助孕胶囊对多囊卵巢大鼠卵巢组织白血病抑制因子表达的影响

目的观察助孕胶囊对多囊卵巢（PCO）大鼠生殖内分泌激素、卵巢白血病抑制因子（LIF）表达的影响，分析其可能的作用机制。方法采用孕激素联合人绒毛膜促性腺激素（HcG）造模法制备PCO模型大鼠。随机分为对照组、PCO模型组、PCO模型组＋助孕胶囊组（中药组）、PCO模型组＋克罗米酚组（西药组），采用放免法测定血性激素水平的变化，光镜观察卵巢、卵泡发育的情况，免疫组化法检测卵巢组织LIF的表达水平。结果助孕胶囊可使PCO大鼠的颗粒细胞层增厚，卵泡膜细胞层变薄，血清雄激素（T）、黄体生成素（LH）水平均明显下降，E2、FSH水平上升，并上调卵巢组织LIF的表达（P〈0．05）。结论助孕胶囊能够降低PCO大鼠血清中T、LH水平，升高E2、FSR水平，上调卵巢组织LIF的表达，从而促进卵泡的发育、成熟及排卵。     

助孕胶囊对PCO模型大鼠血清INH-ACT-FS系统的影响

目的:观察助孕胶囊对PCO模型大鼠血清性激素水平及INH-ACT-FS系统的影响,探讨其对PCOS的治疗作用并分析其可能的作用机制.方法:采用胰岛素联合HCG造模法制备PCO模型大鼠.随机分为对照组、模型组、助孕胶囊组、二甲双胍组.运用放射免疫法测定血清性激素、胰岛素(INS)水平;双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清抑制素(INHB)、激活素(ACTA)及卵泡抑素(FS)的水平.结果:助孕胶囊可明显下调PCO大鼠血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、INS水平;并能上调血清ACT水平,降低血清INH、FS水平;且INS与ACTA呈负相关,与INHB呈正相关.结论:INH-ACT-FS系统在多囊卵巢的发生、发展中起重要作用;高胰岛素血症与INH-ACT-FS系统有关;助孕胶囊能够通过调整H-P-O轴及影响卵巢局部细胞因子INH、ACT、FS的表达,从而调节生殖内分泌,促进卵泡的发育、成熟及排卵.     

助孕胶囊对多囊卵巢综合征大鼠卵巢局部细胞因子表达的影响

目的 观察助孕胶囊对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠血清性激素水平及卵巢局部细胞因子表达的影响.方法 采用孕激素联合人绒毛膜促性腺激素(HCG)法制备PCOS模型大鼠.SD大鼠40只随机分为正常对照组、模型组、助孕胶囊组、克罗米酚组,每组10只,运用放射免疫法测定血清性激素水平的变化;免疫组化法检测卵巢组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、白血病抑制因子(LIF)表达水平并分析各因子之间的关系.结果 助孕胶囊可明显降低PCOS大鼠血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)水平,并下调卵巢组织TNF-α和IGF-1的表达,上调卵巢组织LIF的表达.结论 助孕胶囊能够通过调整内分泌及影响卵巢局部细胞因子的表达,调整PCOS大鼠性腺功能,促进卵泡的发育成熟及排卵.     

健脾化痰方对PCOS大鼠胰岛素抵抗及慢性炎症因子的影响

目的：建立由脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,观察健脾化痰方对PCOS大鼠胰岛素抵抗及慢性炎症因子水平的影响。方法：23日龄雌性SD大鼠皮下注射脱氢表雄酮6mg／100g体重／天,建立PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为4组：模型对照组、二甲双胍组、中药组（健脾化痰方）和二甲双胍＋中药组,每组10只,分别给予相应药物进行干预,为期28d。另设10只同龄SD大鼠为正常对照组。实验结束时,行腹腔糖耐量实验,测定0分、120分血糖及胰岛素水平;隔日将大鼠麻醉后下腔静脉取血,酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、性激素结合球蛋白（SHBG）、白细胞介素-6（IL-6）、内脂素（visfatin）和色素上皮衍生因子（PEDF）的水平,HE染色观察大鼠卵巢的组织学改变及排卵情况。结果与正常组比较,模型组大鼠血清T、LH、LH／FSH、血糖、胰岛素、HOMA—IR、IL-6、PEDF水平均显著升高（P〈0．05）,卵巢组织HE染色光镜下可见各级发育期卵泡及黄体减少,囊性扩张的卵泡增多,卵巢颗粒细胞层数减少;与模型组比较,各治疗组大鼠血清T、LH、LH／FSH、血糖、胰岛素、HOMA—IR、IL-6、PEDF、visfatin水平均显著降低（P〈0．05）,FSH、SH—BG水平均显著升高（P〈0．05）,卵巢HE染色光镜下见囊性扩张的卵泡明显减少,黄体及各级发育期卵泡增多,卵巢颗粒细胞层数增厚。结论健脾化痰方对PCOS大鼠具有明显改善胰岛素抵抗及降低慢性炎症因子水平的作用,并能够改善卵巢功能、恢复排卵。     

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素／环磷酸腺苷-蛋白激酶A（follicle stimulating hormone／cyclic adenosine monophosphate-protein kinaseA,FSH／cAMP-PKA）通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精一胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF．ET）患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇（estrogen,E2）、孕酮（progesterone,P）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的水平,采用蛋白印迹法和Real-timePCR分别检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）蛋白和FSHR、P450芳香化酶（P450 aromatase,P450arom）mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高（P〈0．05）,补肾强经方中剂量纽P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。大鼠含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高（P〈0．01）,cAMP明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,补肾调经方中剂量组P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH／cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。     

滋肾化瘀祛痰汤对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗相关性的影响研究

目的：观察滋肾化瘀祛痰汤对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠胰岛素抵抗相关性的影响并分析其可能的作用机制。方法：规律发情周期SD雌性大鼠50只,应用人绒毛膜促性腺激素（HCG）联合胰岛素（INS）造模法制作动物模型,随机分为正常对照组、模型对照组、二甲双胍组、滋肾化瘀祛痰汤组和益肾导痰调冲汤组。运用放免法测定血清性激素水平的变化,光镜观察卵巢组织形态学改变,免疫组化法检测卵巢组织INR和IGF-1R表达水平。结果：滋肾化瘀祛痰汤能使PCOS大鼠卵巢囊状卵泡减少,颗粒细胞形态恢复完整、排列整齐,卵泡膜细胞层变厚,黄体组织增多;血清T、FSH、LH、INS水平明显下降（P〈0.05）,并下调卵巢组织IGF-1R,增高INR表达。结论：滋肾化瘀祛痰汤通过调整内分泌及影响IGF-1R及INR的表达,改善PCOS大鼠的高胰岛素血症和胰岛素抵抗,促进卵泡的发育成熟及排卵。     

调经助孕方联合二甲双胍对多囊卵巢综合征患者血清INH—ACT—FS系统的影响

目的观察调经助孕方联合二甲双胍对多囊卵巢综合征（PCOS）患者基础体温（BBT）、血清性激素水平及抑制素B（INHB）、激活素A（ACTA）、卵泡抑素（FS）水平的影响,探讨调经助孕方治疗PCOS的作用途径。方法选取20例健康育龄妇女作为健康对照组,将60例PCOS患者随机分为中药组、西药组和中西药联合组,每组各20例。中药组服用调经助孕方,西药组服用二甲双胍,中西药联合组同时服用调经助孕方和二甲双胍,健康对照组不服药。测定健康对照组血清INHB、ACTA、FS水平,测定PCOS患者治疗前后血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、睾酮（T）、INHB、ACTA、FS的水平。各组患者治疗前后自测BBT。结果调经助孕方联合二甲双胍可下调PCOS患者血清INHB、FS水平,上调ACTA水平,并能降低血清LH、LH／FSH、T水平,且使患者BBT得到改善。结论抑制素-激活素-卵泡抑素（INH—ACT—FS）系统在PCOS的发病中起着重要作用;调经助孕方联合二甲双胍可以调节PCOS患者卵巢局部因子INH—ACT—FS系统的水平,从而调节生殖内分泌。     

调经助孕胶囊对不孕大鼠卵巢FSHR、LHR的影响

目的建立SD大鼠ASR模型,探讨调经助孕胶囊对排卵障碍性不孕模型大鼠性周期、卵巢组织形态、血清Inhibin-B(抑制素B)及卵巢FSHR(卵泡刺激素受体)、LHR(黄体生成素受体)的影响。方法给幼年雌性SD大鼠注射雄激素可导致其成年后不孕,这种雄激素致不孕的大鼠不排卵。结果调经助孕组大鼠阴道上皮细胞有明显的周期性变化;调经助孕组大鼠卵巢各级卵泡总数大于模型组(P0.05),调经助孕组大鼠卵巢病理性囊性卵泡个数小于模型组(P0.05);调经助孕组大鼠血清抑制素B含量高于模型组(P0.05);调经助孕组大鼠卵巢FSHR、LHR表达水平高于模型组(P0.05)。结论调经助孕胶囊有使排卵障碍性不孕症的大鼠恢复性周期趋势的作用,增加模型大鼠血清Inhibin-B含量,提升卵巢储备功能,增强模型大鼠卵巢FSHR、LHR的表达水平,促进卵泡的发育与成熟。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的调节作用和血清雌二醇水平的影响

目的：观察中药益坤宁方对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶（AromatasecytochromeP450,P#50arom）的调节作用。方法：建立自然衰老的大鼠模型,将模型分为青年对照组、模型组、益坤宁组和西药对照组4组,益坤宁组和西药对照组分别给予中药益坤宁汤剂和西药利维爱混悬液治疗。4周后,采用免疫组织化学及WesternBlot方法检测大鼠卵巢P450arom蛋白表达情况;采用放射免疫法测定大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平。结果：P450arom蛋白在益坤宁组大鼠卵巢上均多呈阳性表达,与模型组比较均具有显著性差异（P〈0．01）;与西药对照组比较差异不具有统计学意义（P〉0．05）。益坤宁组大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平升高,与模型组比较差异显著（P〈0．01）,与西药对照组比较差异不具统计学意义（P〉0．05）,但其E2水平仍然低于青年对照组,差异具有显著性（P〈0．05）。结论：中药益坤宁可促进围绝经期大鼠卵巢P450arom蛋白的表达。中药益坤宁可提高大鼠血清雌二醇（E2）的水平。中药益坤宁可通过促进卵巢P450arom的表达而利于雌激素的生成。     

经皮穴位电刺激对多囊卵巢综合征大鼠激素及卵巢甾体激素代谢酶表达的影响

目的:观察经皮穴位电刺激对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠血清性激素水平及卵巢甾体激素代谢酶表达的影响,探讨经皮穴位电刺激治疗PCOS的可能机制。方法:SD大鼠用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、经皮穴位电刺激组,每组10只。模型组、药物组、经皮穴位电刺激组大鼠用来曲唑灌胃诱导PCOS模型。经皮穴位电刺激组选取"关元""三阴交"进行电刺激干预,药物组给予克罗米芬1mg·kg-1·d-1灌胃,治疗7d。记录大鼠体质量、卵巢质量,HE染色观察卵巢形态结构,放射免疫法检测血清激素水平,免疫组化及Western blot法检测卵巢细胞色素P 450芳香化酶(P 450arom)和P 450 17-α羟化酶(P 450c17α)的表达。结果:模型组大鼠与正常组相比,体质量和卵巢质量均显著增加(P0.01),血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)水平及LH/促卵泡生成素(FSH)明显升高(P0.01),雌二醇(E2)水平明显降低(P0.01);经皮穴位电刺激组与模型组相比,体质量和卵巢质量显著降低(P0.01),血清T、LH水平及LH/FSH较模型组明显降低(P0.01,P0.05),卵巢形态结构接近正常。与正常组相比,模型组大鼠卵巢组织P 450c17α的表达明显增高(P0.01),P 450arom的表达明显降低(P0.01);经皮穴位电刺激组与模型组相比,P 450c17α的表达明显降低(P0.05),P 450arom的表达明显增高(P0.05)。结论:经皮穴位电刺激疗法可能通过调节PCOS模型大鼠卵巢甾体激素代谢酶P 450c17α和P 450arom的表达,从而调节性激素水平,改善PCOS模型大鼠生殖内分泌紊乱状态和卵巢发育状况。     

桂枝茯苓丸调节PI3K/Akt/mTOR通路对PCOS-IR大鼠排卵障碍的影响

目的:探讨桂枝茯苓丸对来曲唑联合高脂乳剂导致的多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠排卵障碍的影响.方法 :将72只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组和桂枝茯苓丸低、中、高剂量组,每组12只.除空白组外,其余大鼠每日予来曲唑0.001 g·kg1结合高脂乳剂15 mL?kg1连续灌胃30 d建立P...     

调神益肾针法对更年期大鼠卵巢芳香化酶细胞色素P450mRNA表达的影响

目的：研究调神益肾针法对更年期大鼠卵巢芳香化酶细胞色素P450(P450AROM)mRNA表达的影响。方法：采用组织细胞原位杂交技术，辅以计算机图像分析。结果：更年期大鼠卵巢窦状卵泡、成熟黄体细胞中P450AROM mRNA的表达减弱，间质腺细胞中的表达则基本维持正常；经针刺干预后，这些部位尤其是窦状卵泡、成熟黄体该酶mRNA的表达明显增强。结论：促进卵巢P450AROMmRNA的表达，有利于增加雌激素合成限速酶的含量，这可能是调神益肾针法升高体内雌激素水平的分子机制之一。     

罗氏内异方对子宫内膜异位症局部雌激素合成影响的实验研究

目的：从雌激素合成角度探讨子宫内膜异位症（简称内异症）的发病机制,以达那唑作为对照,探索罗氏内异方对内异症模型雌激素合成调节网络的影响。方法：建立大鼠内异症模型,分别给予高、低剂量罗氏内异方似及达那唑治疗,以空白模型组作对照。3周后切除并位内膜病灶,检测前列腺素E2（PGE2）、雌二醇（E0含量和即刻早期表达基因（c—FOS）、小鸡卵白蛋白上游启动子转录因子（COUP—TF）、类固醇合成因子（SF-1）、细胞色素芳香化酶P450（P450arom）的mtkNA表达水平。结果：各用药组中,中药2组的粘连程度最轻,罗氏内异方低剂量组的囊肿最小。与空白模型组比较,各用药组的大鼠异位内膜组织E2和PGE。含量均明显下降,C-FOS表达量明显减弱;2组大鼠异位内膜组织P450arom表达量明显减弱,罗氏内异方低剂量组与高剂量组、达那唑组比较则明显减弱。与其他组比较,罗氏内异方低剂量组大鼠异位内膜组织SF-1表达量明显减弱,各组间大鼠异位内膜组织COUP-TF表达量差异无显著性意义。空白模型组并位内膜的E2含量与PGE2含量、P450arom、C-FOS表达量呈显著正相关,而与COUP-TF表达量呈显著负相关;PGE2含量与P450arom表达量呈显著正相关;P450arom与SF-1表达量有显著的正相关。结论：研究证实,异位内膜局部通过SF-1-P450arom—PGE2介导雌激素合成和C-FOS对雌激素早期应答两种独立途径,使局部的岛浓聚,促进内异症发生发展。同时提示罗氏内异方在一定浓度范围内通过抑制SF-1的表达和C-FOS的表达,使局部E2含量下降,从而抑制异位内膜病灶的发展。     

卵泡膜细胞胰岛素抵抗及隐丹参酮的调控

目的:探索胰岛素抵抗的卵泡膜细胞对腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)的反应变化以及中药隐丹参酮对卵泡膜细胞甾体激素合成的调控作用。方法:采用猪卵巢卵泡膜细胞进行体外培养,应用渥漫青霉素(Wortmannin)诱导构建胰岛素抵抗的细胞模型,并应用隐丹参酮和Forskolin处理各组细胞,检测中药隐丹参酮和/或Forskolin作用后各组的培养液葡萄糖浓度和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和甾体激素合成关键酶的mRNA表达变化。结果:卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后,睾酮(T)、孕酮(P)合成能力明显增强,17α羟化酶(CYP17)、3β-羟基甾脱氢酶(3β-HSD)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、细胞色素芳香化酶(P450arom)和类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)的mRNA表达量增加,胰岛素抵抗卵泡膜细胞对Forskolin的生物效应反应性增强。中药隐丹参酮能够缓解卵泡膜细胞胰岛素抵抗,同时也降低了培养液中睾酮的水平和甾体激素合成酶CYP17和STAR的mRNA水平。结论:中药隐丹参酮能够降低由于卵泡膜细胞胰岛素抵抗所产生的功能异常,提示中药增敏剂可以用于多囊卵巢综合征的治疗,可以起到改善生殖功能的作用。     

温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响

目的观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇(es-tradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制。方法将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组。各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P<0.01,P<0.05)。结论温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一。     

津力达颗粒对PCOS模型大鼠卵巢TGF-β/CTGF的影响

目的:研究津力达颗粒对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢TGF-β1/CTGF表达的影响。方法:40只21 d龄雌性SD大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)建模,按随机数字表法分为模型组、二甲双胍组、津力达组和津力达+二甲双胍组,各组分别给予相应药物灌胃,另取10只空白组皮下注射大豆油,模型组给予等量生理盐水灌胃。实验结束后,观察卵巢病理学变化,检测各组大鼠TGF-β1、CTGF血清学水平、卵巢蛋白含量以及mRNA表达。结果:模型组较空白组血清TGF-β1、CTGF水平及卵巢TGF-β1、CTGF蛋白含量及mRNA显著增高,差异有统计学意义;与模型组比较,二甲双胍组、津力达组和津力达+二甲双胍组TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA表达均有下降,差异有统计学意义,表明当津力达与二甲双胍联合应用时下降趋势增加。结论:津力颗粒可能通过调节卵巢组织中TGF-β1/CTGF表达,改善PCOS模型大鼠卵巢纤维化水平。