qPCR-HRM法检测NSCLC血清循环EGFR突变

目的探讨利用qPCR-HRM法检测血清循环EGFR突变的可能性并与组织检测结果比较。方法收集北京协和医院胸外科2010年6月至2011年7月收治的42例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的石蜡标本及术前静脉血样,用qPCR-HRM法分别检测其EGFR突变情况。结果 42例血样中EGFR突变率35.7%(15/42),肿瘤组织则为33.3%(14/42)。统计表明血浆和组织中的EGFR突变的检测结果未见差别(P0.05)。κ值为0.842(P0.001)。结论使用qPCR-HRM法检测NSCLC患者血清与肿瘤组织的EGFR突变具有极好的一致性。     

高分辨率熔解曲线技术检测非小细胞肺癌患者胸水中EGFR基因突变

目的探讨高分辨率熔解曲线(HRM)技术对非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸水标本EGFR基因突变进行检测的可行性及临床意义。方法采用高分辨率熔解曲线技术检测30例非小细胞肺癌患者胸水标本EGFR基因18-21外显子基因突变,并与Sanger测序法检测结果进行对比分析。结果HRM法检测胸水中EGFR基因18-21外显子突变总检出率为26.67%(8/30),Sanger测序法检测突变总检出率为23.33%(7/30)。HRM法与Sanger测序法相比,敏感性为100%,特异性为95.83%,阳性预测值为88.89%,阴性预测值为100%。结论运用HRM技术对非小细胞肺癌患者胸水进行EGFR基因突变检测方法可行,适宜推广。     

中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的研究

目的:针对表皮生长因子受体(EGFR)的分子靶向治疗越来越受到国内外的广泛关注,其中EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)Gefitinib和Erlotinib已在中国上市,批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC).EGFR突变是靶向药物TKI治疗有效的一个预测指标.有关我国非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的研究已有若干报道,本文意在探讨中国北方地区非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子18-21的突变特点.方法:收集50例来自北方地区的非小细胞肺癌患者的冰冻组织标本,进行EGFR基因外显子18-21的突变检测.结果:50例非小细胞肺癌组织中共检出突变15例(30%),其中外显子19突变6例,均为缺失突变del E746-A750,外显子21突变9 例 ,除1例为L861Q外, 其它均为 L858R替代突变 .女性患者的突变率( 12/23,52%)显著高于男性患者的突变率( 3/27 , 11%),P＝0.002 ;腺癌支气管肺泡癌患者的突变率( 13/26,50%)显著高于鳞癌患者的突变率( 2/20,10%),P=0.005;非吸烟者的突变率(10 /25,40%)高于吸烟者的突变率(5/25,20%),但无显著性差异,P=0.217.与其它报道比较,结果显示北方地区EGFR基因突变的总体发生率与其他地区无显著性差异 ,外显子19、20、21发生突变所占的比例除云南更常见于外显子19,有显著性差异(P＜0.05)外,与其他地区无显著性差异(P＞0.05).但北方地区突变的形式相对单一 .结论:中国南北方地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变发生率及主要突变类型基本一致,北方地区突变类型较单一,可给予针对性的检测.     

EGFR基因突变与酪氨酸激酶抑制剂疗效及预后之间的关系

背景与目的已有的研究表明:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路在非小细胞肺癌的发生和发展中起重要作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)是目前非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的热点。研究表明,EGFR基因突变与TKIs的疗效及预后相关。本研究旨在了解EGFR基因突变与两种酪氨酸激酶抑制剂疗效及预后的相关性。方法共收集了34例接受gefitinib单药治疗和25例接受erlotinib单药治疗的晚期NSCLC患者的病理组织蜡块及相关临床资料。用PCR-PAGE检测EGFR19外显子突变,PCR-RFLP检测EGFR21外显子突变,均用直接测序进行验证。结合临床进行分析。结果59例NSCLC标本中共检测出22例标本中有EGFR基因突变,突变率为37.3%。EGFR基因突变率在女性、腺癌、不吸烟患者中高(P<0.05)。有EGFR基因突变的患者接受酪氨酸激酶抑制剂治疗的有效率高于无突变患者(50%vs18.9%,P<0.05),疾病控制率高于无突变患者(86.4%vs54.1%,P<0.05)。有EGFR基因突变的患者的疾病进展时间和总生存期均高于无突变患者,但是没有统计学差异(P>0.05)。结论EGFR基因突变在女性、腺癌和不吸烟者中发生率高。有EGFR基因突变的晚期NSCLC接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗的有效率和疾病控制率高于无EGFR基因突变者。     

ADx-ARMS方法检测晚期非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

目的:探讨应用ADx-ARMS方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变应用于指导小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗的可行性与临床意义。方法:ADx-ARMS检测24例非小细胞肺癌患者胸水标本EGFR基因第19、20和21外显子突变与KRAS基因第2外显子突变。统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织中的EGFR、KRAS突变率差异。结果:24例胸水标本中,EGFR突变与KRAS突变分别为14例（58.3%）和1例（4.2%）。前期检测过的非小细胞肺癌组织EGFR和KRAS突变率分别为47.6%和4.5%。EGFR和KRAS突变率在胸水标本与前期肺癌组织中差异无统计学意义（P>0.05）。结论:对失去手术机会而难以获得组织标本的晚期非小细胞肺癌患者,可应用ADx-ARMS方法选择胸水标本筛查EGFR、KRAS基因突变,从而指导EGFR-TKIs的临床应用。     

PCR-SSCP检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的敏感性分析

目的 探讨分析PCR-SSCP检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的敏感性.方法 应用PCR-SSCP检测36例非小细胞肺癌标本的突变情况,阳性结果再进行DNA测序.结果 通过PCR-SSCP分析,11例存在突变,突变率为30.6%(11/36);PCR-SSCP分析阳性的结果通过DNA测序全为序列异常.结论 PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变具有较高的敏感性.     

非小细胞肺癌患者血清EGFR基因突变循环DNA检测的临床研究

目的:探讨非小细胞肺癌患者血清EGFR基因突变循环DNA检测的临床意义。方法:选取2011年1月-2014年5月于我院接受治疗的124例非小细胞肺癌患者为研究对象,收集血清及组织标本DNA,检测DNA EGFR基因突变情况。结果:124例非小细胞肺癌患者血清EGFR基因检测结果显示:19号外显子突变11例,21号外显子突变8例,血清总检出19例,检出率为15.3%。组织样本中EGFR基因检测结果显示:19号外显子突变27例,21号外显子突变13例,血清总检出40例,检出率为32.3%。在组织样本中,79例男性EGFR基因突变检出14例,比例为17.7%;45例女性EGFR基因突变检出26例,比例为57.8%,相比具有显著性差异(P<0.05)。76例吸烟史患者检出突变16例,比例为21.1%;48例无吸烟史者检出突变24例,比例为50.0%,两者相比差异显著(P<0.05)。血清样本检测中结果与组织样本基本吻合,在性别和吸烟史方面患者基因突变有显著性差异(P<0.05),在癌症分期及类型方面无显著性差异(P>0.05)。结论:非小细胞肺癌患者血清循环DNA检测EGFR基因突变与肿瘤组织检测具有高度的一致性,这对肺癌患者的诊断、筛查和治疗有着重要的意义,为临床检测提供方便、有效的诊断方法。     

福建省非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分析

 目的　检测福建省非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况。方法　提取50例NSCLC患者新鲜癌组织及其对应的正常组织标本的DNA，用EGFR基因巢式聚合酶链反应（PCR）及脱氧核糖核酸（DNA）测序技术分析NSCLC患者EGFR基因突变情况。结果　50例NSCLC患者的正常组织EGFR第19、21外显子均为野生型，而50例NSCLC患者的癌组织EGFR基因突变检出率为26 ％（13／50）。第19外显子缺失突变10例，第21外显子替代突变3例。结论　福建省NSCLC患者EGFR突变以19外显子突变为主。     

非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体Kras基因突变检测及与临床病理特征的相关性

目的分析非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)、Kras基因突变的情况及其与临床病理学特征的关系。方法收集1110例非小细胞肺癌标本,采用实时荧光PCR法检测标本中EGFR基因第18、19、20和21号外显子及Kras基因第2号外显子12和13密码子的突变情况。结果非小细胞肺癌EGFR基因的突变率为46.1%(512/1 110),Kras基因的突变率为7.1%(79/1110)。EGFR基因突变主要发生在女性、不吸烟和腺癌的患者,突变位点主要集中在第19和21号外显子,第18、19、20和21号外显子突变所占比例分别为3.3%(17/520)、46.0%(239/520)和5.0%(26/520)、45.8%(238/520)。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变主要发生于女性、不吸烟和腺癌的患者,采用实时荧光PCR法检测分析非小细胞肺癌患者EGFR、Kras基因突变的情况,有助于选择靶向治疗获益人群,为个性化治疗提供依据。     

改良的内切酶突变体富集法检测肺癌标本中EGFR基因突变

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是肺癌靶向药物疗效的可靠预测指标,因此基因突变的检测具有非常重要的临床意义。本研究建立使用常规实验仪器、高灵敏度、简便的检测表皮生长因子受体突变的方法,以利于临床中快速的检测EGFR基因突变。方法采用改良的内切酶法富集法检测251例肺腺癌DNA标本中EGFR基因外显子19缺失突变和21(L858R)点突变,并与直接测序进行比较。利用混合突变/野生型EGFR基因的细胞系测定改良方法的灵敏度。结果在251例腺癌标本DNA中使用测序法检测出EGFR外显子19突变46例、外显子21突变26例。采用改良的突变体富集法检另外测出外显子19突变78例、外显子21突变57例,总突变率53.8%。灵敏度检测显示对于外显子19和21,新方法的检测灵敏度达0.5%。结论本方法具有简便、经济、灵敏度高等特点,便于临床快速筛查非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。     

晚期肺腺癌EGFR基因突变状态检测及分析

目的分析晚期肺腺癌表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变率及其与临床特征的相关性。方法收集2010-09-07-2011-07-21首都医科大学附属北京胸科医院收治的晚期初治肺腺癌患者102例,有可供检测的肿瘤组织标本。利用扩增受阻突变系统（amplification refractory mutation system,ARMS）进行EGFR基因突变检测,统计分析EGFR基因突变状态和临床特征的相关性。结果 102例晚期肺腺癌组织中,共检测到EGFR基因突变55例（53.9%）,其中18外显子突变1例（1.0%）,19外显子突变25例（24.5%）,20外显子突变2例（2.0%）,21外显子突变26例（25.5%）,同时存在19和20外显子突变1例（1.0%）。Ⅳ期患者EGFR基因突变率为57.6%（53/92）,高于ⅢB期患者20.0%（1/10）,差异有统计学意义,P=0.041;女性患者EGFR基因突变率56.9%（33/58）高于男性患者的50.0%（22/44）,不吸烟患者EGFR基因突变率58.1%（36/62）高于吸烟患者的36.0%（9/25）,〈65岁患者EGFR基因突变率56.8%（42/74）高于≥65岁患者的46.4%（13/28）,但差异均无统计学意义,P〉0.05。不同取材部位及取材方法之间EGFR基因突变率差异无统计学意义,P〉0.05。结论晚期肺腺癌EGFR基因突变率以Ⅳ期、女性和不吸烟患者较高,但性别及吸烟状态之间的差异无统计学意义。不同的肿瘤活检部位及活检方法之间EGFR基因突变率并无差异。     

DNA直接测序技术检测EGFR基因突变指导厄洛替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的：通过对晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者表皮生长因子受体（epi-dermal growth factor receptor,EGFR）基因突变的检测,探讨厄洛替尼（Erlotinib）一线治疗晚期NSCLC的疗效与安全性。方法：从110例NSCLC患者的肿瘤组织提取DNA,用DNA直接测序技术检测EGFR基因19、21外显子突变情况,31例EGFR基因突变患者中,30例患者口服厄洛替尼150mg/d,持续至疾病进展或发生不能耐受的药物不良反应,评价客观有效率（RR）,疾病控制率（DCR）,总生存（OS）,无疾病进展时间（PFS）,一年生存率和药物不良反应。结果：110例NSCLC组织中EGFR基因突变31（28%）例,其中19外显子缺失18（58%）例,21外显子点突变13（42%）例。EGFR基因突变率女性40%、肺腺癌33%、不吸烟者46%,高于男性、非腺癌、吸烟的病人。30例口服厄洛替尼患者,完全缓解（CR）3例,部分缓解（PR）21例,疾病稳定（SD）5例和疾病进展（PD）1例,客观有效率为80%,疾病控制率为97%,截止随访结束,仍有20例患者生存,故中位总生存未获得结果,无疾病进展时间为11.4个月,1年生存率为78%,厄洛替尼治疗晚期NSCLC最常见的不良反应是腹泻和皮疹,多为I-II级。结论：DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,一线应用厄洛替尼治疗晚期NSCLC患者,疗效明显,耐受性好,是治疗晚期NSCLC的最佳选择之一。     

NSCLC中EGFR基因突变与表达关系研究

目的 研究非小细胞肺癌组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变和蛋白表达的相关性.方法 随机选择北京协和医院胸外科2009年6月至2011年5月收治的非小细胞肺癌(non- small cell lung cancer,NSCLC)患者的石蜡包埋肺癌组织标本71例,分别以直接测序法和免疫组织化学染色法取得表皮生长因子受...     

EGFR第一内含子（CA）n双核苷酸重复多态性和基因突变与肺癌分子靶向治疗的反应

目的：对肺癌组织EGFR基因突变和第一内含子（CA）n双核苷酸重复多态性与分子靶向药物治疗反应相关性进行初步研究。方法：用基因测序的方法检测了观察组共116例肺癌体细胞标本;对照组20例肺癌患者血液标本。对全部标本的EGFR基因18、19、21外显子,以及其中48例第一内含子（CA）n重复序列进行基因测序分析并随访了45例肺癌患者分子靶向药物（易瑞沙）治疗情况。结果：观察组116例标本中共发现20例（17．25％）EGFR基因突变,其中17例为外显子突变,3例为内含子杂合突变。对照组20例肺癌患者血液标本均未发现突变。肺腺癌的突变率为21．62％,比鳞癌（8．33％）、其它类型癌（11．11％）略高,但无统计学差异。EGFR基因突变在女性患者中（7／36,19．45％）所占比例比男性患者（13／80,16．25％）略高,但无统计学差异。观察组中,随访外显子突变患者眼用易瑞沙的有效率（包5％）显著高于未突变者（0％）（P〈0．01）,疾病控制率（100％）高于未突变组（44．4％）（P〈0．05）.外显子突变患者服用易瑞沙治疗的疾病控制率（100％）高于未服用者（40％）（P〈0．05）。内含子杂合的3例中有2例服用易瑞沙,有效率为0％,疾病控制率50％。观察组与对照组有23例（CA）n短重复（CA≤16）（47．9％）,25例（CA）n长重复（CA〉16）（52．1％）。EGFR第一内含子（CA）n重复片段长短与基因突变无明显相关,OR（OddsRatio）〈2。观察组中,16例突变患者与18例未突变患者（CA）n重复片段的长短与分子靶向药物治疗有效率、疾病控制率均无统计学差异（P〉0．05）。结论：EGFR基因突变组患者分子靶向药物治疗有效率（62．5％vs0）、疾病控制率（100％VS44．4％）要明显优于无突变组。在肺癌中,EGFR基因体细胞突变是决定表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂敏感性的最重要的因素。（CA）n重复片段长短与EGFR基因突变无明显相关。分析突变因素关联的（CA）n短重复患者与（CA）n长重复患者的分子靶向药物治疗有效率、疾病控制率无统计学差异。由于部分未突变肺癌患者使用易瑞沙出现一定的疾病控制率,有关分子靶向药物疗效与（CA）n重复的关系有待进一步单因素研究。     

四川地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分型与临床病理特征的相关性分析

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者EGFR基因突变状态及其与临床病理特征的关系。方法 收集2015年1月至2017年12月成都市第三人民医院确诊的NSCLC病理标本203例,其中石蜡切片113例,新鲜组织41例,胸腔积液49例。采用突变扩增阻滞系统（ARMS）-Taqman探针法检测EGFR基因外显子突变状态,分析其与临床病理特征的关系。采用Logistic回归分析影响NSCLC患者发生EGFR突变的因素。结果 203例NSCLC患者中,有97例检测到EGFR突变（47.8％）,其中TKIs药物敏感性突变82例（L858R突变44例,19-del突变35例,G719C/G719S突变1例,L861Q/S768I突变2例）,TKIs耐药性突变7例,另有8例为多位点突变。多位点突变中携带T790M突变率高（87.5%）,以男性、Ⅳ期、腺癌患者为主。EGFR突变主要发生在女性、无吸烟史、腺癌患者;19-del和L858R突变在女性中占的比例更高,分别为57.1％和54.5％,而其他突变类型在男性中占的比例更高（72.2％）。Logistic回归分析显示,无吸烟史患者的EGFR突变率更高（HR=4.146,95%CI：1.802～9.536）。结论 四川地区NSCLC患者EGFR基因突变以L858R和19-del突变为主,女性、无吸烟史、肺腺癌患者更易发生EGFR突变,吸烟状态是预测EGFR突变的独立因素。     

晚期非小细胞肺癌外周血循环肿瘤DNA EGFR突变与TKI疗效的相关性

目的:探讨晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）外周血循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）突变与EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治疗疗效的相关性。方法:利用突变扩增阻滞系统（amplification refractory mutation system，ARMS）法检测50例NSCLC患者外周血ctDNA EGFR突变，其中27例进行组织与ctDNA配对检测。给予TKI治疗一月后进行疗效评价。对ctDNA EGFR突变与患者的临床因素、疗效相关性进行分析，并比较ctDNA与肿瘤组织EGFR突变的一致性。结果:患者性别、年龄、PS评分、病理类型、吸烟史与ctDNA EGFR突变无明显相关性（P>0.05）。ctDNA EGFR突变组客观缓解率（76.5%）、疾病控制率（100%）均高于野生型组（30.3%，60.6%）（P<0.05）。生存分析结果显示:ctDNA EGFR突变组无进展生存期（12个月）较野生型组长（4个月）（P<0.05）。27例配对检测结果显示:ctDNA与肿瘤组织EGFR突变一致率为66.7%（18/27，Kappa=0.400，P<0.05）。无进展生存期:ctDNA（23个月）/肿瘤组织（12个月）EGFR突变组均长于野生型组（2个月/1个月）（P<0.05）。结论:晚期NSCLC外周血ctDNA EGFR突变患者TKI治疗有效率高，ctDNA与肿瘤组织EGFR突变一致性好，作为肿瘤组织的替代检测标本是可行的。     

表皮生长因子受体、p53、Ki-67在三阴性乳腺癌中的表达及其意义

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）、p53、Ki-67在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达及其意义.方法 回顾性分析53例TNBC和128例非三阴性乳腺癌（NTNBC）临床病理特征,并应用免疫组织化学方法检测EGFR、p53、Ki-67在两者之间的表达差异.结果 TNBC与NTNBC淋巴结转移发生率差异无统计学意义[56.6％（30/53）比43.0％（55/128）,P＞0.05],组织学Ⅰ级[9.4％（5/53）与32.8％（42/128）]、Ⅲ级[50.9％（27/53）与22.7％（29/128）]所占比例差异有统计学意义（P＜0.05）;TNBC中浸润性小叶癌较少[5.7％（3/53）],髓样癌较多[15.1％（8/53）],与NTNBC [19.5％（25/128）、3.1％（4/128）]相比差异有统计学意义（P＜0.05）;EGFR、p53、Ki-67在TNBC与NTNBC中的表达率分别为62.3％（33/53）与25.0％（32/128）、71.7％（38/53）与47.7％（61/128）、84.9％（45/53）与70.3％（90/128）,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 TNBC有其独特的临床病理特征,EGFR、p53、Ki-67在TNBC中高表达,提示其恶性程度高,侵袭性强,预后差,EGFR、p53、Ki-67表达可以作为评估TNBC预后的重要参考因素.     

非小细胞肺癌ROS1突变与EGFR突变及临床病理特征的关系

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中ROS1融合突变与表皮生长因子受体（EGFR）突变及临床病理特征的关系。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测2014年12月至2017年12月收治的3487例中国西北地区NSCLC患者ROS1基因的突变情况，同时采用ARMS法检测ROS1基因突变患者的EGFR基因突变情况，分析ROS1和EGFR共突变患者的临床病理特征。结果 3487例NSCLC患者中，ROS1基因突变54例（1.5％）。ROS1基因突变与年龄、性别、吸烟史、病理类型和临床分期有关（P＜0.05）。54例ROS1融合基因突变患者中有3例（5.6％）同时存在EGFR基因突变，其中19外显子缺失突变（19-del）2例，L858R突变1例。3例ROS1突变均为突变体2型（R2）。结论 中国西北地区NSCLC患者ROS1融合基因突变率为1.5％，与EGFR基因突变可以共存。