东方蝼蛄醇提物对3种人类肝癌细胞株的细胞毒性研究

目的:通过东方蝼蛄醇提物对3种人类肝癌细胞株(HepG2、BEL7402、SMMC7721)的细胞毒性测试,探讨东方蝼蛄醇提物的体外抗肿瘤活性。方法:采用乙醇冷浸法对东方蝼蛄干燥品粉碎物进行提取,通过聚酰胺柱层析分离划段得到东方蝼蛄醇提物的不同部位,所得部位通过MTT法对3种人类肝癌细胞株进行体外肿瘤细胞毒性测试。结果:东方蝼蛄醇提物中有2个分离组分对人类肝癌细胞的半数抑制浓度(IC50)值小于10.0μg/m L,对人类肝癌细胞具有明显的细胞毒性。结论:东方蝼蛄醇提物中存在着对肿瘤细胞体外生长具有抑制作用的物质,值得进一步研究。     

重楼醇提取物通过 JAK/STAT 信号通路对神经胶质瘤 U251 细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨重楼醇提取物通过酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路对人神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法:用重楼醇提取物溶液干预人神经胶质瘤细胞U251细胞,然后采用MTT法检测重楼醇提取物对U251细胞生长增殖的影响。使用AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测重楼醇提取物对U251细胞周期及凋亡的影响。Western blot及RT-PCR法检测重楼醇提取物对U251细胞磷酸化酪氨酸激酶2 (p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3 (p-STAT3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白及JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,重楼醇提取物各剂量组细胞抑制率、24 h后细胞凋亡率显著增加(P0.05),且随着剂量的增加而增加(P0.05,P0.01); p-JAK2、p-STAT3、Cyclin D1及Bcl-2蛋白及JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA表达量均显著降低(P0.05),且均随着剂量的增加而降低(P0.05,P0.01)。结论:重楼醇提取物可明显抑制人神经胶质瘤U251细胞的增殖,促进其凋亡,且其作用机制可能与重楼醇提取物阻滞JAK/STAT信号通路的信号传导,抑制通路蛋白及mRNA合成有关。     

4种中药提取物对多西紫杉醇耐药胃癌细胞的作用

目的:研究汉防己甲素、藤黄酸、重楼醇提物、连翘醇提物对多西紫杉醇耐药胃癌细胞的作用,进一步探讨中药的作用机理。方法:体外建立多西紫杉醇耐药的胃癌BGC-823细胞株,MTT法检测细胞的耐药指数及中药对亲本和耐药细胞的细胞毒作用。结果:经过体外诱导建立的BGC-823/Doc耐药细胞株,对多西紫杉醇耐药指数为45.7,对紫杉醇耐药指数为33.5,二者有部分交叉耐药;对汉防己甲素的耐药指数为0.93,对重楼醇提物的耐药指数为1.03,对连翘醇提物的耐药指数为1.20,对藤黄酸的耐药指数为0.95。BGC-823/Doc对紫杉醇、连翘醇提物有部分交叉耐药,对汉防己甲素、重楼醇提物、藤黄酸无交叉耐药。汉防己甲素、重楼醇提物、藤黄酸的细胞毒作用无统计学差异。结论:汉防己甲素、重楼、藤黄酸对BGC-823/Doc耐药细胞株有细胞毒作用,为中药在多西紫杉醇耐药患者中的应用奠定了理论基础。     

重楼总皂苷提取分离及其对人胃癌细胞BGC823的抑制作用

目的：初步探索重楼总皂苷的提取分离方法,并通过比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌细胞BGC823生长抑制作用评价重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用价值。方法：采用热回流提取法得到重楼醇提物,再经大孔吸附树脂分离得到重楼总皂苷。采用噻唑蓝染色法（MTT法）和集落形成实验,比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌BGC823细胞增殖和集落形成的影响。结果：重楼总皂苷、重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ作用于人胃癌BGC823细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为（8.63±0.30）、（2.61±0.03）、（1.97±0.01）μg/mL。在3.13、6.25、12.5μg/mL浓度下重楼醇提物组集落形成抑制率为30.84%、53.27%、100%,而重楼总皂苷组在各浓度范围内均无集落形成。结论：重楼总皂苷对人胃癌BGC823细胞生长抑制作用显著优于重楼醇提物,稍弱于重楼皂苷Ⅰ,但二者IC50数值接近且均较低,从而肯定重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用潜能。     

重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用研究

目的：探讨重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞的体外交互作用及可能的机理。方法：MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估重楼醇提物与多西紫杉醇对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的交互作用;Annexin-Ⅴ-FITC和PI双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定化疗相关基因表达水平。结果：重楼醇提物与多西紫杉醇联合使用在两株细胞中均产生了较好的协同抗肿瘤作用,在小于60%抑制率范围内,联合指数（CI）均小于1。凋亡分析提示,联合用药组细胞凋亡率显著高于各单药组;重楼醇提物作用于SGC-7901细胞24 h后,紫杉类药物相关基因β-tublinⅢ和Tau mRNA表达水平分别降至用药前的（0.34±0.09）和（0.52±0.04）倍。结论：重楼醇提物与多西紫杉醇联合使用有较好的协同抗肿瘤作用,可能与两药协同诱导肿瘤细胞凋亡以及重楼醇提物可下调化疗相关基因表达水平有关。     

雷公藤内酯醇对神经胶质瘤侵袭的体外抑制作用

目的:研究雷公藤内酯醇对胶质瘤侵袭性的体外抑制作用,并探讨其作用分子机制.方法:通过MTT法测定雷公藤内酯醇对胶质瘤细胞株U87细胞增殖抑制作用,划痕实验和Transwell实验评价雷公藤内酯醇对细胞侵袭能力的影响,Real-Time PCR和Western印迹法检测雷公藤内酯醇对U87胶质瘤细胞的组织蛋白酶B(cathepsins B,CB)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和核因子NF-κB(p65)表达的影响.结果:雷公藤内酯醇对胶质瘤细胞增殖有显著的抑制作用,同时可降低U87胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,下调其CB,MMP-9和NF-κB表达水平.结论:雷公藤内酯醇降低U87胶质瘤细胞侵袭能力的机制可能与抑制NF-κB通路、下调CB及MMP-9的表达、降低恶性胶质瘤水解细胞外基质的能力有关.     

重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤U373和U251细胞的增殖活力和迁移能力的影响。方法 采用重楼皂苷Ⅰ不同浓度分别作用于胶质瘤U373和U251细胞24小时后,使用细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;以不同剂量重楼皂苷Ⅰ(0、3、6μM)处理细胞24小时后收集细胞,使用流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕实验用不同剂量的重楼皂苷I(0、1.5、3μM)处理细胞24小时后,观察划痕愈合程度;Transwell小室检测给药重楼皂苷I后胶质瘤U373和U251细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测重楼皂苷I对胶质瘤U373和U251细胞凋亡和迁移相关蛋白表达。结果 CCK-8结果表明重楼皂苷Ⅰ呈剂量依赖性抑制胶质瘤U373和U251细胞增殖,半抑制浓度(50%inhibitory concentration, IC₅₀)值分别为3.47和2.52μM;流式细胞术表明重楼皂苷Ⅰ诱导胶质瘤细胞凋亡;细胞划痕观察到加药后划痕创口愈合程度小于对照组;Transwell实验观察到药物处理24小时后,迁移的细胞...     

美洲大蠊提取物对3株人及小鼠白血病细胞的细胞毒性研究

目的:通过美洲大蠊提取物对体外白血病细胞的细胞毒性测试,探讨美洲大蠊提取物对白血病细胞的抑制作用.方法:美洲大蠊醇提物,通过聚酰胺柱层析分离划段得不同部位,采用MTT法对所得部位进行人及小鼠白血病细胞的细胞毒性测试.结果:有多个部位样品的IC50值小于10μg/mL.结论:通过样品与对照品细胞毒活性结果比较,表明美洲大蠊提取物中存在具有对人及小鼠白血病细胞生长抑制作用的物质,值得对其进行进一步的研究.     

云南重楼中血管内皮生长因子结合因子的活性研究

目的筛选并分离云南重楼水提物中能与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白结合的物质,并探究其对VEGF的刺激作用。方法采用固相化VEGF亲和柱色谱的方法筛选云南重楼水提物中的VEGF结合因子,HPLC法进一步分离纯化该因子成分,并采用MTT法以VEGF敏感型细胞株HepG2为模型验证该因子活性,采用UV、RRLC-QTOF检测,推测该因子可能的成分组成。结果从云南重楼水提物中筛选到能与VEGF蛋白结合的因子(命名为因子B3),HPLC分离纯化后因子B3可以促进VEGF敏感型细胞HepG2的增殖,而对VEGF不敏感型细胞HEK293的增殖没有影响。因子B3和VEGF蛋白对HepG2细胞的增殖促进作用存在叠加效应;而这种效应可以被VEGF抗体阻断;因子B3本身对HepG2细胞的增殖作用也可以被VEGF抗体阻断。通过UV和RRLC-QTOF检测,推测因子B3可能为皂苷类成分。结论云南重楼中得到的因子B3具有促进VEGF功能的活性。     

马甲子叶提取物抗肿瘤活性部位的筛选

目的:从药用植物马甲子叶醇提物中分离筛选具有抗肿瘤作用的活性组分。方法:采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取马甲子叶醇提物,并将这三个萃取部位进行体外抗肿瘤实验,再把筛选得到的具有较好抗肿瘤活性的部位进行硅胶柱层析分离,并采用MTT法对分离得到的组分进行体外抗肿瘤活性比较。结果:通过体外抗Hep G-2细胞和He La细胞实验表明,乙酸乙酯萃取部位具有较好抗肿瘤活性。通过硅胶柱分离,获得5个组分,通过MTT实验发现这5个组分中,石油醚:乙酸乙酯为1∶1和1∶2洗脱所得到的两个组分具有明显的体外抗肿瘤活性,其中石油醚:乙酸乙酯为1∶2的洗脱具有更好的杀伤作用,对Hep G-2细胞和He La细胞的IC_(50)分别为45.79,13.16μg/m L。结论:从马甲子叶醇提物乙酸乙酯部位中分离得到2种具有抗肿瘤作用的活性组分,为进一步分离抗肿瘤活性成分提供一定的指导作用。     

匍匐大戟醇提物抗肿瘤及抑制血管新生作用

选取未曾研究过的云南新平产匍匐大戟,系统研究其抗肿瘤血管生成作用机制。制备匍匐大戟醇提物,取其浸膏配制成合适浓度为受试药,采用经典小鼠的急性毒性实验方法测定最大耐受量(MTD)。同时取正常细胞及肿瘤细胞,给药后通过MTT法检测其IC50。原代培养大鼠胸主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs),通过体外i CELLigence实时细胞分析实验、细胞迁移实验、细胞小管形成实验分别检测匍匐大戟醇提物对RAECs的增殖、迁移和成管能力的影响,并通过应用Western blot方法检测Akt,p-Akt,eNOS,p-e NOS,TGF-β1,Smad3等血管新生相关信号通路蛋白的表达情况。通过建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,给以匍匐大戟醇提物,检测裸鼠体重、肿瘤体积、瘤质量等,应用ELISA法检测各组裸鼠血清中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor,PDGF-BB)的水平,并进行HE染色观察移植瘤组织形态。匍匐大戟醇提物对小鼠的最大耐受量MTD为94.29 g·kg~(-1)。匍匐大戟醇提物对大鼠成肌细胞(L6细胞株)无明显抑制作用,对人肝癌细胞株HepG-2、大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12、人非小细胞肺癌细胞株A549、人宫颈癌细胞细胞株Hela均有显著性的抑制作用,且匍匐大戟醇提物在体外能够显著抑制RAECs的增殖、迁移和小管形成,并且促进RAECs中AKT和e NOS的磷酸化及增加TGF-β1和Smad3蛋白表达。同时,匍匐大戟醇提物可显著性抑制裸鼠在体肿瘤的生长并降低肿瘤裸鼠血清中VEGF的产生,但可增加PDGF-BB因子的含量。匍匐大戟醇提物对肿瘤生长及血管生成具有显著的抑制作用,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

龙葵不同提取部位体外抗肿瘤作用的研究

目的 评价龙葵体外抗肿瘤作用及确定其活性部位.方法 采用MTT法和细胞形态观察法研究龙葵水提物、醇提物及醇提物的5个不同萃取部位对人肝癌细胞株SMME-7721,HepG2和胃癌细胞株MGC-803增殖的抑制作用及对细胞形态的影响.结果 龙葵水提物、醇提物,龙葵石油醚和正丁醇萃取部位对上述3种肿瘤细胞的生长均有不同程度的抑制作用且具有剂量依赖关系,另外均能显著改变细胞形态.结论 龙葵水提物、醇提物具有体外抗肿瘤作用,其石油醚和正丁醇部位是体外抗肿瘤作用的活性部位.     

石菖蒲挥发油对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的 探讨石菖蒲挥发油(volatile oil of acorus gramineus, VOA)对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法 采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测石菖蒲挥发油对p53野生型细胞株U87、p53突变型细胞株U251及正常细胞株HEB的细胞抑制作用及计算半数抑制浓度(IC₅₀)。以Annexin V/PI染色-流式细胞仪检测法染色法考察不同浓度VOA给药U87及U251细胞株48 h后对细胞凋亡的影响。结果 随着VOA剂量的增加,人脑神经胶质瘤细胞生存活率显著降低(P<0.05)。相比于正常的人脑神经细胞HEB,VOA对神经胶质瘤细胞(U87、U251)的IC₅₀值要更为敏感。不同浓度VOA作用于U87细胞48 h和U251细胞48 h后,经流式细胞仪检测均能观察到不同程度的细胞凋亡,随着VOA给药浓度的加大,U87及U251凋亡细胞比例呈显著上升趋势(P<0.05)。结论 石菖蒲挥发油有抑制人胶质瘤U87及U251细胞增殖,促进细胞凋亡的作用。     

雷公藤不同提取部位对小鼠肝肾的损伤作用

目的观察雷公藤不同提取部位对小鼠肝肾毒性损伤的作用。方法提取分离雷公藤不同部位,给小鼠分别灌服5、10 d,检测给药后小鼠体内的肝肾损伤相关功能指标,研究雷公藤的肝肾损伤较明显的部位。结果给药5、10 d后,雷公藤醇提物部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位可导致小鼠血中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的升高;给药5 d后,乙酸乙酯高剂量组和正丁醇高剂量组以及醇提物高、低剂量组的尿素氮(BUN)值升高,但是对血肌酐(Scr)影响不大;给药10 d后,正丁醇高剂量组以及醇提物高、低剂量组的BUN升高,醇提物高、低剂量组Scr值升高。结论雷公藤的肝毒性较强,且毒性成分集中在醇提物部位,而以乙酸乙酯部位和正丁醇部位较多。雷公藤不同部位短期给药产生的肾脏毒性不明显,对肾脏产生的影响主要和醇提物部位有关。     

辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响

目的:研究辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞分泌乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞的细胞毒作用;采用药物不同浓度处理HepG2.2.15细胞72h后,以酶联免疫吸附实验法(ELISA法)测定细胞上清液中HBsAg和HBeAg的分泌水平。结果:辣蓼醇提液浓度为1.8、0.9mg/ml时,对细胞有明显毒性;浓度为0.6、0.3、0.1 mg/ml的辣蓼醇提液处理HepG2.2.15细胞株72h后,对HBsAg、HBeAg的分泌有抑制作用(P0.05),并呈量效关系。结论:辣蓼醇提液具有体外抗HBV的作用,同时有一定毒性。     

白及茎秆抗肿瘤作用的初步研究

目的:初步研究白及茎秆醇提物的化学成分和抗肿瘤作用,更好地开发利用白及药用资源。方法:采用乙醇回流法提取白及茎秆和块茎醇提物,对醇提物进行化学成分分析。不同剂量白及茎秆醇提物处理体外培养的肺腺癌细胞(A549),用MTS法检测A549细胞的增殖情况,划痕法检测A549细胞的迁移率,Hoechst-PI染色法检测白及茎秆醇提物对A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测白及茎秆醇提物对A549细胞Bcl-2、Bax和ICAM-1基因mRNA表达的影响。结果:白及茎秆醇提物化学成分同块茎类似,并能抑制A549细胞的增殖,且存在剂量依赖关系。随着药物浓度的增加,Bcl-2、ICAM-1 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调。结论:白及茎秆醇提物可通过抑制A549细胞的生长增殖,影响细胞凋亡相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。白及茎杆有潜力成为块茎的补充资源。     

25种中草药体外抑制鼻咽癌细胞增殖活性研究

目的:从用于鼻咽癌辅助治疗的中成药鼻咽清毒颗粒和广东民间用于治疗鼻咽部疾病的中药中选取25种中药,对它们进行抗鼻咽癌活性筛选,从中寻找具有进一步研究价值的抗鼻咽癌中药。方法:采用四甲基偶氮唑盐吸收减少实验(MTT法),测定25种中药的65个提取物,包括乙醇提取物、水提取物及部分挥发油,对鼻咽癌细胞CNE的体外增殖抑制作用。结果:65个提取物中,只有重楼的醇提物和地胆草的醇提物对CNE细胞显示出很好的增殖抑制作用,在100μg/mL时,两者对CNE的增殖抑制率分别为83.10%和66.50%;并且重楼和地胆草的醇提物对CNE细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(31.73±0.032)μg/mL和(50.71±0.063)μg/mL。结论:重楼和地胆草的醇提物具有较强的体外抑制鼻咽癌细胞增殖活性,值得进一步研究。     

匍匐大戟醇提物抑制肿瘤和促血管新生的临床应用及效果

目的:研究匍匐大戟醇的提物在肿瘤的对抗作用以及在血管新生的抑制作用方法取正常的细胞和肿瘤细胞,用药之后通过MTT的方法来对IC50进行检测。原代对大鼠胸主动脉内皮细胞(RAECs)进行培养,进行细胞的分析实验,用的是体外i CELLigence的方法,此外,还进行了细胞迁移法和细胞管组实验的实验方法,研究了匍匐大戟提取物对RAECs的增量、迁移和城市管理的影响,同时对p-Akt,Akt,p-e NOS,e NOS,TGF-β1,Smad3等血管新生相关信号通路蛋白的表达情况进行检测,检测的方法是Western blot技术。通过对人肝癌裸鼠移植瘤模型的建立,予以匍匐大戟醇提物,裸鼠体重、肿瘤大小、肿瘤等质量检测,同时对每组裸鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)水平进行检测,检测的方法是LISA技术方法,同时还要对移植瘤组织的形态进行观察,移植瘤组织是进行过HE染色的。结果:匍匐大戟的提纯物对小鼠的最大的耐受量MTD是94.29/(g·kg)。对于大鼠成肌细胞(L6细胞株),匍匐大戟醇提物没有明显的抑制作用,而对于对鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12、人肝癌细胞Hep G-2、大、人非小细胞肺癌细胞株A549、人宫颈癌细胞细胞株Hela来讲,匍匐大戟有明显的抑制作用,此外匍匐大戟醇提物能够增加RAECs的值、迁移和试管的形成,也会有显著的抑制作用。结论:匍匐大戟醇提物能够对肿瘤的生长和血管的生成具有很显著的抑制作用,这种情况也是匍匐大戟发挥抗肿瘤作用的有效机制之一。     

白附子水提物抑制人骨髓神经母细胞瘤细胞增殖的实验研究

目的 探讨白附子水提物体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 以白附子水提物处理人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞24、48 h后,应用细胞增殖检测试剂Kit-8 (CCK-8)细胞增殖和毒性实验检测白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用,运用蛋白印记反应(AV/PI)对该细胞株生长抑制机理进行初步探讨.结果 白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用,与细胞作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.862 mg/mL,与细胞作用24 h的IC50为1.158 mg/ml.Western-blot法检测结果表明,白附子水提物可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡抑制其生长.结论 白附子水提物有抑制SH-SY5Y细胞增殖作用.     

雪灵芝提取物对HepG2．2．15细胞株HBsAg与HBeAg表达的影响

目的:探讨雪灵芝提取物对HepG2.2.15细胞株HBsAg与HBeAg表达的影响.方法:应用HepG2.2.15细胞系培养系统检测雪灵芝提取物对HBsAg与HBeAg表达的影响.结果:雪灵芝醇提物和水提物各剂量组(50～400 mg/L)孵育HepG 2.2.15细胞株72、96h后抑制了HBsAg和HBeAg的表达(与正常对照组比较,P<0.01),并呈浓度和时间依赖性.其中雪灵芝醇提物在实验72、96h对HBeAg最大抑制率分别为63.2%和90.8%;雪灵芝水提取物在实验96 h对HBsAg和HBeAg的最大抑制率分别为52.5%和72.8%.结论:雪灵芝醇提物和水提物体外均有明显的抗乙肝病毒作用,但醇提物细胞毒性较大,而水提物作用确切且毒性较低.