胶原性关节炎大鼠血清中TNF-α，IL-17及IL-10水平分析

[目的]检测血清TNF-α,IL-17及IL-10在Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清中的表达。[方法]建立CIA动物模型,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠模型血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-10及IL-17的水平,同时观察大鼠炎症指数。[结果]60只大鼠随机被分为造模组(40只)和对照组(20只),免疫4周后,造模组40只大鼠有32只发病。造模成功组大鼠血清中TNF-α、IL-17水平分别为(39.65±11.23)pg/mL和(46.1±10.9)pg/mL,明显高于造模失败组和正常对照组(P均<0.05),而IL-10水平(29.11±27.59)pg/mL明显低于造模失败组和正常对照组(P<0.05)。另外,造模组大鼠血清TNF-α和IL-17水平与CIA大鼠炎症指数呈正相关关系(r=0.573,r=0.492,P<0.05),与之相反,CIA大鼠血清IL-10水平与炎症指数呈负相关关系(r=-0.481,P<0.05)。[结论]致炎因子(TNF-α,IL-17)和抑炎因子(IL-10)表达失衡可能在CIA发病中具有重要作用。     

运脾祛风除湿方对胶原诱导性关节炎模型大鼠的影响

[目的]探究运脾祛风除湿方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)型大鼠模和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的影响。[方法]将32只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和西药组4组,每组8只。以胶原注射的方式构建CIA模型,中药组和西药组在初次胶原注射当天分别予运脾祛风除湿方和羟氯喹预防性灌胃治疗,通过关节评分、肿胀度、痛阈、踝关节X线摄片,以及血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,ACPA)、抗牛Ⅱ型胶原抗体水平和辅助性T细胞17(T helper cells 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例评估各组大鼠CIA病情。[结果]与空白对照组比较,模型组大鼠炎症评分、关节肿胀度均显著增高,痛域显著降低,血清中IL-6、抗Ⅱ型胶原抗体和CRP的水平显著增高,Th17/Treg细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P＜0-05)。与模型组比较,运脾祛风除湿方预防性治疗,能显著降低CIA大鼠的关节炎症评分,减轻关节肿胀程度及破坏程度,降低血清中ACPA、IL-6、CRP和抗Ⅱ型胶原抗体的水平,并且在不影响脾脏指数的情况下抑制Th17/Treg比例,差异均有统计学意义(P＜0-05);羟氯喹预防性治疗对CIA病情的缓解效果不显著。说明运脾祛风除湿方能通过延缓RA发病、减轻RA关节炎评分发挥预防和治疗作用。[结论]运脾祛风除湿方预防性治疗可有效推迟RA的发生,缓解关节症状,降低炎症因子及抗体水平,维持Th17/Treg免疫平衡。     

穴位埋线对大鼠CIA模型Treg/Th17相关细胞因子及滑膜组织病理形态学的影响

目的通过观察穴位埋线对大鼠胶元诱导型关节炎(CIA)模型血清Treg/Th17相关细胞因子及滑膜组织病理形态学的影响,从细胞因子角度以及组织病理形态学改变探讨其的作用机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、来氟米特组、穴位埋线治疗组、来氟米特+穴位埋线治疗组。动态观察大鼠一般情况、各项关节炎活动指标、HE染色观察滑膜病理改变、ELISA法检测血清中IL-6、IL-17和TGF-β1含量。结果与模型组比较,各治疗组均能有效改善CIA大鼠关节肿胀以及关节炎指数;提高血清中TGF-β1含量和降低血清中IL-6、IL-17含量,各治疗组能有效减轻CIA模型滑膜组织关节炎炎症及病理形态的改变。结论穴位埋线治疗具有免疫调节作用,其可能调节Th17/Treg细胞平衡而显著减轻关节炎症和破坏。     

核因子-κB寡脱氧核苷酸策略对胶原诱导关节炎大鼠细胞因子调节研究

目的: 探讨核因子-κB(NF-KB)寡脱氧核苷酸(ODN)局部应用对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及机制。方法: 建立Ⅱ型CIA大鼠模型,用NF-κB圈套ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设空白对照组、CIA模型组和实验组。42 d后观察各组关节炎指数、病理指标,采用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠血清和关节液中白细胞介素(IL)-17、IL-12和转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果: 与空白对照组比较,CIA模型组大鼠血清和关节液中IL-17和IL-12水平均明显升高,而TGF-β水平显著降低(P<0.01),而实验组经NF-κB圈套ODN注射后,与CIA模型组比较,血清和关节液中IL-17和IL-12水平均明显降低,而TGF-β水平显著升高(P<0.01)。结论: NF-κB圈套ODN明显抑制CIA大鼠外周血和关节液中IL-17、IL-12的产生,促进TGF-β水平的增加,对CIA有较好的治疗作用。     

Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型的制备及评价

目的提取纯化Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)并制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。方法采用胃蛋白酶消化法从鸡胸骨剑突上提取CⅡ,通过DEAE-52纤维树脂处理、NaC l的反复盐析纯化并采用SDS-PAGE鉴定和吸收光谱分析。所提CⅡ加以完全弗氏佐剂采用皮内注射的方法建立大鼠C IA模型。容积法检测大鼠足爪肿胀度并进行评分;HE染色法对关节组织作病理检查;ELISA法检测体内抗CⅡ抗体的含量;放免法检测血清细胞因子IL-1β、TNFα-含量。结果自提的CⅡ与标准品分子量一致,最大吸收峰为226 nm。CIA大鼠足爪的炎症反应强烈,关节肿胀明显;病理检查关节组织可见其组织纤维化,伴有大量炎性细胞浸润;血清中抗CⅡ抗体水平和IL-1β、TNFα-显著升高。结论该方法提纯CⅡ简单、高效,用以制备大鼠CIA模型成功。     

昆明山海棠对胶原性关节炎大鼠免疫功能的干预作用及其机制

目的: 观察昆明山海棠(THH)对胶原性关节炎(CIA)大鼠免疫功能的干预作用,探讨其可能的作用机制。 方法: SD大鼠50只,随机分为正常组(n=10)和CIA模型制备组(n=40),用鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导大鼠制备CIA模型。再将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、地塞米松组及200和400 mg·kg^-1THH干预组。在实验过程中观察各组大鼠足爪肿胀度和关节炎指数(AI)等变化。实验第35天,采用ELISA法检测血清中抗CⅡ抗体水平;MTT法检测脾T细胞和B细胞增殖活性;ELSIA法检测脾组织白细胞介素12(IL-12)、IL-23和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;取各组大鼠足爪组织行HE染色,观察组织病理学变化。 结果: 与正常组比较,模型组大鼠AI明显上升(P<0.01),血清抗CⅡ抗体水平、脾T细胞和B细胞增殖活性、脾组织中IL-12、IL-23和TNF-α水平明显升高(P<0.01);大鼠足爪皮下组织细胞排列紊乱且有大量炎性细胞浸润及血管增生。与模型组比较,400 mg·kg^-1THH干预组大鼠一般状况得到明显改善,足爪肿胀度和AI明显下降(P<0.01),脾T细胞和B细胞增殖活性明显下降(P<0.01),血清中抗CⅡ抗体水平明显降低(P<0.01),脾组织中IL-23、TNF-α和IL-12水平均明显降低(P<0.01),大鼠足爪组织病理学改变明显减轻。200 mg·kg^-1THH组大鼠上述指标无明显变化(P>0.05)。 结论: 高剂量(400 mg·kg^-1)THH对CIA大鼠关节炎有明显抑制作用,其机制可能是THH能明显抑制T和B淋巴细胞的增殖反应,并抑制脾组织中IL-23、TNF-α和IL-12和血清中抗CⅡ抗体水平,进而明显改善大鼠足爪组织病理学变化。     

高脂饲料对胶原诱导关节炎大鼠关节的影响

目的通过比较不同饮食对胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠关节的影响,明确高脂饲料对关节炎的作用。方法选用Wistar大鼠建立关节炎模型,给予普通和高脂饲料,观察不同饮食条件下大鼠关节炎指数积分、滑膜HE染色以及检测血清中血脂和炎症因子的浓度。结果与普通饲料CIA大鼠组比较,高脂饲料的CIA大鼠关节炎指数积分增加且持续加重,病理切片的滑膜增生层次、血管翳形成和炎性细胞浸润均明显增高,高脂饲料CIA组血清中TC、LDL-C水平明显升高（P〈0.01）,而HDL-C则明显降低（P〈0.05）,前炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-17的浓度也明显升高（P〈0.05）。结论高脂饲料可能通过增强滑膜增生和促进炎症因子来促进CIA关节炎的进展。     

小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究

目的 胶原诱导性关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA)是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型,也是目前国际上公认的关节炎模型.但是,目前鲜见Ⅱ型胶原诱导CIA模型的系统免疫学变化的报道.因此,本研究采用DBA/1小鼠诱导了CIA模型,并对其免疫学改变进行了系统研究.方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和并充分乳化,于DBA/1小鼠尾根部皮内注射进行初次免疫,20 d后同样方法进行再次免疫.应用千分尺测量CIA模型小鼠的左右两侧足掌厚度,并进行关节炎评分.酶联免疫吸附试验测定小鼠血清Ⅱ型胶原特异性抗体,Luminex技术和αLISA技术测定血清及培养上清中的细胞因子水平.结果CIA小鼠于造模后23 d开始,陆续出现前肢、后肢的红肿、功能障碍,发病率高达100％,且随着时间的延长其关节肿胀程度呈进行性加重,关节炎评分增高.CIA小鼠脾脏指数较正常组明显升高,且Ⅱ型胶原刺激的特异性T细胞增殖明显增强.细胞因子检测结果表明,脾细胞培养上清中IFN-γ和1L-4含量及IFN-γ/IL-4比值明显升高,TNF-α和IL-1β水平亦显著升高.此外,CIA小鼠血清中存在高水平的Ⅱ型胶原特异性抗体.结论 Ⅱ型胶原诱导CIA模型发病率高,免疫学改变以Th1细胞因子升高为主,兼有细胞免疫功能及体液免疫功能损伤.     

橙皮苷对大鼠胶原性关节炎的治疗作用及部分机制

目的 研究橙皮苷(HDN)对胶原性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及部分机制.方法 用鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)联合氟氏完全佐剂(FCA)诱导CIA大鼠模型;采用足爪肿胀及病理组织学变化等指标观察HDN(80、160、320 mg/kg)对CIA大鼠的影响;ELISA法测定外周血清白介素17(IL-17)水平;体外用药(HDN ...     

原花青素对CIA大鼠足爪组织中NF-κB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响

目的研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型,免疫组化法检测足爪组织中NF-κB/p65蛋白的表达,ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量。结果原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB/p65蛋白的表达,降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平。结论原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF-κB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关。