血管内皮生长因子及其受体在舌癌细胞中表达及意义

【目的】探讨人舌癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR、Flt-1的表达，进一步认识VEGF在舌癌生长过程中的作用机制。【方法】 以人脐静脉血管内皮细胞ECV304和小鼠成纤维细胞系L929作为对照，应用免疫组化染色和RT-PCR方法，检测体外培养的人舌癌细胞系Tca8ll3、GNM中VEGF及其受体的表达。【结果】GNM、Tca8113中皆有VEGF表达，Tca8113表达KDR和FLT-1,GNM表达KDR。【结论】在舌癌的生长过程中可能存在VEGF的自分泌机制。     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

 【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

LRG-1在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达及意义

目的：探讨富亮氨酸α2糖蛋白1（LRG-1）在舌癌及舌癌细胞系Tca8113中的表达及其与舌癌临床病理参数的关系并分析LRG-1的临床意义。方法采用S-P免疫组织化学方法检测我院40例浸润性舌癌患者的病灶及癌旁正常组织、20例舌部不典型性增生组织、20例舌原位癌中LRG-1的表达,分析LRG-1表达与舌癌临床病理参数的相关性;流式细胞技术检测舌癌细胞系（Tca8113）中LRG-1的表达;Western blotting法检测舌癌组织及细胞系Tca8113中LRG-1的表达;MTT法检测LRG-1对人血管内皮细胞生长的影响;体外小管形成实验观察LRG-1对血管生成的影响。结果 LRG-1阳性表达率在舌癌组织中（85%,34/40）显著高于癌旁正常组织（10%,4/40）,亦显著高于舌部不典型性增生组织（30%,6/20）及舌原位癌（50%,10/20）,差异均有统计学意义（P<0.05）。LRG-1在舌癌组织中的表达与患者年龄、性别等不相关,而与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有相关性（P<0.05）。LRG-1能够促进血管内皮细胞的增殖和小管形成。结论 LRG-1在舌癌组织及细胞系中表达异常,且能够促进血管内皮细胞的生长和小管形成,提示其可能与肿瘤血管生成有关。     

靶向舌癌Tca8113细胞血管内皮细胞生长因子基因的siRNA表达载体构建及体外抑制作用

目的构建靶向舌癌Tca8113细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用。方法设计合成靶向舌癌Tca8113细胞VEGF基因的siRNA cDNA序列并与Psilencer2.1-U6-neo连接,构建VEGF-siRNA表达载体（Pu-VEGF-siRNA）,酶切鉴定和测序确认后,经脂质体Lipofectamine2000转染入Tca8113细胞,以空载体组为实验对照组（Pu-HK）,未转染组为空白对照组。采用酶联免疫吸附（ELISA）和免疫组化方法检测染后Tca8113细胞VEGF蛋白表达差异。结果经过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了靶向Tca8113细胞VEGF基因的siRNA表达载体。与实验对照组和空白对照相比较,转染Pu-VEGF-siRNA后Tca8113细胞的VEGF蛋白表达明显下降（P〈0.05）,但两对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论成功构建了靶向舌癌Tca8113细胞VEGF基因的siRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制Tca8113细胞VEGF蛋白的表达。     

雷公藤红素对舌癌中单核/巨噬细胞的影响

【】：目的：探讨雷公藤红素(Tripterine,Tri)对人单核/巨噬细胞系(THP-1细胞)分泌VEGF、VEGF-C的影响。方法：在酸性微环境中,加入不同浓度的Tri分别与Tca8113细胞、THP-1细胞+ Tca8113细胞、THP-1细胞一起培养24h、48h、72h后,通过ELISA法检测细胞上清液中的血管内皮生长因子-c(VEGF-C)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量,以分析雷公藤红素对这两种生长因子的影响。结果： THP-1细胞、Tca8113细胞分泌VEGF、VEGF-C的数量与培养时间、雷公藤红素浓度、pH值呈负相关(P<0.05)。3.结论：随雷公藤红素浓度的增加和时间的延长,雷公藤红素对单核/巨噬细胞分泌VEGF、VEGF-C因子的抑制作用逐渐增强,从而抑制了舌癌的生长和转移。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-9蛋白表达的影响

目的利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制人舌癌Tca883细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF—siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞（VEGF—siRNA1、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tea8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫细胞／组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF及MMP-9的蛋白表达。结果在培养细胞和移植瘤中,与实验对照组和空白对照组相比,VEGF—siRNA1组和VEGF—siRNA2组VEGF染色平均灰度值高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各组培养细胞中均未见MMP-9表达;各组移植瘤MMP-9染色平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-9蛋白的表达无明显影响。     

血管内皮生长因子及其受体在肝癌细胞中的表达及意义

目的：探讨人肝癌细胞株血管内皮生长因子（VEGF）及其受体的表达,进一步认识VEGF在肝癌血管形成中的作用机制。方法：以人脐静脉血管内皮细胞系ECV304和小鼠成纤维细胞系L929作为对照,采用免疫组化染色及RT-PCR,检测体外培养的人肝细胞肝癌细胞系SMMC7721、HHCC和HepG2中VEGF及其受体的表达。结果：SMMC7721、HHCC和HepG2细胞均有VEGF的表达,同时VEGF受体1（Flt-1)在SMMC7721细胞中也有表达;而HHCC和HepG2细胞则表达VEGF受体2（KDR）。     

RNA干扰沉默血管内皮生长因子抑制人舌癌细胞增殖的实验研究

目的:通过转染能特异性沉默血管内皮生长因子(VEGF)表达的小干扰RNA(siRNA),观察能否抑制人舌癌Tca8113细胞株的增殖.方法:将自行构建的两对表达siRNA的重组质粒(PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2)转染到舌癌Tca8113细胞株中,以空载体组转染为实验对照组,以正常生长的舌癌细胞做空白对照组.实验组和实验对照组经G418筛选后,与空白对照组以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达,流式细胞技术分析细胞凋亡,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果:与实验对照组相比,PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2重组体显著降低舌癌细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.01),MTT的结果显示分别在24、48、72、96 h对细胞增殖的抑制率增加(P＜0.05),细胞凋亡率也明显增高(P＜0.01);而空载体转染组与空白对照组相比,对Tca8113细胞株增殖无抑制作用,对细胞凋亡变化无明显影响(P＞0.05).结论:PU-VEGF-siRNA在细胞内表达的siRNA 不仅能显著降低VEGF表达,而且能有效抑制人舌癌细胞的增殖.     

量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bcl-2的研究

【目的】 利用量子点(QD)优良的光学性质对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2进行特异性荧光标记,并与异硫氰酸荧光素(FITC)进行光稳定性比较。 【方法】 分别利用QD605nm和FITC,通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113细胞内bcl-2的表达,并激光连续照射1 h,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica Confocal Software测量量子点QD605nm和FITC的荧光信号强度。 【结果】 激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内bcl-2明显表达,量子点QD605标记的荧光信号比FITC更具特异性,且激光连续照射1 h, QD605nm标记的荧光未见明显衰减,而FITC标记的荧光1 h内已基本淬灭。【结论】 量子点荧光标记技术能对细胞内bcl-2进行标记,比传统的有机荧光具有更显著的优点。     

缺氧诱导因子抑制剂YC-1对口腔鳞癌Glut1、VEGF表达的抑制效应

目的 探讨缺氧诱导因子抑制剂YC-1对口腔鳞癌(OSCC)中葡萄糖转运蛋白-1(Glut1)、血管内皮生长因子(VEGF)基因的调控作用。方法 (1)应用免疫组织化学法检测60例OSCC患者和12例癌旁正常组织中的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Glut1、VEGF的表达。(2)人舌癌Tca8113细胞在体外进行培养,将其分成缺氧组、常氧组。将浓度为0、10、100 μmmol/L的HIF-1α抑制剂YC-1分别加入二组后,通过RT-PCR技术检测OSCC细胞中HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA的转录水平。结果 免疫组化发现:OSCC癌中HIF-1α、Glut1、VEGF的阳性表达明显多于正常组织,其中HIF-1α的阳性表达与Glut1的阳性表达、VEGF的阳性表达均呈正相关。RT-PCR结果表明,加入YC-1后,HIF-1α的表达在缺氧组和常氧组中均降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。HIF-1α的表达在缺氧组随着YC-1浓度不同无剂量依从性,差异无统计学意义(P＞0.05)。在YC-1作用下,缺氧组和对照组Glut1、VEGF在人舌癌Tca8113细胞中的表达均显著(P＜0.05)降低,缺氧组内Glut1、VEGF的表达随着YC-1浓度增加有剂量依从性(P＜0.05)。结论 HIF-1α、Glut1、VEGF高表达于OSCC组织中。YC-1显著抑制人舌癌Tca8113细胞HIF-1α、Glut1、VEGF分子的表达;YC-1可能通过下调HIF-1α、Glut1、VEGF的表达来抑制OSCC的生长。     

人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.     

血管内皮生长因子及其Flt-1受体在白血病细胞中的表达

目的探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子(VEGF)及其Fh-1受体的表达,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制.方法以人脐静脉血管内皮细胞系ECV304作为对照,采用RT-PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病细胞系K562和HL-60中VEGF及Flt-1的表达.采用MTT试验观察VEGF反义寡核苷酸(VEGF-AS)对白血病细胞体外增殖的影响.结果K562和HL-60细胞同时表达VEGF和Fh-1 mRNA和蛋白.VEGF-AS能够抑制白血病细胞体外增殖.结论在白血病细胞异常增殖中自分泌VEGF可能起着重要作用.     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca-8113细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法分别应用0、10、20、40μmol.L-1盐酸埃克替尼处理体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别作用24、48、72 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用间接免疫荧光联合流式细胞技术及免疫细胞化学方法检测盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果盐酸埃克替尼作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加;随盐酸埃克替尼浓度、作用时间的增加,人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡率增加;人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡率与盐酸埃克替尼浓度、作用时间成正相关。结论盐酸埃克替尼可降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡。     

Notch 1 对舌麟状细胞癌Tca8113细胞表皮生长因子受体表达的影响及其意义

目的：将编码Notch 1胞內域（NICD）转染人舌麟状细胞癌（舌麟癌）Tca8113细胞,探讨Notch 1在Tca8113细胞中的作用及其对表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法：采用脂质体法将编码NICD的pRAMIC-IRES2-EGFP目的质粒和pIRES2-EGFP对照质粒分别转染人舌麟癌Tca8113细胞,实验分为目的质粒pRAMIC-IRES2-EGFP转染组、对照质粒pIRES2-EGFP转染组和非转染组。采用RT-PCR法、Western blotting法和免疫细胞化学法观察细胞中Notch 1mRNA及蛋白和EGFR mRNA及蛋白表达水平,MTT法检测Tca8113细胞的增殖活性并计算细胞存活率。结果：转染后,与非转染组和对照质粒pIRES2-EGFP转染组比较,pRAMIC-IRES2-EGFP目的质粒转染组Notch 1 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而EGFR mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,细胞存活率明显降低（P<0.05）。与非转染组比较,对照质粒pIRES2-EGFR转染组Notch 1 mRNA和蛋白表达水平、EGFR mRNA和蛋白表达水平及细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：Notch 1对舌麟癌Tca8113细胞增殖的影响可能与EGFR的表达下调有关。     

塞来昔布抑制Tca8113释放PGE2及与COX-2、VEGF-C mRNA表达的相关性研究

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞释放前列腺素E2及抑制COX-2、VEGF-C mRNA表达的作用. 方法 MTT法检测细胞的生长抑制率,ELISA法检测细胞分泌PGE2变化,RT-PCR法检测COX-2、VEGF mRNA表达变化. 结果 塞来昔布以量效依赖方式抑制Tca8113细胞增殖的同时,抑制PGE2释放,其抑制Tca8113细胞释放PGE2与抑制VEGF-C mRNA的表达呈正相关关系(r=0.880,P=0.000),但与抑制COX-2 mRNA的表达相关关系虽然有统计学意义,但并不密切(r=0.422,P=0.020)). 结论 塞来昔布抑制Tca8113细胞增殖、抑制VEGF-C及COX-2蛋白及mRNA的表达,可能与调控PGE2的释放有关.     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1蛋白及mRNA表达的影响

目的：研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid,GAA）对人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1蛋白及mRNA表达的影响,探讨GAA的抗肿瘤作用机制．方法（1）应用Western-blot法检测Tca8113细胞在GAA作用48 h后hMLH1基因的蛋白表达变化;（2）应用实时荧光定量（RFQ-PCR）法检测Tca8113细胞在GAA作用48 h后hMLH1基因mRNA 的表达变化．结果（1） Western-blot检测显示：分别用终浓度5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的GAA作用人舌鳞癌Tca8113细胞48 h后,hMLH1基因的蛋白表达比对照组明显增高（＜0.05）;（2） RFQ-PCR检测显示：以终浓度5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的GAA作用于Tca8113细胞48 h后hMLH1基因的mRNA表达水平高于对照组（＜0.05）．结论一定浓度的GAA能够使人舌鳞癌Tca8113细胞系hMLH1基因的蛋白及mRNA表达上调,这可能是GAA抗肿瘤作用机制之一．     

人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系的构建及多药耐药基因和蛋白的表达

目的:建立人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系并检测多药耐药基因和蛋白的表达.方法:利用人舌鳞癌细胞株Tca8113, 采用单次剂量1 Gy,每周2次的60Co照射,诱导其耐放疗性,建立一株耐放疗的人舌鳞癌细胞系.并用免疫组化以及RT-PCR检测多药耐药基因的表达.结果:耐放疗的Tca8113细胞最大耐受剂量为20 Gy,多药耐药基因和蛋白表达水平明显增高. 结论:成功建立耐放疗细胞系,为口腔癌放疗耐药研究提供了细胞模型.