旋毛虫抗原基因Ts21的原核表达与重组蛋白鉴定

目的 原核表达旋毛虫相对分子质量（Mr）21 000抗原基因（Ts21）并对重组蛋白进行纯化和抗原性鉴定。 方法 将旋毛虫抗原基因Ts21亚克隆入原核表达载体pMAL-c2X，构建重组表达质粒pMAL-c2X-Ts21，经酶切鉴定正确后转化大肠埃希菌TB1，以异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。亲和层析法纯化表达产物。应用十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析鉴定重组蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清，ELISA检测抗体滴度，免疫荧光检测（IFA）确定Ts21蛋白在肌幼虫体内的分布。 结果 SDS-PAGE结果显示，表达产物为Mr 63 500的重组融合蛋白，IPTG诱导4 h后表达量最大，薄层凝胶光密度扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18.2%。Western blotting结果显示该重组蛋白可被旋毛虫、纳氏旋毛虫感染小鼠血清及旋毛虫病患者血清识别，但不能被乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及伪旋毛虫感染小鼠血清识别；与钩虫病、囊尾蚴病、日本血吸虫病患者血清无交叉反应，但与并殖吸虫病、华支睾吸虫病及棘球蚴病患者血清有交叉反应。重组蛋白免疫小鼠可产生高滴度的血清抗体，IFA显示Ts21蛋白主要分布于肌幼虫体壁。 结论 成功制备了旋毛虫Ts21基因的重组蛋白，该蛋白具有较好的抗原性。     

以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体

目的 寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。 方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原，分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法，并以旋毛虫肌幼虫排泄?鄄分泌（ES）抗原作为检测对照。 结果 以T668重组蛋白为抗原，对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测，阳性检出率为100 ％，且敏感性高（0.016 μg / 孔），与ES抗原检测结果完全一致。 结论 T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。     

实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的研究

目的 观察小鼠感染旋毛虫后不同时间肉汁中抗体水平的变化及其与血清抗体水平的相关性。 方法 将288只昆明小鼠随机分成3组（每组96只）： 轻度（A组）、 中度（B组）及重度（C组）感染组，每鼠分别经口感染100、300、500条旋毛虫幼虫，感染后各组每周或隔周随机剖杀8只小鼠，收集血清和肉汁，用旋毛虫肌幼虫排泄物分泌抗原（ES抗原）ELISA检测血清及肉汁中抗体水平；另取30只小鼠，每鼠感染500条旋毛虫幼虫，感染后6周剖杀，制备肉样，用ELISA检测4 ℃及-20 ℃保存不同时间后的肉汁中抗体动态水平。 结果 轻度、中度和重度感染组小鼠分别在感染后4、3和3周开始从肉汁中检出抗体，抗体阳性率分别为87.5%、50%和87.5%；3组小鼠的肉汁抗体阳性率均随感染后时间的延长而逐渐升高，分别在感染后6、4和4周达100%，抗体水平均在感染后8周达高峰，吸光度（A₄₉₀值）分别为0.43、0.49及0.52，之后肉汁中抗体水平稍有下降，但感染后第18周抗体阳性率仍均为100%，A490值分别为0.35、0.41及0.46。3组小鼠感染后不同时间肉汁与血清抗体水平均具有相关性（r₁₀₀=0.940，r₃₀₀=0.970，r₅₀₀=0.983，P<0.05）。感染旋毛虫小鼠肉样在4 ℃保存7 d和1 d的抗体水平A₄₉₀值均为0.53（F=0.250，P>0.05）。在-20 ℃保存8周和1周的肉汁抗体水平A490值分别是0.46和0.50，保存8周的肉汁抗体水平与1周的相比无明显下降（F=2.273， P>0.05）；虽然保存10周的肉汁A₄₉₀值已降至0.43，与保存1周的相比差异有统计学意义（F=15.675， P<0.05），但抗体阳性率仍为100%并持续至实验结束时（保存20周）。 结论 动物死亡或屠宰后不能采集血清时，可从新鲜、冷藏及冷冻胴体采集肉汁代替血清进行抗旋毛虫抗体的检测。     

Ts21重组蛋白斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫抗体的研究

目的应用旋毛虫Ts21基因重组蛋白建立诊断人体旋毛虫病及动物旋毛虫感染的快速血清学方法。方法以胶体金标SPA、旋毛虫Ts21重组蛋白与肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原包被硝酸纤维素膜(NCM),分别建立Ts21重组蛋白-斑点免疫金渗滤法(Ts21-dot immunogold-filtration assay,Ts21-DIGFA)与ES-DIGFA,对旋毛虫病及其他寄生虫病患者血清和感染动物血清进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。结果Ts21-DIGFA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性和特异性分别为94.73%和86.96%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为89.47%和86.96%,差异无统计学意义(χ2敏感=0.368,χ2特异=0,P>0.05);Ts21-ELISA的敏感性和特异性分别为94.73%和94.20%,与Ts21-DIGFA相比差异无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=1.272,P>0.05)。Ts21-DIGFA检测旋毛虫感染猪血清的敏感性和特异性分别为88.89%和100%,ES-DIGFA的敏感性和特异性分别为94.44%和95.00%,差异均无统计学意义(χ2敏感=0,χ2特异=0,P>0.05)。小鼠感染300条旋毛虫后4周Ts21-DIGFA的血清抗体检出率为100%(10/10);感染10条及5条旋毛虫后6周血清抗体检出率均为100%(10/10)。DIGFA可在3 min内肉眼观察结果,抗原包被后的NCM和金标SPA在4℃至少保存6个月。结论Ts21-DIGFA检测旋毛虫抗体具有较高的敏感性和特异性及良好的稳定性和重复性,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

母源性抗旋毛虫抗体对子鼠肠道虫荷的影响

目的 探讨母源性抗旋毛虫抗体的传递途径及其对子鼠感染旋毛虫后肠道排虫的作用。方法 98只昆明小鼠子鼠分为4组,感染母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组（A组）、正常母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组（B组）、感染母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组（C组）及正常母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组（D组）。4组子鼠分别在14、21、42日龄时尾静脉采血,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清抗体水平,然后分别经口感染200条肌幼虫,18 h后剖杀子鼠,计数肠道虫荷。 结果 A、B、C和D等4组14日龄子鼠的肠道平均虫荷分别为5、5、19及18条,21日龄子鼠分别为18、19、75及73条。14日与21日龄的A、B两组子鼠肠道虫荷均显著低于C、D两组子鼠（F₁₄=10.056,F₂₁=35.062,P<0.01）。14日和21日龄子鼠血清吸光度（A₄₉₂）,A组（0.177、0.235）与B组（0.183、0.250）均显著高于C组（0.108、0.105）与D组（0.067、 0.065） （F₁₄=75.326,F₂₁=60.867,P<0.01）;14日和21日龄4组子鼠肠道虫荷与其血清抗体水平均呈负相关（r₁₄=-0.621,r₂₁=-0.756,P<0.01）。42日龄4组子鼠肠道虫荷差异无统计学意义（F₄₂=0.916,P>0.05）,血清抗旋毛虫抗体均为阴性,肠道虫荷与其血清抗体水平无相关性（r₄₂=-0.291,P>0.05）。 结论 母源性抗旋毛虫抗体主要经乳汁传递,可明显促进14日和21日龄子鼠感染旋毛虫后的肠道排虫反应。     

Ts21基因在旋毛虫不同期虫体的表达及特性的研究

目的观察旋毛虫Ts21基因在不同发育期虫体的表达及其特性。方法应用RT-PCR检测旋毛虫Ts21基因在成虫、新生幼虫、感染后15d的成囊前幼虫及感染后42d的成囊幼虫(肌幼虫)的转录情况;应用抗Ts21重组蛋白血清通过间接荧光抗体试验(IFA)对成囊前幼虫及肌幼虫冰冻切片抗原进行检测。应用抗Ts21重组蛋白血清对旋毛虫肌幼虫粗(可溶性)抗原及排泄分泌(ES)抗原进行Western-blot分析。结果RT-PCR发现旋毛虫成虫与感染后42d肌幼虫均扩增出一条分子量约540bp的特异性条带(Ts21基因目的条带),而新生幼虫与感染后15d成囊前幼虫则未扩增出目的条带;IFA结果表明抗Ts21重组蛋白血清只与感染后42d成囊幼虫抗原发生阳性反应,而不与感染后15d的成囊前幼虫抗原发生阳性反应。Western-blot结果显示抗Ts21重组蛋白血清只与旋毛虫肌幼虫粗抗原和ES抗原中Mr 21 000的单一蛋白条带发生阳性反应。结论旋毛虫Ts21基因的表达具有期特异性,Ts21蛋白是旋毛虫肌幼虫ES抗原中的一部分。     

旋毛虫在小鼠先天性传播的初步研究

目的?摇研究旋毛虫在小鼠的先天性传播并观察母鼠抗旋毛虫抗体对攻击感染的保护作用。 方法 将昆明小鼠分为受孕后感染组和感染后受孕组，子鼠出生后1 d内剖杀，检查旋毛虫幼虫；将正常母鼠所产子鼠由感染旋毛虫的母鼠喂养，21 d后宰杀，检查旋毛虫幼虫。用间接ELISA检测感染母鼠所产子鼠出生后不同时间的血清抗旋毛虫抗体，观察母鼠抗旋毛虫抗体对攻击感染的免疫保护。 结果 受孕后7 d感染旋毛虫的母鼠所产的6只子鼠中有2只感染旋毛虫；感染旋毛虫后8 d和22 d受孕雌鼠所产子鼠的感染率分别为20%（2/10）和25%(2/8)，从子鼠检获的旋毛虫均是未成囊的幼虫。交叉哺乳实验表明正常母鼠所产的30只子鼠未见旋毛虫感染。感染母鼠所产27只子鼠出生后1、7、24及40 d的血清抗体阳性率分别为100%、100%、77.8%及14.8%，子鼠出生后40 d攻击感染的减虫率为62.0%；感染母鼠所产子鼠血清被动转移小鼠的减虫率55.7%，与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。 结论 旋毛虫在小鼠可经胎盘传播，母鼠的抗旋毛虫抗体对子鼠抗攻击感染可能具有部分保护作用。     

旋毛虫感染小鼠血清IL-12水平的动态观察

给昆明小鼠口饲含150±5条旋毛虫幼虫的骨骼肌，同时设正常对照组。分别于感染后的7、21 、35 和49 d 眼眶静脉取血，分离血清，用双抗夹心ELISA检测血清中白细胞介素12（IL-12）的含量。感染后7 、21 和35 d小鼠血清IL-12水平与正常对照组比较明显降低（P<0.01），感染49 d血清中的IL?鄄12接近正常对照组（P>0.05）。说明小鼠感染旋毛虫后，早、中期血清IL-12水平降低，晚期则接近正常。     

恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保护作用的研究

目的 探讨在毕赤酵母中表达的恶性疟原虫重组蛋白次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGXPRT）诱导小鼠产生的免疫原性和免疫保护作用。 方法 35只BALB/c小鼠随机分为HGXPRT+ISA720实验组、HGXPRT+福氏佐剂试验组、ISA720对照组、福氏佐剂对照组和空白对照组等5组。HGXPRT（50 μg/200 μl）经小鼠后腿皮下免疫3次，间隔3周。每次免疫后2周尾静脉采血，ELISA检测血清特异性抗体水平。以间接免疫荧光试验（IFAT）分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况。于末次免疫后10 d，各组小鼠经腹腔攻击感染约氏疟原虫致死株10⁵个，继而每隔1 d采尾血制薄血片，观察原虫感染的动态变化。 结果 重组蛋白HGXPRT经与佐剂乳化后免疫的小鼠均诱导出针对HGXPRT的体液免疫应答，3次免疫后血清中特异性抗体滴度达到1∶10⁵以上，而两佐剂组和空白对照组小鼠均未产生特异性抗体。经HGXPRT诱导血清能识别恶性疟原虫天然HGXPRT抗原。经约氏疟原虫致死株攻击感染后4 d，两佐剂对照组和空白对照组疟原虫感染高峰相比实验组提前1 d。HGXPRT+ISA720实验组平均原虫率（29.3%）明显低于ISA720对照组（70.0%）和空白对照组（70.0%）（P<0.05）；HGXPRT+福氏佐剂实验组平均原虫率（51.0%）亦明显低于福氏佐剂对照组（60.7%）与空白对照组（70.0%）（P<0.05）。 结论 恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT对小鼠有较强的免疫原性，产生的抗体能识别恶性疟原虫HGXPRT天然蛋白，并对疟原虫攻击感染后的小鼠有一定免疫保护作用。     

弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抵抗弓形虫感染作用的观察

目的 观察弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的肠黏膜和系统免疫应答及其抗弓形虫感染作用。方法 BALB/c小鼠52只随机分为两组（每组26只），免疫组小鼠用弓形虫复合黏膜疫苗（每毫升含可溶性速殖子抗原1 mg， 霍乱毒素50 μg） 20 μl/只滴鼻免疫2次，间隔2周；对照组用等剂量PBS滴鼻。末次免疫后14 d，各组处死6只，摘眼球取血（0.5～1 ml）；取直肠内粪便（4～5粒），ELISA测定血清IgG和粪IgA抗体；分别计数脾组织、派伊尔集合淋巴结（PP）和肠上皮淋巴细胞（IEL），免疫细胞化学法检测各组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群水平。用RH株弓形虫速殖子（4×10⁴个/只）灌胃攻击感染各组其余小鼠，30 d后颈椎脱位处死，计数肝、脑组织速殖子虫荷。 结果 免疫后14 d，免疫组小鼠血清IgG和粪IgA抗体水平（分别为0.224和0.371），显著高于对照组（分别为0.041和0.037）（P<0.05），脾、PP和IEL中T淋巴细胞与对照组相比明显增生（P<0.01），其中脾、PP中CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞增殖显著（P<0.05），IEL中以CD8⁺ T细胞为主，增殖显著（P<0.01），CD4⁺/CD8⁺ 比值降低（P<0.05）。攻击后30 d，免疫组小鼠存活率（85.0%）显著高于对照组（45.0%）（P<0.05）。免疫组肝、脑组织速殖子数比对照组分别减少86.3%、86.7%，两组差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠，能有效诱导黏膜和系统免疫应答，小鼠存活率显著提高，肝、脑组织虫荷显著降低。     

免疫血清对旋毛虫感染性幼虫侵入肠上皮细胞及其发育的影响

目的观察旋毛虫感染性幼虫排泄分泌(ES)抗原与旋毛虫感染性幼虫表面抗原免疫鼠血清对幼虫侵入HCT-8肠上皮细胞及其发育的影响。方法将旋毛虫感染性幼虫接种至半固体培养基(RPMI1640培养基+1.75%琼脂糖)+HCT-8细胞中,37℃5%CO2培养12、24、36、72和96h后镜下观察幼虫发育情况;将幼虫接种至含免疫血清的半固体培养基+HCT-8细胞中,培养15min后镜下观察幼虫形态及其对肠上皮细胞的侵入情况,36h后应用间接荧光抗体试验(IFAT)观察幼虫蜕皮,并计数Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期幼虫。结果幼虫在半固体培养基培养12h可侵入HCT-8细胞单层,36～72h幼虫可蜕皮1～2次,培养96h可见早期成虫。在含ES抗原免疫血清与感染鼠血清条件下培养15min,幼虫头端可见免疫复合物形成的帽样结构,但在含表面抗原免疫血清、正常鼠血清或不含免疫血清条件下培养的幼虫头端则无帽样结构,头端带有帽样结构的幼虫不能侵入HCT-8细胞单层。在含ES抗原与表面抗原免疫血清条件下发育至Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比(2.25%、2.2%)均明显低于含正常鼠血清条件下培养的幼虫(24.7%)(P0.05)。结论旋毛虫ES抗原免疫血清可阻止幼虫对肠上皮细胞的侵入,ES抗原及表面抗原免疫血清均可阻止部分幼虫的发育(蜕皮)。     

旋毛虫氨基肽酶的表达及其血清学诊断价值的研究

目的构建旋毛虫氨基肽酶（TsAP）基因重组质粒,表达重组TsAP蛋白,评价该蛋白的血清学诊断价值。方法通过RT-PCR扩增TsAP基因。构建重组质粒pGEX-6p-1-TsAP,测序及酶切鉴定后转化E．coliBL21,用异丙基-G-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导,表达产物经GSTSefinoseResin（BBI）亲和层析纯化后应用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定。应用旋毛虫重组rTsAP蛋白EusA（rTsAP-ELISA）对旋毛虫感染小鼠血清进行检测,观察旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体阳性率,并与旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA（ES-EIJIsA）的检测结果进行比较。结果构建的重组表达载体pGEX-6p-1-TsAP能表达TsAP蛋白。SDS-PAGE结果显示,rTsAP的分子质量单位约为80ku,以IPTG诱导4h后表达量最大。rTsAP-ELISA及ES-ELIS对旋毛虫感染小鼠血清的抗体检出率均为100％（40／40）,与曼氏裂头蚴、弓形虫感染小鼠及正常小鼠血清均无交叉反应,与日本血吸虫感染小鼠血清的交叉反应率分别为93．75％（15／16）和50．00％（8／16）（P〈0．05）。rTsAP-ELISA与ES-ELISA对旋毛虫感染2周的小鼠血清抗体检出率分别为50．00％（11／22）和81.82（18／22）,差异无统计学意义（P〈0．05）,至感染后6周抗体检出率均达100％。结论重组TsAP蛋白具有良好的反应原性,但与日本血吸虫感染小鼠血清有较高的交叉反应。     

Characterization of a Trichinella spiralis 31 kDa protein and its potential application for the serodiagnosis of trichinellosis

The Trichinella spiralis 31 kDa protein (Ts31) was screened from the excretory-secretory (ES) proteins of muscle larvae (ML) by immunoproteomics using serum from mice infected with T. spiralis at 18 days post infection (dpi). The aim of this study was to characterize the Ts31 protein and to evaluate the potential of the recombinant Ts31 protein (rTs31) for serodiagnosis of human trichinellosis. Ts31 gene was cloned and rTs31 was produced in an E. coli expression system. An anti-rTs31serum recognized the native protein migrating in a 25–55 kDa range by Western blotting of ML crude or ES antigens. Expression of Ts31 gene was observed at all developmental stages of T. spiralis (adult worms, newborn larvae, pre-encapsulated larvae and ML). An immunolocalization analysis identified Ts31 in the cuticle and stichocytes of the parasite. The sensitivity of rTs31-ELISA and ES antigen ELISA for detecting anti-Trichinella IgG antibodies in sera of patients with trichinellosis was 97.83% (45/46) and 86.78% (39/46), respectively (P > 0.05); The specificity of rTs31-ELISA was 99.13% (114/115), which was significantly higher than 85.22% (98/115) of ES antigen ELISA (P < 0.01). The rTs31 protein of T. spiralis could be considered as a potential diagnostic antigen for trichinellosis.     

旋毛虫抗原基因Ts43原核表达及重组蛋白鉴定

目的原核表达旋毛虫相对分子质量(Mr)43 000抗原基因(Ts43)并对重组蛋白进行抗原性鉴定。方法将旋毛虫抗原基因Ts43克隆入原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Ts43,经测序分析正确后转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Western blotting analysis)鉴定重组蛋白的抗原性。结果SDS-PAGE结果显示表达产物为Mr 41 000的重组融合蛋白,IPTG诱导4 h时表达量最大,薄层凝胶光密度扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的14.7%。Western blotting结果显示该重组蛋白可被旋毛虫、乡土旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠血清及旋毛虫病患者血清识别,与人芽囊原虫、微小隐孢子虫感染小鼠和正常小鼠血清和正常人血清无交叉反应,但与棘球蚴病、囊尾蚴病、日本血吸虫病、并殖吸虫病及华支睾吸虫病患者血清均有交叉反应。结论旋毛虫Ts43基因的重组蛋白具有较好的抗原性,但与某些寄生虫病患者血清有交叉反应。     

应用多重PCR技术鉴定我国6个旋毛虫地理株的研究

目的 对我国猪源旋毛虫地理株进行鉴定和分类。 方法 根据旋毛虫rDNA扩展片段V区（expansion segment V region,ESV）和内转录间隔区（internal transcribed spacers,ITS）ITS1和ITS2基因序列合成5对特异性引物,以旋毛虫（Trichinella spiralis,T1）、乡土旋毛虫（T. nativa,T2）、布氏旋毛虫（T. britovi,T3）、伪旋毛虫（T. pseudospiralis,T4）及纳氏旋毛虫（T. nelsoni,T7）的国际参考株作为对照,应用多重PCR对我国6个猪源旋毛虫地理株（河南、云南、哈尔滨、黑龙江同江、湖北及天津）进行鉴定,并观察影响多重PCR扩增的因素。 结果 我国6个猪源旋毛虫地理株多重PCR扩增结果显示,均具1条与T1相同的条带（173 bp）。应用多重PCR对单条旋毛虫幼虫、不同保存条件的旋毛虫幼虫及含幼虫的新鲜小鼠肌肉提取液进行扩增,均得到173 bp的特异性条带。 结论 经多重PCR鉴定我国6个猪源旋毛虫地理株均为T1。     

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P0.05),C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究

目的　寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)物中的特异性诊断抗原。　方法　应用SDSPAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养18、30h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。　结果　旋毛虫肌幼虫培养18、30h后得到的ES抗原组分大致相同,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为112、110、108、97、53、49、45、42、35、23和16kDa。18hES抗原中的102、97、95和53kDa以及30hES抗原中的53、49、45和43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的23kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。　结论　旋毛虫肌幼虫ES抗原中的23kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

青海省达日县棘球蚴病流行病学调查

目的 分析青海省果洛藏族自治州达日县棘球蚴病的流行分布现状,为制定预防控制措施提供科学依据。 方法 于2007年8～9月对达日县6个乡各2～3个自然村的3周岁以上常驻牧民分别用B超、间接红细胞凝集试验（IHA）和间接ELISA法（重组Ag B和Em 18抗原）检查两型棘球蚴病患病和感染情况。并调查当地啮齿类动物、牦牛、绵羊和野犬的感染情况,对采集的棘球绦虫和棘球蚴用PCR-RFLP方法进行虫种鉴定,并确定其基因型。收集牧民的家犬粪便,用双抗体夹心法检测粪抗原阳性率。 结果 共调查牧民1 723人,B超查出棘球蚴病患者236例（占13.7%）,其中囊型和泡型棘球蚴病患病率分别为5.5%（95/1 723）和8.2%（141/1 723）。男、女性棘球蚴病患病率分别为11.6%和16.0%（χ ²=7.0,P＜0.05）。家犬粪抗原阳性率为11.3%（31/275）。剖检9只无主犬,其中5只棘球绦虫感染阳性,对检获的虫体经PCR-RFLP鉴定,1只犬感染细粒棘球绦虫,基因型为G1,4只犬感染多房棘球绦虫。牦牛、绵羊的细粒棘球蚴感染率分别为26.4%（14/53）和5/16,对从牦牛、绵羊检获的细粒棘球蚴经PCR-RFLP鉴定,基因型均为G1。捕获高原鼠兔239只,石渠棘球绦虫感染率为11.3%（27/239）。 结论 达日县存在细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫和石渠棘球绦虫的分布,泡型和囊型棘球蚴病在人群中严重流行,犬是细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫主要传染源。