CD8+ T细胞对HIV-1合成表位的免疫主导应答研究

目的研究CD8^＋ T细胞对人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）表位的免疫主导应答。方法分别采用酶联免疫斑点技术（ELtSPOT）和羧乙基锗倍半氧化物（CFSE）标记流式分析技术，以覆盖HIV-1 Env、Pol、Gag、Vif、Nef、Tat区的701个重叠肽段组成的34个肽段库及其部分单肽段作为刺激表位，对一例感染HIV-1的长期不进展者（LTNP）的外周血单个核细胞（PBMC）中CD8^＋ T细胞的了γ-干扰素（IFN-γ）分泌细胞频率和细胞增殖率进行了测定研究。结果HIV-1 Gag区域肽段诱导产生的CD8^＋ T细胞的IFN-γ分泌细胞频率最高，Nef、Tat、Vif区域依次顺减，Env和Pol区域不能诱导产生显著性应答；在IFN-γ ELISPOT实验中，肽段和相应肽段库刺激产生的结果一致；CD8^＋ T细胞在单肽段刺激下，用ELISPOT技术测定的IFN-γ分泌细胞频率和CFSE标记流式分析技术测定的细胞增殖率显示出较好的相关性。结论CD8^＋ T细胞能特异性识别某些HIV-1抗原表位，诱导出免疫主导应答；当进行HIV-1特异性CD8^＋ T细胞反应增殖测定和免疫主导应答研究时，ELISPOT是值得称道的标准实验，同时，推荐一种新颖的CFSE标记流式分析技术。     

B细胞免疫应答在HIV-1感染过程中的作用研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1,以下简称HIV)感染过程中会造成包括B细胞在内的广泛而重度的免疫功能缺损,最终造成严重的淋巴细胞功能耗竭,使二次感染和机会性感染的易感性增加.更好地了解HIV感染过程中B细胞异常的致病机制,将能为提高HIV患者抗体应答,控制机会性感染提供更好的策略.现对近年来HIV感染过程中B细胞功能缺陷及其病理机制的研究进展作一介绍.     

HIV-1感染中B细胞的活化Ⅱ细胞间相互作用和对细胞因子的需求

HIV-1感染除导致进行性T 细胞功能缺陷外,还伴有明显的B 细胞功能失调。感染者血循环中含有大量活化的B 细胞,能自发产生主要针对HIV-1的特异性抗体,但对有丝分裂原刺激的应答和抗体同忆反应均降低。这种现象可能与HIV-1诱导的自身免疫损伤及AIDS 患者中B 细胞瘤发病率的升高有关。此外,活化的B 细胞还能产生大量IL-6和TNF-α,从而可能对感染者体内HIV-1的扩散有一定促进作用。为进一步解释这一现象,作者采用外周     

HIV-1(Human immunodeficiency virus type1)中和抗体研究进展

HIV-1侵入人体后,人体的免疫系统随之对其发生应答,包括体液免疫和细胞免疫。在原发感染期,HIV-1特异性的抗体和杀伤性T淋巴细胞(CytotoxicalTLymphocyte,CTL)就能够从病人体内检出。HIV-1特异性的CTL被认为在抑制病毒复制过程中起主要作用,而HIV-1特异性的中和抗体,在人体抵抗HIV-1方面的作用也有许多报道。1　中和抗体产生的滞后现象多数研究表明,在HIV-1感染早期,随着血浆HIV-RNA达到峰值后开始下降时抗体才能测出,临床上称之为抗体转阳期(Seroconvertion),抗HIV-1表面抗原gp120,核心抗原p24抗体均不能被检出,临床上称之…     

HIV-2 gag rFPV与rDNA疫苗的联合免疫研究

目的 探讨HIV-2核心蛋白基因gag重组DNA疫苗与重组鸡痘病毒进行联合免疫引起小鼠的免疫应答，为研究HIV-2基因重组疫苗的免疫策略提供实验基础。方法 大量制备并纯化HIV-2 gag重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒，以肌肉注射的方式免疫BALB／c小鼠，ELISA法检测小鼠血清HIV-2抗体，流式细胞仪测定CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚类数量，乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测脾CTL对HIV-2靶细胞的杀伤活性。结果 重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒单独免疫及二者联合免疫均刺激小鼠产生HIV-2特异性抗体，脾T细胞亚类数量增加，并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性，但联合免疫组在各项指标上均高于单独免疫组。结论 以HIV-2gag重组DNA疫苗进行基础免疫、以HIV-2gag重组鸡痘病毒进行加强免疫能诱导小鼠产生更强的特异性细胞和体液免疫应答。     

HIV-1高暴露持续血清阴性者对Nef、Gag肽段库的特异性CTL应答的研究

目的 研究中国HIV-1高暴露持续血清阴性（highly exposed persistently seronegative,HEPS）者的Nef、Gag特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）应答特点,探讨HIV-1特异性CTL应答在这类特殊人群中抵抗感染的作用机制.方法 选取10例HIV-1高暴露持续血清阴性者,11例经性接触感染且从未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者及4例未经暴露的健康志愿者.以覆盖HIV-1 gag全长和部分nef的14个肽段库为刺激原,应用IFN-γ ELISPOT法测定3组人群的特异性CTL应答,并对3组的应答强度、宽度以及对肽段库识别比例进行比较.结果 50%（5/10）的HEPS,100%（11/11）的HIV/AIDS患者均存在Nef及Gag特异性CTL应答,而4例健康对照均为阴性.存在应答的HEPS者对14个肽段库的平均应答强度和宽度分别是HIV/AIDS患者的4.3%和37.7%.在HEPS者中主要识别的肽段库均为HIV/AIDS患者中识别比例相对较低的肽段库.结论 与HIV/AIDS患者相比,HEPS者中的HIV-1特异性CTL应答存在着不同的特点和规律,可能在保护机体免于HIV-1感染中发挥着重要作用.     

树突状细胞与HIV-1传播

树突状细胞(DC)对机体的获得性免疫应答的产生和调节具有重要作用.不成熟树突状细胞(iDC)在体内广泛分布,特别是病原体容易侵入的部位.iDC通过胞饮及吞噬的机制摄取周围的抗原,并在适当的炎症信号刺激下,逐渐成熟,细胞表面上调表达MHC分子及淋巴细胞辅助刺激分子,并向淋巴组织迁移.iDC在严格的控制和调节下完成抗原的摄取、加工、呈递及成熟、迁移及辅助刺激分子的表达,最终有效的将抗原呈递给T细胞,使机体快速产生并维持特异性免疫应答,最终消灭病原体.而最近的研究却发现DC能够被HIV-1利用并协助其进行感染[1].     

HIV-1包膜蛋白疫苗免疫原选择及改造策略研究进展

尽管经过全球研究人员20多年的共同努力,目前仍无有效的HIV-1疫苗面世.由于HIV-1病毒可以通过多种方式逃避机体免疫应答,所以截至目前仍未找到可以有效诱导广谱中和抗体的免疫原或免疫策略,但该方面的研究从未止步.     

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者CD4~+ CD25~+调节性T细胞的研究进展

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者常常以自身免疫系统的过度活化为其显著特征,并且HIV疾病进展与自身的免疫活化程度密切相关。调节性T细胞(Treg)在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面发挥着重要的作用。在HIV-1感染者中,Treg不仅限制机体的过度免疫活化,而且可能抑制针对HIV-1特异的细胞免疫应答;因此,Treg对HIV疾病进展的影响是利是弊,至今尚无定论。对此,深入了解HIV感染者中Treg"量"和"质"的变化及其在HIV感染中的作用,不仅有助于解决目前有关"Treg在HIV病程进展中作用"的争论,而且将有助于设计抗HIV的方案,以期为今后艾滋病的治疗和疫苗的研究提供新的靶点以及提供新的思路和理论参考。     

人类免疫缺陷病毒1感染与髓源性抑制细胞相关性研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者自身的持续免疫活化程度是决定疾病进展的关键。过度免疫活化导致机体免疫系统功能亢进,多种免疫细胞功能改变。髓源性抑制细胞(MDSC)是具有免疫抑制作用的细胞,参与机体免疫调节。在HIV-1感染者中,MDSC显著增多且与CD4+T细胞绝对数等疾病进展指标有关。随着高效抗逆转录病毒治疗的实施,MDSC也发生相应变化。疫苗诱导的MDSC对保护性细胞免疫应答有抑制作用,提示阻止MDSC的诱导可能提高HIV疫苗的有效性。因此,了解MDSC在HIV-1感染者中功能的改变有利于进一步探究HIV-1感染者免疫活化状态的成因,为HIV-1的治疗以及疫苗的研制提供新思路。     

TCR多样性及其在HIV-1感染控制中的作用研究进展

TCR识别特异性抗原多肽-MHC复合体,在共刺激分子协同作用下,启动细胞免疫应答,发挥抗病毒感染作用.HIV-1感染造成机体TCR分布异常,影响CTL的抗病毒效应.但针对某些特殊表位的TCR反应能够对HIV-1的感染起到一定的控制作用.高效抗逆转录病毒治疗(HAART)能够增加TCR多样性,使免疫系统功能得到部分恢复.     

HIV-1 Gag蛋白酵母表达产物的纯化及免疫原性检测

目的 纯化HIV-1Gag蛋白，并检测其免疫原性。方法 将表达HIV-1Gag蛋白的酵母工程菌GS115／pPICGAG接种到YPD培养基中多次传代后，用PCR检测其目的基因。该酵母工程菌在BMMY培养基中经甲醇诱导表达，上清液初步浓缩后上柱进行凝胶过滤层析，并将纯化蛋白免疫Balb／c小鼠，检测其血清抗体水平。结果 该酵母工程菌经多次传代后外源基因不丢失。Western blot检测结果表明纯化蛋白具有很好的反应原性，其纯度可达85％。纯化蛋白免疫小鼠后可诱导特异性抗体产生。结论 表达HIV-1Gag蛋白的酵母工程菌具有很好的遗传稳定性，其表达产物可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

APOBEC3G和HIV-1病毒感染因子Vif研究最新进展

固有免疫在机体抵御HIV-1感染过程中发挥重要作用.载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide protein,APOBEC)家族的成员APOBEC3G(A3G)可以通过胞嘧啶脱氨机制抑制HIV-1的复制,发挥固有免疫的作用;病毒感染因子(virus infectivity factor,Vif)能与A3G结合并引发A3G的降解,使HIV-1的感染率增加100倍以上.该研究为以Vif-A3G为靶点的抗HIV-1药物的研究提供了新的思路.因此A3G、Vif及其相互作用机制成为HIV-1研究的热点.     

HIV-1gp120基因及其与IFN-α基因共表达产物的构建和实验研究

目的研究细胞因子IFN-α在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应.方法以表达中国流行株HIV-1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV-1gp120基因与IFN-α基因的核酸疫苗质粒pGPIFN-α免疫Balb/c鼠,用流式细胞仪测定10 000个免疫鼠脾淋巴细胞中CD4+,CD8+T细胞数及CD4+/CD8+比值.结果 pG-PIFN-α与pGP比较,pGPIFN-α免疫鼠CD4+和CD8+T细胞数明显提高.结论在机体的免疫应答过程中,细胞因子IFN-α能很好地发挥免疫佐剂的作用.     

表达HIV-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗免疫原性比较

目的 在小鼠体内比较表达HIT-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗的免疫原性.方法 分别用rAAV2/1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB/c小鼠一次或两次,于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答,用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应.结果 单次免疫结果显示,在所有检测点rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2/1-gag强,抗体反应在免疫后4周无明显差异.两次免疫后4周的检测结果表明,rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答比rAAV2/1-gag强,但抗体反应比rAAV2/1-gag组弱.结论 rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应,而rAAV2/1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强,但细胞免疫应答较弱.     

HIV-1感染与吞噬细胞活性的降低与重建

HIV-1以巨噬细胞和中性粒细胞作为播散的载体和病毒复制的存贮器：巨噬细胞和中性粒细胞表面表达两种主要的HIV-1协同受体（CXCR4和CCR5）,能分别与HIV病毒亲嗜性毒株x4和R5结合。HIV-1病毒膜蛋白（gp120、gp41）能降低这些细胞的吞噬功能并改变他们的调节功能,这可能是AIDS患者易产生合并感染和重复感染（如呼吸道、肠道感染和HIV-1痴呆）的原因。高效抗逆转录病毒疗法（HAART）能显著改善单核／巨噬细胞和中性粒细胞的化学趋化活性和生物活性,改善这些细胞的功能,降低继发感染的发生率。     

HIV-1CN54 DNA疫苗滴鼻免疫小鼠诱发系统和黏膜免疫应答

目的：探讨重组痘苗病毒rVVsyngp120或rVVmCN54gp120候选疫苗是否增强HIV-1CN54合成gp120基因(syngp120)DNA疫苗的免疫原性。方法：第0、7、14、21天用DNA疫苗滴鼻免疫小鼠,第28、35、42天再滴鼻接种rVVsyngp120或rVVmCN54gp120。体外测脾和肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞增殖应答与CD8^ CTL应答。测血清和黏膜洗液特异的IgG和IgA,并测其是否中和实验室适应株HIV-1SF33。结果：单纯DNA免疫后,脾和MLN淋巴细胞在体外发生增殖应答和CTL应答,且测出血清特异的IgG和黏膜洗液特异的IgA。重组痘苗病毒末次免疫后第2周(第56天),发现rVVmCN54gp120增强MLN淋巴细胞增殖应答和CTL应答,脾CTL应答也增强。rVVsyngp120则增强MLN CTL应答。同时发现：2组重组痘苗病毒免疫的动物其血清中特异IgG抗体滴度均有所增高,但黏膜(粪便和阴道)洗液特异IgA抗体滴度却未增高,未测出血清特异IgA和黏膜洗液特异IgG。免疫血清可中和HIV-1SF33,而阴道洗液却不能。结论：单纯DNA疫苗滴鼻免疫可诱发较弱的系统和黏膜体液免疫与细胞免疫,但维持时间短。重组痘苗病毒主要增强局部黏膜的细胞免疫应答,且稍增强系统体液免疫应答,未增强黏膜的IgA应答。免疫血清有中和作用。     

酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究

目的评价毕赤酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在Balb／c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb／c小鼠，检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1／IgG2a，同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应，其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应，而且重组痘苗初始免疫一蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CrL反应。结论酵母表达的HIV-1 Gag蛋白具有良好的免疫原性，在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用，能刺激动物产生更强的HIV-1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV-1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。     

性激素对天然免疫的调节改变女性生殖道HIV-1易感性

<正>性传播已经成为HIV-1传播的主要途径。HIV-1性传播过程中,女性作为易感群体,在HIV-1感染者中占据越来越高的比例,中低收入国家中女性感染者占到了52%的比例,而在HIV-1盛行的撒哈拉以南非洲,这一比例甚至达到了57%[1]。女性生殖道(Female reproductive tract,FRT)有一个复杂的免疫微环境,主要免疫成分包括:子宫颈阴道黏     

HIV-1C亚型nef基因构建的DNA质粒诱导小鼠免疫反应的研究

目的构建表达中国流行株HIV-1C亚型调控nef基因的重组质粒pVAX-nef，并免疫BALB／c小鼠，观察其免疫效果，为探索新型HIV DNA疫苗提供数据。方法利用分子生物学技术，将nef基因克隆到pVAX，并在体外进行表达与鉴定。以纯化的Nef蛋白作为包被抗原，用ELISA检测其体液免疫反应，用ELISPOT检测其细胞免疫反应。结果重组质粒pVAX-nef成功构建。接种小鼠后2周，ELISPOT结果显示产生了针对HIV特异的CD4和CD8细胞抗原表位的免疫应答，且与免疫剂量存在一定的正相关性。ELISA实验诱导产生了抗HIV-1特异性抗体，其中40μg免疫组诱导的抗体水平最高。结论重组质粒pVAX-nef免疫小鼠后可有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。