NAC通过抑制JNK的活性保护脊髓缺血再灌注损伤

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)在兔脊髓缺血再灌注时的作用及机制?方法:新西兰白兔随机分为3组:假手术组(5只)?缺血再灌注组(缺血前30 min给予0.9% NaCl 腹腔注射,按再灌注不同时间段分为4组,每组5只:A组再灌注0.5 h?B组再灌注2 h?C组再灌注8 h?D组再灌注24 h),NAC组(缺血再灌注30 min前应用NAC,分组同缺血再灌注组)?光镜和电镜观察各组脊髓组织标本的形态学改变,Western blot检测各组脊髓组织中JNK(c-Jun NH2-teminal Kinase)及磷酸化JNK(phosphorylation-JNK,p-JNK)的表达?结果:①光镜和电镜结果显示:缺血再灌注组中B组脊髓神经细胞开始出现早期凋亡的征像;而NAC干预组中D组才出现早期凋亡的征象;②Western blot结果显示:缺血再灌注组中p-JNK在B组中开始表达,并随缺血时间的延长而逐渐增高;而NAC干预组只在D组才被激活且活性小于缺血再灌注组;JNK的蛋白表达在两组中均无明显变化?结论:脊髓缺血再灌注可通过激活信号分子JNK(MRPKs家族)造成脊髓损伤,提前给予NAC干预可部分抑制这种损伤?     

葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤的作用。方法：20只雄性新西兰大白兔随机分成缺血组（A组,n=10）及葛根素组（B组,n=10),夹闭腹主动脉肾下段20min,建立兔脊髓腰尾段血模型,B组于夹闭前10min静脉注射葛根素30mg.kg^-1,A组则静脉注射生理盐水,测定夹闭前、后及再灌注后血浆中丙二醛（MDA）浓度及超氧化物歧化酶（SOD)活性,再灌注4,8,12,24及48h分别对动物后肢运动功能评分;再灌注48h后,处死动物,制作切片,观察其组织病理变化。结果缺血及再灌注后B组MDA值明显低于A组（P＜0．05）,而OD活性明显高于A组（P＜0．05）;再灌注后4,8,12,24及48h时的神经功能评分B组明显高于A组（P＜0．05）;光镜下,与A组相比,B组脊髓组织损伤显著减轻,形态基本正常的前角细胞较多。结论葛根素对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用。     

参附注射液对兔脊髓缺血损伤的保护作用

观察参附注射液对脊髓缺血性损伤的保护作用。方法１８只雄性新西兰大白兔,随机分为３组：Ａ组（ｎ＝６）即保护组,Ｂ组（ｎ＝６）即治疗组,Ｃ组（ｎ６）即对照组。Ａ组和Ｂ组分别于缺血前３０ｍｉｎ内或再灌注３０ｍｉｎ内持续恒速静脉输入参附注射液１０ｍＬ．ｋｇ＾－１;采用肾上主动脉阻断法造成脊髓缺血（２０ｍｉｎ）;术后观察神经功能变化并记录１,４,８,１２,２４和４８ｈ神经功能评分,４８ｈ处死动物后取脊髓（Ｌ     

丹参酮对家兔脊髓缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用

目的：观察丹参酮对家兔脊髓缺血再灌注脊髓、血清谷氨酸水平探讨丹参酮保护脊髓的作用机制。方法：选用新西兰家兔24只,采用结扎腹主动脉的方法制作脊髓缺血再灌注模型。按随机数字表法将动物分为假手术组（ n ＝4）、模型组（ n ＝10）和丹参酮组（ n＝10）。采用Zivin法改进复制模型,于造模前1h给予相应治疗。各组家兔分别于治疗前、缺血30min后再灌注0.5、1、4、8、12h的相应时间点切取脊髓,抽取下腔静脉血,检测缺血再灌注后脊髓谷氨酸、血清谷氨酸含量及对缺血再灌注4h、8h、12h,采用改良Tarlov评分标准进行神经功能评分。结果：模型组与丹参酮组家兔血清、脊髓谷氨酸含量均于脊髓缺血再灌注损伤后30min开始上升,4h后含量达顶峰,之后含量便逐渐下降,12h后大概恢复正常。丹参酮组较模型组各观测点血清、脊髓的谷氨酸含量均低。结论：丹参酮能降低家兔脊髓缺血再灌注的脊髓谷氨酸含量,对家兔的脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用。     

雌激素对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

研究雌激素对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法按随机数表字法把成年的新西兰大白兔分为A～E 5组,每组9 只。钳夹肾下腹主动脉20 min恢复再灌注;B 组,接受与A 组同样的麻醉和手术准备,但不行缺血/ 再灌注损伤;C 组,再灌注开始时从兔耳的缘静脉注射200μg/kg 雌激素;D 组,再灌注开始时从兔耳的缘静脉注射400μg/kg 雌激素;E 组,再灌注开始时从兔耳的缘静脉注射800μg/kg 雌激素。再灌注48 h后根据Tarlov 法对下肢的神经功能进行评分,然后取脊髓组织苏木素- 伊红染色法（HE）进行病理分析。结果Tarlov 评分中雌激素组的神经功能评分高于A组,与A 组比较有统计学意义（p <0.05）。组织病理表明脊髓的前角运动神经元出现凋亡,有显著坏死。A 组脊髓的前角运动神经元计数少于雌激素组,两者比较差异有统计学意义（p < 0.05）。结论雌激素可明显改善兔脊髓缺血再灌注的下肢神经功能,使脊髓的前角正常运动神经元的数量增加,减小缺血再灌注的损伤。     

改良脊髓缺血后处理对兔缺血/再灌注损伤脊髓的保护作用

目的 建立兔改良脊髓缺血后处理模型,研究缺血后处理对脊髓缺血,再灌注(I/R)损伤的作用.方法 选取48只雄性日本大耳白兔随机分为4组,每组12只,假手术对照组(s组),缺血,再灌注损伤组(C组),经典缺血后处理组(PA组),改良缺血后处理组(PB组).分别监测缺血前、再灌注时及再灌注10 min后的平均动脉压(MBP)、心率(HR)及动脉血气pH值、动脉血氧分压(Pa02)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、乳酸(Lac值);采用Tarlov法分别于术后1,3,7,28 d对兔后肢运动功能进行评分;计数脊髓前角正常神经元数;羟胺法测定脊髓组织超氧化物歧化酶(SOD)含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量.结果 各组间各个时点MAP、HR、PaO:、PaC02、Lac变化及术中体温差异均无统计学意义(P>O.05);缺血再灌注后1,3,7,28 d,PA、PB组Tarlov评分明显高于C组(P<0.05);PA、PB组正常神经元计数明显高于c组(P<0.05);C组脊髓MDA含量明显增加,SOD含量明显降低(P<0.05).结论 改良缺血后处理模型建立成功,两种缺血后处理法均可以显著减轻缺血再灌注后脊髓的神经功能损害.     

全脑缺血复灌不同时间对大鼠海马神经元损伤及JNK通路的影响

目的探讨大鼠全脑缺血和复灌不同时间对海马神经元损伤、C-Jun氨基末端激酶（JNK）表达以及JNK激活的影响。方法采用四血管法（4-vessel-occlusion,4-vo）法制作大鼠全脑缺血模型,随机将51只SD大鼠分成假手术组、缺血组和缺血再灌注组,用Western blot检测海马组织JNK的表达和P-JNK的含量。另取9只大鼠缺血10min或缺血20min后复灌7d,甲醛灌注固定后取海马组织用于组织学评价。结果JNK在全脑缺血10min表达明显增加,缺血20min时达到峰值;全脑缺血20min复灌阶段JNK在复灌6h表达明显增加并达到-高峰,复灌12h到达最高峰;P-JNK含量在全脑缺血20min后复灌1h达到高峰,复灌12h再次出现高峰。结论20min全脑缺血后JNK高表达持续时间延长,JNK激活时间更早,更为显著,表明长时间缺血时JNK通路介导的损害作用更大。     

异丙酚对大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨异丙酚不同给药时机对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制研究.方法 噻唑蓝(MTT)法检测异丙酚不同给药时机对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡的状况.RT-PCR法检测细胞中bcl-2mRNA表达.结果 ①缺氧/复氧组细胞死亡率和凋亡率与对照组相比明显增高,差异有显著性(P＜0.01).异丙酚预先和即时给药组明显降低细胞死亡率和凋亡率,差异有显著性(P＜0.01),而异丙酚延迟给药组此作用不明显,差异无显著性(P＞0.05).②缺氧/复氧后bcl-2mRNA的表达明显减少(P＜0.05),异丙酚预先和即时给药组上调bcl-2mRNA的表达,差异有显著性(P＜0.05),而异丙酚延迟给药组此作用不明显,差异无显著性(P＞0.05).结论 异丙酚预先和即时给药明显降低细胞死亡率和凋亡率,而异丙酚延迟给药此作用不明显.异丙酚预先和即时给药能上调bcl-2mRNA的表达,而异丙酚延迟给药此作用不明显.     

亚低温对脊髓缺血再灌注损伤的保护及机制的研究

目的研究亚低温对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法(1)采用腰动脉阻断法制作脊髓缺血动物模型。20只兔均分为常温和亚低温组,缺血40min后于再灌注0.5、4、8、12、24、48h6个时段观察神经功能变化并进行评级和评分。(2)兔18只,假手术组2只,常温和亚低温组各8只,常温和亚低温组在缺血40min后于再灌注4、8、12、24h4个时段采集损伤节段脊髓组织HE染色,光镜下观察。结果(1)缺血40min后,均出现下肢瘫痪,恢复血供后有部分恢复。随着再灌注时间的延长,神经功能逐渐恶化,并与再灌注时间成正比。亚低温组神经功能明显优于常温组(P<0.05)。(2)随着再灌注时间的延长,脊髓损伤的组织病理变化逐渐加重,但在各再灌注时间段,亚低温组脊髓损伤均较常温组为轻。结论脊髓神经功能的恶化与再灌注时间的延长成正相关。31℃-33℃系统亚低温能够明显改善缺血再灌注后神经功能的恶化,是保护脊髓缺血再灌注损伤较好的方法。减少IL-8在脊髓组织中的表达,抑制再灌注后继发炎症反应是其可能机制。     

凋亡蛋白酶抑制剂对肾缺血再灌注损伤的影响

目的：观察凋亡蛋白酶(caspase)广谱抑制刑ZVADfmk对肾缺血再灌注损伤的影响，探讨细胞凋亡与缺血再灌注损伤的关系。方法：建立小鼠肾缺血再灌注模型，将实验动物随机分为5组：对照组、假手术组、缺血再灌注组、再灌注前ZVAMfmk处理组、再灌注2h后ZVADfmk处理组。用流式细胞仪检测肾细胞凋亡发生情况；测定髓过氧化物酶(MP0)、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，反映中性细胞浸润及肾功损害的程度变化。结果：对照组、假手术组肾细胞无凋亡发生；缺血再灌注组细胞凋亡、中性白细胞聚集和肾功能损伤发生明显；再灌注前ZVADfmk处理组细胞凋亡无明显减少，中性白细胞聚集和肾功能损伤减轻；再灌注2h后ZVADfmk处理组细胞凋亡无明显减少，中性白细胞聚集和肾功能损伤无明显减轻。结论：ZVADfmk在再灌注之前运用可以减弱细胞凋亡，同时相应减少中性白细胞聚集和肾功损害；在细胞凋亡已经发生(再灌注2h)后对细胞凋亡无明显抑制，对中性白细胞聚集和肾功能损伤也无明显减轻，提示细胞凋亡可能是引发缺血再灌注损伤的重要机制。     

JNK抑制剂对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 观察特异性JNK抑制剂对H2O2诱导凋亡的培养乳鼠心肌细胞的保护作用，探讨热休克蛋白70（HSPT0）对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法 培养大鼠乳鼠心肌细胞，随机分为4组，即正常对照组、H2O2损伤组、热休克组和JNK抑制剂组。应用免疫组化技术检测HSP70的表达；用透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡百分率。结果 热休克预处理后HSP70在细胞浆内大量表达。JNK抑制剂明显抑制心肌细胞的凋亡率。结论 热应激预适应和JNK抑制剂对心肌细胞都具有保护作用，其保护机制可能与热应激时HSP70在心肌细胞内大量表达从而抑制了JNK的信号转导有关。     

大鼠脊髓损伤后神经细胞损伤与Caspase-3关系的研究

目的探讨大鼠脊髓损伤与凋亡促进因子Caspase-3之间的关系。方法SD大鼠24只,脊髓损伤后取损伤脊髓标本,应用HE染色、免疫组织化学和Caspase-3mRNA原位杂交,TUNEL染色,观察脊髓损伤区神经元损伤变化与Caspase-3表达之间的关系。结果脊髓损伤后5h可监测到Caspase-3免疫组化阳性细胞(10.2个/高倍视野),22～48h时达高峰(21.5～24.2个/高倍视野)。Caspase-3mRNA原位杂交阳性表达始于5h(6.66个/高倍视野),24h达高峰(14.55～18.22个/高倍视野),二者均在72h后呈明显下降趋势。损伤后24h,可监测到TUNEL阳性细胞,持续至72h。Caspase-3mRNA与Caspase-3呈正相关,相关系数为0.716(P<0.05).4～16h受损神经原形态基本正常,24￣48h细胞凋亡特征明显,72h后,几乎所有神经元形态呈现严重变化。结论大鼠脊髓损伤后神经元发生一系列形态变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase-3有密切相关性。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究细胞凋亡在急性脊髓损伤中的作用.方法:以大鼠脊髓压迫性损伤的动物模型,应用透射电镜,HE染色,原位缺口末端标记(TUNFEL)观察急性脊髓损伤后神经细胞的死亡形式.结果:急性脊髓损伤后2 h电镜清晰观察到神经细胞凋亡的形态变化,HE染色和TUNEL显示急性脊髓损伤后6 h和8 h凋亡阳性细胞达高峰.结论:细胞凋亡为急性脊髓损伤后神经细胞的主要死亡形式,也是加重脊髓损伤的一个因素.     

胰岛素对大鼠脊髓损伤细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的影响

目的 观察胰岛素对急性脊髓损伤后细胞凋亡及相关炎症因子表达的影响,探讨胰岛素对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法 60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,建立SCI模型;术后8 h、1d、3 d、7 d、14 d处死动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达变化,并进行比较分析.结果 术后各时相胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞的数目明显少于损伤对照组;胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率明显比对照组降低,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论 初步研究表明胰岛素对急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达是其可能作用机制之一.     

甲泼尼龙对脊髓持续压迫节段神经细胞凋亡影响的动物实验

目的 探讨甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)对脊髓持续受压节段神经细胞的保护作用.方法 选取成年日本大耳白兔145只,空白组5只,手术组和MP治疗组各70只.空白组取颈后正中切口,逐层钝性剥离肌肉组织,不予脊髓压迫,缝合切口;手术组和MP治疗组均在颈后路C6、C7间隙拧入平头螺钉造成脊髓轻度压迫,7d后开始减压,MP治疗组在脊髓受压30 min时经耳缘静脉注射大剂量MP,手术组在脊髓受压30 min时仅注射0.9％氯化钠注射液.脊髓受压6h、24 h、3d、7d以及脊髓减压3d、7d、14 d时取压迫段脊髓行透射电镜观察神经细胞凋亡,流式细胞术检测脊髓神经细胞凋亡率和免疫组化检测凋亡相关Bax蛋白的表达情况.结果 手术组和MP组在压迫6h时均出现神经细胞凋亡,两组神经细胞凋亡率在脊髓受压3d时达最大值,但MP组细胞凋亡率数值在各时间点均低于手术组,脊髓减压后MP组和手术组神经细胞凋亡率均降低,且各减压时间点神经细胞凋亡率有统计学差异.结论 早期给予MP可以降低脊髓持续受压节段神经细胞凋亡率,脊髓压迫减压术联合MP可以保护受压脊髓神经功能.     

鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒对大鼠痛阈及脊髓JNK磷酸化的影响

目的 评价鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒对大鼠痛阈及脊髓JNK磷酸化的影响.方法 健康雄性SD大鼠,体质量200～ 250 g,进行鞘内置管术.取鞘内置管成功的大鼠36只,采用随机数字表法分为3组(n=12):空白对照组(C组)、TRESK-shRNA慢病毒组(TRESK组)和阴性慢病毒组(V组).TRESK组和V组分别鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒和阴性慢病毒,10 μL慢病毒,病毒滴度为1×108 IFU/mL,1次/d,连续7 d;C组于相同时点鞘内注射10 μL生理盐水.各组大鼠分别于鞘内注射前1d(T0)及鞘内注射1 d(T1)、3 d(T2)、5d(T3)、7 d(T4)测定机械刺激缩足阈(MWT)和热刺激缩足潜伏期(TWL).鞘内注射7d疼痛行为学测定结束后处死大鼠,取L4-5段背根神经节(DRG)和脊髓组织,realtime PCR检测背根神经节TRESK mRNA表达,Westem blot 检测脊髓JNK磷酸化水平.结果 TRESK组T3、T4时的MWT明显低于C组(P＜0.05).与C组相比,TRESK组L4～5术侧DRG的TRESK mRNA表达明显降低(P＜0.05).与C组相比,TRESK组L4-5脊髓的JNK磷酸化水平明显增高(P＜0.05).结论 鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒可降低大鼠的机械痛阈,可能与激活脊髓JNK磷酸化有关.     

实验性大鼠脊髓损伤神经细胞凋亡的研究

目的 探讨脊髓损伤（SCI）后神经细胞凋亡时间和空间的分布规律。方法 制作大鼠程控电磁吸铁棒下落打击脊髓损伤模型,且末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡。结果 脊髓损伤后1～2d灰质区TUNEL阳性细胞数最多,随着时间的延长,TUNEL阳性细胞逐渐减少。白质区伤后1d TUNEL阳性细胞数量多,至伤后2d明显减少,伤后7d白质区又出现高峰,至30d白质和灰质区仅见少量散在的TUNEL阳性细胞。结论 脊髓损伤后存在神经细胞的凋亡,白质区和灰质区细胞凋亡演变过程不同。     

Expression of NF-kB in Schwann apoptosis in spinal cord following cells and its effect on motor neuron sciatic nerves injury in rats

Objective：To explore the expression of nuclear factor-kappa B （NF-kB） in Schwann cells （SCs） and its effect on motor neuron apoptosis in spinal cord following sciatic nerves injury in adult rats. Methods： Thirty-six adult Sprague-Dawley （SD） rats were divided randomly into normal control group （n=6）, and sciatic nerves crushing group （n= 30）, and the later was further equally randomized into 5 subgroups： 1, 3, 7, 14, and 21 d post-injury groups. The expression of NF-kB of normal and injured nerves were examined by immunohistochemistry staining, and the apoptosis of motor neurons in spinal cord of lumbar 4 to lumbar 6 （L4-L6） was investigated by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling （TUNEL） assay. Both were qua.ntitated by image analysis. Results： In crushing group, except 21 d post-injury group, the expression of NF-kB was markedly higher than that in the normal control group （P〈0.05, P〈0. 01）. At 1 d after sciatic nerves crushing, the expression of NF-kB was obviously up-regulated, reached peak at 3 d, and recovered at 21 d. The same trend was observed in the time-course on motor neuron apoptosis after sciatic nerves injury. Correlation analyses revealed that motor neuron apoptosis was significantly and positively correlated with the expression of NF-kB following sciatic nerves injury （r= 0. 976 0, P〈0. 01）. Conclusion： After injury of sciatic nerves, the presence and up-regulation of NF-kB in SCs may be involved in motor neuron apoptosis in L4-L6 spinal cord.