PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CD4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化。结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P<0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P>0.05);进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+Treg的表达,发现pdcd4-/-小鼠CD25+Foxp3+Treg比例明显上调(P<0.05)。结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+Foxp3+Treg比例升高,提示PDCD4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用。而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用。     

n⁃3多不饱和脂肪酸对NOD小鼠T细胞的免疫调节作用

目的：探讨n?3多不饱和脂肪酸（n?3 poly unsaturated fatty acid,n?3 PUFA）对NOD小鼠T细胞免疫学功能的影响。 方法： 野生型Balb/c小鼠和已出现典型的Ⅰ型糖尿病症状的NOD小鼠脾 细胞,磁珠分选后获得小鼠CD4+ T细胞,将其分 为4组：野生型 鼠为Wild type组;NOD小鼠分为未处理组、二十二碳六烯 （docosahexaenoic acid,DHA）处理组、二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）处理组。DHA、EPA处理24h,PMA和Ionomycin刺激活化后,采用CCK?8法检测T细胞增殖 流式细胞仪检测Th1/Th2极化、ELISA法检测T细胞细胞因子的分 水平变化。结果：DHA、EPA对T细胞增殖具有显著抑制作用,促 NOD小鼠Th2细胞分化,抑制Th1细胞分化,经ELISA检测,DHA EP 能够抑制T细胞IL?6、IL?17的分泌。结论：n?3多不 饱和脂肪酸 过抑制T细胞增殖,平衡Th1/Th2比例和抑制IL?6、IL?17的分泌对NOD小鼠的T淋巴细胞起到免疫抑制作用。     

支架蛋白JLP调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖

目的 对支架蛋白JLP在小鼠B细胞上CD40诱导信号通路活化及细胞增殖中的作用进行研究,探索支架蛋白JLP在CD40诱导小鼠B细胞信号通路及后续生物学效应中的作用.方法 磁珠分选法分选出jlp野生型和jlp基因敲除小鼠模型脾脏B细胞,使用免疫印迹法检测在接受CD40配体（CD40L）刺激后jlp野生型和jlp基因敲除型小鼠脾脏B细胞p38、Erk和Jnk MAPK,磷酸化c-Jun以及NF-κB信号通路及的活化情况,并使用CFSE检测两种基因型小鼠B细胞在接受CD40L刺激后细胞增殖情况.结果 jlp基因敲除小鼠B细胞在受到CD40L刺激后其p38、Erk、Jnk MAPK信号通路以及c-Jun活化情况均较jlp野生型小鼠B细胞明显减弱,而NF-κB信号通路的激活情况在两种基因型B细胞中并无明显差异,jlp基因敲除小鼠B细胞中CD40诱导的细胞增殖水平较jlp野生型B细胞明显降低.结论 支架蛋白JLP参与调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖.     

脂多糖对部分神经胶质细胞NgR表达的实验研究

目的:观察脂多糖诱导早产鼠小胶质细胞和少突胶质前体细胞NgR的表达及变化,了解NgR表达在TLR-4介导的神经胶质细胞释放炎性细胞因子中的作用。方法:采用振荡和差速贴壁法体外纯化培养MG和OPCs,分别用特异性抗体CD11b和O4做细胞鉴定;用实时荧光定量PCR检测各组MG、OPCs的NgR和MG的TLR-4基因表达情况,并用ELISA测各组TNF-α的含量。结果:LPS诱导后较其他对照组及处理组MG的TLR-4表达水平和MG、OPCs的NgR表达水平均增高,差异具有统计学意义(P<0.05),各组MG经LPS诱导后较其对照组及处理组的TNF-α的含量增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:细菌感染使MG和OPCs的NgR表达增高;脂多糖诱导小胶质细胞表达大量TLR-4需要NgR的介导;TLR-4可能存在上调NgR基因表达的作用。     

炎症诱导性早产小鼠血淋巴细胞CD86和CD69分析

目的 分析小鼠血共刺激分子CD86和各淋巴细胞亚群活化分子CD69的表达,探讨Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱发的早产中的作用。方法 在预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射LPS建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算各组(LPS组、抗TLR4组和对照组)的早产率和死胎率。应用流式细胞仪检测血CD45+CD86+、CD3+CD69+、CD19+CD69+和CD49b+CD69+细胞的百分率。结果 LPS组的早产率\[50.0%(8/16)\]和死胎率\[11.0%(9/82)\]均高于对照组\[0(0/16),3.1%(5/163),P<0.01或P<0.05\],抗TLR4组的早产率\[6.3%(1/16)\]和死胎率\[3.9%(6/154)\]均低于LPS组(P<0.01或P<0.05)。预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的血CD45+CD86+、CD3+CD69+和CD49b+CD69+细胞水平的升高(P均<0.01)。结论 LPS与其特异性受体TLR4作用,触发CD86+树突状细胞的活化和动员,导致T细胞和NK细胞等淋巴细胞亚群的激活,在早产的发生中具有重要作用。     

激活后γδT细胞迅速增殖分子机制的初步研究

目的通过比较分析初始γδT细胞和初始CD4^＋T细胞激活后增殖动力学,以深入了解γδT细胞增殖特点以及相关分子机制。方法应用流式细胞技术分离技术分选出初始γδT细胞和初始CD4^＋T细胞。在此基础之上,用[^3H]掺入法检测不同别量的anti—CD3刺激培养48h后细胞增殖的情况,并进行NIA15K高密度基因芯片分析差异表这基因。结果在经anti—CD3刺激后,初始γδT细胞比初始CD4^＋T细胞更快速地被激活增殖。细胞激活后,DNA芯片分析显示出γδT细胞比CD4^＋T细胞表达明显更高水平的细胞增殖相关基因。其后,通过定量RT—PCR检测c—Myc基因表达情况,得到与基因芯片分析相同的结果。结论这些细胞增殖相关基因为γδT细胞早期激活增殖的力学特性提供了分子基础。     

CD137信号下调乳腺癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制功能

目的探讨CD137信号对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）的生物学效应及机制。方法采用激发型抗人CD137单抗加入PHA刺激的乳腺癌患者外周血T细胞培养体系及Treg细胞培养体系中,利用细胞计数及^3H-TdR掺入法分析T细胞的增殖,流式细胞术分析细胞膜分子和Foxp3表达,ELISA分析细胞因子的分泌。结果CD137分子表达于乳腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞膜;抗人CD137单抗加入PHA活化的乳腺癌患者T细胞培养体系后,T细胞增殖明显增加,Foxp3^＋Treg细胞比例明显下降;激发CD137信号可下调CD4^＋CD25^＋Treg细胞的Foxp3表达,抑制Treg细胞产生TGF-β1和IL-10,以及下调Treg细胞对PHA刺激的CD4^＋CD25^-T细胞增殖的抑制效应。结论CD137信号可抑制Treg细胞的免疫抑制功能,CD137可能是对Treg细胞进行免疫干预的重要靶点。     

多巴胺D1样受体在介导调节CD4^＋T淋巴细胞功能中的作用

目的：从分子水平揭示CD4^＋ T淋巴细胞表达D1受体和D5受体mRNA的现象,探讨这些受体在调节CD4^＋ T淋巴细胞功能中的作用.方法：采用免疫磁珠分离和纯化小鼠淋巴结CD4^＋ T淋巴细胞.用抗CD3/CD28抗体刺激活化CD4^＋ T淋巴细胞,并用D1样受体激动剂SKF38393、拮抗剂SCH23390分别作用于CD4^＋ T淋巴细胞,然后采用real-time PCR法检测CD4^＋ T淋巴细胞上D1受体和D5受体mRNA的表达,Th1细胞特异性转录因子（T-box expressed in T cells,T-bet）和细胞因子干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,Th2细胞特异性转录因子GATA binding protein 3（GATA 3）和细胞因子白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的表达,Th17细胞特异性转录因子（retinoid acid-related orphan receptor gammat,RoR γt）和细胞因子IL-17、IL-22的表达.结果：D1样受体激动剂SKF38393（10^-8和10^-7 mol/L）作用于CD4^＋ T淋巴细胞后,CD4^＋ T淋巴细胞表达D1样受体mRNA增高,IFN-γ的表达降低,GATA 3、IL-4的表达增高,但T-bet、RoR γt、IL-17和IL-22的表达没有变化,SCH23390（10^-7 mol/L）能阻断SKF38393的这些作用.结论：CD4^＋ T淋巴细胞能表达多巴胺D1样受体,CD4^＋ T淋巴细胞上D1样受体的激活可促进CD4^＋ T淋巴细胞向Th2细胞分化、抑制Th1细胞功能及增强Th2细胞功能.     

CD28抗体协同表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞刺激自身T细胞增殖和活化

目的 探讨表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的甲状腺细胞如何发挥抗原递呈功能.方法 分离表达MHCⅡ类分子的转基因鼠和对照小鼠的甲状腺细胞,免疫磁珠方法分离其自身T细胞,在体外共同培养,并加入抗CD28抗体.免疫荧光染色,流式细胞分析检测T细胞的增殖和活化.ELISA方法检测培养上清的细胞因子浓度.结果 单纯表达MHC Ⅱ类分子的转基因小鼠甲状腺细胞不能刺激自身T细胞的增殖和活化,然而当加入抗CD28抗体后,表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞能刺激自身T细胞的增殖、活化及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的分泌,而T细胞对野生型小鼠的甲状腺细胞无反应.结论 加入协同刺激信号后,表达MHCⅡ类分子的甲状腺细胞也可刺激T细胞增殖活化及分泌细胞因子,具有递呈抗原的能力.     

子宫内膜异位症患者RBP4与ENA-78的含量变化

目的探讨子宫内膜异位症(EMS)患者腹腔液及血清中视黄醇结合蛋白4(RBP4)和中性粒细胞激活肽-78(ENA-78)的含量变化及其与EMS发病的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测86例EMS患者和36例因卵巢囊肿或浆膜下子宫肌瘤手术患者腹腔液及血清RBP4和ENA-78含量并进行分析。结果 EMS组患者腹腔液中RBP4、ENA-78的含量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Ⅲ、Ⅳ期EMS患者腹腔液及血清中RBP4的含量较Ⅰ、Ⅱ期患者明显升高,差异也有统计学意义(P<0.01);Ⅲ、Ⅳ期EMS患者腹腔液及血清中ENA-78的含量较Ⅰ、Ⅱ期患者升高,差异有统计学意义(P<0.05)。同时EMS组患者RBP4与ENA-78的含量之间存在正相关(r=0.72,P<0.01)。结论 EMS患者腹腔中高含量的RBP4与ENA-78,可能对EMS发病有影响;EMS患者腹腔液与血清中RBP4和ENA-78含量变化且与EMS关系密切。     

胶质瘤患者T淋巴细胞表面CTLA-4的表达及其临床意义

目的: 探讨胶质瘤患者外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达与胶质瘤WHO分级及手术的关系,阐明CTLA-4的临床意义。方法: 选择本院胶质瘤患者60例作为胶质瘤组,健康志愿者46名作为健康对照组。流式细胞术检测胶质瘤组和健康对照组研究对象外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达,分析其与胶质瘤WHO分级及手术的关系。结果: 胶质瘤组患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平明显高于对照组(P<0.01);Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平最高,Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅲ级胶质瘤(P<0.01),Ⅲ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅱ级胶质瘤(P<0.01);术后胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平低于术前(P<0.01)。结论: 胶质瘤患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的升高而升高,并在胶质瘤发生发展过程中发挥促进作用。     

紫癜性肾炎患儿肾组织podocalyxin的表达及其与尿足细胞数的相关分析(英文)

目的:分析肾脏足细胞特异蛋白podocalyxin(PCX)的表达和尿足细胞数在紫癜性肾炎(Henoch-Schnlein purpura nephritis,HSPN)病理进展过程中的变化。方法:56例HSPN患儿为病例组,根据肾脏病理改变分为4组:HSPN Ⅱ(Ⅱa+Ⅱb)级组(n=10),Ⅲ(Ⅲa+Ⅲb)级组(n=21),Ⅳ级组(n=16)和Ⅴ级组(n=9);另取非肾脏疾病死亡病例尸检切取的肾脏标本4例作为正常肾组织对照组;同时收集8例健康儿童的晨尿作正常尿液对照组。应用免疫荧光方法检测PCX在4例正常肾组织及56例HSPN肾组织中的表达,并对其结果进行定量分析;同时检测8例健康儿童及56例HSPN患儿尿足细胞阳性的发生率和尿足细胞数。结果:在正常对照组和HSPN Ⅱ(Ⅱa+Ⅱb)级组的肾组织中,PCX表达完整,2组之间肾组织PCX阳性面积占肾小球面积的百分比差异无统计学意义(P>0.05);在HSPN Ⅲ(Ⅲa+Ⅲb)级﹑Ⅳ级和Ⅴ级组的肾组织中,PCX表达均有不同程度缺失,从Ⅲ(Ⅲa+Ⅲb)~Ⅴ级其表达依次下降,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01);病理分级在Ⅲ(Ⅲa+Ⅲb)级以上的HSPN,尿中有PCX的阳性表达,提示尿中有足细胞存在;肾组织PCX荧光阳性面积占肾小球的百分比与尿中足细胞数呈负相关(r=-0.637,P<0.01)。结论:足细胞损伤在儿童HSPN病理进展中发挥一定作用;可以在一定程度上反映HSPN的病理损伤程度。     

慢性心力衰竭患者外周血中Th17及Treg细胞的检测及意义

目的  探讨慢性心力衰竭(CHF)患者外周血中Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的变化及意义。方法  49例CHF患者按照NYHA心功能分级分为CHF1组(NYHA心功能Ⅰ～Ⅱ级,n=21)和CHF2组(NYHA心功能Ⅲ～Ⅳ级,n=28)。18例健康体检者作为对照组。采用流式细胞分析法检测外周血中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例。结果  CHF1组和CHF2组患者外周血中Th17/CD4+T细胞的比例明显高于对照组(P均<0.01),CHF2组亦明显高于CHF1组(P<0.01);CHF1组和CHF2组患者外周血中Treg/CD4+T细胞的比例明显低于对照组(P均<0.01),CHF2组亦明显低于CHF1组(P<0.05);Th17/Treg的比值随心功能的减低而增高(P<0.01)。结论  CHF患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与心功能有一定关系,Th17/Treg失衡可能参与了CHF的发生发展。     

IgG4相关性疾病(IgG4-RD)发病机制的研究进展

 IgG4 相关性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)是以多发脏器肿大、血清IgG4升高为特点的一类自身免疫性疾病,发病机制仍不明确。病原体感染导致抗原呈递细胞表面模式识别受体激活,通过抗原呈递促进CD4+T细胞激活,分化为Th1、Th2、Treg和Tfh细胞,产生一系列T细胞因子,进一步促进B细胞活化并转化为浆细胞,产生IgG4。而巨噬细胞和Treg细胞产生的转化生长因子β (transforming growth factor β,TGF-β)和血小板源性生长因子等进一步促进了纤维化的发生。以上细胞因子和免疫细胞参与IgG4-RD发病,为今后的治疗策略提供了新的思路。     

T细胞亚群、中性淋巴比值与肺癌病理分型及非小细胞肺癌临床分期的相关性分析

目的 分析外周血T细胞亚群、中性淋巴比值(NLR)与肺癌病理分型及非小细胞肺癌临床分期之间的关系.方法 采用流式细胞术测定60例肺癌患者T细胞亚群比例,血样分析测定NLR.结果 肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌患者的CD4+T淋巴细胞比例、CD8+T淋巴细胞比例、CD4+/CD8+、NLR差异无统计学意义.晚期组(Ⅲ~Ⅳ期)非小细胞肺癌患者的CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+较早期组(Ⅰ~Ⅱ期)低,差异有统计学意义(P<0.05).晚期组(Ⅲ~Ⅳ期)非小细胞肺癌患者的CD8+T淋巴细胞比例、NLR较早期组(Ⅰ~Ⅱ期)高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 非小细胞肺癌患者的外周血T细胞亚群、NLR与非小细胞肺癌的临床分期具有一定相关性,可作为临床分期的参考指标.     

成人微小病变肾病患者外周血CD4~＋Foxp3~＋调节性T细胞的研究

目的研究CD4＋Foxp3＋调节性T细胞（CD4＋Foxp3＋Treg）及亚群在成人微小病变肾病（MCD）患者外周血CD4＋T细胞中的分布,探讨CD4＋Foxp3＋Treg参与MCD发病的可能机制。方法以27例经肾穿刺活检确诊为MCD的初发成人患者作为研究对象,采用Foxp3-FITC/CD45RA-PE/CD3-ECD/CD4-PC7抗体组合经流式细胞仪检测外周血单个核细胞（PBMCs）中CD4＋Foxp3＋Treg及亚群占CD4＋T细胞的百分比。Real-Time PCR检测PBMCs中Foxp3、Th17转录因子RORc以及细胞因子TGF-β1、IL-6、IL-17A、IL-23mRNA表达。设立正常对照。结果流式细胞检测显示CD4＋Foxp3＋Treg分成3个细胞群体,分别为CD45RA＋Foxp3low（Ⅰ区,静息期Treg）、CD45RA-Foxp3high（Ⅱ区,活化Treg）和CD45RA-Foxp3low（Ⅲ区）。MCD组Ⅰ区＋Ⅱ区细胞和Ⅱ区细胞占CD4＋T细胞的百分比显著低于对照组（P〈0.01）。MCD组PBMCs中Foxp3mRNA表达较对照组下调（P〈0.05）,RORcmRNA表达较对照组上调（P〈0.05）,IL-6、IL-17A、IL-23mRNA表达均显著高于对照组（P〈0.05和P〈0.01）。相关性分析显示,MCD组IL-17A mRNA表达与Ⅱ区细胞占CD4＋T细胞的百分比呈显著负相关（r=-0.81,P〈0.05）。结论成人MCD患者外周血Treg及其活化功能亚群减少,同时伴有Th17转录基因及其相关细胞因子表达的异常升高。提示Treg Foxp3 mRNA表达下调及Treg/Th17细胞比例失衡可能与MCD的发病有关。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

Th17细胞相关因子在人脑胶质瘤中的测定

目的了解Th17细胞相关因子在人脑胶质瘤组织中的表达,确定Th17的存在及浸润程度。方法应用免疫组化二步法检测Th17细胞相关因子CD4+和IL-17在34例脑胶质瘤和10例正常脑组织病理切片中的表达,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)技术,检测IL-17mRNA、RORγtmRNA在人脑胶质瘤组织中的表达量。结果 IL-17、CD4+在正常脑组织表达不明显,在低级别脑胶质瘤中表达较少,CD4+和IL-17在高级别脑胶质瘤中表达明显,组间比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。IL-17mRNA和RORγt mRNA在正常脑组织、低级别、高级别脑胶质瘤中的表达量随恶性程度升高而增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论脑胶质瘤中存在Th17的浸润,其表达量随脑胶质瘤恶性程度的升高而增加。     

慢性心力衰竭患者Th17／Treg失衡的研究及其意义

目的探讨慢性心力衰竭（CHF）患者外周血Th17／Treg的失衡及意义。方法采用流式细胞分析法,检测71例CHF患者（CHF组）和27例正常对照者（对照组）外周血Th17、CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例。结果CHF患者外周血Th17细胞比例显著高于对照组,且心功能NYHA分级Ⅲ-Ⅳ级者比例明显高于I-Ⅱ级者。CHF患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例显著低于对照组,且心功能NYHA分级Ⅲ-Ⅳ级者比例明显低于I-Ⅱ级者。结论CHF患者外周血Th17细胞比例增加,CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例下降,Th17／Treg失衡可能参与了心力衰竭的发生发展。