利用核酸原位杂交技术对HSV－1角膜内潜伏感染的研究

研究单纯疱疹病毒Ｉ型（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＳＶ－１）在角膜内的潜伏感染，利用核酸原位杂交技术对１４只新西兰兔双眼角膜基质内注射接种ＨＳＶ－１Ｍｃｋｒａｅ株，２２只限出现典型的原发单疱病毒性角膜炎（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＫ）。病毒接种后６０天，取其中４个典型单疱角膜炎原发病变的角膜片交叉移植到４只未接种病毒的兔眼上，术后２周取下被病毒感染的角膜植片，利用ＨＳＶ－１单克隆ＩｇＧ抗体对植片行ＨＳＶ－１抗原检测，利用生物素标记的全长ＨＳＶ－１ＤＮＡ探针进行核酸原位杂交。结果术后４个角膜植片抗原检测均为阴性，而ＨＳＶ－１ＤＮＡ检测均为阳性。提示从分子水平上进一步证明角膜组织极可能是ＨＳＶ－１的潜伏感染地。     

角膜与三叉神经节内HSV-1潜伏相关转录启动子的核苷酸序列分析

目的 比较角膜与三叉神经节（ＴＧ）的内单纯疱疹毒１型（ＨＳＶ－１）潜伏相关转化启动序列，进一步证实角膜为ＨＳＶ－１的另一潜伏地。方法 用寺白兔建立ＨＳＶ－１潜伏感染动物模型，提取并ＰＣＲ扩增角膜及ＴＧ ＬＡＴ启动子，比较ＬＡＴ启动子序列。结果 ６６．７％（４／６）的角膜组织扩增出ＨＳＶ－１ＬＡＴ妄动子，且与ＴＧ的电泳位置相同（２１６ｂｐ），其中在－２～１６１间的核苷酸序列完全相同。结论 ＨＳＶ－１     

单纯疱疹病毒I型潜伏感染的分子生物学研究

单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）在角膜发生原发感染后可在三叉神经节（ＴＧ）及角膜组织内发生潜伏感染。分子生物学研究发现潜伏期ＴＧ及角膜组织中都存在ＨＳＶ－１的ＤＮＡ片段及特异性ＲＮＡ的转录，它们与ＨＳＶ－１的潜伏和复发有着密切的关系。但ＨＳＶ－１在ＴＧ与角膜内的潜伏机制有所不同，对这一问题的进一步研究将有助于对ＨＳＶ－１潜伏和复发机理的彻底阐明。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染的分子生物学研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）在角膜发生原发感染后可在三叉神经节（ＴＧ）及角膜组织内发生潜伏感染。分子生物学研究发现潜伏期ＴＣ及角膜组织中都存在ＨＳＶ－１的ＤＮＡ片段及特异性ＲＮＡ的转录，它们与ＨＳＶ－１的潜伏和复发有着密切的关系。但ＨＳＶ－１在ＴＧ与角膜内的潜伏机制有所不同，对这一问题的进一步研究将有助于对ＨＳＶ－１潜伏和复发机理的彻底阐明。     

原位聚合酶链反应检测角膜组织中HSV—1型DNA

为研究单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＶＳ－Ⅰ）在角膜内的潜伏感染情况。采用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）定位检测２１例角膜标本中的ＨＳＶ－Ⅰ，其中７例活动期ＨＳＫ，１３例静止期ＨＳＫ，１例圆锥角膜。结论：在ＨＳＫ活动期及静止期中，角膜各层细胞内均有ＨＳＶ－Ⅰ的存在，极可能整合于细胞核内     

单纯疱疹病毒Ⅰ型眼部潜伏感染的实验研究

纯系新西兰大白兔经角膜接种ＨＳＶ－ｌｓｔｏｋｅｋ株，成功建立单疱病毒性角膜炎模型。自愈后４５天，以原病变角膜为供体，健康新西兰白兔为受体，行穿通性角膜移植术（ＰＫＰ）同时，取患侧１０份及健侧１０份三叉神经节，应用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测ＨＳＶ－１ＤＮＡ。术后５０天，取术侧角膜植片１０只及术侧三叉神经节１０份作相同检测。结果表明，患侧三叉神经节１０份中８份ＨＳＶ－１呈阳性，而健侧１０份中３份阳性；角膜植片１０只有７只阳性，术侧三叉神经节未检测到ＨＳＶ－１ＤＮＡ。由此提示，单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）既可在同侧三叉神经节形成潜伏感染，又可能在对侧三叉神经节形成潜伏，而且角膜极可能为ＨＳＶ－１的另一潜伏部位     

利用核酸原位杂交技术对HSV—1角膜内潜伏感染的研究

研究单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）在角膜内的潜伏感染，利用核酸原位杂交技术对１４只新西兰兔双眼角膜基质内注射接种ＨＳＶ－１ Ｍｃｋｒａｅ株，２２只眼出现典型的原发单疱病毒性角膜炎（ＨＳＫ）。病毒接种后６０天，取其中４个典型单疱角膜炎原发病变的角膜片交叉移植到４只未接种病毒的兔眼上，术后２周取下被病毒感染的角膜植片，利用ＨＳＶ－１单克隆ＩｇＧ抗体对植片行ＨＳＶ－１抗原检测，利用生物素标记的全长ＨＳＶ     

复明Ⅱ号抑制HSV—1再活的实验研究

通过已建立ＨＳＶ—１潜伏感染的动物模型，比较了复明Ⅱ号和无环鸟苷治疗后ＨＳＶ—１的激活率。结果表明：在ＨＳＶ—１角膜感染及给予复明Ⅱ号和无环鸟苷（ＡＣＶ）三十天的全身治疗后，经角膜肾上腺素电离子导入激活潜伏于三叉神经节中的ＨＳＶ—１，复明Ⅱ号组三叉神经节中抗原阳性率和泪液中病毒释放率均低于无环鸟苷组。证明了复明Ⅱ号对潜伏感染之后的再活具有较好的抑制作用，应于临床进一步观察     

单纯疱疹性角膜炎发病机制研究的新进展

单纯疱疹性角膜炎（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＫ）是主要的致盲眼病之一，主要由单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）感染眼部引起。近１个世纪以来，有关ＨＳＶ－Ⅰ眼部感染的研究吸引着众多的科学家。早在１８７３年，人们就认识到ＨＳＶ－Ⅰ是导致眼部感染的致病因素之一，Ｇｕｎｔｅｒ和Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ曾经推测ＨＳＶ－Ⅰ感染很可能与中枢神经系统有关，自从１９７１年首次通过器官培养从潜伏感染的三叉神经节（ｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎ，ＴＧ）中分离出ＨＳＶ－Ⅰ之后，人们正在运用各种技术对ＨＳＫ的发病机制尤其是ＨＳＶ－Ⅰ在感觉神经和中枢神经系统中的潜伏状态和复发机制进行研究和说明。对有关的研究进行综述，供参考。     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲＣ地广东地区３３例肝炎患者血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性。对其中１株输血后ＨＧＶ（ｃｈ－ｓ）基因组５′端非翻译区（５ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｒ等报道ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

正常人角膜单疱病毒基因存留的研究

目的研究正常人角膜内单疱病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ）基因存留的可能性。方法用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术对２２例（２２片）正常人角膜、６例（６片）胚胎角膜（阴性对照）及６例单疱病毒性角膜炎（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＫ）急性期患者角膜（阳性对照）进行检测。结果２２片正常角膜中２０片存有ＨＳＶＤＮＡ，２片角膜ＨＳＶＤＮＡ阴性，６例胚胎角膜ＰＣＲ为阴性，６例ＨＳＫ急性期患者角膜为阳性。结论正常人角膜中有ＨＳＶＤＮＡ存留，与ＨＳＶ血清抗体阳性结果相符     

多聚酶链反应快速检测单纯疱疹Ⅰ型病毒眼部急性和潜伏感染

应用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）对单纯疱疹Ｉ型病毒（ＨＳＶ－Ｉ）眼部急性感染和三叉神经节潜伏感染进行快速检测，所用引物源于ＨＳＶ－Ｉ潜伏相关转录基因（ｌａｔｅｎ－ｃｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｇｅｎｅ，ＬＡＴ）共同序列，扩增片段为４５２ｂｐ。应用该引物对３０份实验性单纯疱疹病毒性角膜炎（ＨＳＫ）标本和８份三叉神经节标本及２８份临床诊断为ＨＳＫ的标本进行检测，同时将上述ＨＳＫ的组织培养结果与ＰＣＲ结果进行比较。结果表明：ＰＣＲ法特异性强，灵敏度高，不仅可用于ＨＳＫ的快速检测，作为客观指标，指导临床诊断，也是研究ＨＳＶ－Ｉ潜伏感染的有力手段。     

紫外光A/核黄素角膜交联后兔角膜基质内基质金属蛋白酶-1含量的变化

目的　检测紫外光Ａ／核黄素角膜交联（ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔＡ／ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎｃｏｒｎｅａｌｃｒｏｓｓ-ｌｉｎｋ-ｉｎｇ,ＵＶＡＲＣＸＬ）后兔角膜基质内基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＭＰ）-１的短期含量变化。方法　１５只新西兰白兔,随机分为３组,每组５只,Ａ组为空白对照组,Ｂ组为角膜交联后３ｄ,Ｃ组为角膜交联后７ｄ。Ｂ、Ｃ两组行ＵＶＡＲＣＸＬ。各组取角膜后去除角膜上皮和内皮细胞,应用ＥＬＩＳＡ法检测角膜基质内ＭＭＰ-１的含量。结果　Ａ组角膜基质内ＭＭＰ-１／总蛋白含量为（０．１４０±０．０３６）×１０－６,Ｂ组为（０．２４２±０．０５９）×１０－６,Ｃ组为（０．３７２±０．０６１）×１０－６,３组之间差异有统计学意义（Ｆ＝２４．０５１,Ｐ＝０．０００）。ＵＶＡＲＣＸＬ后３ｄ,兔角膜基质内ＭＭＰ-１含量显著升高,与Ａ组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,术后７ｄ其含量进一步升高,与Ｂ组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结论　ＵＶＡＲＣＸＬ后７ｄ内,兔角膜基质内ＭＭＰ-１含量持续增加,推测ＭＭＰ-１可能对ＵＶＡＲＣＸＬ后的角膜基质重塑起一定作用。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型眼部感染的研究进展

单纯疱疹病毒Ⅰ型眼部感染的研究进展中国医科大学附属第一临床学院眼科郑晓东沈阳市铁西中医院眼科夏光单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＳＶ─１）是人类发现获得性免疫缺陷病毒（ＡＩＤＳ─ｖｉｒｕｓ）以前研究得最多的病毒［１...     

单纯疱疹病毒I型眼部潜伏感染的实验研究

纯系新西兰大白兔经角膜接各ＨＳＶ－１ｓｔｏｋｅｋ，成功建立单疱病毒性角膜炎模型，自愈后４５天，以原病变角膜为供体，健康新西兰白兔为受体，行穿通性角膜移植术（ＰＫＰ）同时，取患侧１０份及健侧１０份三叉神经节，应用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测ＨＳＶ－１ＤＮＡ。术后５０天，取术侧角膜植片１０只及术侧三叉神经节１０份作相同检测，结果表明，患侧三叉神经节１０份中     

PCR对单疱病毒性角膜炎的诊断

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对临床诊断活动期ＨＳＫ３０眼，匐行性角膜溃疡５眼，原因未明角膜炎３眼进行ＨＳＶ－１ＤＮＡ检测，选择ＨＳＶ的胸苷激酶（ＴＫ）基因为目的基因，扩增片段为１１０ｂｐ。ＰＣＲ法检测同时将上述标本进行组织培养。３０眼活动期ＨＳＫ角膜上皮标本２８眼检出ＨＳＶ－１ＤＮＡ，组织培养阳性９眼；５眼匐行性角膜溃疡全部未测出ＨＳＶＩＤＮＡ；３眼原因未明角膜炎中１眼检出ＨＳＶ－１ＤＮＡ，组织培养均为阴性。结果表明：ＰＣＲ法可用于ＨＳＫ的病原学诊断，其特异性强，灵敏度高，适于临床标本的快速检测，尤其对于临床没有典型病变，角膜炎不能定性者价值更高。     

异搏定对培养角膜基质细胞分泌转移生长因子—β1的影响

目的 探讨异搏定对体外培养兔角膜基质细胞分泌ＴＧＦ－β１的影响。为预防或减轻ＰＲＫ后混浊形成提供线索。方法 将传代细胞，在加药培养后４８ｈ，应用ＴＧＦ－β１Ｆｍａｘ＾ＴＭＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ试剂盒和培养上清中ＴＧＦ－β１含量进行检测，根据标准曲线分别计算出各孔ＴＧＦ－β１的浓度。结果 Ｖｅｒａｐａｍｉｌ浓度５μｇ／ｍｌ和１０μｇ／ｍｌ，作用４８ｈ，培养上清中ＴＧＦ－μ１含量明显降低。     

2.0mm小切口飞秒激光角膜基质透镜取出术与飞秒激光辅助的LASIK矫正近视的疗效比较

目的　比较２．０ｍｍ微切口飞秒激光角膜基质透镜取出术（２．０ｍｍｓｍａｌｌｉｎｃｉｓｉｏｎｌｅｎｔｉｃｕｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ,２．０ｍｍＳＭＩＬＥ）与飞秒激光辅助的ＬＡＳＩＫ（ｌａｓｅｒｉｎｓｉｔｕｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓｗｉｔｈｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄｌａｓｅｒ,ＦＳ-ＬＡＳＩＫ）矫正近视的疗效。方法　研究纳入行２．０ｍｍＳＭＩＬＥ的近视患者４８例（９６眼）,同期行ＦＳ-ＬＡＳＫ者５０例（１００眼）,记录并比较两组术前及术后１ｄ、１周、１个月、３个月及６个月的裸眼视力（ｕｎｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＵＣＶＡ）、最佳矫正视力（ｂｅｓｔｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＢＣＶＡ）、屈光度、生活质量量表（ｑｕａｌｉｔｙｏｆｌｉｆｅ,ＱＯＬ）得分及手术满意度量表评分。结果　在术后１周以后ＳＭＩＬＥ组视力高于ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组,且状态较ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组更为稳定。术后１个月、３个月、６个月ＳＭＩＬＥ组ＵＣＶＡ≥术前ＢＣＶＡ的比例高于ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。术后早期（术后１周）ＳＭＩＬＥ组存在１例过矫,而ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组存在１例欠矫,但在术后１个月、３个月、６个月两组手术患者均在±１．００Ｄ范围内。术后平均角膜前表面形态变异指数及垂直不对称指数在各时间点均为ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组大于ＳＭＩＬＥ组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。两组术前及术后６个月ＱＯＬ得分组间比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,术后６个月ＱＯＬ得分均较术前有所增加,且差异均有统计学意义（ＳＭＩＬＥ:ｔ＝－１３．８５,Ｐ＝０．００;ＦＳ-ＬＡＳＩＫ:ｔ＝－１３．２１,Ｐ＝０．００）,而两组术后６个月ＱＯＬ得分比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。两组均有较高的再次手术选择率及手术推荐率,并且未发生严重的并发症。结论　２．０ｍｍＳＭＩＬＥ与ＦＳ-ＬＡＳＩＫ均具有良好的有效性、稳定性以及可预测性,术后都可获得良好的视力及良好的生活质量,前者更好地保持了角膜前表面的形态。     

聚合酶链反庆检测角膜组织中的单疱病毒DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测正常和病变角膜上皮等组织中的ＨＳＶ－１基因ＤＮＡ。结果提示角膜组织可能是ＨＳＶ－１另一潜伏部位。     

Vogt—Koyanagi—Harada综合征与人类白细胞抗原—DQA1和—DQB1基因 …

目的 探讨人类白细胞抗原－ＤＱＡ１和－ＤＱＢ１（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ－ＤＱＡ１ ａｎｄ ＤＱＢ１,ＨＬＡ－ＤＱＡ１ａｎｄＤＱＢ１）基因与沃洛特－小柳－原田综合征（Ｖｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａｓｙｎｄｏｍｅ,ＶＫＨ）遗传易感的相关性。方法 应用聚合酶链式反应－序列特异性引物（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｅｐｒｉｎ