84例变应性鼻炎患儿过敏原皮内试验结果分析

目的 了解新疆地区变应性鼻炎患儿气传过敏原的分布状况,探讨气传变应原分布的地区差异及产生原因,为本地区儿童变应性鼻炎的防治方案提供客观依据.方法 采用阿罗格(NHD)点刺液进行皮肤点刺试验84例变应性鼻炎患儿进行气传变应原测试.结果 84例变应性鼻炎患儿吸入变应原测试总阳性率96.4%(81例),以藜属花粉最高70.2%(59例),蒿属植物次之42.9%(36例),其后依次为杨树27.4%(23例),榆树25.0%(21例),槭树17.8%(15例),柳树11.9%(10例),豚草(巨大豚草、普通豚草)11.9%(10例),粉螨10.7%(9例),尘螨9.5%(8例),交链孢霉8.3%(7例),特异青霉7.1%(6例),白色念珠菌4.8%(4例)等.81例对不同变应原过敏,其中42例(51.9%)患儿对2种或2种以上变应原过敏.点刺试验皮肤反应强度蒿属最明显,强阳性占蒿属过敏病人的50.0%,藜属次之,强阳性占藜属过敏病人的40.7%.结论 藜属和蒿属为新疆地区变应性鼻炎患儿最主要的变应原,在治疗过程中对这类变应性鼻炎患儿可采取有效的避、忌、替、移等措施,明确变应原后对特异性免疫治疗具有重要的指导意义.     

佛山乐从地区家具工人变应性鼻炎变应原检测分析

目的 分析佛山乐从地区家具工人变应性鼻炎变应原阳性分布情况.方法 收集2014年1月至2016年6月就诊于本院五官科的变应性鼻炎患者500例为观察组,职业均为家具工人;另选取同期本院就诊的非家具工人变应性鼻炎患者500例为对照组.进行患者血清总IgE水平与血清特异性变应原检测及变应原皮肤点刺试验,探讨两组患者吸入性变应原的阳性分布情况,分析两种变应原检测方法的一致性.结果 观察组和对照组患者血清总IgE阳性率分别为95.6％(478/500)、92.8％ (464/500),组间比较差异无统计学意义(x2=3.59,P＞0.05).血清特异性变应原检测和变应原皮肤点刺试验结果显示,两组患者螨类(粉尘螨、屋尘螨、热带螨)变应原阳性率均最高,且观察组螨类、德国小蠊、交链孢菌属、多主枝孢菌属、树木、杂草、霉菌变应原阳性率均显著高于对照组(均P＜0.05).两种变应原检测方法的一致性较好(均Kappa值＞0.6).结论 相对于非家具工人,家具工人变应性鼻炎的螨类等多种变应原阳性率均升高.     

粉尘螨变应原第2组分基因的原核表达及生物信息学分析

目的:克隆并原核表达粉尘螨变应原第2组分重组蛋白,鉴定其变应原性,分析其分子特征,为制备用于临床诊治的变应原奠定基础。方法:提取粉尘螨Total RNA,根据国际基因库(AB195580)设计并合成引物,经RT-PCR合成Derf 2全长基因,与pMD19-T载体连接后,热转化至E.coliJM109;将测序正确的Der f 2基因与pET28a(+)Vector连接,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达;经镍琼脂糖凝胶FF亲和柱层析,收集各阶段洗脱峰用梯度透析法进行复性,Western blot鉴定重组蛋白的变应原性。用生物信息学软件预测其理化性质、空间结构,并构建分子进化树。结果:RT-PCR成功扩增获得目的基因Der f2,全长441 bp,与参考序列同源性99.3%。将构建的pET28a(+)-Der f 2质粒转化宿主菌E.coliBL21诱导表达,SDS-PAGE电泳显示全细胞和沉淀物中均有蛋白表达。亲和柱层析后获得约3.86 mg重组蛋白纯品,Western blot分析表明其可与哮喘患儿血清IgE发生特异性结合。去除信号肽序列(1～17氨基酸)后,重组蛋白由129个氨基酸组成,相对分子质量为14.076,二级结构由延伸主链(30.82%),无规则卷曲(49.32%),α螺旋(19.86%)组成。该变应原可能位于线粒体,属ML域家族。序列比对显示,粉尘螨和屋尘螨、微角尘螨、梅氏嗜霉螨的相似度依次为88%、96%、83%,此四种螨在上述蜱螨变应原第2组分构建的分子进化树中聚成一簇,支持率达100%。结论:粉尘螨变应原第2组分原核表达获得成功,纯化后获得具有变应原性的重组蛋白,为进一步规模生产该变应原并用于临床诊治奠定基础;生物信息学分析初步获得了该变应原的分子特征,为进一步实验室验证指明方向。     

热带剥爪螨变应原Blot 5的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的:克隆热带剥爪螨主要变应原Blot 5基因,表达纯化该蛋白,并检测其免疫活性。方法:提取热带剥爪螨总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Blot 5编码基因,将其连入原核表达载体pET-19b,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析纯化重组变应原Blot 5。用Dot blot、Western blot和ELISA等方法检测重组变应原Blot 5免疫活性。结果:Dot blot和Western blot结果表明重组变应原Blot 5和热带剥爪螨粗提液都能和Blot 5鼠单克隆抗体结合。重组变应原Blot 5检测69份热带剥爪螨过敏患者血清和21份户尘螨过敏患者血清中的特异性IgE,阳性率分别为29.0%和33.3%。结论:表达和纯化了具有与天然蛋白相似的免疫活性的重组热带剥爪螨变应原Blot 5,可用于热带剥爪螨变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。     

法桐花粉主要过敏原基因Pla a1重组表达及鉴定

目的:表达、纯化和鉴定法国梧桐花粉主要变应原基因Platanus acerifolia pollen allergen1(Pla a1)。方法:首先根据文献查找并在GenBank获取法国梧桐花粉主要变应原基因序列Pla a1,利用DNAStar软件进行密码子优化;合成全基因;将Pla a1与载体pET-44a连接后转入大肠杆菌Rosetta中进行诱导并优化目的蛋白表达;利用亲和层析法纯化该外源表达蛋白;应用Western blot,利用法桐花粉过敏患者血清鉴定纯化后的目的蛋白的抗原性。结果:成功构建了pET44a-Pla a1阳性质粒;获得了法桐花粉主要变应原重组蛋白Pla a1;对该重组蛋白进行了亲和层析纯化;免疫印记法表明重组蛋白具有一定的抗原性。结论:首次利用密码子优化的方法获得融合Strep TagⅡ的法桐花粉过敏原重组蛋白Pla a1,为制备高纯度变应原、重组低致敏过敏原及变应原核酸疫苗奠定基础。     

变应性鼻炎患者外周血中T-bet的表达及其与血清IgE的关系

目的 探讨变应性鼻炎患者中外周血单核细胞(PBMC)中T-bet mRNA的表达及其与特异性IgE(SIgE)、患者症状和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)的关系.方法 用Unicap CAP系统检测变应性鼻炎患者变应原,检测血清SIgE的和ECP含量.抽取其中35例对尘螨过敏的变应性鼻炎患者和15例正常人静脉血,密度梯度离心分离PBMC,其中部分PBMC用质量浓度为50μg/mL的螨变应原培养刺激,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测T-bet mRNA表达.结果 变应性鼻炎患者和正常患者T-bet mRNA表达强度与参照物β-actin的比率分别是0.418±0.101和0.706±0.091,两者比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).T-bet mRNA的表达强度分别与变应性鼻炎患者症状评分、ECP的浓度没有相关性(r=-0.227;-0.033,P＞0.05).然而,T-bet mRNA表达强度和SIgE存在负相关关系(r=-0.375,P＜0.05),SIgE水平与过敏症状成正相关(r=0.426,P＜0.05).变应原刺激前后T-bet mRNA表达强度、ECP和SIgE变化差异没有显著性(P＞0.05).结论 变应原为螨的变应性鼻炎患者中,T-bet mRNA表达较正常人低,变应性鼻炎患者T-bet mRNA低表达是变应性鼻炎Th1/Th2失衡机制中的重要环节之一.T-bet mRNA的下调表达与变应性鼻炎患者症状严重程度和ECP浓度无关.在体外,特异性变应原的刺激对儿童和成人的T-bet表达、ECP和SIgE没有影响.T-bet是间接影响IgE水平的因素之一.SIgE水平客观直接地反应过敏的严重程度,但T-bet没有,它只是可能影响IgE水平的间接因素之一.     

日本柳杉花粉变应原CJP-6的重组表达和免疫反应性鉴定

目的:获得日本柳杉花粉主要变应原CJP-6的编码基因,构建其原核表达载体进行表达,并对重组CJP-6(rCJP-6)进行免疫活性鉴定。方法:从日本柳杉花粉中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增CJP-6编码基因,将其克隆入pET-19b表达载体。转入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达,以Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,采用Dot blot和ELISA方法检测重组变应原rCJP-6与对日本柳杉花粉、尘螨和蒿草花粉过敏患者的血清中的IgE反应活性。结果:重组变应原与日本柳杉花粉过敏患者血清中的IgE具有较高的结合活性,rCJP-6与尘螨、蒿草花粉过敏患者血清中的IgE也具有很高的反应性,而且反应性与日本柳杉花粉过敏的患者血清相似。结论:制备并获得了具有IgE结合活性的重组日本柳杉花粉变应原CJP-6,日本柳杉花粉变应原是中国过敏反应性疾病患者潜在的变应原,为国内过敏反应性疾病的临床诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定了基础。     

PLGA为佐剂的螨变应原纳米疫苗治疗小鼠过敏性鼻炎研究

目的探讨螨变应原Der p2经聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包载合成的纳米疫苗特异性免疫治疗小鼠过敏性鼻炎的疗效及机制。方法取雄性SPF级BALB/c小鼠30只,4~6周龄。随机分为5组,即正常组、模型组、空白PLGA治疗组、螨抗原纳米疫苗治疗组(PLGA-DP2治疗组)及螨重组蛋白Der p2治疗组,每组6只。按常规方法建立尘螨过敏性鼻炎小鼠动物模型。建模成功后,空白PLGA治疗组、PLGA-DP2治疗组和螨重组蛋白Der p2治疗组分别使用空PLGA、PLGA-Der p2纳米疫苗(含50μg Der p2蛋白)和50μg螨重组蛋白Der p2经小鼠腹部皮下注射进行免疫治疗,每隔3 d注射1次,共治疗5次。治疗结束后,取螨变应原粗浸液200μg分别滴鼻激发小鼠,激发结束后处死小鼠。在小鼠激发后的30 min内,观察并记录各组小鼠鼻部症状(喷嚏次数、搔鼻及鼻分泌物量)评分情况;检测血清中过敏原特异性抗体(Ig E)及细胞因子[白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10和γ干扰素(INF-γ)]水平;观察鼻黏膜组织形态学变化。结果螨抗原纳米疫苗PLGA-DP2载药量13.6%,包封率88.4%;纳米粒直径为200~400 nm。治疗后小鼠鼻部症状评分,PLGA-DP2治疗组鼻痒(0.67±0.52)分,喷嚏(1.00±0.63)分,清涕(1.67±0.41)分;螨重组蛋白Der p2治疗组分别为(0.83±0.41)分、(1.50±0.55)分、(0.83±0.75)分。明显低于模型组,且PLGA-DP2治疗组降低更明显(P0.05)。PLGA-DP2治疗组和螨重组蛋白Der p2治疗组与模型组比较,血清特异性Ig E及IL-4水平方面均明显降低,PLGADP2治疗组降低更显著(P0.05);而IL-2、IL-10和INF-γ水平显著增加,PLGA-DP2治疗组增加更显著(P0.05)。PLGA-DP2治疗组小鼠鼻黏膜病理表现,上皮细胞基本排列整齐,组织结构清晰,相对模型组黏膜下层嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞减少,鼻黏膜纤毛结构相对比较完整,黏膜基层肿大程度减轻;基本与正常组一致。结论尘螨变应原纳米疫苗加以PLGA为佐剂可有效地抑制小鼠过敏性鼻炎的炎症反应,极大地提高了过敏原疫苗的疗效。     

特异性免疫治疗对变应性鼻炎合并哮喘患儿的影响

目的: 探讨屋尘螨变应原特异性免疫治疗对变应性鼻炎合并哮喘患儿血清白细胞介素 13(IL-13)、白细胞介素 4(IL-4)、干扰素 γ(IFN-γ)水平及鼻部症状和肺功能的影响。方法: 选择屋尘螨变应原阳性的变应性鼻炎合并支气管哮喘的患儿58例,其中35例接受屋尘螨特异性免疫治疗为免疫组,其余23例予局部糖皮质激素治疗为药物组。于治疗前及治疗1年后分别测定患儿血清IL-4、IFN-γ和IL-13水平,并评估鼻部症状和肺功能。结果: 经过1年治疗后,免疫组鼻部症状评分较治疗前明显减少(P<0.05),与药物组相比有显著差异(P<0.05);免疫组因哮喘急性发作而急诊就诊的频率明显少于药物组;与治疗前比较,免疫组血清IL-4和IL-13水平下降,IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4升高 (P<0.05),肺功能改善明显(P<0.05);而药物组血清IL-4和IL-13水平较治疗前无明显下降 (P>0.05),肺功能无改善 (P>0.05)。结论: 特异性免疫治疗后患儿血清IL-4和IL-13下调, IFN-γ及IFN-γ/ IL-4上调,提示特异性免疫治疗可能调节体内T辅助细胞(Th)Th1/Th2细胞的平衡,从而改善患儿鼻部症状和肺功能。     

重组屋尘螨变应原突变体的免疫原性与过敏原性研究

目的 构建屋尘螨Der p2变应原突变体的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达、纯化,以观察屋尘螨Der p2变应原突变体的免疫原性以及抗原性.方法 基因敲除屋尘螨Der p2变应原的部分氨基酸残基序列,将编码基因定向克隆到pET32a原核表达质粒中,转入BL21表达菌中并提纯;将18只Balb/c小鼠随机分为Der p2变应原突变体组、重组Der p2组和对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠血清中IgE、IgG1与IgG2a抗体变化,用免疫斑点试验测定Der p2突变体的IgE结合能力.结果 成功构建了Der p2变应原突变体的原核表达质粒,表达并纯化了Der p2变应原突变体.腹腔免疫后0d,各组IgE、IgG1与IgG2a抗体表达无明显变化(P=0.067、P=0.052、P=0.078);免疫后第7d,重组Der p2变应原组诱导IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组(P =0.002),重组Der p2变应原组诱导的IgG2a抗体高于Der p2变应原突变体组(P=0.0056);腹腔免疫后第14 d,重组Der p2变应原组IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组(P=0.001),Der p2变应原突变体组IgG2a低于重组Der p2变应原组(P=0.0034).Der p2变应原突变体与屋尘螨过敏患者的阳性血清结合明显较低.结论 Der p2变应原突变体能诱导小鼠产生IgG1抗体和IgG2a抗体,同时能明显减少IgE抗体的产生,并且Der p2变应原突变体具有较低的IgE结合能力.     

广州地区呼吸道疾病患儿16种常见变应原检测分析

目的 了解广州地区呼吸道疾病患儿对16种常见变应原的过敏情况,同时探讨不同年龄组之间的变应原阳性率差异,并比较致敏程度.方法 选择2007年8月至2008年3月广州医学院第一附属医院呼吸科门诊和儿科门诊初诊为支气管哮喘、过敏性鼻炎、呼吸道感染等患儿320例为研究对象,其中婴幼儿组(≤3岁)214例,儿童组(>3岁)106例.采用德国FOOKE ALLERG-O-LIQ-SYSTEM变应原检测系统,通过免疫捕获法检测血清中常见的16种变应原特异性免疫球蛋白E(SIgE)抗体.结果 在所有患儿中,其中261例(81.56%)SIgE呈阳性.59例(18.44%)呈阴性.16种变应原SIgE阳性率为屋尘螨(36.88%)、粉尘螨(35.31%)、热带螨(24.06%)、狗毛(6.56%)、猫毛(8.75%)、德国小蠊(16.56%)、蜜蜂毒素(0.94%)、屋尘(45.63%)、全蛋(45.94%)、牛奶(46.25%)、小麦面粉(6.88%)、玉米粉(1.25%)、花生(9.06%)、大豆(5.94%)、螃蟹(2.81%)、虾(4.38%).婴幼儿组SIgE的阳性率为81.78%,以食物性变应原(牛奶、全蛋)为主;儿童组的阳性率为81.13%,以吸人性变应原(尘螨)为主(X2=0.02,P=0.89).儿童组尘螨的过敏阳性率均高于婴幼儿组(P<0.05),且儿童组屋尘螨和粉尘螨的过敏程度多在3级以上.婴幼儿组各级阳性率比较平均.两组对热带螨的过敏程度均较低,多在3级以下.婴幼儿组牛奶和全蛋过敏阳性率高于儿童组(P<0.05),两组的过敏程度均在3级以下.结论 儿童组与婴幼儿组对常见变应原的总阳性率差异无统计学意义,只是对不同变应原阳性率及过敏程度的差异.儿童组主要是对吸人性变应原产生过敏,婴幼儿组主要是对食物性变应原产生过敏,应以不同年龄段来分析儿童变应原检测结果.     

变应性鼻炎免疫治疗的研究进展

变应性鼻炎是一种由变应原激发并通过Ig E介导的鼻黏膜炎性疾病,因其反复发作的鼻部症状和并发症,给临床治疗带来很大挑战。免疫治疗是目前唯一能够改变变应性鼻炎自然病程、针对病因的治疗方法。近来,包括新的给药途径、变应原改造在内的各种新型免疫治疗方法大量涌现,给变应性鼻炎治疗提供更多有效和安全的选择。本文针对变应性鼻炎免疫治疗的最新研究进展进行综述,并对未来的方向进行展望。     

多主枝孢霉重组变应原Cla h8的制备及其免疫活性鉴定

目的:通过基因工程手段,获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8,有利于进行变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。方法:从多主枝孢霉菌体中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Cla h8编码基因,将其连入pET-19b载体。转入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,经诱导表达后,进行提纯复性,用Western blot和Dot-blot检测其免疫活性。结果:重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可以与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合,与天然蛋白具有相似的免疫活性。结论:制备并获得了具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白,可用于多主枝孢霉变应原的标准化,克服天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。     

变应性鼻炎和哮喘的变应原皮试和脱敏治疗

对２００例变应性鼻炎、哮喘或二者兼有的病人进行变应原皮肤试验。发现上海地区７４％的上述病人中对２种或２种以上抗原过敏，其中除屋尘、尘螨是最常见的变应原外，对花粉、昆虫、真菌、羽毛等过敏也占相当比例。应用相应的变应原对病人进行脱敏治疗，其中５９例疗程大于６个多月，最长为２年半。结果显示脱敏治疗对变应性鼻炎和哮喘均有效。总有效率为８４．７％。鼻炎更好。凡疗程越长，效果越好。     

变应性鼻炎患者变应原皮试与血清特异性IgE检测的相关性研究

变应性鼻炎 (ＡＲ )的发生往往与环境中变应原有密切关系 ,找出变应原是ＡＲ诊断和治疗中的关键。对变应原的检测 ,近年来 ,采用体内变应原皮试和体外特异性ＩｇＥ检测 ,为进一步研究这两项检查的临床应用价值 ,本文对两者进行了相关分析 ,其结果如下 :1　材料和方法1 1　研究对象　诊断明确的常年性ＡＲ患者共 5 8例 ,男 30例 ,女 2 8例 ,年龄 12～ 5 5岁 ,病程 1～ 2 0年。对照组为 2 0例健康成人 ,男女各半 ,年龄 2 0～ 40岁。1 2　主要试剂　变应原浸液 :屋尘螨 (蛋白含量 1 5ｍｇ/ｍｌ)、法国梧桐花粉 (9ｍｇ/ｍｌ)、豚草花粉 (10ｍｇ/…     

AcCystatin减轻卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎病变和促炎细胞因子分泌

目的 观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响.方法 将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组.OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂进行腹腔注射,第15天后OVA滴鼻建立小鼠AR模型;A...     

藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定

目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定.方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA.以纯化的mRNA为模板,以含有Xho I内切酶位点和18 by的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA.将cDNA修饰、分级纯化后,获得大于400 by的cDNA片段.将带有黏性末端的双链ds cD-NA与Uni-ZAP XR载体连接,采用ZAP Express cDNA文库合成试剂盒利用λ噬菌体构建藜草花粉λ噬菌体cDNA表达文库,用包装蛋白对合成的ds cDNA进行体外包装,以包装产物感染宿主菌XL1-Blue MRF即获得cDNA表达文库.用PCR方法检测cDNA表达文库的滴度和插人片段的大小.结果:构建的藜草花粉变应原λ噬菌体表达文库的滴度为9.7×10(8)pfu/L,重组率为100%,库容量为4.85pfu.插人片段的长度平均约为1.0 kb.结论:构建的cDNA表达文库的容量及插人片段的大小合适,适用于藜草花粉变应原cDNA克隆的筛选,为制备基因重组藜草花粉变应原疫苗奠定了基础.     

重组人干扰素a-2b治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效观察

肝硬化是我国常见疾病和主要死亡原因之一。我国以乙型病毒性所致的肝硬化为主。目前，治疗肝硬化尚无特效方法，病因治疗及早期预防为治疗的关键。干扰素不仅具有抗病毒、免疫调节作用，而且具有抑制细胞增殖等多种生物活性，许多实验还表现干扰素在一定程度上有抑制肝胶原纤维的合成的作用。本文通过比较慢性乙型肝炎患者运用重组人干扰素a-2b前后血清IV-C、HA含量变化来探讨干扰素抗肝纤维化作用。     

血清白细胞介素2活性的检测

准确测定血清中IL 2活性对评价用重组IL-2进行全身治疗的作用和毒性很重要。以前观察者们采用两种方法确定人重组IL-2治疗性注射后的血清IL-2水平。一种方法是将血清标本在56℃孵育30分钟(加热灭活)以便消除天然存在于人血清中的IL-2抑制因子活性;另一种方法是将血清进行系列稀释使其天然IL-2抑制因子活性在用生物方法测定IL-2活性时不起作用。作者在文中比较了这两种方法以便更准确地测定血清中IL-2水平。作者自病人或健康供血者获得血清标本,健康人血清在体外加入重组IL-2,在生物活性测定之前取相同的标本分别在56℃     

芒果果实中泛变应原profilin的克隆、表达及免疫学活性鉴定

目的　克隆并表达芒果果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)并了解其免疫学活性。方法利用RT-PCR结合:RACE技术克隆芒果果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个芒果profilin的开放阅读框,将其与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了芒果profilin的2个型。每个型的cDNA都包括一个编码131个氨基酸的开放阅读框。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(>70%)。根据变应原的命名规则,将它们分别命名为Man i 3.01和Man i 3.02,并将这两个基因提交到GenBank数据库中,其登录号分别为DQ270547和DQ400579。重组芒果profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2 亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了芒果profilin,并证明与芒果过敏者血清有特异IgE应答。