疗组细胞均经不同放疗剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后,克隆形成实验检测LNT对Eca109细胞的放射敏感性;Eca109细胞分为4组：对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组,流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期分布。结果 与0μg·mL^-1LNT组比较,LNT呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的增殖,后续LNT质量浓度选择200μg·mL^-1;与单纯放疗组比较,LNT+放疗组Eca109细胞存活率下降,放疗增敏比SER为1.27;对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组细胞凋亡率分别为(4.82±1.42)%、(32.21±1.90)%、(14.14±3.07)%和(55.58±1.87)%,其中LNT+放疗组与...     

Pro-apoptotic effect of cecropin AD on nasopharyngeal carcinoma cells

Nasopharyngeal carcinoma （NPC） is one of the highly prevalent malignancies in Southeast Asia. Chemotherapy and radiotherapy are commonly administrated to treat nasopharyngeal carcinoma, but these therapies can not prevent the recurrence and metastasis of tumor cells. Furthermore, these therapies have severe side effects. Therefore, it is important to find a more effective therapy, e. g., a gene therapy for treatment of nasopharyngeal carcinoma. Cecropin AD （Cad） is a hybrid peptide that exhibits higher antibacterial activity than natural cecropin. It consists of 1-11 amino acid residues in the N-end of cecropin A and 12-37 amino acid residues in the c-end of cecropin D. The role of Cad in the malignant cells remains unclear. In this study, the Cad gene was cloned and transferred into NPC CNE2 cells and its pro-apoptotic effect were investigated.     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32mol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10mol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16mol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制的体外实验

目的观察参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用,为其临床应用提供理论依据。方法将不同浓度的参芪扶正注射液与CNE-2细胞作用24、48、72和96h,用MTT法检测参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大。流式细胞仪分析显示参芪扶正注射液将CNE-2细胞明显阻滞于G1期。参芪扶正注射液浓度为8.0g/L作用48h,CNE-2细胞的凋亡率为39.3%,荧光显微镜下观察有凋亡细胞存在。结论参芪扶正注射液能够抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G1期,可诱导CNE-2细胞发生一定程度的凋亡。     

白藜芦醇阻断信号通路对鼻咽癌细胞生长的影响

目的 通过体内和体外研究探讨白藜芦醇在人核孔复合物细胞（NPC）中的抗癌活性。方法 用MTT 实验检测白藜芦醇对CNE-1 细胞和CNE-2Z 细胞（两种具有不同分化程度的NPC 细胞株）生长增殖的影响。用流式细胞仪检测白藜芦醇诱导NPC 细胞凋亡情况和NPC 细胞周期分布变化。Western blot 检测涉及细胞凋亡调控的数个重要基因和与细胞周期调控有关的数种Cyclins 的蛋白表达水平。在裸鼠体内进行CNE-2Z 细胞移植瘤实验。结果 用白藜芦醇处理NPC 细胞后,白藜芦醇不仅以时间和剂量依赖的方式降低NPC 细胞的增殖能力,还可以剂量依赖的方式诱导NPC 细胞的凋亡。流式细胞仪分析结果表明,白藜芦醇处理可将NPC 细胞生长阻滞于S- 期和G2/M- 期。白藜芦醇处理可下调Bcl-2 和低氧诱导因子1（HIF-1）蛋白的表达,上调Caspase-3 蛋白表达。此外,白藜芦醇处理不仅可以降低蛋白激酶B（Akt）、p70 核糖体S6 蛋白激酶（p70S6K）和真核翻译起始因子4E- 结合蛋白1（4E-BP-1）的磷酸化水平,也可降低参与细胞周期调控的数个细胞周期蛋白（Cyclins）的表达水平。白藜芦醇可抑制裸鼠体内NPC 移植瘤的生长,进一步确认白藜芦醇对NPC 生长的治疗效果。结论 在人NPC 细胞株中,白藜芦醇可能是通过干扰Akt/p70S6K 信号通路而发挥有效的抗增殖和促凋亡作用。     

护理干预对鼻咽癌放射治疗患者的影响

目的探讨护理干预对鼻咽癌放射治疗（简称放疗）患者的影响。方法将我院2003—2006年的患者随机分为A组200例，B组200例。A组按鼻咽癌放射治疗常规护理，B组按鼻咽癌放射治疗常规护理加以护理干预。采取干预方式：分阶段、个性化地进行健康教育。结果B组放射治疗前的焦虑和放射治疗口腔黏膜反应明显低于A组，B组掌握健康教育知识及遵嘱行为，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论护理干预可有效地提高鼻咽癌患者放射治疗的效果，减少并发症，生活质量也大有提高。     

FAK阻断对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究RNA干扰（RNAi）抑制黏附斑激酶（FAK）基因表达后对鼻咽癌HNE-1细胞株增殖和凋亡的影响.方法：利用免疫组化法检测鼻咽癌HNE-1细胞株中FAK基因的表达.根据基因库上的FAKmRNA序列,设计合成针对FAK的小干扰RNA（siRNA）并转染HNE-1细胞,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR,WesternBlot等方法检测细胞中FAK基因表达的变化;利用MTT法检测细胞的生长增殖;流式细胞术观察其对细胞周期及凋亡的影响.结果：鼻咽癌HNE-1细胞株中FAK基因呈阳性表达.针对FAK的siRNA使鼻咽癌HNE-1细胞株FAKmRNA和蛋白表达水平分别下调71.4%,59.8%;MTT法检测显示,细胞的生长增殖受到明显抑制,抑制率可达36.8%;转染后48h,鼻咽癌HNE-1细胞G0/G1期细胞量增加,而S期及G2-M期的细胞减少,同时凋亡率增加.结论：干扰鼻咽癌HNE-1细胞内FAK基因的表达,可抑制肿瘤细胞的生长增殖,使细胞周期重新分布并促进凋亡.     

复发性鼻咽癌的自发及放疗后凋亡观察

目的：观察24例复发性鼻咽癌的自发与放疗后凋亡及分裂指数。方法：第一病例均观察放疗前和复发后的病理切片,光镜下计数凋亡指数和分裂指数。结果：结果表明,鼻咽癌的自发凋亡指数为0．55％,分裂指数为0．36％。放疗后复发时凋亡指数为0．63％,分裂指数为0．40％。结论：与其它肿瘤相比,．鼻咽癌属于低凋亡指数肿瘤,复发时凋亡指数和分裂指数与治疗前相比无明显差别。凋亡指数在鼻咽癌预后因素中的作用尚需进一步研究。     

蛋白激酶CK2基因表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用

目的 研究蛋白激酶CK2表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用,并探讨其可能机制.方法 通过RNA干扰技术下调鼻咽癌5-8F细胞中CK2α蛋白表达,利用Western blotting方法验证干扰效果;利用克隆形成实验观察CK2表达沉默后对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响;应用免疫荧光方法检测γ-H2AX灶点形成;Annexin-V和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 通过RNA干扰技术可以有效沉默CK2α表达.克隆形成实验结果显示CK2α表达沉默后,鼻咽癌细胞形成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加;1 Gy照射后15min,CK2α沉默的细胞γ-H2AX灶点数目明显增加;CK2α沉默的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 蛋白激酶CK2与鼻咽癌放射敏感性密切相关,CK2可能是一个非常有潜力的鼻咽癌治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of protein kinase CK2 gene silencing on the radiosensitization in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells and its possible mechanism. Methods RNA interference (RNAi) technique was used to down-regulate the protein kinase CK2α expression in 5-8F cells, and clonogenic assay was employed to observe the changes in the radiosensitivity of the cells. DNA double-strand break was assessed by immunofluorescence staining of γ-H2AX foci,and the cell apoptosis was examined using Annexin V-FITC/PI double-staining flow cytometry. Results CK2α protein was successfully silenced by siRNA. CK2α knockdown significantly decreased the clonogenic activity and increased the radiosensitivity of the NPC cells. After a 15-min exposure of the cells to 1 Gy radiation, significant difference occurred in the γ-H2AX foci between CK2α knockdown cells and the control cells (P<0.01). CK2α silencing significantly increased the cell apoptosis after the exposure (P<0.01). Conclusion Protein kinase CK2 plays an important role in the radiosensitivity of the NPC cells, and suppression of its expression might be a potential therapeutic approach of cancer.