蜕膜细胞条件培养液中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMPs/TIMPs表达的影响

目的研究蜕膜细胞条件培养液(decidual conditioned media,DCM)中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达的影响。方法原代培养早孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM及分别加入TNF-α及EGF抗体的DCM处理COC1,利用RT-PCR法对COC1侵袭基因MMPs/TTMPs的表达进行分析。结果COC1表达MMP-2,TIMP-2,而不表达MMP-9,TIMP-1。早孕EGF-Ab组与对照组(DCM组)比较,前者可以使COC1的MMP-2 mRNA表达降低,且差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组可以降低MMP-2 mRNA的表达,但与对照组比较差异无显著性(P=0.280)。与DCM组比较,EGF-Ab组可以使COC1的TIMP-2 mRNA表达增加,两者差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组有增加TIMP-2 mRNA表达,但差异无显著性(P>0.05)。结论早孕DCM中TNF-α可能抑制COC1侵袭力。早孕DCM中EGF可能促进COC1侵袭力。     

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COC1侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM，用DCM处理卵巢癌细胞株COC1，利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果 卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1)，而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P＜0．01)；早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1mRNA，且有显著差异（P＜0．00）。结论 DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMP-2／TIMP-2以及u-PA／PAI-1之间的平衡，从而降低卵巢癌细胞株COC1的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COC1侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM处理卵巢癌细胞株COCl,利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1),而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P<0.01);早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1 mRNA,且有显著差异(P<0.01)。结论DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COCl侵袭基因MMP-2/TIMP-2以及B-PA/PAI-1之间的平衡,从而降低卵巢癌细胞株COCl的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对洋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕，早孕蜕膜细胞的方法制备DCM，然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞，用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2，MMP-9，基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1），尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA)mRNA均有表达；而TIMP-2，纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1)mRNA未见表达，早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2，MMP-9，uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕，晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2，MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡，而影响滋养细胞的侵袭能力。     

人蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

胎盘滋养细胞的适度浸润是成功妊娠过程中胚胎植入与胎盘形成的必要条件。有研究表明母体的蜕膜微环境能影响滋养细胞的浸润能力。然而,目前滋养细胞有节制侵入子宫内膜的机制尚不明确。本研究通过体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集基质细胞条件培养液（DSCM）用以处理正常人早孕滋养细胞系（B6Tert）,     

VEGF、TNF-α在多囊卵巢综合征中胚胎着床的影响

多囊卵巢综合征是一种发病多因性、临床表现多态性的内分泌综合征。不孕症是其并发症之一,即使受孕成功也易发生自然流产或胚胎凋萎,有时即使进行保胎措施也无法改变其流产结局。近年来研究显示,血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)不但与PCOS的发生发展过程关系密切,而且参与卵泡的生长发育及优选、受精率、妊娠率等多个方面。文章就血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)在多囊卵巢综合征中及胚胎着床的相关影响做一下探讨。     

TNF-α对卵泡内膜细胞睾酮分泌及细胞增殖的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对于卵泡内膜细胞睾酮分泌以及细胞增殖的影响情况。方法:体外培养一定量猪卵泡内膜细胞,与其培养液内加入一定剂量TNF-α,包括三个层次,采用流式细胞仪及CFDA SE细胞增殖检测试剂盒检验TNF-α对于猪卵泡内膜细胞的影响,并采用RIA放射免疫法测定其对睾酮浓度的影响。结果:于培养液中加入TNF-α后,分别就不同时间进行检测,且与对照组对比,两组睾酮水平未见显著差异,然而试验组卵泡内膜细胞平均荧光强度显著低于对照组,差异有统计意义(P<0.05)。结论:TNF-α可明显促进猪卵泡内膜细胞增殖,但对睾酮分泌不具有明显促进作用。     

健脾化瘀解毒中药复方对溃疡性结肠炎患者血清细胞因子EGF、TGF-β1及TNF-α的影响

[目的]通过观察健脾化瘀解毒复方治疗溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效,进一步探讨其分子生物学作用机制。[方法]采用随机、阳性药平行对照方法,将60例轻中度溃疡性结肠炎患者分为观察组30例和对照组30例,观察组给予健脾化瘀解毒复方中药,对照组给予美沙拉嗪4 g/d,疗程为3个月,观察治疗前后高敏C反应蛋白(CRP)、血小板(PLT)、Mayo评分的变化,并检测血清中表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。[结果]血清CRP值、PLT、Mayo评分、EGF、TGF-β1及TNF-α表达治疗前观察组和对照组无统计学差异(P0.05),与治疗前相比,健脾化瘀解毒复方组和观察组治疗后CRP值、PLT、Mayo评分降低、EGF升高、TGF-β1及TNF-α表达降低,均具有统计学差异(P0.01);与对照组相比,健脾化瘀解毒复方组PLT、Mayo评分、TNF-α均具有统计学差异(P0.05);且观察组治疗有效率为93.1%优于对照组的76.7%。[结论]健脾化瘀解毒复方具有良好的抗溃疡性结肠炎的作用,其机制可能与调节血清EGF、TGF-β1、TNF-α的表达有关,其抗炎效果优于美沙拉嗪组。     

EGF对A549肺腺癌细胞黏附和侵袭能力的影响

目的：检测表皮生长因子（EGF）对A549肺腺癌细胞黏附和侵袭能力的影响。方法：A549肺腺癌细胞分为对照组、1ng/mL EGF组和10ng/mL EGF组,常规培养48h,采用Fn包被法和Transwell小室法分别对3组细胞黏附和侵袭能力进行检测,分别以细胞黏附率和穿膜细胞数来表示细胞黏附和侵袭能力的大小。结果：EGF作用48h后,1ng/mL EGF组和10ng/mL EGF组A549肺腺癌细胞的黏附率和穿膜细胞数均显著高于对照组（P〈0.01）,但1ng/mL EGF组和10ng/mL EGF组A549肺腺癌细胞之间相比,细胞黏附率和穿膜细胞数无显著性差异（P〉0.05）。结论：EGF可增加A549肺腺癌细胞的黏附和侵袭能力,但其黏附和侵袭能力并不随EGF浓度的增加而继续增加,提示EGF在正常浓度范围时即可显著促进A549肺腺癌细胞的黏附和侵袭。     

TNF-α基因siRNA真核表达载体的构建及其对A549细胞TNF-α和TGF-β1表达的影响

目的:构建靶向肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,观察其对人肺腺癌A549细胞中TNF-α和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法:依据GenBank中人TNF-α（NM₀00594）序列和siRNA靶序列设计原则,设计并合成一对针对TNF-α的特异性序列（siTNF-α）和一对无关序列（siCon）。退火合成DNA双链,再分别重组入pRNAT-U6.1载体,经过PCR和DNA测序鉴定。将构建好的重组载体pRNAT-U6.1-siTNF-α、pRNAT-U6.1-siCon及空载体pRNAT-U6.1用脂质体介导转染A549细胞株,分别采用RealtimePCR和Westernblot方法检测细胞中TNF-α和TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平。结果:PCR和DNA测序鉴定证实载体构建成功;转染pRNAT-U6.1-siTNF-α的A549细胞中TNF-α和TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均低于其他3组（FmRNA=478.663,4.081;F蛋白=123.420,6.312,P均<0.05）。结论:成功构建了靶向TNF-α基因的siRNA真核表达载体,该载体能够有效沉默A549细胞中TNF-α的表达,TGF-β1基因表达亦受到抑制。     

肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1在米非司酮抗早孕蜕膜中的表达

目的通过对早孕蜕膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的研究,探讨米非司酮应用于早孕药物流产的作用机制。方法用免疫组织化学方法（二步法）测定三组（药物流产组30例,人工流产＋米索前列醇组20例,人工流产组20例）早孕蜕膜组织中TNF-α、TGF-β1的表达水平。结果用米非司酮的蜕膜组织中TNF-α含量显著升高、TGF-β1含量明显降低（P〈0.05）。结论米非司酮可通过升高早孕蜕膜组织中TNF-α、降低TGF-β1的含量而达到抗早孕的目的。     

卵巢恶性肿瘤组织中uPA及其PAI-1表达的临床意义

目的：探讨卵巢恶性肿瘤组织中尿型纤溶酶原激活因子（uPA）及其1型抑制因子（PAI-1）表达的临床意义。方法：采用免疫组化SABC法检测uPA、PAI-1在40例卵巢恶性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中的表达情况并分析其与临床病理因素及预后的相关性。结果：①uPA、PAI-1在卵巢恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常组织（P〈0.05）。②在临床分期Ⅲ～Ⅳ期者其卵巢恶性肿瘤组织中uPA、PAI-1阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0.05）。③uPA、PAI-1表达阳性者,平均生存时间分别均为29.32、31.78个月,明显低于uPA、PAI-1表达阴性者的49.0、52.23个月（P〈0.05）。Cox模型分析显示PAI-1表达为影响卵巢癌预后的独立因子。结论：uPA、PAI-1表达与卵巢恶性肿瘤的发生及侵袭、转移相关,并与卵巢恶性肿瘤的不良预后关系密切。     

盆炎方对盆腔炎性疾病后遗症大鼠子宫组织TNF-α、EGF蛋白表达的影响

目的：观察盆炎方对盆腔炎性疾病后遗症大鼠子宫组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、表皮生长因子（EGF）蛋白表达的影响。方法以“机械性损伤+混合菌种接种法”建立盆腔炎性疾病后遗症SD雌性大鼠子宫模型。造模成功后随机分为模型对照组、妇科千金胶囊组及盆炎方高、中、低剂量组,另设空白对照组和假手术组共计7组,每组8只。分别以盆炎方高、中、低剂量药液、妇科千金混悬液及同等体积蒸馏水灌胃21 d。采用免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中TNF-α、EGF蛋白表达的差异。结果与模型组比较,盆炎方各剂量组大鼠子宫组织的TNF-α表达明显降低（P<0.05）;盆炎方中、高剂量组大鼠子宫组织的EGF蛋白表达明显升高（P<0.05）;结论盆炎方高剂量组能够显著降低盆腔炎性疾病后遗症大鼠子宫中TNF-α的表达,明显增强盆腔炎性疾病后遗症大鼠子宫中EGF的表达,盆炎方对盆腔炎性疾病后遗症有积极治疗作用。     

TNF-α和TGF-β1在胚胎停育患者蜕膜组织中的表达

目的 探讨蜕膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达与胚胎停育的关系。方法 选取2020年11月至2021年10月就诊于该院妇产科门诊经B超确诊为胚胎停育的患者40例为观察组,另选取同期正常妊娠并要求人工流产的孕妇40例为对照组。采用免疫组织化学法与实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测两组蜕膜组织TNF-α和TGF-β1及其mRNA表达水平并比较。以两组蜕膜组织中TNF-α和TGF-β1 mRNA相对表达水平的均值为临界值将患者分为不同亚组,进一步分析TNF-α和TGF-β1 mRNA表达水平与胚胎停育的关系。结果 免疫组织化学结果显示,观察组蜕膜组织中TNF-α、TGF-β1阳性表达率分别为80.0%、 52.5%,对照组分别为47.5%、75.0%;观察组蜕膜组织中TNF-α表达程度高于对照组,TGF-β1表达程度低于对照组,差异均有统计学意义(Z=-3.622、3.898,P<0.05)。RT-qPCR结果显示,观察组蜕膜组织中TNF-α mRNA相对表达水平高于对照组(6.16±1.25 vs. 1.02±0.02),TGF-...     

羊膜细胞培养液对兔角膜重度碱烧伤房水中TNF-α和IL-1的影响

目的探讨羊膜细胞培养液治疗兔眼重度碱烧伤的机制,为临床应用提供理论依据.方法采用中国大白兔72只,随机分成对照组(A组)24只,0.1%地塞米松治疗组(B组)24只,羊膜上皮细胞培养液治疗组(C组)24只.各组动物采用单眼建立角膜碱烧伤模型并分别以0.1%地塞米松液和羊膜细胞提取液对B、C组动物伤眼进行治疗.于伤后1、3、7、14 d活杀动物.每个时段各组分别活杀6只兔,取眼房水检测TNF-α、IL-1的含量与活性.结果各时段B、C治疗组与对照组相比TNF-α、IL-1的活性和含量明显降低(P＜0.01).结论抑制TNF-α和IL-1的生物合成和释放可能是羊膜细胞培养液治疗角膜碱烧伤的机制之一.     

鼻咽癌组织中VEGF,TNF-α及其受体蛋白表达及相关性研究

目的：观察探讨VEGF,TNF-α及受体蛋白VEG-FR1,VEGFR2,P55,P75在鼻咽癌组织的表达情况及VEGF,TNF-α与其受体表达的相关关系.方法：采用组化免疫方法,对60例鼻咽癌组织标本进行染色,观察VEGF,TNF-α与其受体VEGFR1,VEGFR2,P55,P75阳性率及表达强度,并对VEGF,TNF-α与其受体VEGFR1,VEGFR2,P55,P75表达进行相关性分析.结果：鼻咽癌组织中VEGF,TNF-α及受体蛋白VEGFR1,VEGFR2,P55,P75鼻咽癌组织中过度表达,VEGF同VEGFR1表达呈正相关（r=0.440,P=0.010）、同VEGFR1表达呈正相关（r=0.440,P=0.010）,TNF-α同P55表达呈正相关（r=0.442,P=0.002）.结论：VEGF,TNF-α及受体蛋白VEGFR1,VEGFR2,P55,P75在鼻咽癌组织中过度表达,其可能通过VEGF、TNF-α与受体的相互调控在肿瘤的发展中发挥作用.     

Resistin基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究抵抗素(resistin)基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ECV304表达细胞闻黏附分子1(ICAM-1)的影响.方法:应用分子生物学技术,将resistin基因克隆到载体pEGFP-C1中构建质粒pEG/Resi,脂质体转染ECV304,转染6 h加入20 μg/L TNF-α诱导.用RT-PCR方法分别检测转染18、30、42和54h时resistin和ICAM-1 mRNA表达;同时用免疫印迹法检测resistin蛋白的表达,并用ELISA方法检测各期ECV304上清ICAM-1蛋白表达.结果:经酶切鉴定和测序证实质粒pEG/Resi构建成功并可在ECV304中表达;相同TNF-α诱导条件下转染resistin基因组的ICAM-1表达水平始终高于未转染组,在resistin基因表达高峰(30和42 h)ICAM-1 mRNA和蛋白表达量较未转染组均显著升高(P＜0.05);且ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平均随resistin基因表达量的增加而升高.结论:Resistin基因能够增强TNF-α诱导ECV304细胞表达ICAM-1.     

内毒素血症大鼠心肌组织中TNF-α及HMG-1基因的表达

目的 :观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)和高迁移率族蛋白 1(HMG 1)基因在内毒素血症大鼠心肌组织中的动态变化 .方法 :采用RT PCR法半定量分析内毒素作用 32h内大鼠心肌组织中TNF αmRNA及HMG 1mRNA水平 .结果 :正常大鼠心肌组织可表达一定量TNF αmRNA(0 .4 1± 0 .0 8)和HMG 1mRNA(0 .5 3± 0 .0 7) .内毒素作用后 ,两者表达均增加 ,TNF αmRNA在 8h达峰值 (0 .91± 0 .0 3,P <0 .0 1) ,HMG 1mRNA在 2 4h达峰值 (1.0 3± 0 .0 9,P <0 .0 1) .结论 :内毒素能上调心肌组织中TNF αmRNA和HMG 1mR NA的表达 ,且呈时间依赖性     

EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响

目的：探讨EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响及其机制。方法：对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子（rhECF）作为刺激因子,采用半定量RT-PCR和Western Blot方法测定癌细胞中MMP-3mRNA和蛋白含量变化。结果：与未处理组相比,用不同浓度（0．1,1,10ng／m1）EGF处理舌鳞癌细胞后MMP-3表达随浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein（10μg／ml）能够抑制EGF对癌细胞MMP-3表达的诱导作用。结论：EGF通过酪氨酸激酶通路诱导口腔癌细胞MMP-3的表达。