骨髓间充质干细胞移植对慢性脑缺血大鼠认知功能及海马CA1区EphB2的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞移植(mesenchymal stem cells,MSCs)对慢性脑缺血大鼠认知功能及海马CA1区EphB2的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、实验组(2VO模型+MSCs干预),选8、10、12w 3个时间点,采用双侧颈总动脉永久性阻断法(2VO)建立慢性脑缺血模型,通过Morris水迷宫检测各组大鼠的认知功能,同时用免疫组织化学的方法和Western blot检测大鼠海马CA1区EphB2的表达.结果 模型组和实验组大鼠与假手术组相比逃避潜伏期明显延长,在同一时间点实验组逃避潜伏期较模型组明显缩短(P＜0.05),实验组海马CA1区EphB2的表达较模型组增多(P＜0.05).结论 骨髓间充质干细胞移植能明显改善大鼠慢性脑缺血所致的认知功能障碍,其机制可能是通过升高EphB2的表达而改善学习记忆能力.     

慢性脑缺血海马CA1区微血管LRP-1的表达及其对认知功能的影响

目的探讨慢性脑缺血大鼠海马CA1区微血管LRP—1表达与认知功能改变的相关性。方法应用双侧颈动脉结扎的方法制作SD大鼠慢性缺血模型;Morris水迷宫对大鼠的认知功能进行测试;免疫组化技术测定海马CA1区微血管LRP-1,Ⅷ因子相关抗原及GFAP的表达;放免技术对脑脊液Aβ蛋白的浓度进行测定。采用 MIAS图像分析系统对免疫组化结果进行平均光密度测定及微血管计数。结果术后1个月手术组大鼠认知功能已明显下降,寻找平台所需游走的距离较假手术显著延长。术后6个月手术组大鼠海马CA1区微血管LRP-1的表达较假手术组大鼠显著降低;GFAP的表达显著增强;但VIII因子相关抗原的表达及微血管计数两组之间无显著差异。微血管LRP-1表达与水迷宫成绩呈负相关。手术组大鼠脑脊液Aβ蛋白含量较假手术组显著下降。结论慢性缺血过程中,大鼠认知功能下降与海马CA1区微血管LRP-1的表达下降有显著相关性。     

阿魏酸钠对脑缺血大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

为了探讨脑缺血迟发性神经细胞死亡与细胞凋亡的关系以及阿魏酸钠的抗凋亡作用,利用大鼠全脑缺血及再灌流模型,TUNEL法原位标记DNA片段,观察用阿魏酸钠后海马CA_1区神经细胞凋亡改变.结果发现,脑缺血10min再灌流3d后海马CA_1区存在较明显的神经细胞凋亡现象,凋亡细胞分布与光镜下神经细胞迟发性死亡的病理改变相对应,缺血前用药组神经细胞凋亡数目较对照组明显减少,神经细胞迟发性改变减轻.而缺血后用药组未见显效.结果提示,脑缺血海马CA_1区神经细胞迟发性死亡可能是通过细胞凋亡完成,阿魏酸钠对脑缺血再灌流引起的海马CA_1区神经细胞凋亡具有一定的防止作用.     

丁咯地尔对慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞及认知障碍的影响

目的研究丁咯地尔对慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞和认知障碍的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,治疗组大鼠给与丁咯地尔灌胃,免疫组化法多克隆抗血清GFAP标记海马CA1区星形细胞,用Y-型迷宫测定大鼠的认知功能变化。实验研究为持久性2VO2个月。结果慢性脑缺血2个月后大鼠海马CA1区星形胶质细胞大量增生肥大,认知能力明显下降,丁咯地尔治疗后,星形胶质细胞的活动明显减少,认知功能明显提高。结论丁咯地尔能抑制慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞反应,改善其认知功能障碍。     

神经生长因子对大鼠脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的　研究神经生长因子（ Ｎ Ｇ Ｆ）在缺血性脑损伤中对神经细胞凋亡的影响。方法　采用大鼠 ４ 血管闭塞脑缺血模型, Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 方法原位标记 Ｄ Ｎ Ａ 片段,观察脑室内注射 Ｎ Ｇ Ｆ 后海马 Ｃ Ａ１ 区神经细胞凋亡的变化。结果　使用 Ｎ Ｇ Ｆ 后 ３ｄ 海马 Ｃ Ａ１ 区 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 阳性神经细胞数为神经细胞总数的１３．９％ ±１１．６％ ,与缺血对照组（２１．３％ ±１３．７％ ）比较显著减少（ Ｐ＜ ０．０１）。结论　外源性 Ｎ Ｇ Ｆ 对脑缺血所致的神经细胞凋亡可能具有一定的保护作用。     

间歇性缺氧对大鼠认知功能和海马CA1区超微结构的影响

目的观察间歇性缺氧对大鼠认知功能及海马CA1区神经元超微结构的影响。方法SD雄性大鼠16只,随机分为正常组(UC,n=8)和间歇性缺氧组(IH,n=8)。UC组正常饲养,IH组每日间歇缺氧7 h建立间歇性缺氧大鼠模型,通过Morris水迷宫测试检测其学习和记忆能力,并于灌注固定后应用透射电镜观察海马CA1区超微结构。结果(1)Morris水迷宫学习成绩(定位航行实验):第5 d训练结束时IH组大鼠逃避潜伏期明显长于UC组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Morris水迷宫记忆成绩:IH组穿越平台次数[(1.38±0.92)次]较UC组减少[(3.75±1.04)次](P<0.01);IH组跨越目标象限时间占整个游泳时间的百分率[(20.52±3.41)%]也较UC组减少[(39.89±5.63)%](P<0.01)。(3)电镜下可见IH组神经元细胞质的电子密度增加,核染色质浓缩并聚集核膜附近,粗面内质网排列紊乱或扩张并出现脱颗粒现象,线粒体主要表现为肿胀、空泡变性及嵴消失,突触结构分界不清,突触小泡稀疏。UC组无明显病变。结论IH可致大鼠学习记忆障碍和海马神经元超微结构改变,IH所引起的大鼠学习记忆障碍与海马神经元超微结构的改变密切相关。     

酪氨酸蛋白激酶Src和Fyn对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经细胞损伤的影响

目的 观察胞内可溶性酪氨酸蛋白激酶Src、Fyn蛋白对脑缺血再灌注后海马CA,区神经细胞存活的影响.方法 采用Pulsinelli-Brierley 4动脉阻塞(4-VO)大鼠全脑缺血模型,缺血前连续3d脑室注射Src、Fyn反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy-nucletides,AS ODNs)抑制Src、Fyn蛋白的表达后缺血,复灌5d,石蜡切片,焦油紫染色,图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞面积总和,与缺血组及错义寡核苷酸组(missense oligodeoxy-nucletides,MS ODNs)比较进行形态学分析.结果 Src、Fyn反义寡核苷酸对脑缺血再灌注后海马CA,神经细胞均有明显保护作用,以Src AS ODNs保护作用更明显,与缺血组比较约有50%细胞存活(P<0.05).结论 胞内可溶性酪氨酸蛋白激酶Src、Fyn蛋白的含量降低对脑缺血再灌注后海马神经细胞有明显保护作用,且以Src作用更为明显.     

神经节苷脂对不完全性脑缺血后海马CA1区NOS阳性神经元表达的影响

目的 :探讨神经节苷脂 (GM1)对不完全性脑缺血及再灌注不同时间后海马CA1区一氧化氮合酶 (NOS)的影响及对神经元的保护作用。方法 :用双侧颈总动脉夹闭加放血的方法制成大鼠不完性脑缺血及再灌注模型 ,以还原尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH d)组织化学方法观察缺血及再灌注后海马CA1区NOS阳性神经细胞变化及GM1对其影响。结果 :海马CA1区神经细胞受损 ,在缺血 30min时NOS阳性细胞数最高 (44 .5±7.4 ) ,为对照组的 2倍 ,再灌注 2h ,12h ,2 4h ,3d后逐渐下降 ,5d时恢复正常水平。而GM1能防止脑缺血及再灌注后神经细胞受损和NOS阳性神经细胞变化。 结论 :GM1对大鼠不完全性脑缺血及再灌注不同时间后海马CA1区NOS的表达有抑制作用 ,并对神经元具有保护作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区NO表达的影响

目的研究丁基苯肽对慢性脑缺血大鼠海马区一氧化氮（NO）表达的影响。方法 80只大鼠随机分为假手术组、模型组、预处理组、处理组。根据硝酸还原酶法和β-NADPH组织化学染色法,又将每个小组分为两个亚组。模型组、预处理组和处理组利用双侧颈总动脉永久结扎术制备动物模型,假手术组不结扎双侧颈总动脉。预处理组在造模前及造模后均给予丁基苯酞,处理组在造模后给予丁基苯酞,假手术组和模型组在造模后给予同等剂量的生理盐水,4组分别在造模后1个月处死大鼠取材。用硝酸还原酶特异性还原NO产物的方法测定大鼠前脑缺血模型中海马NO释放量的异常变化。β-NAD-PH组织化学染色显示一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元,光镜下观察。结果模型组、预处理组及处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目与假手术组相比均有明显增加。与模型组相比,预处理组和处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少。与处理组相比,预处理组海马区NO、NOS阳性神经元数目减少更明显。结论慢性脑缺血缺氧能使大鼠海马区NO含量明显增加,丁基苯肽（NBP）能减轻这种变化。     

雌激素对慢性脑缺血大鼠认知功能及突触素的影响

目的 研究苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠认知功能及突触素的影响.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,30只大鼠随机分为3组,A组:假手术组;B组:缺血组;C组:雌激素治疗组.各组于手术60d后,应用Y迷宫、免疫组化及图像分析系统测定大鼠认知功能及海马、齿状回突触素的含量.结果 治疗组较缺血组认知障碍明显改善(P＜0.01),与假手术组相比,缺血组突触素的含量明显下降,治疗组以上变化明显减轻(P＜0.01).结论 苯甲酸雌二醇能改善慢性脑缺血大鼠的认知功能,这可能与增加大鼠脑内突触素的含量有关.     

慢性脑缺血大鼠OXR的表达变化及天智颗粒干预的实验研究

目的研究慢性脑缺血病程中食欲素受体(Orexin receptor,OXR)的表达水平及天智颗粒的干预对其表达水平的影响。方法通过结扎双侧颈总动脉建立脑缺血大鼠模型,水迷宫法进行行为学评价,免疫组化法测定OXR的表达水平。结果缺血15 d时大鼠的学习记忆能力明显减退,1月、2月模型组较15d模型组好转。缺血15 d时OXR表达水平明显增高,1月时OXR的表达水平较15 d时明显下降,2月时OXR的表达水平再次增高。治疗组与其模型组相比,学习记忆能力均明显好转;治疗15 d OXR的表达水平较模型组明显下降,治疗2月OXR的表达水平较模型组明显升高。结论 Orexin系统可通过某种途径对慢性脑缺血起双向调控作用,而天智颗粒可通过orexin系统治疗脑缺血。     

苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠海马胆碱乙酰转移酶变化及雌激素的影响

目的观察苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶的影响,以探讨胆碱乙酰转移酶的变化在慢性脑缺血发病中的作用及雌二醇对此变化的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,30只大鼠随机分为假手术组、缺血组和雌二醇治疗组。各组于造模60d后,应用Y迷宫观察其行为学改变,采用免疫组化观测大鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶的变化。结果治疗组较缺血组认知障碍明显改善（P〈0.01）,其海马胆碱乙酰转移酶的表达也明显增高（P〈0.01）。结论苯甲酸雌二醇能改善慢性脑缺血大鼠的认知功能可能与其提高海马区胆碱乙酰转移酶水平有关。     

Intercellular adhesion molecule-1 expression in the hippocampal CA1 region of hyperlipidemic rats with chronic cerebral ischemia

Chronic cerebral ischemia is a pathological process in many cerebrovascular diseases and it is induced by long-term hyperlipidemia,hypertension and diabetes mellitus.After being fed a high-fat diet for 4 weeks,rats were subjected to permanent occlusion of bilateral common carotid arteries to establish rat models of chronic cerebral ischemia with hyperlipidemia.Intercellular adhesion molecule-1 expression in rat hippocampal CA1 region was determined to better understand the mechanism underlying the effects of hyperlipidemia on chronic cerebral ischemia.Water maze test results showed that the cognitive function of rats with hyperlipidemia or chronic cerebral ischemia,particularly in rats with hyperlipidemia combined with chronic cerebral ischemia,gradually decreased between 1 and 4 months after occlusion of the bilateral common carotid arteries.This correlated with pathological changes in the hippocampal CA1 region as detected by hematoxylin-eosin staining.Immunohistochemical staining showed that intercellular adhesion molecule-1 expression in the hippocampal CA1 region was noticeably increased in rats with hyperlipidemia or chronic cerebral ischemia,in particular in rats with hyperlipidemia combined with chronic cerebral ischemia.These findings suggest that hyperlipidemia aggravates chronic cerebral ischemia-induced neurological damage and cognitive impairment in the rat hippocampal CA1 region,which may be mediated,at least in part,by up-regulated expression of intercellular adhesion molecule-1.     

慢性脑缺血大鼠OXR表达的实验分析

目的 探讨慢性脑缺血时食欲素受体(OXR)的表达.方法 通过结扎双侧颈总动脉(2VO)建立脑缺血模型,免疫组化测定OXR表达.结果 慢性脑缺血是OX1R及OX2R出现了一致的表达变化,即缺血15 d时二者表达均明显增加,1个月时下降,2个月时再次升高.缺血1个月时大部分神经细胞萎缩,而2个月时部分细胞恢复正常.结论 提...     

缬沙坦对慢性脑缺血大鼠认知障碍及MDA、SOD的影响

目的　研究缬沙坦对慢性脑缺血大鼠认知障碍、丙二醛 (MDA)及超氧化物歧化酶 (SOD)的影响。方法　采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型 ,3 0只大鼠随机分为 3组 ,A组 :假手术组 ;B组 :缺血组 ;C组 :缬沙坦治疗组。术后 12周测定其认知能力及脑组织MDA、SOD含量。结果　C组较B组认知障碍明显改善 (P <0 0 1) ,MDA含量明显降低 (P <0 0 1) ,SOD明显升高 (P <0 0 1)。结论　缬沙坦能有效清除自由基 ,并能改善慢性脑缺血大鼠的认知障碍。     

尼莫地平和超氧化物歧化酶联合抗缺血/再灌注损伤作用研究

目的研究尼莫地平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)联合治疗大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用。方法将45只成年雄性Wistar大鼠随机分成4组,尼莫地平组、超氧化物歧化酶组、联合药物(尼莫地平加超氧化物歧化酶)组和对照组。应用线栓法制作大鼠MCAO模型,缺血后4h行再灌注。于再灌注前20min、再灌注后12h和36h尾静脉给药;48h后计算大鼠存活率、行神经功能缺损评分、脑血流量和脑梗死体积测定。结果①大鼠存活率分别为:41.7%、27.3%、70.0%和25.0%。联合药物组较对照组的存活率明显增加(P<0.05)。②神经功能缺损评分为:4.39±0.197、4.47±0.492、3.79±0.521和4.67±0.709。联合药物组较对照组的神经功能缺损明显减少(P<0.01),较尼莫地平或SOD组也明显减少(P<0.05)。③脑组织血流量为:96±23%、81±19%、129±47%和79±41%。与对照组相比三个药物组的脑血流量均增加(P<0.05)。联合药物组的脑血流量增加又明显高于单药治疗组(P<0.05)。④梗死体积为:261.0±55.2、261.2±59.3、128.5±58.4和383.5±58.8mm3。联合药物组梗死体积明显小于对照组(P<0.05)和两个单药组(P<0.01,P<0.05)。结论尼莫地平和超氧化物歧化酶联合用药对脑缺血/再灌注损伤具有神经保护作用,并且优于单一药物治疗。     

慢性脑缺血大鼠脑OX2R的表达

目的 研究慢性脑缺血Orexin受体-2(OX2R)的表达.方法 通过结扎双侧颈总动脉建立脑缺血模型;用水迷宫进行行为学评价;双标免疫荧光观察OX2R的表达.结果 缺血15d时大鼠的学习记忆能力明显减退,1个月、2个月较缺血15d模型组学习记忆能力有所好转.同时,缺血15d时OX2R在神经元的表达明显增高,1个月时OX2R的表达较15d时明显下降,2个月时OX2R的表达再次增高;此外,OX2R在神经纤维亦有表达其变化趋势同神经元.组织学示15d时部分细胞萎缩,1个月时大部分细胞变形萎缩,2月时部分细胞形态恢复正常.结论 提示脑缺血的早期OX2R可能有诱导细胞凋亡的作用,而缺血的后期有神经保护作用.     

尼莫地平对局灶性脑缺血鼠脑血影蛋白的影响

目的 观察大脑中动脉（MCA）缺血后血影蛋白的动态变化,寻找反映脑缺血程度的形态学依据。并评价尼莫地平的脑保护作用。方法 制作大鼠MCA局灶性脑缺血模型。免疫组化法检测血影蛋白含量。缺血后10min,30min,3h,6h和48h观察血影蛋白动态变化。结果 缺血后10min缺血区域血影蛋白表达降低。24h达高峰,尼莫地平可减少缺血区神经元血影蛋白的降解,具有脑保护作用。结论 检测血影蛋白可反映神经元缺血损伤后的早期形态学改变,钙离子拮抗剂一尼莫地平有重要的脑保护作用。