肠道营养促进烧伤大鼠肠三叶因子表达的实验研究

目的 探讨肠道营养对烧伤大鼠三叶因子（ITF）及其mRNA表达的影响。方法 采用30％体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,随机分成伤前对照（C）,静脉营养（PN）及肠道营养（EN）组。采用原位杂交、免疫组化和高效液相色谱等手段检测了烧伤后大鼠肠组织中肠三叶因子（ITF）ITF mRNA的变化,并观察了两组大鼠肠道受损情况。正常大鼠小肠中ITF及ITF mRNA均有一定表达,它们主要分布于肠绒毛杯状细胞中。烧伤后肠道组织结构受损,ITF mRNA表达明显降低,肠杯状细胞分泌ITF的能力大幅下降,特别是ITF二聚体的含量远远低于伤前（P＜0.01）。两组比较,尽管肠道营养不能逆转烧伤后ITF下降的趋势,但能明显抑制其下降幅度,同时EN组肠粘膜受损程度也明显低于PN组。结论 严重烧伤后肠粘膜结构受损的ITF合成下降的主要原因,与静脉营养相比肠道营养可减轻肠粘膜受损程度,降低ITF特别是ITF二聚体的下降幅度。     

谷氨酰胺对烧伤大鼠肠三叶因子表达的影响

目的　探讨谷氨酰胺对烧伤大鼠肠三叶因子 (intestinaltrefoilfactor,ITF)表达的影响及其可能的机制。方法　采用 3 0 %体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型 ,随机分正常对照 (C)组 ,烧伤后普通肠道营养 (EN)组及烧伤后添加谷氨酰胺的肠道营养 (GLN)组。EN组用等量甘氨酸补足氮量 ,使两组烧伤大鼠保持等氮、等热卡 ,动态观察伤后两组大鼠ITF及ITFmRNA的变化。结果　正常大鼠小肠中ITF及ITFmRNA均有一定表达 ,烧伤后其表达一过性增加 ,随后明显降低。两组比较 ,GLN组大鼠肠组织中ITF及ITFmRNA水平明显高于EN组 ,同时GLN组肠粘膜受损程度也明显低于EN组。结论　严重烧伤后肠粘膜结构受损是ITF合成下降的主要原因 ,谷氨酰胺能保护肠粘膜 ,维护杯状细胞的正常结构和功能 ,促进ITF特别是ITF二聚体的合成和分泌     

肠三叶因子在大鼠肠道中表达的实验研究

目的 研究肠三叶因子（ＩＴＦ）及其ｍＲＮＡ大鼠肠道的分布规律。方法 采用原位杂交、免疫组化等手段观察了ＩＴＦ及ＩＴＦｍＲＮＡ在大鼠肠道的表达并使用高效液相色谱仪检测了不同肠段ＩＴＦ的含量。结果 从十二指肠至结肠均有ＩＴＦ及ＩＴＦｍＲＮＡ表达，主要分布于肠绒毛杯状细胞，其中ＩＴＦｍＲＮＡ仅在杯状细胞的基底和边缘表达，其它区域的杯状细胞则呈ＩＴＦｍＲＮＡ阴性反应，同时发现部分其它部位的肠上皮细胞中亦有     

肠三叶因子在应激胃粘膜损伤早期修复中的作用

目的 :研究肠三叶因子 (ITF)在水浸束缚应激 (WRS)大鼠胃粘膜基因表达变化 ,探讨其在应激胃粘膜损伤早期修复作用。　方法 :采用水浸束缚应激制作模型 ,动态监测胃粘膜血流量 (GMBF) ,大体及光镜下观察粘膜损伤程度 (UI)及组织学变化 ;逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测ITF基因表达变化 ;免疫组化染色进一步证实其表达。　结果 :应激造成胃粘膜广泛损伤 ,但损伤指数在 2、4、8h逐渐减小 ,至 8h降为 6 4 .9% ,GMBF逐渐恢复 ,至 8h上升为正常 (89.8% ) ,ITF基因表达逐渐增强 (0 .0 2 2± 0 .0 0 1 )vs(0 .1 77± 0 .0 1 0 ) ,P <0 .0 1 ,免疫组化染色计分为 (0 .1 34± 0 .0 0 1 )vs(0 .2 5 3± 0 .0 1 ) ,P <0 .0 1。　结论 :ITF可能参与了胃粘膜早期重建     

严重烧伤后肠道损伤与肠源性高代谢的关系

目的　探讨烧伤后肠道损害与“肠源性高代谢”的关系。方法　在建立严重烧伤加清洁肠道动物模型的基础上 ,将 96只Wistar大鼠随机分为烧伤对照 (B)组和烧伤加清洁肠道 (SDD)组。观察了伤后 0～ 10d大鼠静息能量代谢率(REE)的变化 ,同时检测了伤后 0、1、3、5、7、10d血中内毒素 (LPS)、肿瘤坏死因子 (TNF)和二胺氧化酶 (DAO)的含量 ,并进行相关分析。结果　烧伤后两组大鼠的REE、TNF、LPS和DAO均明显高于伤前 ,两组相比 ,SDD组的REE、TNF和LPS较B组均有不同程度的降低 ,而DAO则明显高于B组。相关分析显示 ,REE同LPS和TNF呈显著正相关 (r1 =0 .77,P <0 .0 5 ,r2 =0 .81,P <0 .0 5 ) ,与DAO相关不显著 (r >0 .0 5 )。结论　烧伤后肠源性高代谢与血中炎症介质含量呈正比 ,但肠道损伤程度加重并不引起代谢率相应增加 ,二者不存在线性关系     

不同途径给予重组人肠三叶因子对烧伤后小鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的探讨重组人小肠三叶因子(rhITF)对烧伤后肠黏膜屏障功能的影响。方法建立30%体表面积Ⅲ度烧伤小鼠模型,将104只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(C组,n=8)、烧伤对照组(B组,n=32)、肠三叶因子灌胃给药组(IG组,n=32)和rhITF皮下注射组(SC组,n=32)。观察伤前及烧伤后1、3、5、7d小鼠肠黏膜屏障功能的变化及不同途径给予rhITF对其的影响。结果烧伤后肠黏膜损伤指数、通透性、血浆二胺氧化酶(DAO)活性明显高于C组,而肠上皮细胞增殖指数和肠黏膜厚度则显著降低。与B组比较,IG组和SC组小鼠的损伤指数、通透性和DAO活性明显降低(P<0.05),黏膜厚度显著增加(P<0.05)。与SC组比较,IG组的疗效更明显(P<0.05)。结论 rhITF能有效减轻烧伤后肠道损伤,维护肠黏膜屏障功能,通过胃肠途径给予肠三叶因子的疗效更佳。     

肠道免疫与烧伤后肠细菌移位

<正>当机体受到休克、烧伤、创伤或免疫抑制时,肠道常驻菌穿透粘膜进入肠系膜淋巴结或其它器官的现象称为细菌移位(bacterial translocation,BT),可引起脓毒症(sepsis)、多器官功能衰竭综合征(MOF)甚或死亡。基于内源性感染的观点,肠道在MOF中的作用日益受到重视。有学者认为肠道不仅是MOF的靶器官,更是始动器官。肠道是人体最大的潜在“贮菌库”,正常人不会发生细菌移位导致感染,当机体遭受严重创伤、休克、烧伤等应激时,就有可能发生细菌移位,这与上述情况下全身免疫机制下降有关,其中肠道免疫功能的削弱尤为引人注目。     

重组人肠三叶因子减轻烧伤后肠源性高代谢的实验研究

目的探讨重组人肠三叶因子(rhITF)对烧伤后肠源性高代谢的作用及期机制。方法采用30%体表面积Ⅲ度烧伤小鼠模型,将72只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(C组,8只)、烧伤对照组(B组,每个时相点8只)和rhITF治疗组(ITF组,每个时相点8只)。观察伤前及烧伤后1、3、5、7d小鼠静息能量代谢率(REE)的变化,同时检测伤后血浆内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果两组烧伤小鼠的REE、TNFα、LPS、IL-1和IL-6水平均明显高于烧伤前水平(P<0.05),两组比较,ITF组小鼠REE明显低于B组,平均降幅达25%左右。与之对应,血浆LPS、TNF-α、IL-1和IL-6含量也明显低于B组(P<0.05)。结论 rhITF能减轻烧伤后肠道受损程度,降低烧伤小鼠血中炎症介质水平,从而减轻烧伤后肠源性高代谢。     

乌司他丁对严重烧伤大鼠肠道损伤及炎症因子的影响

目的观察乌司他丁对严重烧伤大鼠致肠黏膜损害和炎症因子的影响。方法采用30%体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,随机分成烧伤对照组、乌司他丁组,两组给予等氮、等热量、等体积的营养液。乌司他丁组于伤后每日静脉注射乌司他丁。观察烧伤前及烧伤后第1、2、3、4、5、6、7天大鼠的氮平衡变化,同时检测烧伤后血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)活性及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的含量。结果烧伤后两组大鼠的氮平衡、D-乳酸、DAO、TNF-α及IL-6均显著高于烧伤前(P<0.01);乌司他丁组的氮平衡、D-乳酸及DAO活性与烧伤对照组相似(P>0.05);而TNF-α及IL-6含量显著低于烧伤对照组(P<0.05,P<0.01)。结论乌司他丁能有效降低血浆炎症因子水平,而对肠黏膜屏障没有直接的保护作用。     

烧伤大鼠肠黏膜损伤肠内营养实施时机的选择

目的:探索大鼠烧伤后最佳的肠内营养(EN)实施时机,观察早期肠内营养(EEN)对烧伤后肠黏膜损伤的影响。方法:采用30%总体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,将88只Wistar大鼠随机分为假伤对照组(C组)8只,早期肠内营养组(EEN组,于伤后6 h开始实施EN)和延迟肠内营养组(DEN组,于伤后24 h开始实施EN)各40只(每时相点8只)。检测伤前和烧伤后0.5、1、3、7和10 d大鼠肠黏膜跨膜电位差(PD)、肠黏膜血流量(IMBF)、肠黏膜内pH(pHi)值、血浆内毒素(LPS)含量和二胺氧化酶(DAO)活性,并计算肠黏膜损伤指数。结果:EEN组和DEN组大鼠烧伤后天数(PBD)0.5～10肠黏膜PD、IMBF和空肠pHi值均低于C组(PBD 0)(P<0.01),而血浆LPS含量、DAO活性及肠黏膜损伤指数均高于C组(P<0.05～P<0.01)。EEN组大鼠PBD 1～10肠黏膜PD、IMBF和PBD 1、PBD 3、PBD 10空肠pHi值均高于DEN组(P<0.05～P<0.01),而PBD 3～10 LPS及PBD 3血浆DAO活性均低于DEN组(P<0.01)。EEN组与DEN组比较,未出现明显的不适症状,未见呕吐、腹胀与腹泻。结论:较早给予EN能改善烧伤后肠黏膜血供,减轻肠道受损程度,维护肠黏膜结构与功能,未见明显不良反应。     

Effects of Intestinal Trefoil Factor on Colonic Mucosa in Experimental Colitis of Rats

The trefoil factor family (TFF) is a relativelynewfamily of peptides , which are expressed andsecretedin a tissue-specific manner inthe gastroin-testinal tract . These factors protect epitheliumfrom injury , promote repair through restitutionand wound healing, and inhibit tumor growth[1].Previous study showed that trefoil factor potentlyaccelerated healing and reduced inflammation in arat model of colitis[2]. Nitric oxide (NO) is ani m-portant regulator of gut inflammatory responsesand plays…     

肠三叶因子的纯化、理化性质及其稳定性分析

目的:制备高纯度的肠三叶因子(ITF),研究其理化性质及其在模拟胃肠道环境中的稳定性.方法:首先利用硫酸氨分级沉淀、镍离子亲和层析、超滤离心三步法纯化ITF,然后分析氨基酸序列、肽指纹图谱、三级结构,最后建立模拟胃肠道环境模型,研究ITF的稳定性.结果:经过三步纯化后ITF的纯度超过95%,产量约为50 mg/L;氨基酸序列分析、肽指纹图谱分析与预测值完全一致,质谱分析显示精确Mr约为7879.4,与理论值(7679.7)基本一致;三级结构研究证实ITF主要以二聚体的形式存在;模拟胃肠道环境中的稳定性研究显示,ITF在蛋白酶/ITF的比例高达1:1时,经过4 h消化,ITF二聚体残余量超过50%;在pH值2.0～12.0的缓冲液中,37℃水浴5 h后,残余量均超过90%;pH7.8缓冲液37℃水浴5 d,残余量超过70%.结论:获得了高产量、高纯度及高度稳定的ITF,为ITF大规模的工业化生产及口服药的制备打下了坚实的基础.     

Production of human intestinal trefoil factor in Pichia pastoris

Objective：To construct a Pichia pastoris （P. pastoris） expression vector of human intestinal trefoil factor （hITF） and study its expression and purification procedures. Methods：hITF gene encoding mature peptide was modified with a polybistidine tag sequence at the N-terminal, and then inserted into the P. pastoris expression vector pGAPZaA at the downstream of the s-mating factor signal. After gene sequencing, the recombinant pGAPZaA-hITF was transformed into the P. pastoris strain X-33 with lithium chloride, rhITF was induced to constitutively express in shake flask, and then analyzed with Tricine SDS-PAGEand Western blotting. The obtained rhITF was isolated from the cultured supernatants by ammonium sulfate precipitation, Ni-NTA affinity chromatography, and ultrafiltration. Results：The correctness and integrity of rhITF were identified by restriction digestion and gene sequencing, rhITF was successfully expressed to 50 mg/L as a secretive protein. After purification, the purity was above 95%. Tricine SDS-PAGE and Western-blot analysis showed that rhITF presented as a single band with a molecular weight of 10 kDa, a little larger than 7 879 Da as assayed by mass spectrometry analysis. Conclusion： hITF P. pastoris expression vector is successfully constructed and rhITF is expressed in P. pastoris at commercially relevant level. This research lays foundation for the further functional studying of hITF.     

烧伤合并内毒素血症早期肠粘膜损害机制的研究

目的：探讨烧伤合并内毒素血症早期肠粘膜损害的发生机制。方法：采用２０％Ⅲ度体表烧伤合并小剂量内毒素（ＬＰＳⅠｍｇ／ｋｇ）注射的大鼠模型,动脉检测了肠组织血小板激活因子（ＰＡＦ）、黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）、丙二醛（ＭＤＡ）等的变化。结果：烧伤合并内毒素注射后肠组织ＰＡＦ升高较ＸＯ则,０．５-ｈ即显著高于正常对照组,６ｈ达高峰 ,肠组织ＸＯ和ＭＤＡ分别与ＰＡＦ呈显著正相关（Ｐ〈０．００５;Ｐ〈０．００１）,     

人肠三叶因子真核载体的构建与表达

目的 构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)的真核载体并在真核细胞中表达.方法 从人结肠粘膜提取总RNA,逆转录多聚酶反应制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因,TA克隆至pGEMT载体中,测序鉴定后将hTFF3基因重组到真核表达载体pCMV5-myc中,转染真核细胞293-T,裂解细胞后分别采用鼠抗人c-myc抗体和鼠抗人11下3抗体行Western-blot了解hTFF3表达情况.结果 从人结肠粘膜成功克隆了hTFF3基因并经测序验证,构建了pCMV5-myc-hTFF3真核表达载体,转染细胞后行western-blot提示hTFF3可在293-T细胞中表达.结论 成功构建pCMV5-myc-hTFF3重组真核载体并在293-T细胞中表达hTFF3蛋白,为进一步研究hTFF3的功能、作用机制及相互作用蛋白奠定了基础.