日本血吸虫31／32kDa纯化诊断抗原现场应用研究

为了解洪灾后日本血吸虫病的流行情况,探讨日本血吸虫３１／３２ ｋＤａ纯化诊断抗原（Ｓｊ３１／３２）现场应用的价值,我们于 １９９８年 ９～１２月,应用 Ｓｊ３１／３２对流行区赤壁镇进行了人群日本血吸虫感染状况的调查。 材料和方法１检测对象 遭受洪灾的日本血吸虫病疫区的湖北赤壁镇八把刀村１、２组常住居民,共３４５人,其中,男性１８９人,女性 １５６人,年龄 ３～７０岁。抽取被检者静脉血５ ｍｌ,分离血清,低温冰箱保存备检,同时留取粪便作虫卵检查。２ Ｓｊ３１／３２诊断抗原的抽提和初步纯化 利用制备型 ＳＤＳ－…     

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。     

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。     

日本血吸虫成虫38kDa天然分子抗原的分离纯化与免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫成虫可溶性抗原38kDa（SjAWA38kDa）的动物保护作用，并对SjAWA38kDa作为抗日本血吸虫病分子疫苗的可行性进行评估。方法用SDS-PAGE电泳、切胶、电洗脱、超滤等方法分离纯化SjAWA38kDa．继而用SjAWA38kDa免疫昆明小鼠，然后进行尾蚴攻击感染（40尾／只），进行减虫率和减卵率研究。结果SjAWA38kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用，其减虫率为33．8％，减卵率为51．7％，有统计学意义（P〈0．05）。结论SjAWA38kDa分子抗原具有刺激机体产生抗日本血吸虫病的免疫保护作用，可以作为抗日本血吸虫病分子疫苗研究的靶标。     

佐剂对日本血吸虫31／32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋＤａ蛋白辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ｐａｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２蛋白辅以福氏完全佐剂对小鼠保护性免疫力的影响。     

吡喹酮治疗对日本血吸虫31/32 kDa抗体的影响

为探讨化疗对日本血吸虫31/32kDa抗体的影响,应用纯化日本血吸虫31/32kDa抗原（Sj31/32）和可溶性虫卵抗原（SEA）对94例经吡喹酮治疗后不同时期血吸虫病患者血清抗体进行检测。结果治疗后3和6个月血清31/32kDaIgG水平分别为1.26±0.15和0.65±0.14(治疗前为2.03±0.20,P<0.01),而SEAIgG水平则分别为2.87±0.19和2.30±0.20（治疗前为3.01±0.17,P>0.05）。各年龄组治疗前后血吸虫抗体水平均随治疗进展而降低,其中儿童和青少年（3～20岁年龄组）Sj31/32IgG水平下降最快,治疗后6个月时几乎接近正常值。治疗前Sj31/32IgG与SEAIgG水平之间高度相关（r=0.90）,治疗后3和6个月两者之间的相关程度降低（r分别为0.30和0.40）。结果表明,吡喹酮治疗后患者血清中Sj31/32IgG下降较快,Sj31/32IgG似可作为一种短期抗体用于疗效考核。     

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠,同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ,肝减卵率为６７０２％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ , 肝减卵率为 ４９０３％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ , 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示, Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５）,且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达,纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达，纯化，鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ，抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ其片段长度均为６５４ｂ     

日本血吸虫可溶性尾蚴抗原早期诊断价值的研究

目的　确定日本血吸虫可溶性尾蚴抗原作为血吸虫病早期诊断检测用抗原的应用价值。方法　从感染日本血吸虫的钉螺收集尾蚴 ,制备可溶性尾蚴抗原 (SCA) ,建立应用 SCA为抗原检测家兔血清抗体的 ELISA法 ,并以此法检测 2 8只低度感染日本血吸虫家兔的感染前和感染后不同时期的血清 ,并与常规 SEA-ELISA法比较。结果　用 SCA检测时 ,感染后 15 d有 2 /2 8只家兔血清开始出现抗 SCA抗体阳性 ,2 0 d已有 2 0只阳性 ,阳性率为 71.4% ,3 0 d 2 8只全部阳性 ,阳性率为10 0 % ,而抗 SEA抗体在感染后 2 0 d开始出现 ,3 4d有 2 1只阳性 ,阳性率为 75 .0 % ,3 7d阳性率为10 0 %。平均出现抗体的时间 SCA-ELISA和 SEA-ELISA分别为 (2 1.2 5± 4.0 7) d和 (3 1.5 0±5 .12 ) d,前者比后者早 10 d。结论　用日本血吸虫可溶性尾蚴抗原检测血吸虫病具有早期诊断的价值     

日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白的纯化及在诊断中的应用

本研究以前染蛋白为指示,将制备型SDS—PAGE和电渗析技术相结合,分离、纯化日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白,用于ELISA中诊断血吸虫病。结果:纯化日本血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psj31/32)与急、慢性日本血吸虫病和曼氏血吸虫病人血清反应的阳性率分别为100％、100％和98.4％;纯化曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psm31/32)与上述病人血清反应的阳性率均为100％。与NHS和其它寄生虫病人血清反应的特异性较高。Psj31/32和Psm31/32检测同种血清,它们的OD值具有高度的正相关关系,但OD值与曼氏血吸虫病人粪便中虫卵数量(EPG)无相关关系。结果提示:两种纯化的31/32kD蛋白在血吸虫病诊断中具有较高的敏感性和特异性,并具有共同抗原决定簇存在,不仅可用于诊断急、慢性日本血吸虫病,而且Psj31/32也可作为诊断曼氏血吸虫病的候选抗原,用于我国输入性曼氏血吸虫病的诊断。     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。     

日本血吸虫病患者尿液中循环抗原和抗体联合检测的诊断价值

[目的 ]探讨尿液中血吸虫循环抗原和抗体检测对日本血吸虫病的诊断价值。 [方法 ]用单克隆抗体夹心 ELISA法检测日本血吸虫病患者尿液中循环抗原 ,间接ELISA检测尿液中特异性抗体。 [结果 ]10例急性血吸虫病和 6 1例慢性血吸虫病患者尿液中循环抗原的阳性率分别为 6 0 %和 40 % ,特异性抗体的阳性率分别为 80 %和 6 1 7%。两者联合检测的总阳性率分别为 10 0 %和 71 7%。 10 0例健康对照者尿液中仅 3%出现假阳性。 [结论 ]检测尿液中日本血吸虫循环抗原和特异性抗体简便、实用 ,为一种非损伤性的血吸虫病诊断方法。     

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.     

旋毛虫成虫抗原的免疫保护性研究

目的 比较旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。 方法 检查免疫鼠和对照鼠肠道成虫、肌幼虫和血液中的嗜酸性粒细胞数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。 结果旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原免疫组的成虫减虫率分别为84.48％、89.98％和85.16％;肌幼虫减虫率分别为69.82％、78.80％和73.94％。3种抗原免疫组小鼠血中的嗜酸性粒细胞(EOS)数明显增多,血清中IgG抗体滴度明显升高,IgG抗体的几何平均倒数滴度(GMRT)分别是未免疫组的6.96、7.99和6.06倍。 结论 旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力,且可激发特异性体液免疫和细胞免疫。成虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。     

水蛭可溶性抗原诊断日本血吸虫病的初步研究

目的　探讨水蛭可溶性抗原 (L SA)用于诊断日本血吸虫病的可能性。　方法　首先用 Western blot对 L SA与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性进行分析 ,进而对 L SA- EL ISA用于诊断慢性血吸虫病的效果作出评价。　结果　经 SDS- PAGE及 Western blot技术分析的结果表明 ,L SA的主要蛋白组分区带为 8条 ,其中分子质量为 116～ 118、72、4 5和 31ku蛋白组分可被日本血吸虫病患者血清所识别 ;用 L SA- EL ISA检测慢性血吸虫患者血清 85份 ,阳性检出率为90 .5 9% (77/ 85 )检测正常人血清 87份和其它 3种寄生虫病患者血清 5 6份 ,假阳性率分别为 4 .6 0 % (4/ 87)和 1.79% (1/5 6 )。与 SEA- EL ISA法比较 ,两者敏感性和特异性差异无显著性 (P>0 .0 5 )。　结论　日本血吸虫病患者血清中存在较多的抗 L SA抗体 ;用 L SA检测慢性血吸虫病显示出较好的敏感性和特异性 ,因而水蛭是一种值得进一步研究的血吸虫异源抗原     

慢性血吸虫病吡喹酮治疗前后血清循环抗原水平的变化

目的 观察慢性血吸虫病患者吡喹酮治疗前,后血清血吸虫肠相关趋阴极抗原（ＧＡＣＡ）水平的变化。方法 Ｋａｔｏ－Ｋａｔｚ法粪检确定慢性血吸虫病患者６４例,随机分成２组,治疗组３３例,对照组３１例,分别给予口服４０ｍｇ／ｋｇ剂量吡喹酮和安慰剂。采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）分别检测２组患者治疗前和治疗后２,８,２４ｈ和４８ｈ血清ＧＡＣＡ水平。