炎症信号受体TLR4在大鼠正常牙髓和牙周组织中的分布及意义

目的:研究大鼠正常牙髓和牙周组织中炎症信号受体TLR4表达特点,探讨其在健康牙髓及牙周组织天然免疫防御中的可能作用.方法:采用石蜡及冰冻切片和免疫组化技术检测大鼠健康牙髓及牙周组织中TLR4的表达情况.结果:正常牙髓组织中成牙本质细胞、血管内皮细胞及参与先天免疫的巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞等细胞TLR4免疫反应阳性,牙髓成纤维细胞不表达TLR4.TLR4表达于牙周结缔组织,可见与上皮层临近的固有层结缔组织强阳性染色.结论:TLR4可能参与了牙髓牙周组织的先天免疫反应,在牙髓牙周组织抵御外来病原微生物入侵中可能起重要作用.     

Toll样受体4在大鼠炎症牙髓表达的免疫组化研究

目的研究内毒素(LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中Toll样受体4(TLR4)的表达特点,以探讨TLR4在牙髓炎症中的可能作用,推测它在牙髓炎发生发展中的意义。方法通过对LPS诱导的大鼠磨牙牙髓炎组织切片,同时采用免疫组化方法检测大鼠牙髓炎中TLR4的表达情况。结果 1 d组:成牙本质细胞呈中度阳性表达,牙髓成纤维细胞为中度至强阳性表达;3⁷ d组:成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞阳性表达减弱;2周组:坏死区扩大呈均质弱阳性表达,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞减少,呈阳性,修复牙本质呈弱阳性表达;3周组:大部分坏死牙髓组织呈均质弱阳性表达。结论 TLR4在大鼠牙髓炎发生、发展呈动态表达,TLR4可能参与调节牙髓炎发生、发展及修复过程。     

Toll样受体4在大鼠实验性牙髓炎和根尖周炎中的表达

目的:建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,了解TLR4在大鼠牙髓和根尖周组织的表达情况。方法:采用单纯髓腔开放法建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,进行组织学及X线片观察。免疫组化检测TLR4在牙髓炎中的表达,RT-PCR检测TLR4在根尖周炎中的表达。结果:组织学及X线观察证实成功复制大鼠牙髓炎及根尖周炎模型,免疫组化结果表明大鼠正常牙髓组织成牙本质细胞层TLR4阳性表达,牙髓内部血管内皮细胞亦见表达,牙髓成纤维细胞未见表达。炎症牙髓组织TLR4表达较正常组增强。RT-PCR检测发现正常和炎症根尖周组织均有TLR4mRNA表达,炎症组表达较正常组增强。结论:TLR4在牙髓组织和根尖周组织均有表达并参与了牙髓根尖周炎症的发生和发展。     

大肠杆菌脂多糖影响Toll样受体4在人牙髓细胞的表达

目的:探讨大肠杆菌脂多糖(lippolysacchaide,LPS)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)表达的影响及TLR4在LPS对牙髓细胞激活中的作用。方法:以大肠杆菌LPS刺激体外培养的人牙髓细胞,运用实时荧光定量RT-PCR和免疫荧光技术分别检测牙髓细胞TLR4mRNA和蛋白的表达。利用抗体阻断和ELISA方法观察TLR4在LPS激活牙髓细胞释放IL-1β中的作用。结果:正常牙髓细胞不表达TLR4,1×10-4g/L大肠杆菌LPS作用HDPCs6、12、24h后均可见TLR4在胞膜/胞质的表达,胞核并不表达TLR4。FQRT-PCR结果表明LPS能明显上调牙髓细胞TLR4mRNA的表达(P<0.001),并具有LPS浓度依赖性。抗体阻断和ELISA结果证实LPS能激活牙髓细胞释放IL-1β(P<0.01),抗TLR4单抗能明显抑制LPS对HDPCs的激活(P<0.05)。结论:正常人牙髓细胞不表达TLR4,大肠杆菌LPS能诱导牙髓细胞表达TLR4mRNA和蛋白。TLR4介导了LPS对牙髓细胞的活化,在LPS对牙髓细胞激活效应中具有重要作用。     

脂多糖和转化生长因子-β1对牙髓细胞Toll样受体4的表达及信号通路的影响

目的研究牙髓炎症过程中,在促炎因子脂多糖（LPS）和抑炎因子转化生长因子-β1（TGF-β1）同时存在的情况下,牙髓细胞表面Toll样受体4（TLR4）的表达水平及相关信号分子的变化情况。方法LPS、TGF-β1作用于体外培养的牙髓细胞,用流式细胞术检测牙髓细胞表面TLR4的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）、Westernblot方法检测相关信号分子的表达水平,包括进化保守的Toll信号中介分子（ECSIT）和核转录因子-κB（NF-κB）;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测前炎症因子白细胞介素-6（IL-6）的分泌水平;然后进一步通过real-time PCR法检测临床炎症牙髓组织中相应指标的变化。结果体外培养的牙髓细胞在LPS、TGF-β1共同作用下,细胞表面TLR4的表达水平没有明显变化,但是IL-6分泌增加,ECSIT表达增加,NF-κB入核增加。临床标本的real-time PCR结果表明：炎症状态下的牙髓组织中TGF-β1 mRNA表达增加,TLR4 mRNA表达没有明显变化,ECSIT及IL-6 mRNA表达增加。结论牙髓炎症发展过程中,虽然牙髓组织中TGF-β1表达增加,抑制细胞表面TLR4的表达,但TLR4的信号通路仍然被活化,主要机制可能是LPS引起信号分子ECSIT的活化,从而抑制TGF-β1信号通路的活化。     

Toll样受体4在人成牙本质细胞和牙髓组织中的表达

目的 探讨人牙髓组织和成牙本质细胞中Toll样受体4（TLR4）的表达与分布特点，及其在牙髓组织天然免疫防御中的可能作用。方法从新鲜拔除的人第三磨牙获取牙髓组织和成牙本质细胞，扫描电镜观察牙髓摘除后髓腔壁成牙本质细胞形态和附着情况；RT—PCR检测人牙髓组织以及成牙本质细胞中TLR4mRNA的表达情况：采用免疫印迹技术和免疫组织化学方法检测TLR4蛋白的表达与定位。结果扫描电镜观察牙髓摘除后成牙本质细胞大部存留在髓室壁上，细胞形态良好：RT-PCR结果发现健康牙髓、成牙本质细胞均可表达TLR4mRNA，产物大小为278bp；免疫印迹法检测正常牙髓、成牙本质细胞在相对分子质量89000附近出现蛋白条带；免疫组化显示牙髓组织中的成牙本质细胞、血管内皮细胞TLR4免疫反应阳性。正常牙髓中牙髓成纤维细胞不表达TLR4。结论成牙本质细胞通过表达TLR4参与牙髓牙本质复合体的先天免疫反应，TLR4在牙髓抵御外来病原微生物入侵的宿主免疫防御中起重要作用。     

TLR9在成牙本质细胞中的表达

目的：研究成牙本质细胞中TLR9、DSPP基因表达特征及信号转导途径。方法：采用RT-PCR检测TLR9在小鼠牙髓组织中及TLR9、DSPP在成牙本质细胞系中的表达。用CpGODN-A和CpGODN-B刺激细胞,在时间梯度0、3、6、9、12、24h,检测TLR9、DSPP基因的表达特征。结果：TLR9mRNA在小鼠牙髓组织中有表达。TLR9、DSPPmRNA在成牙本质细胞中都有显著的表达,在CpGODN刺激下显著上调,在6h处于峰值。结论：TLR9在成牙本质细胞中有表达;TLR9的特异性表达对DSPP基因表达量有影响。     

LPS对人牙周膜细胞Toll样受体4及下游炎症因子表达的影响

目的：观察革兰氏阴性菌外膜成分脂多糖（LPS）对牙周膜细胞（PDLCs）Toll样受体4（TLR4）及下游炎症因子表达的影响。方法：用浓度为10μg／mL的LPS对牙周膜细胞进行刺激,Western Blot检测牙周膜细胞上TLR4受体表达,同时ELISA检测培养基上清中炎症因子TNF－α、IL－1β的含量。结果：加入LPS后,牙周膜细胞上TLR4蛋白表达增强,炎症因子TNF－α、IL－1β含量增多,且随LPS的刺激时间增加而呈上升趋势。结论：LPS促进PDLCs的TLR4表达,并导致炎症因子分泌增加,TLR4信号通路在牙周炎发病过程中具有重要作用。     

年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平及功能的影响

目的：观察不同年龄组小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4（TLR2/4）表达水平的差别,以及该细胞在脂多糖（LPS）刺激下,炎症因子TNF-α分泌水平的差别。方法：采用real-time PCR和流式细胞技术,检测低龄组和高龄组小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平的差异;同时检测1μg/mL大肠杆菌（E.coli）LPS或1mg/L牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）LPS刺激后,两组细胞TLR2/4表达水平的变化;采用ELISA技术检测炎症因子TNF-α分泌水平的变化。结果：刺激前,两组细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平均无明显差别。E.co-li LPS或P.gingivalis LPS刺激后,低龄组细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达水平均明显高于高龄组（P〈0.05）,其分泌的TNF-α水平也显著高于高龄组（P〈0.05）。结论：年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平没有显著影响,但增龄性变化可能导致TLR2/4功能的减退。     

内毒素对人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的:观察内毒素(LPS)刺激后人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4的表达,探讨牙周膜细胞作为免疫活性细胞在牙周炎局部免疫反应中的作用。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,经来源鉴定后,取生长良好的第4代细胞用LPS进行刺激,分别于刺激0、4、8、12、24 h,运用免疫细胞化学染色法检测TLR2和TLR4在牙周膜细胞中的表达;利用多功能真彩色细胞分析管理系统进行图像分析,对TLR2和TLR4进行免疫组化评分(IHS)。结果:无LPS刺激的对照组(刺激O h)TLR2和TLR4的表达均为弱阳性,加入LPS后,染色增强,且随着刺激时间的延长而增加(P<0.05),LPS刺激后各时间点TLP2和TLR4的IHS分值与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:内毒素的刺激可以使牙周膜细胞TLR2和TLR4表达增多,提示牙周膜细胞参与牙周局部免疫反应。     

窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响研究

目的 动物实验观察窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响,探讨牙髓组织在LPS刺激后的信号转导途径.方法 在8头小型猪磨牙和前磨牙上制备不同深度窝洞,窝洞分为牙釉质深层组、牙本质浅层组、牙本质深层组.封入一定量的内毒素,分另q于术后3天、7天、14天、28天处死动物取牙.采用免疫组织化学染色的方法,观察小型猪磨牙和前磨牙窝洞内封入内毒素后牙髓组织中TLR4的表达和分布.结果 小型猪正常牙髓中未见TLR4阳性细胞.内毒素实验组随着窝洞深度增加,TLR4阳性细胞数增加.在深窝洞组3a窝洞下方牙髓组织中TLR4阳性细胞多为中性粒细胞表达,其他实验组多为单核细胞表达.结论 牙髓组织中TLR4的表达提示内毒素通过牙本质渗透至牙髓,通过LPS信号受体TLR4在牙髓组织的炎症发展过程中发挥作用.     

脂多糖信号受体CD14和 TLR4在人炎症根尖周组织中的表达

目的 研究慢性根尖周炎患者根尖周组织中脂多糖(LPS)信号受体CD14和TLR4的表达和分布,探讨CD14和TLR4在炎性根尖周组织中可能的作用.方法 收集需做根尖外科手术的12例慢性根尖周炎患者和10例外科手术拔出的无牙髓炎和根尖周病变的阻生齿的根尖周组织,术中取炎症和正常根尖周组织后常规切片,采用免疫组织化学方法检测CD14和TLR4的表达和分布.结果 CD14和TLR4在炎症根尖周组织中呈强阳性表达,主要分布于单核细胞、巨噬细胞等炎症细胞;而在正常根尖周组织中未见明显CD14和TLR4阳性细胞.结论 炎症根尖周组织中CD14和TLR4的阳性表达,提示LPS可能通过CD14和 TLR4信号受体在根尖周炎症组织中发挥作用.     

TLR4在人健康和深龋牙髓组织中的定位表达研究

目的 比较人健康及深龋牙齿牙髓的组织形态及Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)在两种牙髓组织中的定位表达,以明确TLR4是否参与牙髓的天然免疫反应过程.方法 正常及深龋牙齿脱矿后行HE染色,观察牙本质及牙髓组织基本形态,正常及深龋牙髓组织行免疫组织化学染色,观察TLR4的定位表达情况,进行免疫组织化学染色评分分析.结果 HE染色显示正常牙齿牙本质小管结构完整、分布均匀,牙髓组织内细胞、血管和纤维结缔组织完整清晰.深龋牙齿部分牙本质小管遭到破坏,牙髓组织结构完整,与正常组牙髓组织相比较未见明显改变.免疫组织化学染色显示正常与深龋牙髓组织中TLR4阳性染色均表达于成牙本质细胞层及血管周围组织,但深龋牙髓组织阳性染色明显增强.免疫组织化学染色评分结果正常组为1.25±0.46,深龋组为2.10±0.74,2组差异具有统计学意义(t=2.833,P=0.012).结论 TLR4在正常及深龋牙髓中均有表达且深龋牙髓表达更多,提示TLR4参与了深龋牙髓组织的天然免疫反应.     

Toll样受体4对牙周膜细胞增殖的影响

目的：了解Toll样受体4对人牙周膜细胞增殖的影响。方法：以改良组织块法体外获得人牙周膜细胞,取生长良好的第3代细胞随机分为3组：空白对照组、NC对照组（NC－shRNA转染组）和TLR4－shRNA转染组,并于转染48 h 后用倒置荧光显微镜观察转染效果、用荧光实时定量 PCR检测各组细胞中TLR4mRNA的表达水平;最后将3组细胞分别接种于96孔细胞培养板进行培养,分别于培养24、48、72 h用MTT法检测各组细胞的增殖能力。结果：TLR4－shRNA可明显降低人牙周膜细胞的TLR4mRNA表达水平（P＜0．05）;MTT检测结果显示,TLR4－shRNA转染组在常规培养48、72 h的OD值均明显低于空白对照组和NC对照组（P＜0．05）,而NC对照组的OD值在72 h时明显低于空白对照组（P＜0．05）。结论：TLR4对牙周膜细胞的增殖有一定调控作用,转染慢病毒后该作用增强。     

炎症人牙髓组织渗出液中IL-8含量的检测

目的：检测人正常和炎症牙髓组织渗出液中ＩＬ－８的含量,揭示ＩＬ－８与牙髓炎的关系。方法：用滤纸条浸润法采集正常和临床诊断为急性或慢性牙髓炎患牙牙髓组织渗出液。用ＥＬＩＳＡ方法检测其ＩＬ－８含量。结果：正常牙髓组织渗出液中检测不到ＩＬ－８,而炎症牙髓组织渗出液中均有较高水平的ＩＬ－８（０．３３～１．０μｇ／Ｌ）,且在急性牙髓炎中的水平高于慢性牙髓炎（Ｐ〈０．０１）。结论：ＩＬ－８参与了牙髓炎的发生和     

人正常或炎症牙髓组织中炎症信号细胞间黏附分子-1表达的研究

目的：研究人正常、慢性牙髓炎、急性牙髓炎牙髓组织中细胞间黏附分子-1免疫定位，探讨其在牙髓炎症机制中的作用和意义。方法：采用免疫组化（ABC）法对成人正常牙髓、慢性牙髓炎、急性牙髓炎牙髓中的细胞间黏附分子-1进行免疫定位。结果：细胞间黏附分子-1在3组牙髓组织中均有表达。其分布为：正常牙髓组织中少许血管内皮细胞呈较弱的阳性反应；慢性牙髓炎牙髓组织中较多的血管内皮有较强的阳性染色；急性牙髓炎牙髓组织中很多血管内皮染色呈强阳性。其中急性牙髓炎组染色强度与慢性牙髓炎组、正常组之间细胞间黏附分子-1的表达有显著差异；慢性牙髓炎组与正常组之间细胞间黏附分子-1的表达也有显著差异。结论：①人牙髓组织中血管内皮细胞膜表达细胞间黏附分子-1。②炎症组与正常组之间细胞间黏附分子-1的表达有显著性差异。③细胞间黏附分子-1可能参与介导牙髓炎症过程，在炎症机制中发挥重要作用。