乌司他丁对内毒素血症大鼠心肌TOLL样受体4表达的影响

目的 观察乌司他丁对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导心肌TOLL样受体4(TLR4)受体表达的影响及与炎症反应的关系.方法 选取8周龄的雄性SD大鼠32只,分成四组:正常对照组,内毒素血症组(LPS组),LPS+乌司他丁组,LPS+地塞米松组.除正常对照组以外,其余三组给予脂多糖8 mg/kg大鼠阴茎静脉注射,LPS+乌司他丁组与LPS+地塞米松组分别同时给予乌司他丁2.5万/kg、地塞米松5 mg/kg;正常对照组给予同量的生理盐水,3h后断头取血并取心肌液氮保存;ELISA法测血浆TNF-α的水平;放免法测定心肌组织中AngⅡ水平;RT-PCR法测定心肌组织TLR4 mRNA表达;免疫组化法和蛋白免疫印迹法测心肌组织TLR4含量.结果 (1)LPS组TNF-α、CRP、IL-6水平和心肌AngⅡ水平显著增高;与LPS组相比,乌司他丁组TNF-α 、CRP、IL-6和心肌AngⅡ显著降低(2)LPS可明显增加心肌中TLR 4 mRNA及蛋白表达,乌司他丁明显抑制心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.结论 乌司他丁能抑制LPS诱导大鼠心肌的炎症反应.乌司他丁能降低LPS诱导大鼠的心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.乌司他丁可能通过降低TLR4水平抑制LPS诱导的炎症反应.     

己酮可可碱对内毒素血症大鼠心肌TLR4与TNFα mRNA表达影响及机制研究

目的:研究己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对内毒素血症(endotoxemia,ETM)大鼠心肌组织Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)mRNA表达的影响,探讨PTX在ETM中对急性心肌损伤的保护作用。方法:实验分空白对照组,ETM组,PTX组;ETM经尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)5mg/kg,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织TLR4和TNFαmRNA的表达。结果:ETM组心肌组织中TLR4与TNFα表达均较正常对照组显著增强(P<0.001);注射PTX后心肌组织中TLR4与TNFαmRNA表达分别比ETM组显著减少(P<0.01)。结论:PTX可通过抑制ETM心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导,抑制促炎症因子表达,对ETM心肌损伤起保护作用。     

Toll样受体4在内毒素血症小鼠心肌TNF-α表达中的作用初探

目的内毒素引起的心肌功能损害与内毒素诱导心肌局部肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的产生密切相关,然而其信号转导机制尚未完全阐明.Toll样受体4(Toil-like receptor4,TLR4)是新近发现的内毒素受体.本实验旨在探讨TLR4受体在心肌的表达情况及其在内毒素血症小鼠心肌TNF-α表达中的作用.方法以Toll样受体4基因突变型小鼠C3H/HeJ及野生型小鼠BALB/C为实验对象,给以腹腔内注射内毒素(1mg/kg)或生理盐水.注射生理盐水的小鼠作为对照.用RT-PCR方法,对两组小鼠心肌TLR4及注射内毒素前后小鼠心肌TNF-α mRNA表达进行检测.结果心肌表面存在TLR4表达.内毒素刺激后,野生型小鼠心肌TNF-α mRNA表达明显增加,而突变型小鼠心肌未检测到TNF-α的表达.结论TLR4介导了内毒素血症时小鼠心肌局部TNF-α的表达.     

乙型肝炎肝硬化患者血清内毒素、IL-4、IL-18水平的研究

研究肝硬化患者病程中血清内毒素(LPS)和IL-4、IL-18水平变化。采用鲎三肽基质染色法和ELISA法分别检测35例肝硬化患者活动期和缓解期上述三项指标，并设健康人40例为对照组。结果为：肝硬化患者两期LPS、IL-4、IL-18水平均明显高于正常对照组(未检出LPS)，缓解期较活动期显著降低。三指标均呈正相关。结论：LPS、IL-4、IL-18在HBV所致肝硬化发病中可能有重要作用。     

人参二醇皂苷对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肺组织TLR4与IL-18表达的影响

目的观察失血性休克复合内毒素二次打击所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)及白介素-18(IL-18)表达的变化,探讨TLR4与IL-18在ALI中的作用以及人参二醇皂苷(PDS)和地塞米松(Dex)对其影响。方法利用失血性休克对Wistar大鼠制造第一次打击,之后给予地塞米松(Dex)或人参二醇皂苷(PDS)治疗,再腹腔注入脂多糖(LPS)作为第二次打击。二次打击6h后处死动物,取肺组织,通过RT-PCR检测TLR4和IL-18 mRNA,通过Western blot检测IL-18蛋白的表达。结果与假手术对照组相比,二次打击可使肺组织TLR4 mRNA、IL-18 mR-NA及IL-18蛋白表达水平明显升高(均P<0.01),而Dex或PDS预治疗则能显著降低其含量(P<0.05)。结论失血性休克-内毒素二次打击所致急性肺损伤可能通过增加TLR4功能从而使其介导的信号转导作用加强,导致IL-18等炎症介质的分泌增加引起肺损伤,而PDS通过抑制TLR4介导的信号转导通路,减少IL-18等炎性介质的释放从而减轻肺损伤。     

血管活性肠肽对内毒素性休克大鼠肠道TLR4、MD2和BD3 mRNA表达的影响

目的探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致休克大鼠肠道组织TLR4、MD2和BD3 mRNA表达的影响。方法 40只SD大鼠,随机分为LPS组(15只)、LPS+VIP组(15只)和对照组(10只)。LPS组尾静脉注射LPS(E.coli O55B5)10 mg/kg;LPS+VIP组尾静脉注射LPS 10 mg/kg后注射VIP 5 nmol/kg;对照组尾静脉注射等容量生理盐水。分别于注射后6 h和24 h处死,留取结肠组织标本,RT-PCR检测结肠组织TLR4、MD2和BD3 mRNA表达,光镜下观察24 h时肠组织病理变化。结果①肠组织病理改变:注射LPS后大鼠肠黏膜坏死脱落,微绒毛结构消失,结缔组织明显充血,大量的炎性细胞浸润。采用VIP治疗后病变明显减轻。②TLR4、MD2和BD3 mRNA表达:注射VIP后6 h、24 h,肠组织TLR4、MD2和BD3 mRNA表达升高(P0.05);24 h时LPS+VIP组TLR4、BD3和MD2 mRNA表达明显低于LPS组(P0.05)。结论 LPS致内毒素性休克大鼠肠道损伤时,肠组织TLR4、MD2和BD3 mRNA表达增强。VIP可减轻LPS所致肠道黏膜损伤,其机制可能与下调重要的炎症基因TLR4、MD2和BD3 mRNA表达有关。     

非酒精性脂肪性肝病患者血清TLR4、IL-10、IL-22与肠道菌群的相关性

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清Toll样受体4(TLR4)、白介素-10(IL-10)、白介素-22(IL-22)与肠道菌群的相关性。方法研究对象选自2016年6月至2018年8月期间我院消化内科收治的126例NAFLD患者。选取同期进行体检的健康人90例作为对照组。比较各组间肠道菌群及肠道定植抗能力,血清TLR4、IL-10、IL-22水平,并进行pearson相关性分析和logistic多元回归分析。结果与对照组相比,NAFLD组双歧杆菌、乳酸杆菌、B/E值更低(P0.05),肠杆菌、肠球菌更高(P0.05)。NAFLD组血清TLR4显著高于对照组,IL-10、IL-22低于对照组(P0.05)。经pearson相关性分析,NAFLD患者TLR4与双歧杆菌、乳酸杆菌、B/E值呈负相关(P0.05),与肠杆菌、肠球菌呈正相关(P0.05);IL-10、IL-22与双歧杆菌、乳酸杆菌、B/E值呈正相关(P0.05),与肠杆菌、肠球菌呈正负相关(P0.05)。经logistic回归分析发现,TLR4、IL-10、IL-22是NAFLD患者B/E值的影响因素。结论 TLR4、IL-10、IL-22可能通过影响NAFLD患者的肠道菌群失调,参与疾病的发生、发展。     

TLR4在糖尿病大鼠肺组织表达的变化及对脂多糖反应性的研究

复制糖尿病大鼠模型，饲养4周，正常组及糖尿病组分别给予腹腔注射脂多糖5mg／kg，12h后免疫组化及免疫印记分析方法检测Toll样受体4（TLR4）在大鼠肺组织中含量的变化。观察到糖尿病组大鼠肺组织TLR4表达较对照组增高（P=0．000）；糖尿病组大鼠腹腔注射脂多糖后肺组织TLR4表达无明显变化（P=0．941），正常组大鼠腹腔注射脂多糖后TLR4表达明显增高（P=0．000）。提示糖尿病机体处于促炎症状态，但在免疫应激条件下糖尿病机体的TLR4不能正常发挥免疫识别功能，将可能导致糖尿病机体的免疫防御能力降低。     

内毒素性肝衰竭大鼠TLR4mRNA表达、血清肿瘤坏死因子-α及肝细胞凋亡的动态变化

目的 观察急性内毒素性肝衰竭大鼠肝组织中TLR4mRNA表达变化规律及其与血清肿瘤坏死因子-α水平、肝细胞凋亡的关系。方法雌性Wistar大鼠给予D氨基半乳糖／脂多糖同时腹腔注射，计算动物死亡率及生存时间，动态观察给药后4、8、12h肝功能、血清肿瘤坏死因子-α、肝组织TLR4mRNA表达及病理变化，以TUNEL法检测原位细胞凋亡，计算凋亡指数。结果80％大鼠死于急性肝衰竭，平均生存时间15．6h±1．8h，病理表现为肝脏大块或亚大块坏死。给药后4、8、12h血清TNF—α增高含量及肝细胞凋亡均增加，血清TNF—α变化早于肝细胞凋亡指数的增加，肝组织TLR4mRNA的表达与血清TNF—α含量呈正相关（r=0．709，P=0．000）。结论 内毒素通过单核吞噬系统TLR4介导TNF—α大量产生，激活炎症级联反应并诱导肝细胞凋亡是内毒素性肝衰竭的重要病理机制之一，阻断肝内外单核吞噬系统TLR4介导的的生理学作用，可能会对内毒素性肝衰竭起到一定防治作用。     

蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织TLR4,TLR9表达的影响

目的:探讨蓝莓抗氧化作用对猪血清免疫性肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)和Toll样受体9(TLR9)蛋白表达的影响.方法:60只♂Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、蓝莓低、中、高剂量防治组(C、D、E组)、复方鳖甲软肝片防治组(F组).除A组外,其余各组均腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型.C、D、E、F组在造模同时分别给予蓝莓原浆或复方鳖甲软肝片灌胃,1次/d,共12wk.第12周末处死大鼠,计算大鼠肝脏指数,行肝脏病理组织学检查,测定各组大鼠血清ALT和AST水平、肝组织匀浆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,免疫印迹法(western blot,WB)和免疫组织化学法检测TLR4和TLR9蛋白质在肝脏组织中的表达.结果:各组大鼠血清ALT、AST水平无明显差异(F=4.274,0.917,P>0.05);与B组比较,D,E组肝组织匀浆SOD活性、GSH含量明显升高(F=6.662,61.472,P<0.05);肝脏指数、MDA及Hyp含量明显降低(F=3.972,42.755和41.265,P<0.05);肝纤维化程度明显减轻(F=63.339,P<0.05),胶原表达减少;E组大鼠肝组织TLR4和TLR9蛋白质表达明显减少(F=6.932和7.534,P<0.05).结论:TLR4和TLR9蛋白质表达增加可能与免疫性肝纤维化的发生发展有关.蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化有一定的预防作用.     

谷氨酰胺对内毒素血症肠组织TLR2、4表达的影响

目的:探讨谷氨酰胺对TLR2、4表达的调节与肠组织损伤的关系.方法:将24只10日龄Wistar幼鼠随机分为对照组(n=8),ip生理盐水,1 mL/kg;LPS组(n=8),ip LPS,5 mg/kg;谷氨酰胺组(n=8),ip LPS 5 mg/kg 谷氨酰胺10 mL/kg,3 h后取肠组织,HE染色观察病理改变,RT-PCR检测肠组织TLR2、4 mRNA的表达.Western blot检测TLR蛋白表达.结果:对照组TLR2、4 mRNA均较LPS组弱(TLR2 mRNA:1.386±0.04 vs 4.093±0.90.TLR4 mRNA:9.872±0.36 vs 16.706±1.28.TLR2蛋白:22.28±0.96 vs 79.27±3.16.TLR4蛋白:35.07±0.17 vs 65.18±0.46):与LPS组相比,谷氨酰胺组TLR2、4mRNA和蛋白表达明显下调(TLR2 mRNA:3.055±0.51.TLR4 mRNA:3.920±0.5.TLR2蛋白:51.15±1.84.TLR4蛋白:43.25±0.27),肠组织损伤明显减轻.结论:谷氨酰胺通过抑制TLR2、4 mRNA的表达,减轻肠组织的损伤.     

TLR2、TLR4和TLR9在慢性重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中的表达

目的:观察重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中TLR2、TLR4和TLR9的表达,为重型肝炎肝衰竭发病机制的研究提供思路.方法:免疫组织化学法检测慢性重型肝炎患者肝组织及外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4和TLR9表达,同时平行设立慢性乙型肝炎、肝硬化患者和正常人作为对照.免疫组织化学法检测急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭及正常大鼠肝组织中TLR2、TLR4和TLR9表达.阳性对照为大鼠结肠组织.结果:正常人、慢性乙型肝炎和肝硬化患者肝组织中TLR2和TLR9未见表达;慢性重型肝炎患者肝组织中TLR2和TLR9有表达;正常人及慢性乙型肝炎患者PBMC中TLR2、TLR9未见表达,慢性重型肝炎患者PBMC中TLR2和TLR9有表达;正常大鼠肝组织TLR2、TLR9未见表达,急性肝衰竭和慢加急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2、TLR9有表达;TLR4在所有标本中均未见表达,但在阳性对照中有表达;TLR2、TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少.结论:TLR2、TLR9的高表达与机体的免疫状态密切相关,可能参与了重型肝炎和肝衰竭的发病过程.     

老年大鼠心肌组织Toll样受体4的激活在脑心综合征中的作用

目的 探讨老年大鼠心肌组织Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的激活与急性脑缺血再灌注继发心肌损伤的关系.方法 线栓法制造局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用免疫组织化学法观察TLR4不同再灌注时间点心肌组织的表达,同时监测不同再灌注时间点大鼠心电图的改变和肌酸激酶同工酶MB(creatine-kinase isoenzyme MB,CK-MB)浓度的变化,并分析其与心肌TLR4表达相关性. 结果 实验大鼠大脑中动脉阻塞后,心电图异常的发生率为77.5%(31/40),且以ST-T改变为主;与对照组比较,在脑缺血再灌注3 h CK-MB水平[分别为(179.6±22.5)IU/L与(302.6±39.3)IU/L,P＜0.05]开始升高,于再灌注12 h达峰值[(481.4±52.2)IU/L,P＜0.01];心肌TLR4蛋白在大鼠脑缺血再灌注3 h即观察到少量表达,6 h表达达到高峰,与假手术组比较,差异有统计学意义(分别为3.00±0.82、7.86±1.35和1.00±0.58,均为P＜0.01),且表达量与CK-MB浓度变化呈正相关(r=0.642,P＜0.01).结论 心肌TLR4受体在老年大鼠脑缺血再灌注对心肌损伤过程中被激活,可能与心肌受损有关,提示炎症反应有可能是脑心综合征发病机制中的一个重要环节.     

Toll样受体4与大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性的实验研究

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (LPS)重复刺激的耐受性与其Toll样受体 4(TLR4)表达的变化 ,研究两者之间的联系。方法　将 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,用随机数字表法分为正常对照组 (A组 ) ,LPS单次刺激组 (B组 )和LPS 2次重复刺激组 (C组 )。用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF α)及TLR4、白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )、IL 1 8mRNA表达的变化 ,WesternBlot检测TLR4蛋白表达的变化。结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF α分泌和TLR4、IL 1 0、IL 1 8mRNA表达及TLR4的蛋白表达水平 ,A组分别为 (0 4 5 0± 0 0 1 0 ) μg/L、1 1 6± 0 0 4、0 97± 0 0 3、1 32 0± 0 0 2 0、5 8 1± 0 4 ;B组分别为 (0 76 0± 0 0 30 ) μg/L、2 1 8± 0 0 9、1 83± 0 0 7、2 0 6 0± 0 0 6 0、1 4 8.3± 1 4 ;B组与A组比较差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;C组分别为 (0 4 90± 0 0 5 0 ) μg/L、1 2 3± 0 0 3、1 1 5± 0 0 5、1 1 70± 0 0 4 0、96 5±0 7;C组与B组比较差异也有显著性 (P <0 0 5或 <0 0 1 )。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与TLR4表达     

Toll样受体4与肝损伤

Toll样受体是近几年发现的天然免疫受体，主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号传导，是天然免疫与获得性免疫的连接点。Toll样受体4介导内毒素引起的感染性免疫反应，参与了肝脏内的损伤、纤维化、再生与修复等炎症反应过程。     

病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞Toll样受体4基因表达的研究

目的研究病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞内Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。方法采用鲎试剂法测定86例肝炎患者和11例对照组的血浆脂多糖(LPS)浓度,外周血单核细胞TLR4mRNA的表达用RT-PCR法检测。结果肝炎患者血浆LPS浓度均有不同程度的升高,高于对照组(P<0.05),重型肝炎组升高最显著,与其他各型肝炎比较差异有显著性(P<0.05);重型肝炎组单核细胞TLR4mRNA的表达升高最明显,与其他各型肝炎及对照组比较差异有显著性(P<0.05),其他各型肝炎与对照组比较差异不明显(P>0.05)。结论各型肝炎均存在内毒素血症,以重型肝炎最为显著,且重型肝炎患者外周血单核细胞内TLR4mRNA的表达水平最高,可能与肝细胞损伤相关。     

模拟代谢性内毒素血症对肝损伤小鼠肝组织TLR4信号通路的影响

目的：观察持续4 w的模拟代谢性内毒素血症对小鼠肝脏组织病理和4型Toll样受体（TLR4）信号通路的影响。方法将30只雄性C57BL/6J 小鼠随机分为正常组（n=10）和内毒素组（n=10）,均予以普通饲料喂养,和高脂组（n=10）,予以高脂饲料喂养。内毒素组小鼠同时经腹部皮下植入的微泵注入内毒素300μg·kg-1·d-1,连续4 w,正常组小鼠皮下微泵持续注入生理盐水作为对照。4 w后测定小鼠血清内毒素水平,对肝组织切片行HE染色后进行非酒精性脂肪性肝病评分（NAS）,采样Real time PCR法测定小鼠肝组织TLR4及其下游的MyD88和TRIF-related adaptor molecule （TRAM） mRNA水平。结果内毒素组小鼠血清内毒素水平（0.62±0.04 EU/ml）显著高于正常组（0.50±0.06 EU/ml,P〈0.05）和高脂组（0.49±0.05 EU/ml,P〈0.05）;内毒素组小鼠肝组织主要表现为单纯性脂肪变性,NAS积分为（2.30±0.49）,高脂组小鼠肝组织炎症较明显,NAS积分为（4.20±1.61）,显著高于内毒素组（P〈0.05）;与正常组相比,内毒素组小鼠肝组织TLR4 mRNA 水平上调5.12倍（P＜0.01）,TRAM mRNA水平上调3.46倍（P＜0.01）,而MyD88 mRNA水平与正常组比,无显著差别。结论持续4 w的模拟代谢性内毒素血症可诱导小鼠肝脏单纯性脂肪变性,TLR4 mRNA 和TRAM mRNA水平上调,而MyD88 mRNA水平无显著变化。     

脑出血大鼠炎性因子TLR4的表达与血脑屏障通透性的关系探讨

目的 探讨脑出血大鼠炎性因子Tol样受体4(TLR4)蛋白表达与血脑屏障通透性的关系.方法 将30只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组,每组15只.采用胶原酶立体定位注射法复制脑出血大鼠模型.评估各组大鼠不同时间点神经功能缺损评分;检测脑组织TLR4蛋白的表达;测量血肿周围脑组织伊文思蓝(EB)含量.结果 脑出血模型组大鼠急性期脑组织TLR4蛋白表达上调、血肿周围脑组织EB含量升高,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠脑出血后炎性因子TLR4蛋白表达的上调可能加重了血肿周围脑组织损伤,使血脑屏障通透性增加,加重脑水肿,从而升高神经功能缺损评分.