抑癌基因RASSF1A在胃癌中的表达及意义

目的 研究胃癌组织中抑癌基因RASSF1A的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法分别检测39例胃癌组织标本和18例正常对照胃组织标本RASSF1A蛋白表达; RT-PCR法检测4株胃癌细胞株、正常胃黏膜细胞株GES-1以及阳性对照Hela细胞中RASSF1A mRNA的表达;结合病理学特征进行分析.结果 胃癌组织RASSF1A表达阳性细胞明显少于正常对照胃组织(P＜0.01);不同分化程度、临床分期及浸润深度的胃癌组织,其RASSF1A表达存在显著性差异(P＜0.05).4株胃癌细胞株中仅MKN45细胞有RASSF1A mRNA表达;而正常胃黏膜细胞株GES-1和阳性对照Hela细胞均表达RASSF1A mRNA.结论 胃癌组织中RASSF1A基因表达明显减少,其可作为评估胃癌恶性程度和预后的一项有意义的指标.     

抑癌基因RASSF1A在胃癌中的表达及意义

目的研究胃癌组织中抑癌基因RASSF1A的表达并探讨其临床意义。方法应用免疫组化法分别检测39例胃癌组织标本和18例正常对照胃组织标本RASSF1A蛋白表达;RT-PCR法检测4株胃癌细胞株、正常胃黏膜细胞株GES-1以及阳性对照Hela细胞中RASSF1A mRNA的表达;结合病理学特征进行分析。结果胃癌组织RASSF1A表达阳性细胞明显少于正常对照胃组织(P<0.01);不同分化程度、临床分期及浸润深度的胃癌组织,其RASSF1A表达存在显著性差异(P<0.05)。4株胃癌细胞株中仅MKN45细胞有RASSF1A mRNA表达;而正常胃黏膜细胞株GES-1和阳性对照Hela细胞均表达RASSF1A mRNA。结论胃癌组织中RASSF1A基因表达明显减少,其可作为评估胃癌恶性程度和预后的一项有意义的指标。     

RASSF1A基因在胃癌中的表达及意义

目的：检测抑癌基因RASSF1A在胃癌细胞株及组织中的表达情况,探讨RASSF1A在胃癌发生发展中的作用及临床意义。方法：用RT-PCR及Western blot检测细胞株、胃癌及癌旁组织中RASSF1A基因及蛋白的表达水平。结果：RASSF1A在低分化BGC-823细胞中的表达量明显低于中分化SGC-7901细胞,在胃癌中的表达阳性率（43.48%）显著低于癌旁组织（85.51%）,且低分化胃癌中的表达低于中高分化,Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。结论：在原发性胃癌组织中,RASSF1A的表达明显缺失或低下,且与肿瘤的分化程度及分期相关。     

RASSF1A与胃癌的研究进展

胃癌是常见起源于胃上皮的恶性肿瘤。我国胃癌发病率高,每年死于胃癌的患者居消化道肿瘤死亡原因的首位。现代研究表明,癌基因的激活和抑癌基因的失活在肿瘤发生发展中起着非常重要的作用。     

RASSF1基因在胃癌组织及细胞中的表达

[摘要] 目的 研究RASSF1基因的三种转录本(RASSF1-A, -B, -C)在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种转录本的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC和SGC细胞中三种转录本的mRNA表达水平。结果 RASSF1基因3种转录本在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A,RASSF1B 表达缺失率分别为60.2%(37/60),25%（15/60）,RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%（55/60）。结论 RASSF1三种转录本在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达无差异,其余基因比较有差异。RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关。     

RASSF1基因在胃癌组织和细胞中的表达及意义

目的 研究RASSF1基因的3种剪接体(RASSF1A、RASSF1B、RASSF1C)在胃癌组织及细胞中的表达特点.方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种剪接体的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中3种剪接体的mRNA表达水平.结果 RASSF1基因3种剪接体在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A、RASSF1B表达缺失率分别为60.2%(37/60)、25%(15/60),RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%(55/60).结论 RASSF1 3种剪接体在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达差异无显著性,其余基因比较差异有显著性.RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关.     

乳头状甲状腺癌组织中RASSF1A基因甲基化及其临床意义

目的:探讨乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中RASSF1A基因甲基化表达及其临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测28例PTC组织及癌旁组织RASSF1A基因甲基化状态,结合临床资料,分析RASSF1A基因甲基化与年龄、性别、病理分期、淋巴结转移间的相关性。结果:28例PTC组织中有15例(53.6%)RASSF1A基因存在甲基化,相应癌旁甲状腺组织仅7例(25.0%)存在甲基化。RASSF1A基因异常甲基化在PTC肿瘤组织中显著高于癌旁组织(P=0.029)。在临床分期Ⅱ~Ⅲ期组(87.5%,7/8)显著高于Ⅰ期组(35.0%,7/20)(P<0.05);而在年龄(P=0.385)、性别(P=0.165)、淋巴结转移(P=0.420)方面差异无统计学意义。结论:RASSF1A基因甲基化在PTC的发生、发展中起重要作用。     

消痰散结方药物血清对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察消痰散结方药物血清对人胃癌MKN-45细胞生长和凋亡的影响。方法：采用低、中、高浓度消痰散结方药物血清处理MKN-45细胞后,倒置相差显微镜下观察MKN-45细胞的形态学变化,血球计数盘计数细胞,细胞活性计数试剂盒检测消痰散结方药物血清对MKN-45细胞增殖的影响;Annexin V-异硫氰酸荧光素（{luorescein isothiocyanate,FITC）／碘化丙啶（propidiumiodide,PI）双标记法流式细胞术检测消痰散结方药物血清诱导MKN-45细胞后细胞凋亡的情况。结果：低、中、高浓度消痰散结方药物血清均能不同程度地抑制人胃癌MKN-45细胞的增殖,细胞发生了脱落、变圆、折光率下降等形态学变化;Annexin V-FITC／PI双标记法检测显示消痰散结方药物血清可诱导细胞发生凋亡,其中中、高剂量的效果有高于低剂量的趋势。结论：消痰散结方药物血清可抑制人胃癌MKN-45细胞的增殖,促进其凋亡。     

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠对胃癌细胞系生长及p16基因表达的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系SGC7901和BGC823生长及p16基因表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素染色法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测p16基因mRNA及蛋白质表达,甲基化特异性PCR法(MSP)检测p16基因的甲基化状态.结果 NaB处理后SGC7901和BGC823细胞生长受到抑制,1×10-3,3×10-3,5×10-3mol/L NaB处理72 h后两株细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数显著降低(P<0.01),呈现G1阻滞,各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01).p16基因在SGC7901及BGC823细胞中低表达,启动子区呈异常甲基化状态,NaB处理后在两株细胞中表达均增强.结论 NaB对胃癌细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导凋亡及上调p16基因表达有关,NaB可能通过增加组蛋白乙酰化水平及甲基化下调增加胃癌细胞中p16基因的表达.     

FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附的影响

目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05),但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。     

诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响

目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑铃形的结构,再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中.TRIzol法提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化.通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线,最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况.结果:哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞,并成功提取了细胞总RNA.RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组,MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢,TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞.结论:哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控,进而抑制op18基因表达及MKN-45细胞增殖.     

胃癌细胞MKN-45和SGC-7901中MTA1的泛素化修饰及其对MTA1表达的影响

目的 :转移相关基因1(metastasis associated 1,MTA1)已知与肿瘤转移密切相关,且与胃癌恶性程度明显相关,并可以通过影响信号转导途径发挥其功能,本研究拟确定MTA1是否可以被泛素化途径所调控。方法:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞后,以IP/WB实验检测MTA1的表达水平,并将带Myc标签的MTA1质粒以及带HA标签的泛素(HA-Ub)质粒转入该细胞,检测Myc-MTA1的表达。结果:以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞MKN-45、SGC-7901后,MTA1表达水平显著增加;免疫共沉淀实验显示泛素分子可以与MTA1直接结合,并且实验组较对照组相比泛素化程度明显增加;将HEK293细胞以si MTA1处理封闭MTA1的表达后,将Myc-MTA1质粒以及HA-Ub质粒转入该细胞,发现当后者存在时Myc-MTA1可被强烈泛素化。结论:在胃癌细胞中MTA1是可被泛素化途径修饰的蛋白。     

干扰CTPS基因促进川楝素诱导的人胃癌MKN-45细胞凋亡

目的 探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法 通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料,构建CTPS基因干扰载体,转染MKN-45细胞48 h后,采用qRT-PCR和Western blot检测CTPS基因mRNA和蛋白表达情况。用80 nmol/L的川楝素处理干扰CTPS基因的MKN-45细胞48 h,使用MTT实验法检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测γH2AX的表达。结果 生物信息学分析发现CTPS在人胃癌组织中高表达,CTPS基因高表达的胃癌患者总生存期短。向MKN-45细胞中分别转染Sh-ctrl空载体和Sh-CTPS干扰载体,qRT-PCR和Western blot检测显示,与转染Sh-ctrl空载体相比,转 染Sh-CTPS干扰载体的MKN-45细胞中CTPS mRNA和蛋白表达均降低,其中转染ShCTPS-3干扰效果最显著,分别降低了85.21%和53%（P<0.001）。检测细胞存活率及形态变化显示,与Sh-ctrl组相比,ShCTPS-3组细胞存活率降低（P<0.01）,细胞皱缩,形态不规则,呈现凋亡特征,细胞凋亡率升高（P<0.05）;在此基础上用80 nmol/L的川楝素处理转染Sh-ctrl和ShCTPS-3的MKN-45细胞48 h,与Sh-ctrl+川楝素组相比,ShCTPS-3+川楝素组细胞存活率降低（P<0.001）,细胞出现凋亡小体,细胞凋亡率升高（P<0.05）。结论 干扰CTPS基因促进川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡。