大鼠慢性脑缺血后Chat表达特征及丁基苯酞的影响

目的 研究大鼠慢性脑缺血后大脑皮质和海马中胆碱乙酰基转移酶(Chat)表达特征及丁基苯酞(dl-butyphthalide,NBP)的影响.方法 健康wistar大鼠60只,雌雄不拘,随机分为4组,每组15只.A组:对照组(假手术 溶剂);B组:单纯缺血组(手术 溶剂);C组:缺血低剂量治疗组(手术 低剂量NBP 溶剂);D组:缺血高剂量治疗组(手术 高剂量NBP 溶剂).对照组除不结扎双侧颈总动脉外,其他的处理同模型组.C组和D组造模2月后分别按60mg/kg、120 mg/kg给予丁基苯酞每日灌胃,丁基苯酞用花生油稀释至2ml,A组和B组每日给予花生油2ml,各组皆连续灌胃一个月,用免疫组织化学SABC法在光镜下观察各组皮层和海马chat的表达.结果 B组皮质和海马chat表达与A组相比明显减少.C组、D组和B组相比chat表达增多,D组和C组相比chat表达明显增多,差异有统计学意义.结论 慢性脑缺血后大鼠皮层和海马chat表达减少,丁基苯酞通过对慢性脑缺血大鼠神经细胞凋亡有明显的抑制作用使chat表达增多.     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NMDA受体亚单位NR2B及突触素表达的影响

目的 观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚单位(NR2B)及突触素表达的影响.方法 采用免疫组化方法观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NR2B及突触素表达的影响.结果 B组与A组比较,海马CA1区、CA3区及齿状回NR2B及突触素的表达明显减少(P＜0.05),C、D组大鼠海马各区NR2B及突触素的表达与单纯缺血组比较均不同程度增加(P＜0.05);D组与C组比较,NR2B及突触素的表达增加更明显(P＜0.05).结论 慢性缺血3个月后,大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回中NR2B 及突触素的表达明显减少,而丁基苯酞能改善这种缺血改变,增加NR2B 及突触素的表达.     

丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马iNOS及MG表达的影响

目的观察丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、小胶质细胞(microglia,MG)表达的影响,探讨丁苯酞脑保护作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为4组:正常大鼠组为A组,假模型组为B组,模型组为C组,丁苯酞干预组为D组。行双侧大鼠颈总动脉永久结扎的方法制作大鼠慢性脑缺血模型。丁苯酞干预组在慢性脑缺血模型成功后给予丁苯酞软胶囊0.2g·kg~(-1)治疗12周,采用Y迷宫测定各组大鼠学习记忆能力,免疫组化染色测定iNOS及OX42(小胶质细胞的标志)表达,特异性尼氏染色方法测定海马CA1区神经元。结果 A、B组大鼠学习记忆能力正常,海马区iNOS、OX42少量表达,神经元数目正常。C、D组大鼠学习记忆能力下降,海马区iNOS、OX42表达增多,神经元数目减少。与C组相比,D组大鼠学习记忆能力明显增加(P0.01),海马区iNOS、OX42表达减少(P0.01),神经元数目增加(P0.01)。结论丁苯酞可减少慢性脑缺血大鼠海马区iNOS、OX42表达,减少MG的过度激活,减少海马区神经元坏死,提高大鼠的学习记忆能力,具有脑保护作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区NO表达的影响

目的研究丁基苯肽对慢性脑缺血大鼠海马区一氧化氮（NO）表达的影响。方法 80只大鼠随机分为假手术组、模型组、预处理组、处理组。根据硝酸还原酶法和β-NADPH组织化学染色法,又将每个小组分为两个亚组。模型组、预处理组和处理组利用双侧颈总动脉永久结扎术制备动物模型,假手术组不结扎双侧颈总动脉。预处理组在造模前及造模后均给予丁基苯酞,处理组在造模后给予丁基苯酞,假手术组和模型组在造模后给予同等剂量的生理盐水,4组分别在造模后1个月处死大鼠取材。用硝酸还原酶特异性还原NO产物的方法测定大鼠前脑缺血模型中海马NO释放量的异常变化。β-NAD-PH组织化学染色显示一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元,光镜下观察。结果模型组、预处理组及处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目与假手术组相比均有明显增加。与模型组相比,预处理组和处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少。与处理组相比,预处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少更明显。结论慢性脑缺血缺氧能使大鼠海马区NO含量明显增加,丁基苯肽（NBP）能减轻这种变化。     

丁基苯酞对脑出血大鼠血管内皮生长因子、血管生成素-2蛋白表达及血管新生的影响

目的 通过观察大鼠脑出血后脑组织中血管内皮生长因子（vaseular endothelial growth factor, VEGF）、血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）蛋白在不同时间点的动态表达及不同剂量丁基苯酞干 预后其与新生血管数量的变化,探讨丁基苯酞对脑出血大鼠可能的神经保护作用及机制。 方法 通过自体血注入法制备SD大鼠脑出血模型并随机分为脑出血模型组、丁基苯酞低剂量组 及丁基苯酞中剂量组,以及对照的假手术组。丁基苯酞低、中剂量组大鼠分别予以丁基苯酞10 mg/kg、 25 mg/kg灌胃给药（每日2次）,假手术组及脑出血模型组大鼠则在相同时间用同等体积大豆油代替 灌胃。分别在术后1 d、3 d、7 d、15 d评估大鼠神经功能缺损,采用免疫组化法检测各时间点CD34的表 达并进行新生血管计数及血管场面积测定,检测各时间点VEGF、Ang-2蛋白的表达,测定脑出血大鼠 血肿体积。 结果 与脑出血模型组比较,丁基苯酞中剂量组在术后各时间点,低剂量组术后7 d、15 d VEGF蛋 白表达上调;丁基苯酞低、中剂量组术后各时间点An g-2蛋白表达均上调,血管计数均增多;丁基苯酞 低剂量组术后3 d的神经功能缺损评分较低,丁基苯酞中剂量组术后3 d、7 d、15 d的神经功能缺损评 分较低,上述差异均有统计学意义。丁基苯酞低、中剂量组与脑出血模型组,在术后7 d、15 d血肿体 积差异无统计学意义。 结论 丁基苯酞可以显著减轻脑出血大鼠的神经功能缺损,其作用机制可能与上调VEGF、Ang-2蛋 白的表达,增加脑出血血肿周围新生血管密度有关,同时未增加血肿增大的风险。     

苯甲酸雌二醇对去卵巢大鼠慢性前脑缺血脑保护作用的研究

目的观察苯甲酸雌二醇对去卵巢大鼠慢性前脑缺血脑组织病理形态、学习记忆以及死亡率的影响,探讨雌激素对慢性缺血性脑损害的保护作用。方法50只健康雌性Wistar大鼠,随机分为4组。A组:正常对照组,n=5;B组:假去卵巢缺血组,n=15;C组:去卵巢缺血组n=15;D组:去卵巢缺血苯甲酸雌二醇治疗组。各组按要求制备模型,应用Morris水迷宫筛选并检测记忆功能,坚劳蓝 焦油紫染色、CD31免疫组化染色观察额叶皮质和海马CA1区神经元毛细血管变化。结果A组大鼠额叶皮质和海马CA1区神经元、毛细血管形态正常,学习记忆功能良好,B、C、D组与A组相比上述指标改变明显,差异具有显著性(P<0.05),而且C组改变明显重于B、D组(P<0.05);C组额叶皮质神经元、毛细血管和海马CA1区神经元数量减少,与A、B、D组相比差异具有显著性(P<0.05),B、D组相比上述改变无差异(P>0.05);缺血后各组大鼠急性期死亡率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论雌激素对去卵巢慢性前脑缺血大鼠额叶皮质及海马CA1区病理变化以及学习记忆功能均产生了有益的影响,但未能降低急性期大鼠的死亡率。     

狗枣猕猴桃叶提取物黄酮对大鼠急性脑缺血后caspase-3、VEGF表达的影响

目的 探讨狗枣猕猴桃叶提取物黄酮对大鼠永久性缺血性脑损伤后急性期caspase-3、VEGF表达的影响.方法 首先Nagasawa线栓法制备大鼠大脑中动脉永久性急性脑缺血模型(MCAO).Wistar雄性大鼠随机分为盐水对照组(A组:生理盐水对照组)、小剂量给药组(B组:给药剂量10mg/kg)、中剂量给药组(C组:给药剂量20mg/kg)、大剂量给药组(D组:给药剂量40mg/kg).A组按照0.5ml/100g体重腹腔注射生理盐水.B、C、D组于手术前30min及术后2h两次腹腔内给药.应用TUNEL法测缺血区凋亡细胞数;原位杂交法检测缺血区caspase-3mRNA表达;免疫组化的方法检测VEGF的表达变化.结果 B、C、D组TUNEL法测定缺血区凋亡细胞数明显少于A组(P<0.05);B、C、D组缺血区神经细胞Caspase-3表达明显低于A组(P<0.05).B、C、D组缺血区神经细胞VEGF表达明显高于A组(P<0.05);D组VEGF表达高于B、C给药组(P<0.05).结论 狗枣猕猴桃叶提取黄酮可以减少脑缺血后神经细胞凋亡、促进VEGF的表达.     

慢性间断性缺氧后一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的表达及维生素E和左旋丁基苯酞对其影响

目的 研究慢性间断性缺氧后一氧化氮 (NO)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在皮层和海马的表达及不同剂量维生素E(VitE)和左旋丁基苯酞 (L NBP)对其影响。方法 将 6 0只SD大鼠随机分成 6组 ,建立慢性间断性缺氧模型 ,并给予大、小剂量L NBP和VitE。其中 ,大剂量VitE和L NBP的剂量为 5 0mg/kg。小剂量VitE和L NBP的剂量为 2 5mg/kg。用免疫组织化学方法和生化方法分别检测皮层iNOS的表达和海马NO的水平。 结果对照组可检测到微弱的iNOS阳性染色。缺氧组大脑iNOS阳性染色显著增加 (P <0 .0 1)。与缺氧组相比 ,各治疗组阳性细胞均明显减少 (均P <0 .0 1)。与对照组相比 ,缺氧组NO的生成显著增多 (P <0 .0 1)。各治疗组与缺氧组相比 ,VitE大剂量组与缺氧组相比NO的生成无显著性差异 (P >0 .0 5 )。L NBP大剂量与L NBP小剂量及VitE小剂量组的NO含量均显著减少 (P <0 .0 1)。结论　 慢性间断性缺氧后iNOS表达增多 ,同时NO的合成增多。治疗性给予L NBP和VitE能够显著抑制iNOS表达。治疗性给予大、小剂量L NBP和小剂量VitE能够显著抑制NO的合成。大剂量VitE对于NO的合成无影响。     

克罗卡林对急性脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用

目的 探讨急性脑缺血再灌注后大鼠脑内小胶质细胞的活化及K-ATP通道开放剂克罗卡林(Cromakalin)的脑保护作用.方法 将72只SD大鼠,随机分为3组:A组为假手术组,B组为单纯缺血再灌注组,C组为克罗卡林干预组.应用改良Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,免疫组化染色检测OX42(小胶质细胞的标志)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况;应用特异性尼氏染色进行海马CA1区神经元计数.结果 A组各时间点海马 CA1区OX42,iNOS均有少量表达,B组OX42,iNOS随时间推移表达增多,72 h达高峰,7 d减少,与A组相比两者表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.01).C组各时间点OX42、iNOS与B组相比表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Cromakalin能明显抑制急性脑缺血再灌注后大鼠脑内OX42增殖,减少iNOS的表达,降低海马神经元的死亡程度,具有脑保护作用.     

石杉碱甲、尼莫地平对脑缺血鼠学习记忆障碍与血管内皮生长因子、Caspase-3表达的影响

目的:对脑缺血大鼠采用尼莫地平与石杉碱甲进行药物干预治疗,观察治疗后不同药物组血管内皮生长因子(VEGF)、caspase-3表达水平与学习记忆改善程度。方法:采用免疫组化和Y迷宫检测脑缺血鼠学习记忆功能的变化及VEGF、caspase-3在缺血区的表达。结果:各治疗组VEGF、caspase-3在海马区、大脑皮质、基底节区表达均显著低于脑缺血对照组(A组)P<0.01,尤以海马、大脑皮质区较显著。其中石杉碱甲加尼莫地平干预组(B组)VEGF、caspase-3细胞阳性表达的降低和学习记忆功能的改善,明显好于A、C、D组,P<0.01。结论:石杉碱甲加尼莫地平治疗组与其他药物治疗组比,能有效改善VEGF、caspase-3表达水平和提高学习记忆的能力,为认知障碍早期的治疗提供依据。     

慢性脑缺血老龄大鼠海马中突触素的表达特征

目的 研究老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中突触素表达特征.方法 应用免疫组化染色技术检测大鼠脑海马中CA1区、CA3区和齿状回中突触素的表达.结果 缺血组海马CA1区、CA3区和齿状回三处突触素灰度值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05.结论 老龄大鼠海马结构内CA1区、CA3区及齿状回内突触素和NR2B的表达明显减少.     

Long-term effects of seizures in neonatal rats on spatial learning ability and N-methyl-D-aspartate receptor expression in the brain

For the purpose of investigating the long-term effects of seizures in neonatal rats on spatial learning ability and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor expression in adult rat brain, a seizure was induced by inhalant flurothyl daily in neonatal Wistar rats from postnatal day 6 (P6). The authors assigned six rats each averagely into the single-seizure group, the recurrent-seizure group (seizures induced in six consecutive days), and the control group. During P60 to P65, the rats were tested for spatial learning ability with the Morris water maze task. On P75, the authors examined protein expression of the NMDA receptor (NR) subunits, NR1, 2A, 2B, 2C, and 2D, in the cerebral cortex and hippocampus by Western blotting analysis. On P65, the escape latencies from the water maze of the rats in the recurrent-seizure group were significantly longer than those of the control rats, but there was no difference between the single-seizure group and the control group. NR subunit expression in the cerebral cortex and hippocampus of the rats with single seizure was similar to those in the control rats. Compared with the control rats, the protein expressions of NR1, NR2A and NR2B in the cerebral cortex and NR2A in the hippocampus of the recurrent-seizure group was significantly decreased, but NR2C protein expression in the cerebral cortex and hippocampus significantly increased. Recurrent seizures induced in neonatal rats might cause long-term spatial learning ability deficit and modify NR expression in the cerebral cortex and hippocampus of adult rats. The results suggest that abnormal NR expression might play an important role in long-term spatial learning ability deficit induced by recurrent seizures in early life.     

慢性脑缺血老龄大鼠海马区突触素及NMDAR2B表达的研究

目的 本实验旨在观察慢性脑缺血老龄大鼠海马区突触素及NR2B表达的变化.方法 健康Wistar大鼠100只,随机分为5组,A组(对照组)、B组(缺血4周组)、C组(缺血8周组)、D组(缺血12周组)、E组(缺血16周组),每组20只.造模方法采用手术结扎大鼠双侧颈总动脉.分别于手术后4周、8周、12周、16周,采用免疫...     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1反义抑制剂治疗局灶性脑缺血作用机制的实验研究

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）反义抑制剂（ASODN）治疗急性脑梗死的作用机制。方法 采用Koizumi‘s线栓法制作可复流MCAO大鼠模型。40只8-12月龄健康，雄性Wistar大鼠随机分为4组；（1）MCAO组；（2）MCAO PBS组；（3）MCAO MSODN组；（4）MCAO ASODN组。实验各组分别于MCAO后2h,24h经侧脑室注射给药，MCAO后第5天处死动物。取脑组织进行NMDAR1免疫组织化学及NMDAR1mRNA原位杂交检测。检测结果经CMIAS图像分析系统进行定量分析。结果 （1）ASODN治疗组NMDAR1阳性细胞在海马CA1区，CA3区及DG区的数密度，光密度显著低于MCAO组；（2）ASODN治疗组NMDAR1mRNA阳性细胞在海马各区及大脑皮层的数密度，光密度与MCAO组无显著差异。结论 NMDAR1反义抑制剂可能主要作用于NMDAR1基因的蛋白翻译过程（胞浆机制），抑制缺血后神经元NMDAR1的产生。下调NMDAR1的数量及功能，减轻缺血后迟发性神经元坏死。达到脑保护作用。     

VEGF在实验性脑积水大鼠脑组织中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）在脑积水后脑组织中的表达状况。方法 雄性Wistar大鼠60只，随机分为实验组和对照组，其中实验组48只，再随机平均分为A、B、C、D四个亚组，应用显微外科技术向枕大池内注入25％白陶土混悬液0．1ml，分别在白陶土注射后第1、2、4、6周行MRI检查，获取鼠脑冠状切面的T2图象，鉴定脑积水是否形成。之后24h内处死动物并迅速取脑组织，应用免疫组织化学方法分别测定各组大鼠脑组织不同部位VEGF表达情况。其余12只用同样方法向枕大池内注入生理盐水作为对照组。结果 34只大鼠成功诱发脑积水。与对照组相比，实验组脑组织中VEGF表达均明显升高，尤其是脑室周围白质更为明显。结论 VEGF可能参与脑积水的病理损害和恢复过程。     

小容量复苏对脑外伤合并休克大鼠脑超微结构和vWF表达的影响

目的 观察小容量高晶体-高胶体渗透压混合液(HHS)复苏对脑外伤合并休克大鼠脑超微结构和Ⅷ因子相关抗原(vWF)表达的影响.方法 SD大鼠54只随机分为:(1)假手术组;(2)脑外伤+休克组;(3)HHS组;每组各18只.脑外伤+休克组和HHS组建立脑外伤合并急性失血性休克模型,随后在HHS组进行小容量HHS复苏.观察各组脑超微结构和vWF的表达.结果 电镜显示HHS对神经元、星形细胞和血脑屏障均有保护作用.脑外伤+休克组在损伤后4h和24h vWF的表达显著减少(P＜0.01),48h开始恢复,但显著低于假手术组和HHS组(P＜0.01);HHS组在损伤后4h,vWF的表达显著减少(P＜0.0l),24h开始恢复,至48h恢复正常.结论 小容量HHS复苏治疗脑外伤合并休克大鼠,可以抑制脑血管内皮损伤,促进微血管修复,减轻继发性脑损伤.     

血红素氧合酶-1及血红素氧合酶-2在大鼠局灶性脑缺血中的意义

目的　研究血红素氧合酶 1(HO 1)及血红素氧合酶 2 (HO 2 )在局灶性脑缺血中的作用。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血模型 ,对 6 6只大鼠脑缺血后不同时间点进行HO 1、HO 2免疫组化染色及病理学研究 ,并用计算机图像分析技术计算两者表达水平。结果　栓塞后 30min大鼠皮质及海马即有HO 1阳性神经元及胶质细胞的表达 ,且随着时间推移HO 1的表达逐渐增强 ,到栓塞后 12h达峰值 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降 ,栓塞后 1周仍有HO 1表达。HO 2在正常大鼠及梗死大鼠脑组织内均有表达。栓塞后不同时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5 ) ,但HO 2表达呈动态变化 ,2 4h时最高 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降。结论　脑缺血时脑内HO 1、HO 2表达的不同变化 ,是脑组织对损伤恢复重要的机制之一。HO 1修复受损的神经元和胶质细胞 ,而HO 2在于维护正常细胞的稳定     

酒精中毒后大鼠大脑皮质和海马的血管内皮生长因子变化及相关机制

目的观察酒精中毒后大鼠大脑皮质和海马的血管内皮生长因子(VEGF)变化。方法Wistar雄性大鼠酒精灌胃4周造成酒精中毒模型。通过免疫组化SP染色的方法进行大鼠大脑皮质及海马VEGF的测定。结果对照组大鼠大脑皮质及海马VEGF均未表达,酒精组大鼠大脑皮质其中5只VEGF为强阳性表达,7只为阳性表达,3只为弱阳性表达,2只未表达。海马区7只为强阳性表达,6只为阳性表达,2只为弱阳性表达,2只未表达。结论酒精中毒后可以引起VEGF的表达,VEGF的表达可能对脑血管与神经细胞有保护作用。