Wnt/β-catenin信号通路在高压氧治疗大鼠神经病理性痛中的作用

目的观察高压氧后处理对大鼠神经病理性痛的治疗作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法成年雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将其分为三组:假手术组(S组)、坐骨神经慢性缩窄手术组(CCI组)和高压氧治疗组(HBO组),每组10只。HBO组于术后第1天开始高压氧治疗,连续7d,1次/天。S组和CCI组单纯放入氧舱100min而不接受治疗。于术前1d、术后1、3、5、7d测定机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。术后7d取材,应用Western blot法测定各组大鼠脊髓Wnt3a、β-catenin分子表达,应用免疫组化法测定各组大鼠脊髓Wnt3a蛋白的表达。结果术后1、3、5、7dCCI、HBO组MWT明显低于,TWL明显短于S组(P0.05)。术后1、3、5、7dHBO组MWT明显高于,TWL明显长于CCI组(P0.05)。术后7dCCI组大鼠脊髓Wnt3a、β-catenin蛋白表达明显高于S组和HBO组(P0.05)。术后7dCCI组大鼠脊髓背角Wnt3a、β-catenin蛋白表达明显高于S组和HBO组(P0.05)。应用免疫组化法检测Wnt3a蛋白的表达情况,与Western blot所检测蛋白表达情况相同。结论高压氧后处理能减轻大鼠神经病理性痛,其作用机制可能通过抑制脊髓Wnt/β-catenin信号通路来实现。     

γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠神经病理性痛形成中的作用

目的 探讨大鼠腰段脊髓γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)在神经病理性痛形成中的作用.方法 SD大鼠112只,随机分为2组(n=56):假手术组(s组)和慢性坐骨神经结扎损伤组(CCI组).结扎大鼠左侧坐骨神经建立CCI模型.于CCI前、CCI后1、3、5、7、10、14 d随机取8只大鼠,测定机械刺激缩足反应阈值(MWT)和热刺激缩足反应潜伏期(TWL).于CCI前、CCI后l、3、7、14d随机取6只大鼠,取腰段脊髓,采用免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角GAT-1蛋白的表达.结果 与CCI前比较,2组CCI后各时点MWT和TWL均降低(P＜0.05);与S组比较,CCI组CCI后各时点MWT和TWL均降低,CCI后1、3 d GAT-1表达升高(P＜0.05或0.01).结论 大鼠神经病理性痛的形成与GAT-1表达增多有关.     

鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对CCI大鼠脊髓背角pERK表达的影响

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(OCI)大鼠机械和热痛阈及脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达的影响,探讨NO-711在脊髓水平抗痛敏的机制.方法 雄性SD大鼠126只,随机均分为六组(n=21):CCI+NO-711 50μg组(N50组)、CCI+NO-711 100 μg组(N100组)、CCI+NO-711 200 μg组(N200组)、CCI+生理盐水组(CN组)、CCI组、假手术组(S组).CCI组和S组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的NO-711或生理盐水,测定给药前、给药后30 min、1、2、4、8 h大鼠MWT、TWL及脊髓背角pERK表达的变化.结果 CCI组MWT和TWL术后3 d后各时点较术前2 d均降低和缩短、且相应时点均低于和短于S组(P＜0.01);与给药前比较,CN组大鼠各时点MWT和TWL,差异无统计学意义,而NO-711各剂量组大鼠给药后MWT和TWL均呈剂量依赖性增加;与CCI组和NS组比较,NO-711对脊髓背角pERK表达呈剂量依赖性抑制.结论 鞘内注射NO-711能明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏及脊髓背角pERK表达,提示pERK介导NO-711在脊髓水平具有抗痛敏效应.     

沉默髓系细胞触发受体1基因对神经病理性痛大鼠的影响

目的探讨髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1,TREM1)在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法成年雄性SD大鼠,体重220~300 g,取鞘内置管成功大鼠48只,随机分为四组(n=12):对照组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、TREM1sh RNA组(RNAi组)和阴性慢病毒组(Virus组)。采用慢性坐骨神经压榨性损伤法(CCI)制备神经病理性痛模型。RNAi组于造模前1周鞘内注射p GLVU6/RFP/Puro-sh RNA 30μl(1×109IU/ml);Virus组、CCI组和S组分别鞘内注射等量阴性慢病毒和生理盐水。于造模前1 d和造模后1、3、7、14d测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于造模后14 d痛阈测定结束后,处死大鼠,取L4-5节段脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓TREM1、TLR4、My D88、IκBα和p-NF-κB p65蛋白含量,RT-PCR法测定脊髓IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量。结果与S组比较,CCI组和Virus组TREM1蛋白含量明显增加(P0.05);与CCI组比较,RNAi组TREM1蛋白含量明显降低(P0.05)。与S组比较,CCI组、RNAi组和Virus组造模后各时点MWT和TWL明显降低(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显增加,IκBα蛋白含量明显降低(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显升高(P0.05)。与CCI组比较,RNAi组大鼠造模后各时点MWT和TWL明显升高(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显降低,IκBα蛋白含量明显增加(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论干扰TREM1基因可以缓解大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

细胞程序性坏死抑制剂Nec?1可减轻神经病理性痛大鼠的痛觉过敏

目的观察RIP1和RIP3在坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury, CCI)痛大鼠脊髓水平的表达变化,探讨程序性坏死特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在神经病理性痛中的保护作用。方法雄性8周龄SD大鼠60只,随机分为三组:假手术组(Sham组)、坐骨神经CCI组(CCI组)、坐骨神经CCI+Nec-1组(CN组),每组20只。在术前1周、术后1、3、5、7、10和14 d分别测定大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL)。每组取10只大鼠于术后7 d处死,采用Western blot法检测脊髓中RIP1、RIP3蛋白含量,采用透射电镜观察脊髓组织超微结构的变化。结果与Sham组比较,术后1、3、5、7、10和14 d CCI组MWT明显降低(P0.05),术后3、5、7、10和14 d TWL明显缩短(P0.05),术后7 d脊髓RIP1和RIP3蛋白含量明显升高(P0.05),脊髓中可见多处细胞核膜崩解,线粒体肿胀、嵴断裂,神经髓鞘出现明显的分离。与CCI组比较,术后7、10和14 d CN组MWT明显升高(P0.05)、TWL明显延长(P0.05),术后7 d脊髓RIP1和RIP3蛋白含量明显降低(P0.05),脊髓细胞核膜完整,线粒体稍有肿胀、嵴清晰,神经髓鞘分离不明显。结论 RIP1和RIP3介导的信号通路参与大鼠神经病理性痛的发生,给予Nec-1治疗可以减轻神经病理性痛大鼠的痛觉过敏症状。     

姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节神经元大麻素受体1和NR2B表达的影响

目的 探讨姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节(DRG)神经元大麻素受体1 (CBR1)及含NR2B亚基N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,体重200～230 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=18):假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)、姜黄素组(Cur组)和溶媒对照组(SC组).S组仅分离、暴露坐骨神经,其余3组采用慢性压迫性损伤法制备神经病理性痛模型.Cur组术后腹腔注射姜黄素100 mg·kg-1·d-1,连续14 d,SC组给予等容量二甲基亚砜.分别于术前2d、术后1、3、7、10、14 d时测定机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).分别于术后3、7、14 d时处死6只大鼠,取脊髓背角和DRG,采用免疫组化法检测神经元CBR1和NR2B的表达.结果 与S组比较,其他3组术后MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG神经元CBR1和NR2B表达上调(P＜0.05);与CCI组比较,Cur组术后MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG神经元CBR1表达上调,NR2B表达下调(P＜0.05),SC组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与脊髓背角及DRG神经元CBR1表达上调、NR2B表达下调有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响

目的 评价丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠108只,体重180 ～ 220 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)和丹参酮ⅡA磺酸钠注射液组(SSI组).CCI组和SSI组采用坐骨神经慢性压迫损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.SSI组于术毕即刻开始至处死前1d,腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液25 mg/kg,1次/d,S组和CCI组腹腔注射等容量(5 ml/kg)生理盐水.于术前1d、术后3、7、14 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于术后3、7、14 d时测定痛阈后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定脊髓背角Bcl-2和caspase-3的表达;采用分光光度法测定脊髓MDA含量及SOD活性.结果 与S组比较,CCI组和SSI组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角Bcl-2和caspase-3表达上调,脊髓MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05);与CCI组比较,SSI组MWT升高,TWL延长,脊髓背角Bcl-2表达上调,caspase-3表达下调,脊髓MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓组织氧化应激反应,减少脊髓背角神经元凋亡有关.     

脊髓背角ERK激活在大鼠神经病理性疼痛中的作用

目的探讨脊髓背角细胞外信号调节激酶(ERK)的激活在大鼠神经病理性疼痛诱发和维持中的作用。方法雄性SD大鼠,体重200～300 g。本研究分多剂量给药和单剂量给药两部分,均进行行为学实验和脊髓背角磷酸化ERK(p-ERK)表达检测。实验一48只鞘内置管大鼠随机分6组(n=8):假手术 生理盐水(NS)组(S组)、慢性压迫性损伤(CCI) NS组(C组)、CCI 5%二甲亚砜(DMSO)组(D组)、CCI 错义寡核苷酸10μg组(M组)、CCI U0126 5μg组(U组)、CCI 反义寡核苷酸组10μg组(A组)。鞘内给药后记录大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二48只鞘内置管大鼠随机分3组(n=16),自CCI术前1 d至术后3 d分别注射NS(G1组)、U0126 5μg(G2组)或ERK反义寡核苷酸10μg(G3组),假手术大鼠4只为阴性对照组,检测脊髓p-ERK的表达。实验三CCI术后5 d大鼠40只随机分5组(n=8):CCI 5%DMSO组(D’组)、CCI U0126 0.2μg组(U0.2组)、CCI U0126 0.5μg组(U0.5组)、CCI U0126μg组(U1组)、CCI U0126 5μg组(U5组),假手术大鼠8只注射5%DMSO(S组)为阴性对照组,记录MWT和TWL;实验四另选CCI术后5 d大鼠20只为实验组,鞘内注射U0126 5μg,假手术5 d大鼠(阴性对照组)与CCI术后5 d大鼠(阳性对照组)各4只,鞘内注射5%DMSO 0.5 h后取材,检测脊髓p-ERK的表达。结果实验一与C组比较,U组与A组MWT和TWL升高,作用持续至术后13 d;实验二与G1组比较,G2组与G3组术后3、5 d胞浆p-ERK2表达以及术后3、5、10 d胞核p-ERK1与p-ERK2表达降低;实验三与D组比较,U0.5组给药后MWT和TWL升高,其作用分别持续至鞘内给药后6 h和2 h;与U0.2组比较,MWT:U0.5组鞘内给药后0.5、2、6 h、U1组给药后0.5、2、6、12 h、U5组鞘内给药后0.5、2、6、12、24 h升高,TWL:U1组鞘内给药后12 h、U5组鞘内给药后0.5、6、12、24 h升高;与U0.5组比较,U5组MWT鞘内给药后0.5、12、24 h和TWL鞘内给药后0.5、12 h升高;实验四与阴性对照组比较,实验组鞘内注射U0126 5μg后0.5 h胞浆与胞核p-ERK1和p-ERK2表达下降,与实验组0.5 h比较,实验组胞浆p-ERK1于6、12、24 h升高,胞核p-ERK1于2、6、12、24 h升高,胞浆与胞核p-ERK2于6、12、24 h均升高(P<0.05)。结论脊髓背角ERK激活参与了大鼠神经病理性疼痛的诱发和维持过程。     

神经病理性疼痛大鼠FcγRⅠ mRNA表达量的变化

目的研究大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)发生后不同时期FcγRⅠmRNA表达量的变化。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为三组:空白对照组(C组,n=8),假手术组(S组,n=32),CCI模型组(NP组,n=32)。C组不进行任何处理,S组只分离暴露坐骨神经后不结扎,NP组建立CCI模型。观察并记录术前和术后3、7、14和21d三组大鼠术侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和右后爪热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。RT-PCR检测术后3、7、14、21d时S组和NP组RTPCR脊髓、背根神经节的FcγRⅠmRNA表达。结果与术前比较,术后3、7、14和21dNP组MWT明显减少、TWL明显缩短(P0.05)。与NP组比较,术后3、7、14和21dC组、S组MWT明显增加、TWL明显延长(P0.05),术后3d的C组、术后3、7、14和21dS组脊髓和背根神经节的FcγRⅠmRNA表达明显减少(P0.05或P0.01)。结论坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓海马和背根神经节FcγRⅠmRNA表达上调,可能与神经病理性疼痛的发生有关。     

鞘内联合应用白细胞介素-1受体拮抗剂、氯胺酮对慢性神经病理性疼痛的影响

目的 观察白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1ra)与氯胺酮联合应用对慢性神经病理性疼痛的影响. 方法 采用大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型.雄性SD大鼠40只,按完全随机原则随机分为假手术组、CCI组、IL-1ra组、氯胺酮组、IL-1ra+氯胺酮组.各实验组造模后,分别于第21天鞘内注射前2 h及注射后第2、4、6小时,采用von Frey纤维丝和热痛刺激仪检测大鼠机械性缩爪潜伏期(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热痛缩爪潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),应用免疫组织化学及Western blot方法检测脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase ,p-ERK)表达的情况. 结果 与CCI组相比,鞘内联合应用IL-1rα+氯胺酮组,明显减轻神经病理痛大鼠的痛行为,给药2h后MWT(7.1±2.2)显著升高,TWL(13.5±3.6)显著延长,其效应持续至给药后6 h(P<0.01).脊髓背角p-ERK表达明显减少(P<0.01),免疫组化p-ERK阳性细胞数也明显减少(P<0.01).同时比单独高剂量应用各药物效应有增强的趋势. 结论 IL-1ra与氯胺酮在较低剂量联合应用能明显减轻神经病理性疼痛,与降低p-ERK表达有关.     

电针对神经病理性痛大鼠脊髓及背根神经节中白细胞介素-33和ST2表达的影响

目的探讨电针对神经病理性痛大鼠脊髓及背根神经节中白细胞介素(IL)-33和ST_2表达的影响。方法成年雌性SD大鼠40只,体重190~240g,随机均分为假手术组(Sham组)、模型组(MC组)、同侧电针组(SE组)和对侧电针组(VE组)。建立坐骨神经压迫性损伤模型,SE组和VE组大鼠分别对右侧肢体和左侧肢体的阳陵泉穴和足三里穴进行电针治疗,分别于治疗前(T0)、治疗7d(T_1)、治疗后3d(T_2)和治疗后7d(T_3)测定四组大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),于T_3时采用荧光定量PCR检测大鼠脊髓及背根神经节中IL-33和ST_2表达。结果与T0时比较,T_1~T_3时MC组、SE组和VE组大鼠MWT明显降低,TWL明显缩短(P0.05);T_1时MC组,T_1~T_3时SE组和VE组大鼠MWT明显低于Sham组,T_1~T_3时MC组、SE组和VE组大鼠TWL明显短于Sham组(P0.05);T_2、T_3时SE组和VE组大鼠MWT明显高于,TWL明显长于MC组(P0.05)。MC组、SE组和VE组大鼠脊髓及背根神经节中IL-33 mRNA和ST_2mRNA相对表达量明显高于Sham组(P0.05);SE组和VE组大鼠脊髓及背根神经节中IL-33mRNA和ST_2mRNA相对表达量明显低于MC组(P0.05)。结论电针治疗可明显减轻神经病理性疼痛大鼠痛,可能通过抑制脊髓及背根神经节中IL-33和ST_2表达,阻断IL-33/ST_2介导的炎性反应而发挥作用。     

神经干细胞移植数量对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨神经干细胞(NSGs)移植数量对大鼠神经病理性痛的影响.方法 取出生1～3 d的SD大鼠,制备NSCs悬液.清洁级雄性SD大鼠84只,体重150～180 g,采用右侧坐骨神经半切断法制备大鼠神经病理性痛模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为7组(n=12),假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不切断,鞘内注射细胞培养液30 μl;神经病理性痛组(NP组):于模型制备后3d鞘内注射细胞培养液30 μl;NP+NSCs 103组(N1组)、NP+NSCs 104组(N2组)、NP+NSCs 105组(N3组)、NP+NSCs 106组(N4组)和NP+NSCs 107组(N5组):于模型制备后3 d,鞘内注射相应浓度的NSCs悬液.模型制备前1 d和制备后1、3.7、14和21 d时测右足机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于模型制备后7和21 d,痛阈测定结束后,取右侧腰膨大脊髓背角及L5背根神经节,测定脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组和N1～5组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数增多,染色加深;与NP组比较,N2～5组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF 阳性细胞数增多,染色加深;模型制备后7 d N1～5组MWT依次升高,TWL依次延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;模型制备后14、21d,N1～3组MWT依次升高,TWL依次延长(P<0.05),模型制备后21 d,N1～3组脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调,BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;N3～5组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NSCs移植减轻大鼠神经病理性痛的适宜移植数量为105个.

Abstract：

Objective To investigate the effect of intrathecal (IT) transplantation of different quantities of neural stem cells (NSCs) on neuropathic pain (NP) in rats.Methods Eighty-four adult pathogen-free male SD rats weighing 150-180 g were randomly divided into 7 groups ( n = 12 each) : group sham operation (S group) , NP group, NP+ NSCs 103 , 104 , 105 , 106 , 107 groups (N1-5 groups) . NP was induced by partial transection of right sciatic nerve. NSCs were transplanted into subarachnoid space in N1-5 groups. Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation (MWT) and paw withdrawal latency to nociceptive thermal stimuli (TWL) were measured at 1 day before (baseline) and 1, 3, 7, 14 and 21 days after operation. Brain derived neurotrophic factor ( BDNF) expression in spinal dorsal horn and dorsal root ganglia (DRG) was detected by immuno-histochemistry and RT-PCR on the 7th and 21st day after operation. Results Partial transection of the sciatic nerve gradually reduced MWT and TWL after operation starting from day 1 until day 7 and 14 as compared with the baseline in group NP. IT NSC transplantation significantly increased MWT and TWL and expression of BDNF in spinal dorsal horn and DRG in a dese-dependent manner at day 7 after operation in N1-5 groups as compared with group NP. There were no significant differences in MWT and TWL and BDNF expression among N3, N4 and N5 groups at day 21 after operation.Conclusion The proper quantity of transplanted NSCs which are able to ameliorate NP induced by partial transection of sciatic nerve in rats is 105 .     

姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠108只,体重220～250 g,随机分为6组(n=18):对照组(C组)、假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)和不同剂量姜黄素组(Cur1组、Cur2组和Cur3组).C组腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续14 d;S组只分离坐骨神经,然后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;CCI组术后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;Cur1组、Cur2组或Cur3组术后分别腹腔注射姜黄素30、100、300 mg·kg-1·d-1,持续至术后14 d,姜黄素以二甲基亚砜溶解.于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14d时测定热缩足反应潜伏期(TWL)和机械缩足反应阚值(MWT).各组于术后3、7、14 d时各处死6只大鼠,免疫组化法测定脊髓背角和背根神经节中磷酸化c-jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和c-jun的表达.结果 与CCI组比较,Cur1组和Cur2组术后MWT升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达下调,Cur2组术后TWL升高(P<0.05);与Cur1组比较,Cur2组术后TWL升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达均下调(P<0.05),MWT差异无统计学意义(P0.05).结论 姜黄素30、100mg/kg可减轻大鼠神经病理性痛,100 mg/kg效果更明显,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节p-JNK和c-jun表达上调有关.     

鞘内注射DREAM-shRNA对神经病理性痛大鼠脊髓背角p-CREB表达的影响

目的 探讨鞘内注射转录因子下游调控元件拮抗因子-短发夹RNA(DREAM-shRNA)对神经病理性痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠,体重280～320 g,采用坐骨神经慢性压迫(CCI)法建立大鼠神经病理性痛模型.于CCI后第3天鞘内置管.取鞘内置管成功的大鼠24只,随机分为4组,每组6只,假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不结扎;神经病理性痛组(NP组):于CCI后第8天鞘内注射生理盐水10 μl;RNA干扰组(RNAi组):于CCI后第8天鞘内注射DREAM-shRNA 5 μl和牛理盐水5 μl;空白载体组(BV组):于CCI后第8天鞘内注射慢病毒空白载体5 μl和生理盐水5μl,各组连续注射7 d.于CCI前1 d(T0,基础状态)、CCI后第7～14天(T1-8)时测定机械痛阈.于CCI后第15天时测定脊髓背角绿色荧光蛋白(GFP)和p-CREB的表达水平.结果 与基础值比较,各组各时点机械痛阈降低(P<0.05或0.01);与T1时比较,NP组和BV组T5-8时机械痛阈降低,RNAi组T8时机械痛阈升高(P<0.05或0.01);与S组比较,NP组和BV组机械痛阈降低,RNAi组T2时机械痛阈降低,T8时升高,NP组、RNAi组和BV组脊髓背角p-CREB表达上调(P<0.05);与NP组比较,RNAi组T6-8时机械痛阈升高,脊髓背角p-CREB表达下调(P<0.05).RNAi组脊髓背角可见大量绿色荧光,即GFP表达阳性,其余3组脊髓背角未见绿色荧光,即GFP无表达.结论 鞘内注射DREAM-shRNA缓解大鼠神经病理性痛的机制可能与抑制脊髓背角p-CREB的表达有关.     

鞘内注射γ-氨基丁酸转运体抑制剂NO-711在骨癌痛大鼠脊髓水平抑制磷酸化细胞外信号调节激酶1／2的上调

目的探讨脊髓水平脊髓细胞外信号调节激酶1／2（extracellular regulated kinase1／2,ERK1／2）活化在大鼠骨癌痛发生中的作用。方法实验1：雌性SD大鼠48只,体重160g-200g,按随机数字表法分成2组（每组24只）,A组（对照组）、B组（模型组）。采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞方法制备大鼠骨癌痛模型。于术前1d、术后1、3、5、7、10、14、21d测定大鼠机械刺激缩足反射阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）和自由行走痛行为学评分（arabulatory-evoked painscores,APS）,术后第7、14、21天取大鼠腰段脊髓,采用Western blot方法检测ERK1／2的表达。实验2：60只大鼠按随机数字表法分为5组（每组12只）：S组、N1组、N2组、N3组和N4组。假手术组＋生理盐水（S组）、骨癌痛＋生理盐水（N1组）、骨癌痛＋NO-71110ug（N2组）、骨癌痛＋NO-71120ug（N3组）、骨癌痛＋NO-71140ug（N4组）。于术后第14天鞘内分别给予生理盐水（S组、N1组）、γ-氨基丁酸转运体（γ-aminobutyric acid transporter-1,GAT-1）抑制剂NO-711 10 ug（N2组）、NO-711 20ug（N3组）、NO．711 40ug（N4组）。最后一次给药后0．5、1、2、4、8、12、24h观察大鼠MWT和APS,于给药后4h取腰段脊髓,采用Western blot方法检测脊髓磷酸化细胞外信号调节激酶（phopho-extracellular regulated kinasel／2,p-ERK1／2）的表达。结果实验1：与A组和手术前比,从术后第7天开始,B组MWT（8．02±0．30）显著降低（P〈0．01）,APS（0．88±0．22）和p-ERK1／2表达显著升高（P〈0．01）。实验2：与给药前相比,N1组大鼠MWT和APS在鞘内给予生理盐水（NS）后无明显改变。与给药前和N1组相比,NO-711可显著提高骨癌痛大鼠MWT（P〈0．05）,其作用时间可分别达8h（N2组,6．49±0．64）和12h（N3组12．40±1．37、N4组11．48±0．69）,但不能改善骨癌痛大鼠APS。免疫蛋白印迹法（Western blot）：与s组相比,M组p-ERK1／2表达明显上调（P〈0．01）;与N1组相比,N2、N3、N4组p-ERK1／2表达含量降低（P〈0．01）。结论脊髓背角p-ERK表达上调参与了骨癌痛的产生,NO-711通过抑制p-ERK表达上调缓解骨癌痛大鼠机械痛觉过敏。     

B族维生素对大鼠糖尿病神经病理性痛的效应

目的 探讨B族维生素(维生素B1、B6、B12)对大鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)的效应.方法 雄性SD大鼠104只,体重200～230 g,随机分为13组(n=8):正常对照组(C组),DNP组,DNP+生理盐水组(NS组),DNP+维生素B110、33、100 mg/kg组(B1 10组、B133组、B1100组),DNP+维生素B610、33、100 mg,kg组(B610组、B633组、B6100)组),DNP+维生素B120.5、1.5、4.5 mg/kg组(B120.5组、B12 1.5组、B124.5组),DNP+维生素B1 10/B6 33/B12 1.5 mg,kg组(VBC组).除C组外,其余各组均采用腹腔注射链唑霉素75 mg/kg 的方法制备DNP模型,于注射链唑霉素前2 d、注射后14 d时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),MWT和TWL均低于基础值的85%为DNP模型制备成功.注射链唑霉素后14 d时腹腔注射相应剂量和种类的B族维生素或生理盐水,1次/d,连续2周,并于B族维生寨给药1、3、7、14 d时测定MWT和TWL,最后1次测定痛阈后处死大鼠,测定脊髓背角和背根神经节(DRG)磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达水平.结果 与C组相比,其余各组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG p-CREB表达上调(P<0.05);与DNP组比较,各B族维生素组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG p-CREB表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05);与B110组、B633组、B121.5组比较,VBC组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG p-CREB表达下调(P<0.05).结论 B族维生素可减轻大鼠DNP,呈剂量依赖性,其机制可能与抑制脊髓背角和DRG CREB 的磷酸化有关.     

神经病理性痛大鼠背根神经节TRESK mRNA表达的变化

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG) 孔钾离子通道TRESK mRNA表达的变化.方法 雄性SD大鼠32只,体重22、0～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组).采用坐骨神经分支选择性损伤法制备神经病理性痛模型.S组仅暴露神经,不结扎.于术前1 d和术后1、3、5、7、14 d取8只大鼠,测定左后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术前1 d和术后14 d痛阈测定结束后取L4,5术侧DRG,采用RT-PCR法测定TRESK mRNA的表达.结果 与S组比较,NP组MWT明显降低,DRG TRESK mRNA表达明显下调(P<0.05或0.01),TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG TRESK mRNA表达下调,该变化可能与神经病理性痛的形成有关.