中药复方小续命汤组分活性评价及抗脑缺血有效成分组制备

目的:在前期的研究基础上,通过化学分析和药理活性分析相结合的方法,制备小续命汤抗脑缺血有效成分组.方法:DPPH法测定样品对自由基的清除作用;MTT法测定细胞存活率,观察样品对过氧化氢损伤、谷氨酸损伤及低氧损伤的保护作用;TBA法测定线粒体脂质过氧化.结果:综合分析多靶点活性,40%乙醇洗脱物和中间层的活性最强.结论:40%乙醇洗脱物和中间层按比例混合为小续命汤抗脑缺血有效成分组.     

小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血大鼠的作用

 目的 评价小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血大鼠的保护作用。方法 采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血动物模型。通过神经症状评分和倾斜板实验评价大鼠行为学的改变;TTC染色法观察脑缺血范围;分光光度法测定与脑组织一氧化氮合酶（NOS）活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性。结果 与局灶性脑缺血模型组相比较,小续命汤有效成分组可显著改善神经症状障碍,延长倾斜板停留时间,减少脑梗死体积,改善局灶性脑缺血引起的脑组织中MDA含量升高、SOD活性降低及NOS活性增高,但对GSH-px无显著影响。结论 小续命汤有效成分组对局灶性脑缺血具有保护作用,其作用机制可能与调节脑内氧化-抗氧化平衡及降低iNOS活性有关。     

基于UPLC/Q-TOF-MS~E分析小续命汤有效成分组的化学成分

目的:快速阐明中药复方小续命汤的化学组成。方法:利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF-MSE)对小续命汤有效成分组进行了快速分析和成分鉴定。液相条件:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速0.35 m L·min-1;质谱条件:采用ESI源,正、负离子模式下分别进行数据采集。结果:通过与对照品信息的提取辨识、与数据库数据的匹配指认以及对文献资料的比照分析,从小续命汤有效成分组中鉴定了42个化合物,主要包括黄酮、生物碱、三萜皂苷等类成分,并归属了各化合物的单味中药来源。结论:本研究比较全面地阐明了小续命汤有效成分组的化学组成,为此中药复方的质量控制提供参考,也为其深入的药效物质基础及药理作用研究奠定了基础。     

小续命汤有效成分组化学成分研究

目的:研究小续命汤有效成分组的化学成分。方法:采用动态轴向压缩柱色谱对小续命汤有效成分组进行分离,通过光谱分析确定化合物的结构。结果:从小续命汤有效成分组中分离得到12个化合物,分别鉴定为正二十八烷酸、正十六烷醇、千层纸素A、汉黄芩素、黄芩素、粉防己碱、防己诺林碱、汉黄芩苷、黄芩苷、芍药苷、苦杏仁苷、甘露醇。结论:所有化合物均为首次从该复方中分离得到。     

基于PINK1/Parkin通路探讨小续命汤调控急性脑缺血再灌注后线粒体自噬的分子机制及神经细胞凋亡的影响

目的:探讨小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注后线粒体自噬中PINK1/Parkin通路及神经细胞凋亡的影响.方法:将120只大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤组、小续命汤+线粒体自噬抑制剂组.采用线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,栓塞1h后恢复灌注24 h,再灌注24h后各组均选取20只.各组大鼠均于造...     

电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠神经元保护作用的机制。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(CI/R)及脑缺血再灌注+电针组(CI/R+EA),每组12只。采用改良线栓法制备局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型。于再灌流开始后,CI/R+EA组电针"水沟"百会"穴,电针参数:频率2~15 Hz,间断疏密波,电流强度1 mA,以局部肌肉轻微震颤为度,时间30 min。以罗丹明123和Annexin V-FITC进行荧光染色,通过流式细胞仪检测细胞内荧光强度,分析脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡发生率的变化。结果:CI/R组大鼠大脑皮层细胞线粒体膜电位明显低于假手术组(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01);电针治疗后,线粒体膜电位升高,细胞凋亡率受到抑制,与CI/R组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:针刺治疗可明显减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,上调神经细胞线粒体膜电位水平可能是针刺抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

电针对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠肝细胞线粒体保护作用机理研究

目的探索电针对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠肝细胞线粒体保护作用机理。方法应用透射电镜线粒体体视学检测急性脑缺血再灌注大鼠线粒体的变化并测定治疗前后肝细胞线粒体ATP酶活性及肝细胞总抗氧化能力。结果模型组肝细胞线粒体体视学、ATP酶活性及肝细胞总抗氧化能力检测结果与对照组相比较,差异均有统计学意义（P〈0．0．5或P〈0．01）;电针治疗后,肝细胞线粒体体视学、ATP酶活性及肝细胞总抗氧化能力检测结果均有明显改善,与模型组相比较差异有统计学意义（P〈0．0．5或P〈0．01）。结论电针对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠引发的肝细胞线粒体损伤具有确切的保护作用,其治疗作用机理是通过拮抗活性氧过氧化损伤和改善能量代谢来实现的。     

小续命汤对急性脑缺血再灌注线粒体相关蛋白Hsp60、Mitofilin表达的影响

目的:观察小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及对线粒体相关蛋白表达的影响。方法:60只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤组、环孢素A组、溶媒组5组,每组12只。采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,观察各组大鼠的一般情况、神经功能缺损,采用Nissl染色观察神经细胞损伤,Western blot和免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后缺血半暗带皮层线粒体热休克蛋白60 (Heat shock protein 60,Hsp60)和mitofilin蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组出现明显神经功能缺损,细胞发生缺血再灌注损伤,缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达上调(P 0.05)。与模型组比较,小续命汤组、环孢素A组可显著改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,并显著上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:小续命汤可改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、Mitofilin蛋白的表达,从而发挥脑保护的作用。     

小续命汤对急性脑缺血再灌注损伤BDNF,GDNF表达的影响

目的:观察小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响。方法:60只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤低、中、高(15,30,60 g·kg~(-1))剂量组。各组大鼠于造模前3 d开始给药直至观察节点结束,采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,采用苏木素-伊红(HE)染色,Nissl染色观察脑缺血再灌注损伤,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组织化学法检测脑缺血再灌注损伤后的BDNF,GDNF蛋白表达。结果:与模型组比较,小续命汤高、中剂量组可显著改善其神经功能缺损(P0.05),减轻脑缺血再灌注引起的缺血性损伤;小续命汤高、中剂量组还可显著上调BDNF,GDNF蛋白表达(P0.05)。结论:小续命汤可能通过上调脑缺血再灌注后缺血半暗带区BDNF,GDNF的表达发挥脑保护的作用。     

丹星通络汤对脑缺血再灌注损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的观察丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSP70)表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法40只健康雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶脑缺血再灌注大鼠模型,并随机将大鼠分为假手术组,缺血再灌注组(I/R),丹星通络汤大、小剂量组和尼莫地平组,每组8只。丹星通络汤组分别按15mL/kg(大剂量),7.5 mL/kg(小剂量),尼莫地平组10 mg/kg,术前连续给药7 d,每天1次。假手术组和缺血再灌组分别灌以10 mL/kg的生理盐水。大鼠局灶性脑缺血2 h,然后行再灌注。再灌注24 h断头取脑组织,采用免疫组织化学法检测脑组织中HSP70蛋白的表达,并与病理组织学改变进行对照。结果丹星通络汤能明显增强大脑皮质及海马HSP70的表达,减轻神经细胞损伤。结论丹参通络汤能减轻脑组织的缺血再灌注损伤,改善神经功能缺失,其作用机制可能与增加HSP70表达有关。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响

目的　研究补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法　将 36只SD大鼠随机分为 3组 :假手术组 (P ,n =12 )、模型对照组 (C ,n =12 )、补阳还五汤组 (B ,n =12 )。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,脑缺血再灌注 4 8h后TTC染色计算脑梗死体积 ,TUNEL染色检测神经细胞凋亡 ,免疫组化方法检测缺血侧皮质Bcl- 2 /Bax的表达 ,电镜观察线粒体的变化。结果　脑缺血再灌注后缺血侧皮质神经细胞凋亡增多 ,同时Bcl- 2表达减少 ,Bax表达增多 ,Bcl- 2 /Bax比值下降 ,线粒体肿胀且大多破裂。补阳还五汤干预后 ,细胞凋亡减少 ,脑梗死体积减小 ,Bcl- 2 /Bax比值上升 ,线粒体肿胀减轻。结论　补阳还五汤可能通过抑制神经细胞凋亡而减小脑梗死体积 ,其机制可能是通过上调Bcl- 2 /Bax比值 ,保护线粒体 ,防止发生线粒体通透性转变。     

牛磺酸对脑缺血 再灌注大鼠脑组织中前列腺素水平的影响

 目的 研究牛磺酸(taurine,Tau)对大鼠脑缺血性损伤的保护作用。方法 采用Pulsinelli的大鼠四动脉阻断脑缺血/再灌注模型,用放免方法检测脑组织中与前列腺素代谢有关的一些指标及测定脑水含量。结果 Tau可降低缺血/再灌注大鼠脑组织中血栓素B〈sub〉2〈/sub〉(TxB〈sub〉2〈/sub〉)水平,使6-酮-前列腺素F〈sub〉1α〈/sub〉(6-Keto-PGF〈sub〉1α〈/sub〉)与TxB〈sub〉2〈/sub〉的比值提高,同时降低脑水含量。结论 Tau对大鼠脑缺血性损伤具有保护作用,其作用机制可能与其影响前列腺素系统的功能及降低脑水含量有关。     

3,4-二氯苯丙烯酰另丁胺抗脂质过氧化作用与对大鼠脑缺血的保护作用

 目的：研究3,4-二氯苯丙烯酰另丁胺（简称AED₈₈₀₁）对大鼠脑缺血／再灌注损伤的作用及探讨其在抗脂质过氧化方面的影响。方法：建立Pulsineli四血管阻断大鼠脑缺血／再灌注模型,通过生化检测手段,对脑组织中与脂质过氧化有关的一些指标进行检测。结果：AED₈₈₀₁能使脑缺血／再灌注大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（Se-GSH-Px）活性增加;脑组织及血清中丙二醛（MDA）含量降低;脑组织中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）活性提高。结论：AED₈₈₀₁对脑缺血／再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与其具有抗脂质过氧化作用有关。     

中医药靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治脑缺血/再灌注损伤的研究进展

线粒体稳态失衡在脑缺血/再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury,CI/RI）病理过程中扮演重要角色。线粒体分裂/融合的动态调节（线粒体动力学）作为线粒体质量控制（mitochondrial quality control,MQC）的关键环节,在CI/RI中维持线粒体稳态发挥重要作用。小泛素相关修饰物（small ubiquitin-related modifier,SUMO）修饰是一类存在于细胞内动态可逆的蛋白质翻译后修饰形式,通过对底物蛋白进行多步酶促反应以完成对靶蛋白的SUMO修饰和去SUMO修饰过程,进而影响底物蛋白的亚细胞定位、蛋白互作和稳定性,其普遍参与了蛋白转运、信号传导、DNA修复、炎症反应及氧化应激等病理生理过程。线粒体动力学及相关蛋白通过SUMO化修饰调控线粒体融合和分裂,进而调节线粒体稳态,在CI/RI进展与转归中发挥着关键作用。中药在防治缺血性脑病方面具有明显优势,综述了线粒体分裂/融合过程中相关蛋白的SUMO化修饰的调节机制,以及靶向调节线粒体动力学及相关蛋白SUMO化修饰防治CI/RI的中医药研究进展,以期为缺血性...     

眼针对脑缺血再灌注大鼠脑内脑源性神经营养因子表达的影响

目的：观察眼针疗法与体针疗法对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响,探讨眼针与体针效应的差异。方法：将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、眼针穴区组、眼针穴区外组与体针组,每组8只。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗死再灌注模型。眼针穴区组取＂肝区＂＂上焦区＂＂下焦区＂＂肾区＂。眼针穴区外组选择眼针同名穴区的外3 mm处针刺。体针组取＂曲池＂＂足三里＂穴针刺。采用Zea Longa评分法进行大鼠神经功能评分,实时定量PCR方法检测缺血再灌注72 h后脑内BDNF mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测缺血再灌注后72 h脑组织BDNF蛋白的表达。结果：眼针穴区组和体针组大鼠神经功能缺损症状较模型组大鼠减轻（P〈0.01）,眼针穴区组与体针组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;眼针穴区组和体针组较模型组大鼠脑内BDNF mRNA和蛋白含量均升高（P〈0.01）,眼针穴区组与体针组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：眼针与体针在改善脑缺血再灌注损伤中的作用接近,两种疗法的作用机制可能均与脑内BDNF的表达上调从而促进脑组织的修复有关。     

龙琥醒脑颗粒对脑缺血再灌注模型大鼠受损脑细胞线粒体动力学的影响

目的 研究龙琥醒脑颗粒对脑缺血性再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）大鼠受损脑细胞线粒体动力学的影响及其机制。方法 大鼠制备CIRI模型,将造模成功的40只大鼠随机分为模型组及龙琥醒脑颗粒低、中、高剂量（75、150、300 mg/kg）组和金纳多（150 mg/kg）组,另设置假手术组8只,给予相应药物干预4 d后,TTC染色法检测大鼠脑组织梗死体积;透射电镜（TEM）观察梗塞侧脑皮层组织超微结构的变化;Western blotting和qRT-PCR法检测各组大鼠线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission protein 1,Fis1)、线粒体融合蛋白2(mitochondrial fusion protein 2,Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,Opa1)、动力相关蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)、核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)、Yes相关蛋白1(Yes-associa...     

丹参饮预处理保护缺血/再灌注损伤模型大鼠心肌细胞实验研究

目的:研究丹参饮预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法:将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参饮低剂量组、丹参饮中剂量组、丹参饮高剂量组,每组10只,采用前降支结扎法制备大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。观察干预后各组大鼠心电图、心肌酶标志物、N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)变化情况; 应用TTC染色法测定心肌梗死面积、HE染色观察心肌病理学改变。结果:与模型组比较,丹参饮预处理的各组能降低大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)与NT-proBNP水平,缩小心肌梗死面积(均P<0.01),改善心肌病理学形态,且随丹参饮浓度增加,以上作用更为显著。结论:丹参饮预处理可明显降低缺血/再灌注损伤大鼠血清心肌酶学水平,缩小心肌梗死面积,减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤,保护心功能,且存在剂量依赖关系。     

补阳还五汤及其有效成分体外给药对脑细胞膜流动性的影响

 目的 比较研究补阳还五汤及其有效成分黄芪甲苷、阿魏酸、川芎嗪、芦丁、绿原酸、紫檀烷苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芍药苷、丹皮酚、槲皮素体外给药对缺血 再灌损伤大鼠脑细胞膜流动性的影响。方法 大鼠颈总动脉结扎30 min 再灌2 h作为脑中风动物实验模型。用自旋标记ESR法测脑细胞膜流动性。结果 病理切片证实脑组织发生脑中风的典型病变。损伤大鼠脑细胞膜流动性较正常大鼠减低;补阳还五汤及其有效成分对正常细胞无影响但可使损伤大鼠脑细胞膜流动性增大,不同程度地恢复到接近于正常细胞膜流动性水平。结论 细胞膜流动性是一个敏感而重要的生物学指标,反映细胞的活性状态。可用这一新的技术方法来研究补阳还五汤及其组方的配伍机理,为中药方剂的改进提供理论依据。