MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性研究北大核心CSCD

目的:研究MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性。方法:采用PCR-STR微卫星基因分型技术检测103例食管癌患者和84例正常对照MICA基因5外显子多态性。构建食管癌标本中高频率出现的MICA等位基因的真核表达载体,转染293T细胞株,LDH法检测NK细胞对不同MICA等位基因转染的293T细胞的杀伤作用,效靶比20∶1。ELISA法检测转染的293T细胞上清中s MICA含量。结果:食管癌患者第5外显子检测到5种等位基因,频率分别为:MICA-A4(9.71%),MICA-A5(22.3%),MICA-A5.1(40.8%),MICA-A6(15.5%),MICA-A9(11.7%),其中MICA-A5.1与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。MICA等位基因转染293T细胞株后,相对于其他第5外显子A5.1组对NK杀伤的敏感性较低[(30.4±6.3)%,P<0.05],上清可溶性MICA分泌增加(135.7±6.2)pg/ml。结论:食管癌与MICA第5外显子多态性A5.1显著性相关,其危险性高于其他等位基因。     

MICA 第5 外显子微卫星多态性与食管癌相关性研究

目的:研究MICA 第5 外显子微卫星多态性与食管癌相关性。方法:采用PCR-STR 微卫星基因分型技术检测103 例食管癌患者和84 例正常对照MICA 基因5 外显子多态性。构建食管癌标本中高频率出现的MICA 等位基因的真核表达载体,转染293T 细胞株,LDH 法检测NK 细胞对不同MICA 等位基因转染的293T 细胞的杀伤作用,效靶比20 1。ELISA法检测转染的293T 细胞上清中sMICA 含量。结果:食管癌患者第5 外显子检测到5 种等位基因,频率分别为:MICA-A4(9.71%),MICA-A5(22.3%),MICA-A5.1(40.8%),MICA-A6(15.5%),MICA-A9(11.7%),其中MICA-A5.1 与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。MICA 等位基因转染293T 细胞株后,相对于其他第5 外显子A5.1 组对NK 杀伤的敏感性较低[(30.4±6.3)%,P<0.05],上清可溶性MICA 分泌增加(135.7±6.2)pg/ ml。结论:食管癌与MICA 第5 外显子多态性A5.1 显著性相关,其危险性高于其他等位基因。     

c-Met对三阴性乳腺癌细胞增殖及阿霉素耐药性的影响

目的:研究c-Met对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力及对阿霉素耐药性的影响。方法:构建阿霉素耐药的MDA-MB-231/ADR细胞系,实时荧光定量PCR及Western blotting技术检测不同细胞系中c-Met mRNA及蛋白的表达。脂质体转染c-Met-siRNA及表达质粒或AKT-siRNA,Western blotting检测转染效率;四甲基偶氮唑法(MTT法)检测细胞的活力及对阿霉素的敏感性。结果:对阿霉素耐药的MDA-MB-231/ADR细胞中cMet的mRNA及蛋白表达均显著高于对照的MDA-MB-231细胞,转染高表达c-Met的质粒可增加MDA-MB-231细胞的活力并降低其对阿霉素的敏感性,而利用siRNA抑制耐药细胞株中c-Met的表达后,可以逆转MDA-MB-231/ADR细胞对阿霉素的耐药。此外,c-Met可以磷酸化激活细胞中的AKT,并通过该信号分子增加MDA-MB-231细胞活力并诱导耐药。结论:c-Met可作为一个重要的靶点应用于三阴性乳腺癌的治疗。     

ARK5 is associated with the invasive and metastatic of breast carcinoma

目的 探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义.方法 采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达.应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况.通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化.ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果 乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性.转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435.转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低.ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低.结论 应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用.     

体外扩增人外周血来源免疫细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤作用

目的探讨人外周血来源的细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞、树突状细胞-细胞因子诱导杀伤(DC-CIK)细胞和自然杀伤(NK)细胞对人MDA-MB-231乳腺癌细胞的体外杀伤作用。方法采用含红色荧光蛋白标签(RFP)和萤光素酶报告基因(Luc)的慢病毒感染MDA-MB-231细胞,通过荧光显微镜检测MDA-MB-231细胞感染率。分离人外周血单个核细胞(PBMC),诱导获得CIK细胞、 DC-CIK细胞、 NK细胞,体外扩增培养。采用流式细胞术检测免疫细胞的扩增效果及表型,并检测体外扩增的人外周血来源免疫细胞在不同效靶比下对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制作用。结果 DC-CIK细胞、 NK细胞及CIK细胞对MDA-MB-231肿瘤细胞的杀伤作用随效靶比的增加以及作用时间的延长而增强。共培养72 h后,免疫细胞对靶细胞的杀伤率均达到90%以上。结论体外扩增的CIK细胞、 DC-CIK细胞、 NK细胞对乳腺癌细胞具有杀伤作用。     

不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究

目的：观察不同肿瘤细胞表面MICA的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法：以体外培养的K562（人慢性髓原白血病细胞株）、MCF-7（乳腺癌细胞株）、HR-8348（直肠腺癌细胞株）、CNE-2（人鼻咽癌细胞株）、Hela（人宫颈癌细胞株）为靶细胞，流式细胞仪检测细胞表面MICA的表达，以K562细胞作为对照，应用LDH释放法检测不同效靶比情况下体外培养的NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结果：K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞表面均表达MICA，体外杀伤试验表明NK细胞对上述肿瘤细胞均有杀伤活性，anti-MICA单抗可部分封闭NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结论：NK细胞对K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞具有较高的杀伤活性，可作为一种生物治疗手段。     

miR-193b体外协同增强多柔比星对乳腺癌细胞的抗肿瘤效应

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-193b是否能增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力及机制。方法:用real-time PCR方法检测乳腺癌患者及健康对照者血浆中的miR-193b表达水平。MTT法检测miR-193b联合多柔比星对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤效力。利用生物信息学、real-time PCR及Western blot方法验证miR-193b是否调节乳腺癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合多柔比星治疗乳腺癌疗效的影响。结果:乳腺癌患者血浆中miR-193b表达水平显著低于对照组。miR-193b联合多柔比星治疗组对MDA-MB-231细胞的杀伤效力显著高于多柔比星单治疗组。miR-193b转染后,MDA-MB-231细胞Mcl-1的mRNA及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合多柔比星在Mcl-1表达载体转染后对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-193b联合多柔比星组。结论:miR-193b通过靶向于Mcl-1增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力。     

显性负性ⅠκBα对乳腺癌细胞株核因子κB通路和运动迁移的影响

目的： 探讨在高转移人乳腺癌细胞中，核因子κB活性对肿瘤生长及运动迁移能力的影响。方法: 转染显性负性突变的ⅠκBα重组质粒入高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435，筛选并鉴定稳定转染的细胞株；凝胶迁移实验观察核因子κB活性，细胞生长曲线、平板集落形成试验及Millicell-PCF培养小室观察质粒转染对细胞生长和趋化运动的影响。结果: 乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞中存在高NF-κB组成型激活，稳定转染显性负性的ⅠκBα质粒后，细胞NF-κB活性下调，在不明显影响细胞生长、克隆形成的情况下，抑制高转移乳腺癌细胞株的运动能力。结论: 在体外，抑制NF-κB通路，可明显抑制高转移乳腺癌细胞株的运动迁移能力。     

Y14和Upf1在人乳腺癌细胞表达增强

目的 探讨Y14和Upf1在人乳腺癌细胞株和人乳腺癌组织表达情况及其意义。方法 应用免疫细胞化学、激光共聚焦方法测定Y14和Upf1在乳腺癌细胞株MCF-7、ZR-75-30、T47D、MDA-MB-435s、MDA-MB-453、MDA-MB-231与乳腺上皮细胞株HBL-100中的表达情况。结果 ⑴人乳腺癌细胞株中Y14和Upf1的表达均明显高于乳腺上皮细胞株（P＜0.05）。⑵在人乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞株的Y14和Upf1表达明显高于MCF-7细胞（P＜0.05）。⑶Y14和Upf1在人乳腺癌组织表达增强（P＜0.05）。结论 Y14和Upf1在人乳腺癌细胞和人乳腺癌组织中的表达增强。     

人Qki-5基因重组腺病毒的制备

目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.     

ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

软骨同源蛋白1(CART1)敲低诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞S期阻滞并抑制其侵袭和迁移

目的运用外源性RNA干扰技术,敲低MDA-MB-231乳腺癌细胞中软骨同源蛋白1(CART1)基因的表达,研究CART1基因沉默后对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法采用人工合成的针对CART1基因的siRNA,用转染试剂RNAi MAX将CART1-siRNA转染MDA-MB-231细胞。实时定量PCR检测转染后CART1 mRNA水平,Western blot法检测转染后CART1蛋白水平,TranswellTM侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭、CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 CART1-siRNA能有效沉默CART1在MDA-MB-231细胞中的表达,CART1沉默后MDA-MB-231细胞侵袭和增殖能力明显下降,S期细胞的比率增高而G2/M细胞比率减少。结论下调MDA-MB-231细胞CART1的表达,可降低其侵袭和增殖能力、诱导S期阻滞。     

雌激素受体α阴性乳腺癌雌激素受体α基因启动子区CpG岛甲基化和肼苯哒嗪去甲基化作用

目的 检测雌激素受体(ER)α阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞及ERα阴性乳腺癌组织中ERα基因启动子区CpG岛甲基化状态;探索肼苯哒嗪能否作为去甲基化药物恢复ERα基因表达。方法应用特异性聚合酶链反应(MSP)检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞和20例ERα阴性乳腺癌组织ERα基因3个启动子区A、B、CpG岛甲基化情况,肼苯哒嗪处理上述两种乳腺癌细胞,逆转录(RT)-PCR检测不同启动子调控下ERα基因异型体(isoform)ERα-A、ERα-B、ERα-C mRNA和ERα基因公共编码区mRNA表达。结果MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞启动子区ERα-A、ERα-B均存在CpG岛甲基化,ERα-C无甲基化,20例ERα阴性乳腺癌组织中,13例(65％)ERα-A、10例(50％)ERα-B CpG岛甲基化阳性。其中9例ERα-A、ERα-BCpG岛甲基化均阳性(45％),仅1例(5％)ERα-C存在CpG岛甲基化。肼苯哒嗪处理上述两种细胞后,检测到ERα-A、ERα-B mRNA和公共编码区mRNA表达。结论乳腺癌组织和细胞ERα基因表达沉默可能与ERα基因启动子区A、B甲基化有关,且肿瘤分期愈晚,甲基化程度愈高。肼苯哒嗪能作为去甲基化药物诱导ERα基因表达。     

不同乳腺癌细胞系中TLR5 和NLRC4 受体的表达和定位

目的:探究TLR5 和NLRC4 受体在不同乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7 和MDA-MB-435 中的表达和定位情况,并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞TLR5 受体的激活情况。方法:利用Real-time PCR 法检测MDA-MB-231、MCF-7 和MDA-MB-435 细胞TLR5 和NLRC4 mRNA 表达水平,用流式细胞仪检测MDA-MB-231、MCF-7 细胞TLR5 受体的表达和定位。纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5 和NLRC4 两条通路)、FliC驻90-97(不能激活TLR5 通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4 通路)、FliC驻90-97:L3A(两条通路都不激活)。用1 g/ ml 重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7 细胞,12 h 后,ELISA 法检测IL-8 的分泌。结果:MCF-7 细胞TLR5 mRNA 表达水平最高,约是MDA-MB-435 细胞的1 700 倍,MDA-MB-231细胞TLR5 表达水平是MDA-MB-435 的约200 倍。TLR5 在MCF-7 细胞浆和胞膜上均有表达,而MDA-MB-231 细胞只在胞浆中表达。激活TLR5 通路的FliC 和FliC-L3A 能够刺激MCF-7 细胞分泌IL-8,而不激活TLR5 通路的FliC 90-97 和FliC 90-97:L3A 则不能。结论:不同乳腺癌细胞系都表达TLR5 和NLRC4,但是表达部位和表达水平不同。MCF-7 细胞TLR5 和NLRC4 表达高于其他乳腺癌细胞系。乳腺癌细胞系表面的TLR5 受体可以被鞭毛素蛋白激活,为进一步探讨TLR5 通路的激活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供实验基础。     

核糖核酸酶抑制因子对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和侵袭的影响

目的:将核糖核酸酶抑制因子(RI)转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,探讨RI对细胞凋亡和侵袭的影响。方法:(1)应用脂质体LipofectamineTM2000分别将重组表达载体pLNCX-RI和空载体pLNCX导入MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆并扩增传代。RT-PCR和Western blot检测RI表达。(2)流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验分别观察RI对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响。(3)RT-PCR和West-ern blot法检测Survivin mRNA和蛋白的表达,Western blot方法检测Caspase-3蛋白的活化情况,初步探讨RI诱导乳腺癌细胞凋亡的相关机制。(4)RT-PCR和Western blot法检测CD24mRNA和蛋白的表达,初步探讨RI抑制细胞侵袭的机制。结果:(1)成功构建表达外源性RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI。(2)与未转染的MDA-MB-231细胞及转染空载体的MDA-MB-231/pLNCX细胞相比,MDA-MB-231/pLNCX-RI细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞穿膜数减少(P<0.01);Survivin mRNA和蛋白的表达量下降(P<0.01),且能活化Caspase-3;CD24 mRNA和蛋白的表达量亦下降(P<0.01)。结论:(1)外源性RI基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的稳定表达可以通过抑制Survivin的表达和激活Caspase-3促进细胞凋亡,并能通过抑制CD24表达降低细胞侵袭力。     

单羧酸转运蛋白基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期、侵袭和转移能力的影响。方法将真核表达质粒pcDNA3.1/MCT及空质粒pcDNA3.1分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞。采用实时定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分别检测转染后细胞内MCT基因的表达。Annexin V-FITC/PI染色和PI单染色结合流式细胞术检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期的影响,Transwell实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。结果实验组MCT的mRNA和蛋白水平明显高于转染空质粒的阴性对照组和未处理组;MCT过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡,G2期细胞减少、S期细胞增多,同时能抑制癌细胞的侵袭和迁移能力。结论 MCT基因过表达能促进MDA-MB-231细胞的凋亡、调节细胞G2/M期检控点,抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

microRNA-31通过靶向调控Dock1抑制乳腺癌的上皮-间质转化

目的:探讨microRNA-31(miR-31)靶向调控Dock1对乳腺癌上皮-间质转化的影响。方法:通过qRT-PCR、Western blot检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-31、Dock1的表达情况;将含有miR-31的过表达质粒或Dock1的敲除质粒转入乳腺癌细胞MDA-MB-231中并检测转染效率;用Western blot检测转染后各组细胞中Dock1的表达变化; Transwell侵袭实验检测转染及共转染后各组细胞的侵袭能力的变化; Western blot检测转染及共转染后各组细胞中EMT标志物的表达情况。结果:MCF-7细胞中miR-31的表达明显高于MDA-MB-231细胞,但两组都低于其在MCF-10A中的表达。转染对照及过表达质粒后,MDA-MB-231细胞中miR-31的表达较正常组与对照组明显上调,Dock1表达明显下调。Transwell侵袭实验结果显示,MDA-MB-231/miR-31组相比于MDA-MB-231/NC组穿过基底膜的细胞数明显减少,而与MDA-MB-231/miR-31+con组相比无明显差距; MDA-MB-231/miR-31+Dock1组与MDA-MB-231/miR-31+con组相比穿过基底膜的细胞数明显增多。Western blot结果显示,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞相比于MDA-MB-231/NC细胞中E-cadherin表达水平显著上调,在MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中E-cadherin的表达水平与对照组相比无统计学意义;与MDA-MB-231/NC细胞相比,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞中Vimentin表达水平明显下调,MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中Vimentin的表达水平几乎无变化。结论:miR-31可以靶向调控Dock1来抑制乳腺癌的上皮-间质转化,进而抑制乳腺癌的侵袭与转移。     

IFN-α对宫颈癌细胞MHC-I类链相关蛋白A表达的上调作用

目的:观察IFNα对宫颈癌细胞MHCI类链相关蛋白A(MICA)表达及功能的影响。方法:以IFNα诱导宫颈癌细胞系HeLa和Caski后,用半定量RTPCR和免疫组化染色法观察诱导前后MICAmRNA和其蛋白表达的变化,用MTT比色法检测诱导前后宫颈癌细胞对外周血NK细胞杀伤敏感性的变化。结果:经IFNα诱导后,HeLa和Caski细胞中MICAmRNA和其表面MICA蛋白的表达水平均明显上调,并呈一定的时间和剂量依赖关系。NK细胞对MICA表达较高的HeLa细胞的杀伤活性,明显高于对MICA弱表达的Caski细胞。经1×106U/LIFNα诱导3d后,两种细胞对NK细胞杀伤的敏感性均明显增强(P<0.01)。结论:IFNα可上调MICA在肿瘤细胞表面的表达,并可增强肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性。     

MDA-7/IL-24 inhibits the growth and induces the apoptosis of human breast cancer MDA-MB-231 cell line

目的 探讨IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制和促凋亡作用.方法 利用脂质体将穿梭质粒pDC316-hIL-24-EGFP瞬时转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR检测转染后hIL-24基因mRNA的转录,Western blot检测转染后IL-24和caspase-3蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达.IL-2可上调MDA-MB-231细胞中caspase-3蛋白表达.IL-24基因的表达使得乳腺癌MDA-MB-231细胞出现增殖抑制.流式细胞仪检测显示MDA-MB-231细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G2/M期.Hoechst 33258染色显示IL-24基因转染后MDA-MB-231细胞出现凋亡.结论 IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后可能通过上调caspase-3的表达而抑制细胞增殖,促进其凋亡.     

rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响

为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P<0.05);两株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P<0.05);MDA-MB-435细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化。两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调。rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05)。由此表明,CD40信号影响乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHCII类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTESmRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用。同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性。