天花粉毒蛋白免疫毒素对靶细胞凋亡的作用

借化学交联方法将一种自然存在的植物单链毒素——天花粉毒蛋白(TCS)引至胃癌单抗MGb_2分子上,制得抗胃癌天花粉毒蛋白交联物MGb_2—TCS。以示踪技术对MGb_2—TCS在临床人胃癌实体瘤细胞中的内化及其杀伤靶细胞的死亡模式进行了探讨,同时还观察了ras癌基因的活化表达与MGb_2—TCS靶细胞杀伤效应之间的关系。结果显示,MGb_2—TCS以胞膜凹陷方式入胞后,绝大部分由管泡结构输送至多泡小体,然后再由多泡小体输送至溶酶体,并在那里消化降解,仅见少量的MGb_2-TCS自管泡或多泡小体阶段易位至胞质作用位点。超微形态学观察发现,MGb_2-TCS所致的靶细胞损伤出现细胞凋亡的特征性形态学改变。ras癌基因产物p~(21)蛋白的定位进一步显示,MGb_2—TCS损伤的细胞P~(21)多为阴性,而P~(21)阳性的细胞则不受MGb_2—TCS的影响。MGb_2—TCS对胃癌细胞的杀伤是通过启动细胞凋亡机制来实现的。尽管MGb_2—TCS内化后易位至胞质作用位点是MGb_2—TCS杀伤靶细胞的必要条件,但MGb_2-TCS对靶细胞的杀灭尚可能与靶细胞ras癌基因活化表达状态具有一定的关联。     

99Tcm-Herceptin的放射性标记与显像研究

目的探索HER2阳性胃癌显像剂99Tcm-Herceptin的标记方法,并进行荷瘤动物模型的显像研究。方法分别采用2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)法和2-亚氨基噻吩(2-iminothiolane,2-IT)法标记赫赛汀(Herceptin)。评价不同标记方法对抗体活性和标记率的影响。通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定标记抗体99Tcm-2-IT-Herceptin的体外稳定性。建立HER2阳性胃癌动物模型,并进行显像研究。结果 2-IT法标记Herceptin具有较高的标记率(>95%),且不会破坏抗体的完整性。标记抗体具有较高的体外稳定性。荷瘤动物模型注射99Tcm-2-IT-Herceptin 24h后,可以得到清晰的肿瘤显像结果。结论 99Tcm-2-IT-Herceptin具有较高的标记效率和体外稳定性,对所采用的HER2阳性动物模型具有靶向性,可能进一步开发成为新型HER2阳性胃癌显像剂。     

抗胃癌药MTX—胃癌McAb交联物的制备及其选择性细胞毒的研究

近年来,本室已制备出12株鼠抗胃癌单抗,动物及人体内免疫显像研究均表明部分机体在体内导向作用较好,本文用其中一株单抗MGb_2(鼠IgG型)制备抗体-BSA-氨甲喋呤(MTX)结合物,探讨单抗在胃癌导向治疗的可能性。     

~(131)I标记抗AFP抗体SPECT扫描对肝细胞癌定位及诊断

用核素标记抗AFP抗体对肝癌的放射免疫探测(Radioimmunodetection,RA-ID)研究受到人们的重视。本文对17例患者(其中12例肝癌、2例肝血管瘤、2例肝硬化及1例肝脓肿)进行了~(131)I标记抗AFP抗体的RAID研究。氯胺丁法~(131)I标记纯化的马抗人AFP多克隆抗体和鼠抗人AFP单克隆抗体。静脉注射标记抗体2.0～2.5mCi后     

~(131)I标记抗胃癌单克隆抗体(MG_7)在荷人胃癌裸鼠体内的分布及显像研究

本文观察~(131)I标记的抗胃癌的MG_7-McAb及其片段在移植人胃癌或结肠癌裸鼠体内的生物学分布及放射免疫显象。MG_7抗体在结肠癌(无关肿瘤)移植片 中无明显定位分布,静脉注射4只鼠的六种主要脏器及体液的肿瘤与非肿瘤比活性比值(T/NT)平均为1.32。该抗体及其片段在胃癌移植片中有明显定位浓集,其中F(ah′)_2段的浓集量(T/NT=4.9)大于全抗体(T/NT=3.0)。注射标记McAb后48～72h作放射免疫显象可见肿瘤的阳性图象,胃癌移植片的显像比结肠癌密集、清晰,注射标记F(ah′)_2片段者,胃癌的清晰显像时间可提前至注射后24h。     

第二抗体对~(131)I标记单抗放射免疫显像的改善作用

本文用Iodogen法标记抗结肠癌单抗2C_(10),标记抗体放化纯度96％,放射比4.47μCi/μg,仍保持较高的免疫活性。动力学分布实验:带人结肠癌裸鼠20只,随机分为二组。经腹腔注射~(131)I-2C_(10) 5μCi/只,其中一组12小时后注射纯化兔抗鼠IgG抗体100μg。注射后1～5天每日每组处死2只动物,测脏器比放射性。计算出T/N比值和每克组织计数占注射总计数     

碘标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤导向治疗的意义和观察

本文报告用~(131)I标记肝癌单克隆抗体HAb18、及其F(ab’)2片段对裸鼠移植瘤导向治疗的观察,具有明显的杀伤效应,其效果优于国外同类抗体。 同位素标记与显像 用~(131)I标记HAb8、18IgG及其F(ab’)2片段,全部采用氯胺T碘化法,标记率:51％比活性:9.58×10~4Bq/μg。抗体与肝癌细胞在体外的亲和率:IgG—70％,F(ab’)2—55％。尾静脉注入碘标记物后,荷瘤裸鼠肿瘤部位明确显像。其定位指数;IgG—3.09,F(ab’)2—6.99。 实验分组与治疗12只荷瘤肝癌裸鼠(SMMU—LTNM)分4组,实验前服用0.25％     

胃癌单克隆抗体GMGI:1D1-2在荷瘤裸鼠中的放射免疫显像

本文应用胃癌组织和胃癌细胞株接种Rowett裸大鼠及BALB/c裸小鼠,成功地建立了两种荷瘤裸鼠模型。采用氯铵T碘化法将~(125)I、~(131)I标记于抗人胃癌单克隆抗体GMG1:1D1-2。标记率为68％,IF和RIA法测定标记物显示仍保持明显的抗体活性。标记后的GMG1:1D1-2注入荷人胃癌裸     

~(131)I标记抗胃癌单克隆抗体(MG_7)在荷人胃癌裸鼠体内的分布及显像研究

本文观察~(131)I标记的抗胃癌的MG_7-McAb及其片段在移植人胃癌或结肠癌裸鼠体内的生物学分布及放射免疫显像。MG_7抗体在结肠癌(无关肿瘤)移植片中无明显定位分布,静脉注射4只鼠的六种主要脏器及体液的肿瘤与非肿瘤比活性比值(T/NT)平均为1:32。该抗体及其片段在胃癌移植片中有明显定位浓集,其中F(ab’)_2段的浓集量(T/NT=4.9)大于全抗体(T/NT=3.0)。注射标记McAb后48～72h作放射免疫显像可见肿瘤的阳性图像,胃癌移植     

抗胃癌单克隆抗体的吸附内化与液相胞饮之间的关系研究

本文以人胃癌SGC-7901细胞为实验模型,应用胶体金示踪技术,对鼠抗人胃癌单克隆抗体KGb_2的吸附内化与液相胞饮之间的关素进行了探讨。电镜观察发现:(1)液相胞饮的入胞途径有被覆小凹、微胞饮凹陷及大胞饮凹陷3种。抗体的吸附内化入胞途径与之一致;(2)凡是抑制液相胞饮活动的因素均能抑制MGb_2抗体的吸附内化。根据本研究结果及对相关文献材料的分析,本文提出抗肿瘤抗体的吸附内化依赖于膜胞饮功能区这一内化细胞生物学理论的新观点。     

蓝藻抗病毒蛋白-N的制备、生物活性鉴定及其多克隆抗体的制备和修饰

目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰。方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体。结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1∶16 000以上,Western blot分析表明其具明显特异性。抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1∶6 400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体。结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。     

胃癌单克隆抗体-氨甲喋呤交联物的制备及其细胞毒作用的研究

本文用本室已研制出12株鼠抗人胃癌单抗中一株MGb_2制备抗体-BSA-氨甲喋呤结合物,探讨所选单抗在胃癌导向治疗的可行性。 BSA与5倍过量的SPDP反应,每克分子BSA中引入3克分子二硫吡啶基团(PDP)。PDP-BSA通过碳二亚胺与氨甲喋呤连接。PDP-BSA-MTX以二硫代苏糖醇还原得到HS-BSA-MTX。     

抗胃印戒细胞癌株KATOⅢ单克隆抗体MGb_1和MGb_2的建立及其免疫组化初步鉴定

本文用胃印戒细胞癌株KatoⅢ免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞与SP2/0融合,获得两株抗胃印戒细胞癌的单克隆抗体,即MGb_1和MGb_2。ABC免疫酶标组化法证实,89例正常胃粘膜呈阴性反应。20例胃癌阳性率达80％,其中印戒细胞癌达100％,显著高于肺癌、结肠癌、食管癌、眼癌、皮肤癌等。本文讨论了MGb_1和MGb_2用于早期胃印戒细抱癌诊断及鉴别诊断的价值。     

异硫氰酸荧光黄直接标记小鼠腹水McAb的新方法

<正> 高质量FITC标记抗体的制备是免疫荧光试验的关键之一,但其制备过程中受到抗体纯度及其活性、标记试剂及标记程序,特别是荧光素与蛋白质的比例等影响。Goding氏报道了一种简便的改良标记程序,用于标记提纯的兔抗小鼠IgM免疫球蛋白,效果良好。鉴于单克隆抗体(McAb)的匀质性、其理化特性不及常规免疫血清稳定,往往在提纯过程中抗体变性较大。作者将 Goling氏方法进一步改进后用于将FITC直接标记小鼠腹McAb获得了较为满意的结果,现报告如下。     

抗乳腺癌单克隆抗体mAb109的放射性标记与生物评价

目的探索单克隆抗体mAb109的标记方法,并进行荷瘤动物模型的生物分布和显像研究。方法采用2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)法还原单克隆抗体mAb109,并测定还原抗体浓度和巯基含量。通过葡庚糖转络合法用放射性核素99Tcm标记mAb109,测定标记抗体的标记效率和稳定性。建立乳腺癌动物模型,并进行体内分布和显像研究。结果还原抗体保持了较高的完整性,平均每分子抗体含有5.38个巯基。葡庚糖转络合法标记mAb109具有较高的标记率(>90%)和体外稳定性。标记抗体在肿瘤部位有显著的富集,且具有较长的滞留时间。荷瘤动物模型注射99Tcm-mAb109后,可以得到清晰的肿瘤影像。结论99Tcm-mAb109具有较高的标记效率,对所采用的葡萄糖调节蛋白78(glucose-related protein 78,GRP-78)阳性动物模型具有一定的靶向性。     

~(125)Ⅰ标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125Ⅰ标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性。方法:①利用Iodogen法,Na125Ⅰ标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率。纸层析法测定放射化学纯度和稳定性。②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性。③观察小鼠体内的生物学分布情况。结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40~100μg、抗体20~50μg[Iodogen(m)∶抗体(m)=2∶1],加入Na125I15~30 MBq、室温反应10~15 min,标记率为(90.40±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2~26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%。②125Ⅰ-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性。③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数。结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125Ⅰ-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性。为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础。     

125I标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125I标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性.方法:①利用Iodogen法,Na125I标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率.纸层析法测定放射化学纯度和稳定性.②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性.③观察小鼠体内的生物学分布情况.结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40～100μg、抗体20～50μg[Iodogen(m):抗体(m)=2:1],加入Na125I15～30 MBq、室温反应10～15 min,标记率为(90.40 4±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2～26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%.②125I-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性.③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数.结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125I-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性.为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础.     

NBS法标记抗CD20F(ab')2条件的研究

目的 :探讨NBS法标记抗CD2 0F(ab’) 2 的最优条件。方法 :其它条件固定时 ,依次改变反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积 ,进行标记后将反应混合物经PD - 1 0柱淋洗 ,收集蛋白峰 ,测定放射性计数 ,计算标记率和免疫活性分数。结果 :反应时间在 2min之前 ,标记率随时间延长而提高 ,2min后出现平台 ,3min达最大值 ,活性在 3min之前变化不大 ,之后明显降低 ;NBS/F(ab’) 2 在 1 6时标记率最高 ,1 4之后活性急剧下降 ;温度对标记率和活性的影响不明显 ;小体积反应有利于提高标记率。结论 :反应时间为 3min ,NBS/F(ab’) 2 为1 6 ,室温小体积标记为最优条件     

改良氯胺T碘标法标记肿瘤单克隆抗体

<正> 使用单克隆抗体进行体外放射免疫和体内亲和实验中,常见的问题是用氯胺T法碘标后的抗体活性易丢失。原因是因为标记试剂中的氯胺T和偏重亚硫酸钠影响蛋白的活性。我们用饱和酪氨酸(Tyr-osine)取代偏重亚硫酸钠,并同时和原氯胺T法和乳过氧化物酶法相比,标记率相同,但标后的活性与标前一致。     

抗人结肠癌单克隆抗体CL_3全抗体与F(ab'''')_2片段在荷瘤裸鼠体内动态分布比较

为提高放射免疫显像(RAID)和放射免疫引导下外科手术(RIGS)的效果,用抗人结肠癌单克隆抗体(McAb)CL3,通过Pepsin消化法制备F(ab＇)_2,~(125)I标记,标记率73.1％,放化纯度99.5％,比活度4.7μCi/μg。结合分析法测定的免疫活性为56.8％,亲和常数为3.4×10~9L/mol。~(125)I-CL3全抗体标记率73％,放化纯度99.2％,比活度4.12μCi/μg,免疫活性