抗多菌灵单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的:制备抗多菌灵小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测蘑菇、干菇类中残留的多菌灵提供基础。方法:将小分子的多菌灵交联在大分子载体匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗多菌灵mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测mAb的交叉反应,及初步竞争抑制检测。结果:通过ELISA筛选出7株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型均为IgG1。与同属于苯并咪唑类杀菌剂的苯菌灵和甲基硫菌灵没有交叉反应。竞争抑制检测结果显示MC-3细胞株竞争效果较好。结论:获得1株高特异性、高亲和力、能稳定分泌抗多菌灵抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研发多菌灵残留免疫检测技术和产品奠定基础。     

抗人DAF单克隆抗体的制备及鉴定

以初步纯化的人红细胞膜ＤＡＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,成功地获得３株（ＤＧ３、ＤＧ９和ＤＡ１１）抗人ＤＡＦ单克隆抗体。经间接ＥＬＩＳＡ测定,３株杂交瘤细胞培养上清及腹水的抗体效价分别为１０－３～１０－４及１０－６～１０－７;３株单抗的重链为小鼠ＩｇＧ１亚类,轻链为κ型。结合还原条件下的免疫印迹实验及３株单抗对ＤＡＦ促衰变活性的抑制作用,推测ＤＧ９识别的抗原表位为ＳＣＲ１,而ＤＧ３和ＤＡ１１为ＳＣＲ２至ＳＣＲ４。     

抗温和气单胞菌单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗温和气单胞菌(Aeromonassobria,As)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以灭活的温和气单胞菌免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备抗温和气单胞菌mAb。用间接ELISA法对mAb的特性进行初步鉴定。结果获得6株能稳定分泌抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、2A8、2F11、3C6、3D11、4G2。经测定杂交瘤细胞培养上清及其诱生的腹水mAb效价分别为1×10-2~1×10-3、1×10-5~1×10-6。6株杂交瘤细胞系所分泌的mAb亚类是2A8、2F11为IgG1,1A8、3D11为IgG2a,3C6为IgG2b,4G2为IgG3。其中mAb3C6经交叉反应试验证明,与弧菌属其他几种细菌均不起反应,特异性强。结论成功地制备了抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,为该病的免疫学诊断及防治提供了基础。     

抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及初步鉴定

嗜水气单胞菌是养殖及野生鱼、虾、蛙、甲鱼等生物常见的细菌性病原体[1],可通过受伤的皮肤及伤口感染,并可通过食物链感染人,造成腹泻、败血症等疾病而严重威胁人类健康,是我国沿海地区人群中最常见的致病性弧菌之一[2].     

抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。     

抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。     

抗人活化B淋巴细胞单克隆抗体制备及鉴定

自儿童手术摘除的新鲜扁桃体分离人Ｂ淋巴细胞，经ＰＭＡ（佛波醇）激活后得到人活化Ｂ淋巴细胞，用于免疫ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠后，取免疫小鼠之脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，融合后细胞于含ＨＡＴ－ＩＭＤＭ完全培养基的２％甲基纤维素半固体培养基选择生长，经细胞酶联免疫吸附（ＣＥＬＩＳＡ）筛选间接免疫荧光流式细胞仪鉴定，获培养上清对活化Ｂ细胞及３Ｄ５细胞株细胞反应阳性，而Ｊｕｒｋａｔ细胞株细胞反应阴必的杂交     

抗HSPC238单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗HSPC238的单克隆抗体，为HSPC238的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白HSPC238为抗原，免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备HSPC238单克隆抗体，并用间接ELISA法和Western—blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗HSPC238的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为E001和E002。ELISA检测抗HSPC238单克隆抗体的腹水效价为1：12800和1：25600。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。通过Western—blot实验证实，两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性HSPC238蛋白。结论成功制备了两株效价高、特异性好的抗HSPC238单克隆抗体，制备的抗HSPC238单克隆抗体可用于HSPC238蛋白的鉴定，为HSPC238蛋白的生物学功能研究奠定了基础。     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

用肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721以贯序法免疫BALB/c小鼠,获得一株分泌肝癌单抗的杂交窟株HL_2,其染色体数目为97—105。单抗HL_2系IgG_2b亚类。吸收实验及阻断实验证明HL_2抗原与CEA、AFP、HBsAg、HBcAg及HBeAg无免疫同源性。ABC法和ELISA法说明单抗HL_2与四株肝癌细胞、六例肝癌组织均呈明确阳性反应,除与SGC-7901、H_(128)、K_(562)、Hela细胞株及部分胚胎肝脏,胚胎结肠有较弱性反应外,与肝癌旁组织、正常肝脏、其它肿瘤组织和细胞株、二种正常人细胞及其它胚胎组织无反应。显示了单抗HL_2的特异性较好、阳性率较高,是一个有应用前景的单抗。     

抗阿莫西林单克隆抗体的制备、纯化与鉴定

目的: 制备抗阿莫西林小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测动物原性食品中残留的阿莫西林提供基础.方法: 将小分子的阿莫西林交联在大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗阿莫西林mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测单抗与氨苄西林和头孢唑啉的交叉反应.结果: 通过ELISA筛选出5株可以稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型4株为IgG1/κ,1株为IgG2a/κ.亲和力在2.1×109~4.7×109.这5株mAb与氨苄西林的交叉反应为100%,与头孢唑啉没有交叉反应.结论: 获得5株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗阿莫西林抗体的杂交瘤细胞株,同时因为与氨苄西林的交叉反应为100%,这使得进一步研发动物源性食品中阿莫西林和氨苄西林残留的免疫检测技术和产品成为可能.     

抗乳腺癌单克隆抗体MG_2的制备及其鉴定

用人乳腺癌组织及腋窝淋巴结转移癌单细胞悬液对BALB/c小鼠进行初次免疫,3周后改用人乳腺癌组织提取的抗原再次免疫。末次免疫后3d取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0进行融合,,经筛选及克隆化培养,建立了1株分泌抗人乳腺癌单克隆抗体MG_2。免疫组化染色表明MG_2与乳腺癌产生强阳性反应,而乳腺纤维腺瘤、良性增生及非乳腺来源肿瘤以及正常组织则为阴性或弱阳性着染。初步证明单抗MG_2对乳腺癌具有一定的特异性与敏感性,因而可为乳腺癌的放免显像及免疫导向治疗提供一个新的较理想的载体。     

抗硝基酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定

硝基酪氨酸 (nitrotyrosine ,NT)为活性氮 (reactivenitrogenspecies,RNS)对蛋白酪氨酸残基氧化修饰的产物 ,是体内RNS形成的重要生物标记物[1,2 ] 。目前 ,NT的检测主要采用HPLC、HPLC EC及GC MS等方法 ,需要大型仪器和专业人员操作 ,并需进行样品的预处理 ,费时费力 ;而且样品的处理过程还会人为地产生NT ,影响检测结果的准确性[3 ,4] 。免疫学技术为检测NT开辟了一条新的途径 ,将NT与载体蛋白的连接物作为免疫原 ,制备针对NT的mAb ,然后用于ELISA、Westernblot、免疫组化染色和免疫电镜研究。用ELISA法定量测定NT时 ,…     

抗人肝癌单克隆抗体HCD78的制备及免疫组化定位

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，具有发病隐袭、病死率高的特点，早期诊断对预后的意义重大。单克隆抗体（ｍＡｂ）技术问世后，人们试图通过应用抗肝癌ｍＡｂ提高肝癌的早期诊断率。然而目前获得的抗肝癌ｍＡｂ识别的抗原都不是肝癌特异性抗原，而且由于肿瘤异质性的存在，又使其临床应用受到一定影响。本研究应用自建的人肝癌细胞株ＨＣ１０８免疫小鼠，制备了１株能稳定分泌抗人肝癌ｍＡｂ的杂交瘤细胞。免疫组化证实，该ｍＡｂ具有较好的特异性，其识别的肿瘤抗原主要定位于细胞膜。现将建株过程和初步鉴定的结果报道如下：１…     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)的单克隆抗体(mAb).方法:利用从人工流产刮宫物中提取的HCG免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞同NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合, 采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞株, 并对mAb的亚型、亲和力及特异性进行鉴定.结果:共获得26株能稳定分泌抗HCG特异性mAb的杂交瘤细胞株.mAb的亚类均为IgG1, 亲和力介于1.14×108～2.0×108 mol/L之间, 其中4株mAb与HCG的β亚基有较强的反应, 而与黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)均无交叉反应.结论:成功获得4株鼠抗人HCG mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的mAb能特异识别人HCG的β亚基, 可用于早孕、肿瘤等诊断的进一步研究.     

抗人重组SCF单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

本研究利用ＰＥＸ３１Ｂ作为载体，在大肠杆菌表达出重组人ＳＣＦ融合蛋白。用该蛋白作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过鼠－鼠杂交瘤技术，成功地获得４株分泌抗人重组ＷＳＣＦ单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经检测，它们所分泌的抗体亚类均为ＩｇＧ１，免疫印迹试验和抗体特异性鉴定证实，４株单抗均能特异性地识别可溶性ＳＣＦ。抗ＳＣＦ单抗杂交瘤细胞系的建立，为深入研究ＳＣＦ的生物学特性、功能以及ＳＣＦ产品的纯化，提供了     

抗T4单克隆抗体的制备和特性鉴定

采用T4 BSA联结物免疫BALB/c小鼠 ,通过杂交瘤技术 ,获得 4株稳定分泌高特异性抗T4单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,并制取到含高效价单克隆抗体的腹水。放免分析结果显示 ,所得的 4株单抗对T4均表现高亲和性和高特异性 :Ka>10 8L/Mol,与T2交叉反应未测出 ,与T3交叉反应 <0 4 0 % ,与rT3交叉反应为 <0 2 2 %。采用T4 10D11株单抗替代多抗应用于放免药盒 (RIA )与商品药盒进行比较 ,同时测定 96例临床血样 ,结果表明 ,两者之间有极显著的正相关 (Y =1 12X 3 15 ,r=0 985 0 ) ,为这些单抗的应用提供了基础     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗解脲脲原体(Uu)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用灭活的Uu免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗Uu的mAb。以ELISA和免疫组织化学染色法对mAb的亚类、效价及特异性进行鉴定。结果:获得3株抗Uu的mAb,均为IgG2b亚类。3株mAb的腹水ELISA效价为10-4~10-5。有2株只与Uu产生反应而不与肺炎支原体、淋球菌(gonococcus/GC)及豚鼠气单胞菌(A.cariae)等病原体发生交叉反应。免疫组化结果表明,mAb能和解脲脲原体特异性结合。结论:制备了3株具有较高的特异性和效价的抗UumAb,为Uu的免疫学检测及相关研究提供重要的制剂。