Flavopiridol诱导耐阿霉素尤文肉瘤细胞株VH-64/ADR 凋亡及作用机制的研究

目的:探讨细胞周期蛋白酶抑制剂flavopiridol(FP)对耐阿霉素尤文肉瘤细胞增殖抑制及凋亡诱导的作用机制.方法:采用MTT法测定阿霉素(ADM)及falvopiridol对VH-64/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50),计算耐药倍数;流式细胞计数仪(FCM)检测falvopiridol给药后VH-64/ADR细胞周期的变化;Western-blotting方法检测细胞中Bcl-2、pro-caspase-3、活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达.结果:flavopiridol可抑制尤文肉瘤耐阿霉素细胞株VH/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度相关性(P<0.05).flavopiridol给药后,耐药细胞株VH-64/ADR的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);bcl-2、pro-casepase-3表达下调,而活性型PARP表达上调. 结论:FP可有效诱导VH-64/ADR细胞发生凋亡,其机制可能与线粒体信号传导途径有关.     

Flavopiridol诱导耐阿霉素尤文肉瘤细胞株VH-64／ADR凋亡及作用机制的研究

目的：探讨细胞周期蛋白酶抑制剂flavopiridol（FP）对耐阿霉素尤文肉瘤细胞增殖抑制及凋亡诱导的作用机制。方法：采用MTT法测定阿霉素（ADM）及falvopifidol对VH-54／ADR细胞的半数抑制浓度（IC50）,计算耐药倍数;流式细胞计数仪（FCM）检测falvopiridol给药后VH-64／ADR细胞周期的变化;Western—blotting方法检测细胞中Bcl-2、pro—caspase-3、活化型多聚ADP核糖多聚酶（PARP-85）蛋白的表达。结果：flavopiridol可抑制尤文肉瘤耐阿霉素细胞株VH／ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度相关性（P〈0．05）。flavopiridol给药后,耐药细胞株VH-54／ADR的细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0．05）;bcl-2、pro—casepase-3表达下调,而活性型PARP表达上调。结论：FP可有效诱导VH-64／ADR细胞发生凋亡,其机制可能与线粒体信号传导途径有关。     

曲古抑菌素A通过p53转录激活途径诱导尤文肉瘤细胞凋亡

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制.方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）测定细胞增殖抑制率.流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化.免疫印迹法（Western-blot）检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶（cleaved-PARP）,p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达.实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响.结果：TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加.TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平.另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生.结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡.     

细胞周期蛋白激酶抑制剂诱导尤文肉瘤细胞凋亡作用的机制

目的探讨小分子细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol（FP）尤文肉瘤细胞株RD-ES凋亡诱导作用及其调控机制。方法FP作用RD-ES细胞后，光学显微镜观察其形态变化，MTT法测定FP对细胞增殖的抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测bcl-2，bax，mcl-l和caspase-8的蛋白表达变化。结果MTT实验显示FP对尤文肉瘤RD-ES细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，流式细胞计数分析表明FP可诱导细胞凋亡，免疫印迹检测显示FP对bcl-2及bax的表达无影响，但细胞凋亡抑制基因mcl-1活性型caspase-8的表达被上调。结论FP可诱导尤文肉瘤细胞株凋亡，其作用不依赖于bcl-2基因的变化，mcl-1基因表达的抑制及caspase-8路径的激活可能为其机制之一。     

丹参酮Ⅰ抗肿瘤作用及作用机制的实验研究

目的通过丹参酮Ⅰ(tanshinone Ⅰ)对肿瘤细胞的体内外实验研究,探讨丹参酮Ⅰ抗肿瘤作用及作用机制.方法人肝癌细胞(HepG2)培养液中加入不同浓度的丹参酮Ⅰ,培养72小时,观察HepG2细胞的增殖率;倒置显微镜下观察HepG2细胞的形态变化;流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞周期及凋亡率;免疫组化检测HepG2细胞的增殖凋亡调控相关基因(Bax、Bcl-2)的蛋白表达.用HepG2细胞制作Balb/c裸鼠荷瘤模型,每天腹腔注射丹参酮Ⅰ 1次连续10天,观察抑瘤率.结果丹参酮Ⅰ抑制HepG2细胞生长;阻滞HepG2细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡;通过下调Bcl-2基因表达(P＜0.01),上调Bax基因表达(P＜0.01)诱导HepG2细胞凋亡;抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长,抑瘤率为33.3%.结论丹参酮Ⅰ具有抗肿瘤活性,其作用机制之一是诱导细胞凋亡.     

重组人p53腺病毒逆转非小细胞肺癌顺铂耐药的体外研究

目的 为重组人p53腺病毒应用于临床非小细胞肺癌顺铂耐药患者提供实验依据.方法 采用CCK-8试剂检测半数抑制浓度(IC50);应用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡发生率;采用功能分类基因芯片检测药物作用前后的基因变化.结果 顺铂联合重组人p53腺病毒后,H1299细胞顺铂的半数抑制浓度下降至5 μg/mL(P<0.05),细胞的凋亡率上升为10.73%(P<0.05).重组人p53腺病毒单药作用后,H1299细胞内p53基因大量表达.在两药联合作用下,导入的p53基因激活了由Fas/Apo-1/CD95系统、TNFR超家族、Bcl-2/Bax等所介导的凋亡通路,同时也上调了部分细胞周期调控基凶.结论 重组人p53腺病毒介导的基因治疗有希望成为治疗临床非小细胞肺癌顺铂耐药患者的一种有效的辅助手段.     

丹参酮I抗肿瘤作用及作用机制的实验研究

目的　通过丹参酮 I(tanshinone I)对肿瘤细胞的体内外实验研究 ,探讨丹参酮 I抗肿瘤作用及作用机制。方法　人肝癌细胞 (Hep G2 )培养液中加入不同浓度的丹参酮 I,培养 72小时 ,观察 Hep G2细胞的增殖率 ;倒置显微镜下观察 Hep G2细胞的形态变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测 Hep G2细胞周期及凋亡率 ;免疫组化检测 Hep G2细胞的增殖凋亡调控相关基因 (Bax、Bcl- 2 )的蛋白表达。用 Hep G2细胞制作 Balb/c裸鼠荷瘤模型 ,每天腹腔注射丹参酮 I1次连续 10天 ,观察抑瘤率。结果　丹参酮 I抑制 Hep G2细胞生长 ;阻滞 Hep G2细胞周期于 G0 /G1 期并诱导细胞凋亡 ;通过下调 Bcl- 2基因表达 (P<0 .0 1) ,上调 Bax基因表达 (P<0 .0 1)诱导 Hep G2细胞凋亡 ;抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 ,抑瘤率为 33.3%。结论　丹参酮 I具有抗肿瘤活性 ,其作用机制之一是诱导细胞凋亡。     

上海中医药大学附属普陀医院实验中心，上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所，上海200062

背景与目的：细胞凋亡受阻是肿瘤细胞产生耐药的重要因素,从细胞凋亡的研究入手,将为肿瘤的治疗和耐药性的逆转开辟新的途径。本研究观察一种新型萘酰亚胺类衍生物8c对结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞的作用,探讨诱导HCT116/L-OHP耐药细胞凋亡的分子机制。方法：采用CCK-8法检测8c对HCT116/L-OHP细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察8c对HCT116/L-OHP细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR(realtime PCR)检测p53 mRNA、Bax mRNA及Bcl-2 mRNA水平变化;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测p-p53、Bax、Bcl-2及细胞色素c(Cyt-c)的蛋白表达水平。结果：8c抑制HCT116/L-OHP细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=8.16 μmol/L)低于阳性对照氨奈菲特(IC₅₀=28.37 μmol/L);药物作用后,8c诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡通路中p53(Ser15)磷酸化水平上升,但p53 mRNA水平不受影响;Bax蛋白水平及mRNA水平明显上升,Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时8c又引起细胞色素c的释放。结论：8c通过磷酸化p53 Ser-15位点激活p53,随即激活细胞凋亡通路相关蛋白的表达,这可能是8c抑制结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞增殖的重要机制之一。8c具有良好的抗肿瘤及抗耐药潜力和开发应用前景。     

5-氟尿嘧啶联合米非司酮对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:体外研究5-氟尿嘧啶(5-fluororacil,5-Fu)联合米非司酮(mifepristone,MIF)对人宫颈癌SiHa细胞株的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法:体外培养人宫颈鳞癌SiHa细胞株,采用MTT法检测不同浓度MIF、5-Fu单药以及两药联合作用对SiHa细胞增殖率的影响;采用FCM分析两药合用对SiHa细胞凋亡率及细胞周期分布影响;蛋白质印迹法检测药物处理后SiHa细胞中p53、Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:不同浓度5-Fu和MIF单药对SiHa细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。5-Fu联合MIF作用于SiHa细胞可增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制(P<0.05),且对MIF的作用浓度呈剂量依赖作用;蛋白质印迹法检测结果显示,联合用药组能使p53和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性。结论:MIF能增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达有关。     

MicroRNA let - 7f 对胃癌细胞株 SGC7901 / ADR 耐药性的影响

目的：通过检测胃癌细胞株SGC7901及其阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中microRNA let-7f的表达差异,探讨let-7f表达与胃癌细胞对ADR耐药的关系.方法：通过实时荧光定量PCR比较SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞中 let-7f表达水平的差异;MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况.结果：qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低（ P＜0.05）.MTT法结果显示SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（0.95 ±0.08）g/L和（5.40 ±0.28）g/L.SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后,let-7f表达显著上调,并且对阿霉素的IC50明显降低（ P＜0.05）.凋亡检测结果显示,转染let-7f mimic后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加（ P＜0.05）.Western Blot结果表明相较于转染let-7f negative control（NC）组,转染let-7f mimic组cleaved-Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而两组中的Bcl-2表达水平无差异.结论：let-7f在胃癌阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中的表达显著降低,逆转let-7f表达可增加其对阿霉素敏感性,并诱导其凋亡.     

中国乳腺癌患者生活质量研究进展

生活质量（qualityoflife,QOL）又译作生命质量、生存质量,它是在世界卫生组织提倡的健康新概念“人们在躯体上、精神上及社会生活中处于一种完好的状态,而不仅仅是没有患病和衰弱”的基础上构建的,是医学模式由生物医学模式向生物一心理一社会医学模式转变的体现。西方发达国家已将此概念广泛应用于临床试验、卫生政策制定和卫生资源效益评价等众多领域。生存质量已作为评价肿瘤患者术后状况的首选指标。     

外泌体在肿瘤发展中的研究进展

外泌体是细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的细胞外纳米级小囊泡。外泌体可以携带蛋白,运送RNA,在细胞间物质和信息转导中起重要作用。外泌体可能通过调控免疫功能,促进肿瘤血管新生和肿瘤转移,以及直接作用于肿瘤细胞等途径,影响肿瘤的进展。外泌体可应用于肿瘤的诊断。本文总结了近年来有关外泌体在肿瘤发展中作用的研究进展。     

Inhibitory effect of suramin in rat models of angiogenesis in vitro and in vivo

The aim of the present study was to test the ability of the chemotherapeutic agent suramin to inhibit angiogenesis in experimental models in vitro and in vivo. In the culture of rat aortic rings on fibronectin, suramin dose-dependently inhibited vascular cell growth, achieving the maximal effect (mean − 88% versus controls, P < 0.05) at 400 μg/ml. Image analysis showed that suramin could inhibit microvessel sprouting in fibrin from rat aortic rings as evaluated by the ratio between the cellular area and the mean gray value of the sample (sprouting index); suramin at 50 μg/ml significantly reduced the sprouting index from the control value of 0.35 ± 0.04 to 0.14 ± 0.02 mm²/gray level (P < 0.05). Likewise, the area occupied by cells was 19.2 ± 1.8 mm² as compared with 41.8 ± 4.2 mm² in controls (P < 0.05). In the rat model of neovascularization induced in the cornea by chemical injury, suramin at 1.6 mg/eye per day reduced the length of blood vessels (0.7 ± 0.1 mm as compared with 1.5 ± 0.1 mm in controls, P < 0.05). In the same model the ratio between the area of blood vessels and the total area of the cornea (area fraction score) was decreased by suramin from 0.19 ± 0.02 in controls to 0.03 ± 0.003 (P < 0.05). Suramin given i.p. at 30 mg/kg per day markedly inhibited the neovascularization induced in the rat mesentery by compound 48/80 or conditioned medium from cells secreting the angiogenic protein fibroblast growth factor-3 (FGF-3). The area fraction score in control rats treated with compound 48/80 was 0.31 ± 0.03, and this was reduced to 0.07 ± 0.01 by suramin (P < 0.05). After i.p. administration of FGF-3 the area fraction score was reduced by suramin from 0.29 ± 0.03 to 0.05 ± 0.01 (P < 0.05). These results provide evidence that suramin exerts inhibitory effects on angiogenesis in both in vitro and in vivo models. Received: 9 January 1998 / Accepted: 29 June 1998     

Dicer在肿瘤中的研究进展

Dicer是miRNA剪切成熟的关键酶,在肿瘤中扮演单倍体不足抑癌基因的角色.Dicer基因突变携带者易发生家族性肺胸膜母细胞瘤;Dicer在各种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,基因低表达肿瘤更常表现出恶性程度高和预后差的特点;同时也能介导对药物治疗的敏感性;另外Dicer与miRNA之间复杂的调控体系是其参与肿瘤发生发展的根本所在,可为肿瘤的靶向治疗提供研究基础.     

The role of ultrasonography in diagnosis of cryptorchidism in children

Complex preoperative ultrasonic investigation of the inguinoscrotal area and abdominal cavity was made in 265 patients with cryptorchidism aged 1 to 14 years. The data of this investigation allowed development of an original technique of differential diagnosis of testicular retention and ectopy. Informative value of ultrasonic investigation in diagnosis of testicular ectopy and retention reached 100%. Examination of 44 children with unpalpable testes diagnosed abdominal cryptorchidism in 42 (65.6%) patients. In 10 (15.6%) patients testicular visualization failed. Testicular aplasia was diagnosed in 12 (18.8%) patients. Assessment of morphofunctional condition of the retained gonade showed that all the children had deficiency of testicular volume and abnormal intratesticular blood circulation.     

Role of MutSalpha in the recognition of iododeoxyuridine in DNA

We have previously demonstrated that both the MLH1 and MSH2 status impact the DNA levels of the halogenated thymidine (dThd) analogues iododeoxyuridine (IdUrd) and bromodeoxyuridine (BrdUrd), and thereby radiosensitization induced by these analogues, indirectly implicating both mismatch repair (MMR) proteins in the removal of these bases from DNA. More recent data from our group demonstrate that base excision repair (BER) also impacts IdUrd-DNA levels, supporting a role for the BER pathway in IdUrd removal as well. In this study, we have examined more direct interactions between the MSH2 protein and the processing of IdUrd incorporated in DNA. Our data demonstrate that the MutSalpha (MSH2/MSH6) complex binds specifically to DNA containing an IdUrd-G mismatch, using both purified human MutSalpha as well as nuclear extracts from Msh2-proficient and-deficient mouse cell lines. MutSalpha binding to a IdUrd-G is better recognized than a G-T mismatch in the same sequence context. In addition, MSH2 protein can be found colocalized with IdUrd-DNA using confocal microscopy in G(1) synchronized cells after treatment with IdUrd. Consistent with our recent publication, coadministration of IdUrd and a chemical inhibitor of BER, methoxyamine (MX), also increases the extent of MSH2 nuclear colocalization with IdUrd. Furthermore, we show that the extent of MSH2 colocalization with IdUrd in G(1)-synchronized human tumor cells varies with MLH1 status, suggesting a role for the MLH1 protein in stabilizing the interaction between the MSH2 protein and DNA containing IdUrd. These data, both in vitro and in vivo, suggest direct involvement of MSH2 in processing IdUrd in DNA.