采用Wistar及SD大鼠制作C6胶质瘤模型

我们分别采用Wistar大鼠及SD大鼠制作C6胶质瘤模型，现将结果报道如下。一、材料和方法1．动物模型制作：Wistar大鼠28只，150～200g，雌雄各半，购自本院实验动物中心。另购SD大鼠10只，150～200g，雌雄各半。大鼠c6胶质瘤细胞株购自中科院细胞库。采用江湾Ⅱ型立体定向仪复制脑胶质瘤模型。[第一段]     

γ刀照射对胶质瘤细胞p16基因蛋白水平表达的影响

我们针对体外培养的胶质瘤细胞 ,在亚细胞水平探讨了肿瘤细胞γ刀照射后的凋亡机理 ,为以后研究提供依据 ,现报道如下。一、材料与方法1.主要试剂及来源 :培养基及蛋白酶为美国Ｆｌｕｋａ公司产品。小牛血清为长春生物制品所生产。兔抗鼠 ｐ16多抗(ＮＨ 46)为美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色试剂盒 (ＳＰ90 0 0 )为北京中山公司产品。2 .细胞培养 :Ｃ6细胞为高度恶性的胶质瘤细胞 ,购自美国生物菌种存储中心 (ＴＡＣＣ ,Ｐｏｃｋｖｉ ,ＭＤ ) ,接种于 2 5ｃｍ2培养瓶中单层培养。培养基含 10 %热灭活小…     

苯乙酸对脑胶质瘤细胞超微结构的影响

本实验旨在观察诱导分化剂苯乙酸 (ＰＡ)对脑胶质瘤细胞形态及细胞周期的影响 ,在细胞水平探讨苯乙酸的作用机理。一、材料与方法1.细胞培养 :苯乙酸及ＩＭＤＭ培养基购于美国Ｆｌｕｋａ公司 ,小牛血清为长春生物制品所生产 ,胰蛋白酶为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,胶质瘤细胞Ｃ6购于美国菌种存储中心ＡＴＣＣ。Ｃ6细胞接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中常规单层培养 ,置于 37℃体积分数为 5 %的ＣＯ2 恒温恒湿培养箱中。2 .电镜观察 :Ｃ6细胞在培养瓶中传代培养 ,分别加入 0、2 .5、5 .0ｍｍｏｌ/Ｌ苯乙酸。 7ｄ后胰酶消化收集细胞 ,离心 ,取离心管底…     

Angiostatin cDNA对胶质瘤体内生长的影响

Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ是新近发现的血管内皮生长抑制因子 ,能显著抑制一些实验性肿瘤的生长。为探讨Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ治疗脑胶质瘤的可行性 ,我们观察了其对胶质瘤体内生长的影响。1.材料与方法 :(1)材料 :Ｕ87人脑多形性胶质母细胞瘤细胞及转染Ａｎｇｉｏ ｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ的Ｕ87 Ａｇｓｔ细胞 ,由瑞典Ｃａｏ博士惠赠。Ｕ87 Ａｇｓｔ中 ,ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ与Ｕ87细胞的整合、表达已被鉴定[1] 。 6～ 10周龄裸小鼠 (Ｂａｌｂ/ｃｎｕ)购自北京市实验动物中心 ,ＣＤ31单克隆抗体及ＨＩＧＨ ＳＡＢＣ试剂盒由博士德公…     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞增殖细胞周期的影响及其抑瘤作用

本研究旨在观察人骨形成蛋白(ＢＭＰ) 2对人脑胶质瘤细胞增殖、细胞周期的影响及其抑瘤作用 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44由本所保存。 18只ＢＡＬＢ/Ｃ胸腺缺陷裸小鼠 ,4～ 6周龄 ,体重 (18± 2 )ｇ ,购自本校动物实验中心。重组人骨形成蛋白 2 (ｒｈＢＭＰ 2 )由本校生物化学教研室蒲勤博士提供 ,16 40培养基及胰蛋白酶购自Ｇｉｂｃｏ公司。四甲基唑蓝 (ＭＴＴ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)购自华美生物公司。2 .细胞培养 :参照司徒镇强[1] 方法。3.ＭＴＴ实验 :以 5× 10 3 个对数生长期细胞接种于…     

增殖细胞核抗原反义寡核苷酸对人不同恶性肿瘤细胞体外增殖活性的影响

设计针对增殖细胞核抗原(ＰＣＮＡ)基因的特异性反义寡核苷酸(ＰＣＮＡＡＳＯ)可抑制人胃癌不同细胞系增殖,而对正常细胞生长则无影响[1]。本研究旨在探讨ＰＣＮＡＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞、人结肠癌ＨＣＴ8细胞、人肺癌ＧＬＣ82细胞、人恶性胶质瘤ＢＴ325细胞体外增殖活性的影响及作用的敏感性。一、材料与方法细胞培养所用生长液为199,其中含体积分数为10%或15%的灭活胎牛血清及双抗,常规培养。寡核苷酸的合成参考文献[2]合成。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染实验参考文献[2]进行。细胞计数用台盼蓝排除法计数活细胞。ＭＴＴ实验参考文献[3]进…     

膀胱癌化疗中纤维连接蛋白介导的药物耐受研究

纤维连接蛋白 (ＦＮ)与肿瘤的浸润、生长、转移有密切的关系。Ｄａｍｉａｎｏ等[1]发现 ,多发性骨髓瘤细胞粘附于包被ＦＮ的培养板后 ,对化疗药物的敏感性降低 ,将其称为细胞粘附介导的药物耐受(ＣＡＭ ＤＲ)。我们的实验检测了膀胱肿瘤细胞与ＦＮ粘附后对化疗药物敏感性的变化。一、材料与方法1 实验材料 :膀胱癌细胞株Ｔ2 4购自中科院上海细胞所 ;ＭＴＴ、丝裂霉素Ｃ(ＭＭＣ)均购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;ＦＮ与小牛血清 (ＢＳＡ)购自美国ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 ;ＡＮＮＥＸＩＮⅤ试剂盒购自Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司。∑ 960型酶标仪、…     

应用旋转生物反应器和微载体技术体外大规模扩增人骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞 (ＭＳＣｓ)因其自身所具有的特殊性而日益受到关注[1,2 ] 。我们采用微载体技术在旋转生物反应器内扩增人骨髓间充质干细胞。一、材料与方法1.试剂 :细胞培养基ＤＭＥＭ购自美国Ｇｉｂｃｏ公司 ;旋转生物反应器购自美国Ｓｙｎｔｈｅｃｏｎ公司。2 .ＭＳＣｓ的分离与培养 :骨髓来源于正常献髓者 ,将人骨髓经ＤＭＥＭ稀释后用一种细胞分离液Ｐｅｒｃｏｌｌ分离 ,Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液的比重为 10 73 ｇ/Ｌ。分离后收获单个核细胞 ,ＤＭＥＭ洗 2次 ,接种于 2 4孔板内 ,浓度为 2 .0× 10 5个 /ｃｍ2 ,各孔内加入 10 %胎牛血清 …     

痘苗病毒介导白细胞介素Ⅱ基因治疗大鼠C6胶质瘤的实验研究

我们通过痘苗病毒介导ＩＬ 2 (ｒＶＶ ＩＬ 2 )基因治疗大鼠Ｃ6 胶质瘤动物模型的研究 ,探讨痘苗病毒作为一种新的载体对恶性神经胶质瘤进行基因治疗的可行性。1.材料与方法 :(1)ｒＶＶ ＩＬ 2载体的扩增、Ｃ6 细胞转染及痘苗病毒转染后Ｃ6细胞的体外增殖能力的改变 :具体方法见文献 [1,2 ]。 (2 )ｒＶＶ ＩＬ 2转染Ｃ6 细胞后脑内致瘤性的改变 :雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠40只 ,体重 3 0 0～ 3 5 0ｇ ,随机分为转染组及对照组 ,每组 2 0只。转染组将转染ｒＶＶ ＩＬ 2后的Ｃ6 细胞接种到大鼠脑内 ,接种靶点定位于冠状缝前 1 0ｍｍ ,矢状缝右旁开…     

三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7404、SMMC-7721 和肝癌裸鼠移植瘤模型的作用

砒霜主要成分为三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3) ,用于治疗急性早幼粒细胞白血病效果良好 ,且毒副作用较低[1] 。本研究旨在观察Ａｓ2 Ｏ3对人肝癌细胞株ＢＥＬ 740 4,ＳＭＭＣ 772 1和肝癌裸鼠移植瘤模型的影响 ,探讨Ａｓ2 Ｏ3对原发性肝癌的作用及其机制 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.药物和试剂 :0 .1%Ａｓ2 Ｏ3溶液购自哈尔滨医科大学第一附属医院 ;噻唑蓝 (ＭＴＴ)购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;细胞凋亡原位检测试剂盒为德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。小鼠抗增殖细胞核抗原多克隆抗体为美国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司产…     

联合基因联合转染胶质瘤细胞皮下接种对机体免疫功能的影响

我们用腺病毒作载体 ,将B7 1基因和IL 2基因联合转染脑胶质瘤细胞后小鼠皮下接种 ,观察了其对机体免疫功能的影响。一、材料和方法1.动物与细胞系 :昆明小鼠 ,雌性 ,6～ 8周龄 ,体重 18～ 2 0 g ,购自第二军医大学实验动物中心。G42 2小鼠胶质瘤细胞系由北京神经外科研究所建株。Yac 1、P815、CTLL 2和L92 9由第二军医大学免疫学教研室常规传代培养。小鼠B7 1基因和IL 2基因腺病毒载体由日本Hamada教授赠送。51Cr购自Amer sham公司 ;MTT购自Fluka公司 ;ConA购自Sigma公司 ;基因重组IL 2标准品购自Ceteus公司 ;重组小鼠TNF标准品…     

脑立体定向接种C6细胞建立大鼠脑胶质瘤模型

应用脑立体定向术将Ｃ６细胞接种在Ｓｐｒｅｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠脑尾状核，同时留置永久性聚乙烯导管建立的大鼠脑胶质瘤模型方法。将２０只ＳＤ大鼠按肿瘤生长时间分为４组。分别在接种后１、２、３、４周时进行ＭＲＩ检查，病理解剖，病理组织学以及ＧＦＡＰ和Ｓ－１００免疫组化检查。结果表明该方法建立胶质瘤模型不仅较为接近人脑胶质瘤生长特性，而且颅内生长稳定，无颅外种植生长，适于胶质瘤实验治疗研究需要。     

脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义

我们采用逆转录聚合酶链反应(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,检测了 4株脑胶质瘤细胞株、5 2例新鲜脑胶质瘤标本和 15例脑胶质瘤患者外周血标本的Ｔｈ1/Ｔｈ2类细胞因子的表达情况 ,初步探讨了脑胶质瘤Ｔｈ2类细胞因子漂移的意义。1.材料与方法 :胶质瘤细胞株ＳＨＧ 44、Ｕ2 5 1、Ｃ6和 9Ｌ ,购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本5 2例 ,取自我院患者 ,术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理 :星形细胞瘤Ⅰ级 4例 ,星形细胞瘤Ⅱ级 6例 ,间变性星形细胞瘤 2 3例 ,多形性胶质母细胞瘤 9例 ,少突胶质细胞瘤 3例 ,脉络丛乳头状瘤 1例 ,…     

Fas、FasL和C-myc基因表达与隐睾生殖细胞凋亡的关系

1998年 10月至 2 0 0 1年 2月我们利用动物隐睾模型检测生殖细胞凋亡及Ｆａｓ、ＦａｓＬ和Ｃ ｍｙｃ基因在隐睾中的表达 ,探讨Ｃ ｍｙｃ与Ｆａｓ/ＦａｓＬ介导的细胞凋亡途径之间的相关性。报告如下。材料与方法　 2 2日龄ＳＤ雄性健康大鼠 2 0只 ,手术复制单侧隐睾动物模型。模型建立后 ,分别在第 3天 (Ａ组 ,10只 )和第 7天 (Ｂ组 ,10只 )处死两组大鼠 ,取双侧睾丸标本。生物素 ｄＵＴＰ/酶标亲和素测定法检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡 (试剂盒购自德国ＢＭ公司 ) ,阳性染色胞核呈棕褐色。免疫组织化学ＳＰ法检测Ｆａｓ、ＦａｓＬ和Ｃ ｍｙｃ…     

培养的星形胶质细胞反应性胶质化的研究

我们利用分离培养的星形胶质细胞(ａｓｔｒｉｃｙｔｅ ,Ａｓｔ)建立体外反应性胶质化模型 ,并在此基础上研究损伤Ａｓｔ反应的发生、发展及其特点。一、材料与方法新生当天大鼠 ,取皮层组织常规制成细胞悬液 ,转入含胎牛血清的ＤＭＥＭ培养瓶中 ,37℃、体积分数为 5 %ＣＯ2 孵箱培养 2 4ｈ ,细胞贴壁后换液。待细胞生长至约 80 %融合后 ,质量分数为 0 .2 5 %胰酶消化细胞、传代 ,重复传 3～ 4代 ,Ａｓｔ纯度超过 95 %。将Ａｓｔ消化后接种在经多聚赖氨酸处理的盖玻片上 2 4孔板中 ,Ａｓｔ生长达80 %～ 90 %融合后 ,用无菌血管钳夹持自制消毒…     

小鼠白细胞介素-2基因修饰肝癌细胞瘤苗的抗肿瘤作用

我们利用阳离子脂质体Ｔｒａｎｓｆｅｃ ｔａｍ将携带小鼠白细胞介素 (ｍＩＬ) 2基因的真核表达质粒导入小鼠肝癌细胞 ,经放射线照射后制成瘤苗 ,观察其对荷瘤小鼠的治疗作用。一、材料和方法1.主要试剂 :阳离子脂质体Ｔｒａｎｓ ｆｅｃｔａｍ购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。ｍＩＬ 2采用酶联免疫吸附测定法 (ＥＬＩＳＡ法 )测定 ,检测试剂盒购自Ｅｎｄｏｇｉｎ公司。质粒携带ｍＩＬ 2基因的真核表达质粒(ＶＲ1110 ) [1] 由美国Ｖｉｃａｌ公司惠赠。2 .实验动物和细胞株 :雌性ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠 ,6～ 8周龄 ,购自上海医科大学实验动物中心。小鼠肝…     

高渗盐水对大鼠重症急性胰腺炎血清细胞因子水平的影响

重症急性胰腺炎 (SAP)是一种严重的全身性多器官损害性疾病 ,在发病早期 ,由于细胞因子、氧自由基等因素的作用[1] ,胰腺外器官损害远超出胰腺病变的本身。我们通过本研究尝试在大鼠SAP状态高渗盐水干预措施观察血清细胞因子水平变化及机制。一、材料和方法1.材料 :取雄性Wistar大鼠 48只 ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g/只 ;L 精氨酸购自武汉亚法生物有限公司 ;肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 6(IL 6)、白细胞介素 10 (IL 10 )免疫检测试剂盒购自法国Diaclone公司。2 .分组和模型制备 :随机分成对照组、模型组、等渗盐水组、高渗盐…     

抑制脂肪酸合成酶对乳腺癌细胞的影响及其机制

内源性脂肪酸由位于细胞胞浆中的脂肪酸合成酶 (ＦＡＳ)催化合成 ,有研究表明减少内源性脂肪酸合成可抑制乳腺癌细胞的增殖 ,但其机制尚未阐明[1] 。本研究旨在对其作用机制作进一步探讨。一、材料与方法1.细胞培养 :人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7购自中国科学院上海细胞研究所。常规培养于含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,在 10 0 %湿度 ,5 %ＣＯ2 培养箱中3 7℃单层贴壁传代培养。2 .抑制ＦＡＳ对ＭＣＦ 7细胞周期的影响 :ＭＣＦ 7细胞以 1× 10 9个 /Ｌ浓度接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中 ,生长至 70 %融合 ,加入浅蓝霉素 (ｃｅｒｕｌｅｎ…     

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甲状腺髓样癌 (ｍｅｄｕｌｌａｒｙｔｈｙｒｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＭＴＣ)是恶性程度中等的恶性肿瘤 ,但因其有多灶性发生和淋巴结转移出现早的生物学行为特点[1] ,超过 5 0 %的病人就医时已有颈部淋巴结的转移[1～ 3 ] ,5年生存率约为 45 % [1,3 ] ,预后并不乐观。ＭＴＣ源于甲状腺中滤泡旁Ｃ细胞恶变 ,Ｃ细胞是神经内分泌细胞 ,即所谓ＡＰＵＤ细胞 (ａｍｉｎｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒｕｐｔａｋｅａｎｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｔｉｏｎｃｅｌｌ) ,其合成和释放的降钙素(ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ,ＣＴ)是理想的ＭＴＣ肿瘤标志 ,检测血清ＣＴ…     

不同作用时间内表皮生长因子对肝癌细胞凋亡的影响

目前研究证实众多因素可以诱导肝癌细胞凋亡,如ＴＧＦ、ＩＬ－２、ＴＮＦ等,也有学者报道营养缺乏是诱导肿瘤细胞凋亡的重要因素,为此我们用无血清培养诱导人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１凋亡,并以此为模型研究表皮生长因子（ＦＧＦ）对肝癌细胞凋亡的影响。 材料与方法 １．细胞培养 人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１购自中国科学院上海细胞所,用含１０％小牛血清（华美公司）ＲＰＭＩ－１６４０（ＧＩＢＣ公司）培养液培养于３７℃、５％ ＣＯ培养箱中,常４８ｈ更换培养液。 ２．扫描电镜 生长于盖玻片上的贴壁细胞（无血清培养）经…