MicroRNA-150通过下调MUC4抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨microRNA-150(miR-150)与宫颈癌细胞生物学功能的相关性。方法收集宫颈癌/癌旁配对样本23例,培养宫颈癌细胞系SiHa细胞、HeLa细胞、miR-150 mimics干预细胞。生物信息学分析,确定miR-150靶标,双荧光素酶报告基因检测进行验证;RT-qPCR及Western blot检测miR-150、MUC4表达;CCK-8检测细胞增殖;AO-PI染色后荧光倒置显微镜下,观察细胞自噬;Transwell检测细胞迁移。结果在宫颈癌组织及SiHa、HeLa细胞中,miR-150表达显著下调,MUC4表达显著上调;荧光素酶报告基因检测证实MUC4是miR-150的直接靶标;miR-150过表达后MUC4表达显著降低,SiHa细胞增殖、迁移侵袭能力显著降低,且细胞凋亡增加;miR-150过表达与细胞自噬相关。结论miR-150可能通过下调MUC4表达抑制宫颈癌细胞的恶性生长和侵袭行为,这可能为宫颈癌的诊断和治疗策略提供新方法。     

miR-186通过下调EGFR表达对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨miR-186与EGFR在宫颈癌组织和细胞中的表达及作用机制。方法:RT-PCR与Western blot法分别检测30例宫颈癌组织与30例正常宫颈组织中miR-186与EGFR表达,分析其与宫颈癌临床病理之间的关系。增殖侵袭实验检测SiHa和HeLa细胞增殖与侵袭;双荧光素酶实验明确EGFR的3'-非翻译区(3'-UTR)是否为miR-186的直接靶点。结果:与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-186呈低表达,EGFR呈高表达,两者均与宫颈癌分化程度、淋巴转移密切相关。宫颈癌组织中miR-186表达与EGFR表达均呈负相关(EGFR mRNA:R~2=0.865,P0.001;EGFR蛋白:R~2=0.832,P0.001)。上调miR-186表达能抑制SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。双荧光素酶实验明确miR-186靶定了EGFR的3'UTR并影响了EGFR的蛋白表达。EGFR过表达逆转了miR-186抑制的细胞增殖和侵袭。结论:miR-186通过靶定EGFR的3'-UTR抑制EGFR表达进而抑制宫颈癌SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。     

LONP1在SiHa细胞中的表达及临床意义

目的:探讨线粒体离子肽酶1(LONP1)在宫颈癌SiHa细胞中的表达及其对SiHa细胞增殖、迁移及线粒体功能的影响。方法:Western blot法检测宫颈癌SiHa细胞和正常宫颈上皮细胞中LONP1表达。通过小干扰RNA(siRNA)下调SiHa细胞中LONP1水平,分析其对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及线粒体功能的影响。结果:宫颈癌SiHa细胞中LONP1表达较宫颈上皮细胞明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。降调LONP1表达后,SiHa细胞的增殖能力明显减弱,凋亡增加,迁移能力减弱,线体功能受到抑制(P0.05)。结论:下调SiHa细胞中LONP1表达可抑制细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,影响细胞的线粒体功能,从而参与宫颈癌的发展进程。     

LncRNA MALAT1靶向miR124-3p/STAT3对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探究LncRNA MALAT1靶向miR124-3p/STAT3对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法采用RT-PCR检测Ect1/E6E7、Hela、SiHa和C33a细胞中LncRNA MALAT1的mRNA表达水平;构建慢病毒稳定细胞系,采用双荧光素酶报告基因分析LncRNA MALAT1和miR-124-3p-OE的靶向关系;采用MTT法检测细胞的增殖活力;采用Transwell分析细胞的侵袭情况;采用Western blot检测细胞中STAT3的蛋白表达。结果与Ect1/E6E7细胞比较,Hela、SiHa和C33a细胞中LncRNA MALAT1的mRNA相对表达水平明显上升(P 0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示LncRNA MALAT1靶向作用miR-124-3p并下调其表达水平(P 0.05)。LncRNA MALAT1敲降或miR-124-3p过表达均可显著抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭,并下调STAT3的蛋白表达(P0.05)。结论 LncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p/STAT3分子轴促进宫颈癌细胞的增殖和迁移,有望为宫颈癌的早期诊断和临床治疗提供新的思路。     

EXOSC4对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:探讨EXOSC4在调节宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭方面的作用及机制。方法:通过GEPIA在线数据库分析EXOSC4在宫颈癌中的表达及预后情况,Western blot法检测人宫颈癌细胞株中EXOSC4的表达,设计合成靶向EXOSC4的特异性shRNA,构建稳定低表达EXOSC4的宫颈癌细胞株。Western blot和荧光定量PCR验证干扰效率;CCK-8和细胞克隆形成实验检测各组HeLa细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测细细胞周期;采用细胞划痕和Transwell实验检测HeLa细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)和Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、c-Myc、cyclin D1)的表达水平。结果:宫颈癌组织中EXOSC4表达明显高于正常组织,EXOSC4高表达提示预后不良。与HCC94和SiHa细胞系相比,EXOSC4在HeLa细胞中表达量最高。抑制EXOSC4表达可显著降低宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,细胞周期阻滞在G_0/G_1期,上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-myc和Cyclin-D1表达(均P0.05)。结论:沉默EXOSC4可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-335调控ROCK1对宫颈癌细胞作用的研究

目的探讨miR-335调控Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响。方法选取人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7、宫颈癌细胞系SiHa,分别转染miR-335 mimic、miR-335inhibitor、control mimic及control inhibitor,采用RT-PCR检测miR-335表达,Western blot检测ROCK1蛋白表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果与Ect1/E6E7细胞相比较,在SiHa中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P0.05)。转染miR-335mimic后SiHa细胞中miR-335表达显著增高,ROCK1蛋白表达显著降低(P0.05);转染miR-335 inhibitor后SiHa细胞中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P0.05)。转染miR-335mimic后SiHa细胞侵袭、迁移能力显著降低,而转染miR-335 inhibitor后则显著增高(P0.05)。与转染control mimic相比,共转染miR-335 mimic与野生型ROCK1-WT可使SiHa荧光素酶活性及ROCK1 mRNA明显降低(P0.05)。结论 miR-335可抑制宫颈癌细胞侵袭及迁移,可能通过调控ROCK1发挥作用。     

miR-200c通过靶向下调FOXC1逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性的机制研究

目的:探讨miR-200c通过调控叉头框转录因子C1(FOXC1)影响宫颈癌细胞对顺铂敏感性的机制研究。方法:qRT-PCR法检测miR-200c在宫颈癌顺铂耐药组织和细胞中的表达水平。CCK-8和Annexin V-FITC/PI双染流式术检测过表达miR-200c对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响;双荧光素酶报告基因验证miR-200c与FOXC1的靶向作用关系;进一步实验,探讨miR-200c通过靶向FOXC1对HeLa/DDP细胞恶性生物学行为的影响。结果:miR-200c在宫颈癌耐药组织和HeLa/DDP细胞中均低表达。过表达miR-200c可显著抑制HeLa/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡。双荧光素酶报告基因证实,miR-200c靶向作用FOXC1并下调其表达水平。过表达miR-200c通过靶向下调FOXC1进而显著抑制HeLa/DDP细胞增殖和诱导细胞凋亡,从而增强HeLa/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:miR-200c通过下调FOXC1表达增强宫颈癌HeLa/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

RhoC siRNA对宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨Ras相似物C(RashomologueC,RhoC)GTP酶对宫颈癌SiHa细胞增殖和转移的影响。方法:以人宫颈癌细胞株SiHa为研究对象,利用RhoC小干扰RNA对RhoC基因进行沉默,RT-PCR和WesternBlot检测转染前后RhoC的表达变化,MTT法比较细胞增殖能力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率的改变。基质胶粘附实验比较细胞粘附率的变化,transwell体外侵袭实验比较细胞侵袭能力变化,体外迁移实验比较细胞运动能力的改变。结果:RhoCsiRNA明显下调RhoC基因的表达。RhoC表达下调后,SiHa细胞的增殖能力和凋亡率没有明显变化(P>0.05),SiHa细胞对基质胶的粘附率明显降低(P<0.01),SiHa细胞的体外侵袭能力明显降低(P<0.01),体外迁移能力显著降低(P<0.01)。结论:RhoC明显地促进了宫颈癌SiHa细胞株的体外粘附、侵袭和迁移,但对其增殖和凋亡没有显著作用。提示RhoC在宫颈癌的恶性进展中起重要作用。     

沉默MMP-2对人宫颈鳞癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响。方法:分别用MMP-2沉默慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞(MMP-2-LV组)、空载慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞为阴性对照组(NC-LV组)。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)观测MMP-2 mRNA的表达,蛋白质印迹(Western blotting)检测MMP-2蛋白的表达,流式细胞技术、Transwell侵袭、迁移和CCK-8细胞增殖实验观测MMP-2对细胞凋亡、侵袭、迁移和细胞增殖的影响,在裸鼠上构建移植瘤模型观测MMP-2对小鼠皮下成瘤能力。结果:转染后,与NC-LV组比较,MMP-2-LV组细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达量较低(P<0.05),增殖能力降低(P<0.01),侵袭、迁移能力降低(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,接种MMP-2-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积小于接种NC-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积(P<0.01)。结论:沉默MMP-2可抑制SiHa细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进其凋亡,MMP-2可能是宫颈鳞癌的潜在诊疗靶点。     

PinlsiRNA对宫颈癌细胞SiHa增殖和凋亡的影响

目的：通过小干扰RNA（siRNA）栽体介导抑制肽基脯氨酰同分异构酶（Pinl）表达,探讨Pinl对宫颈癌细胞SiHa增殖与凋亡的影响。方法：构建pGPU6／GFP／Neo—PinlsiRNA表达载体,脂质体介导将其转染至宫颈癌细胞SiHa中;实验设3组：实验组（SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组）、阴性对照组（SiHa／pGPU6-con组）和空白对照组（Si-Ha）。采用RT—PCR、Western blot法检测Pinl的表达;M1Tr法检测细胞增殖活性;原位末端标记法（TUNEL）和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果：转染SiHa／pGPU6．PinlsiRNA的SiHa细胞中,PinlmRNA和蛋白表达分别下调68．1％和54．8％,细胞增殖显著抑制。TUNEL显示典型细胞凋亡特征,SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组的凋亡指数（AI）为（29．6±14．58）％,显著高于SiHa／pGPU6-con组[（8．44±5．65）％]和空白对照组[（5．34±4．47）％]（P〈O．05）。SiHa／pGPU6．PinlsiRNA组的细胞凋亡率为（30．95±16．47）％,显著高于SiHa／pGPU6-COIl组[（6．18±6．10）％]和空白对照组[（5．95±4．99）％]（P〈0．05）。结论：RNA干扰技术能特异高效的抑制Pinl基因的表达,Pinl基因的下调能抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,提示Pinl可能成为治疗宫颈癌的新靶点。     

LATS1在宫颈癌中的表达及其生物学特性的实验研究

目的:探讨LATS1在宫颈癌中表达的临床意义及生物学特性。方法:免疫组化法检测80例宫颈癌组织中LATS1蛋白表达;分别以Si Ha及Caski细胞系为媒介,进行LATS1转染及干扰实验;MTT及基质胶侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力。结果:80例宫颈癌组织中LATS1低表达的比例约为45%(36/80);LATS1过表达抑制了宫颈癌细胞的增殖和侵袭,LATS1过表达上调p27表达量的同时下调cyclin E及MMP-9的表达量。LATS1过表达刺激了YAP的磷酸化过程。敲除LATS1的Caski细胞系中则呈现相反的结果。结论:在宫颈癌中,LATS1发挥肿瘤抑制剂的功能,在肿瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用。     

Notch基因细胞内区在子宫颈癌组织中的表达及DAPT对子宫颈癌细胞的影响

目的 了解宫颈癌组织中Notch基因细胞内区(NICD)蛋白的表达水平及其临床意义,探讨γ分泌酶抑制剂--氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对宫颈癌细胞系的作用.方法 应用蛋白印迹法检测40份宫颈癌组织及21份正常宫颈组织中NICD蛋白的表达水平.体外培养宫颈癌细胞SiHa、HeLa,加入不同浓度的DAPT,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测细胞的S期细胞比例(SPF)、凋亡细胞百分比和增殖指数(PI);应用蛋白印迹法检测DAPT对SiHa、HeLa细胞中NICD蛋白表达的影响.结果 NICD蛋白的表达水平在宫颈癌组织中明显高于正常宫颈组织(分别为1.237±0.353、0.938±0.105),两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).在宫颈癌组织中,低分化者NICD蛋白的表达水平明显高于高～中分化者(分别为1.496±0.540、1.150±0.216),有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(分别为1.419±0.532、1.159±0.210),有宫旁转移者明显高于无宫旁转移者(分别为1.718±0.710、1.183±0.258),腺癌明显高于鳞癌(分别为1.463±0.395、1.162±0.187),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).DAPT作用于SiHa、HeLa细胞后,NICD蛋白的表达水平下降(P<0.05).不同浓度的DAPT作用不同时间能够抑制宫颈癌细胞的增殖、促进其凋亡,且浓度越高出现作用的时间越早.结论 NICD在宫颈癌的发生、发展中起一定的促进作用;DAPT能抑制宫颈癌细胞的增殖,促进宫颈癌细胞的凋亡,其机制可能与抑制NICD的生成有关.     

槲皮素对宫颈癌细胞SiHa增殖的影响

目的:探讨槲皮素对于人宫颈癌细胞Si Ha的作用及机制。方法:用不同浓度的槲皮素(0、20、40和80μmol/L)处理Si Ha细胞不同时间后(24 h,48 h和72 h),通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力的变化;通过流式细胞仪检测槲皮素对细胞周期的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测槲皮素对细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,槲皮素处理Si Ha细胞24 h和48 h后,40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);槲皮素处理Si Ha细胞72 h后,20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);在40μmol/L和80μmol/L组,随着培养时间延长,细胞活力较24 h时降低(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,Si Ha细胞经过20、40和80μmol/L浓度的槲皮素分别处理48 h后,处于G0/G1期的细胞百分比明显高于对照组。RT-PCR和Western blotting结果显示,槲皮素可以下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达。结论:槲皮素通过下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达,可以抑制Si Ha细胞的活力和增殖。     

Downregulation of miR-599 predicts poor outcome in cervical cancer patients and promotes the progression of cervical cancer

ObjectiveCervical cancer remains a leading cause of gynecological cancer-related death. In this study, we aimed to investigate the expression pattern of miR-599 and its prognostic significance in cervical cancer.Materials and methodsThe RT-qPCR analysis was used to detect the expression levels of miR-599 in cervical cancer tissues and cell lines. The association between miR-599 expression and clinical characteristics of cervical cancer patients was analyzed using the χ² test. The Kaplan–Meier analysis and multivariate Cox proportional hazards model were used to explore the prognostic significance of miR-599. Then, CCK-8 assays, transwell migration, and invasion assays were used to assess the effects of miR-599 on tumor cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, respectively.ResultsmiR-599 expression was significantly downregulated in cervical cancer tissues and cells compared with non-cancerous tissues and HaCaT cells, respectively. Statistical analysis revealed that miR-599 expression was associated with lymph node metastasis and FIGO stage. The miR-599 expression was an independent prognostic factor for overall survival. Functionally, overexpression of miR-599 suppressed cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, while downregulation of miR-599 had opposite effects.ConclusionmiR-599 acts as a tumor suppressor in cervical cancer that inhibiting cell proliferation, migration, and invasion of cervical cancer cells, suggesting that miR-599 may be a potential prognostic biomarker and novel targeted strategy for cervical cancer.     

Vascular endothelial growth factor C promotes cervical cancer cell invasiveness via regulation of microRNA-326/cortactin expression

Vascular endothelial growth factor C (VEGF-C) accelerates cervical cancer metastasis, while the detailed mechanism remains largely unknown. Recent evidence indicates that microRNA play a crucial role in controlling cancer cell invasiveness. In the present study, we investigated the role of miR-326 in VEGF-C-induced cervical cancer cell invasion. VEGF-C expression was higher and miR-326 was much lower in primary cervical cancer specimens than that in non-cancerous specimens, and a negative correlation between VEGF-C and miR-326 was found. On cervical carcinoma cell line SiHa cells, treatment with VEGF-C downregulated miR-326 level and increased cortactin protein expression. Transfection with miR-326 mimic reversed cortactin expression induced by VEGF-C, suggesting that VEGF-C increased cortactin via downregulation of miR-326. VEGF-C activated c-Src and c-Src inhibitor PP2 abolished VEGF-C effect on miR-326 and cortactin expression, implying that VEGF-C regulated miR-326/cortactin via c-Src signaling. VEGF-C promoted SiHa cell invasion index, which was largely inhibited by transfection with miR-326 antagonist or by siRNA against cortactin. In conclusion, our findings implied that VEGF-C reduced miR-326 expression and increased cortactin expression through c-Src signaling, leading to enhanced cervical cancer invasiveness. This may shed light on potential therapeutic strategies for cervical cancer therapy.     

肿瘤靶向多肽TMTP1偶联阿霉素选择性地抑制高侵袭性宫颈癌细胞株生长的体外研究

目的:合成一种新型的抗肿瘤药物TMTP1-Dox,探讨其应用于宫颈癌化疗的潜在应用价值。方法:选取正常宫颈上皮永生化细胞系End1及宫颈癌细胞系SiHa和C-33A。Transwell试验验证侵袭转移能力。细胞亲和试验检测FITC-TMTP1对细胞株的亲和能力。流式细胞仪检测Dox及TMTP1-Dox的细胞摄入。CCK-8法检测Dox和TMTP1-Dox作用于End1、C-33A和SiHa细胞时的生长抑制率。结果:SiHa细胞的侵袭能力显著强于C-33A和End1细胞,TMTP1对SiHa细胞的亲和力高于C-33A和End1,SiHa细胞对TMTP1-Dox的摄入量显著多于C-33A和End1,差异均有统计学意义(P0.05)。作用12和24h时,TMTP1-Dox/Dox对SiHa细胞的生长抑制率无显著差异(P0.05)。TMTP1-Dox对C-33A和End1细胞的生长抑制作用明显弱于Dox细胞,差异有统计学意义(P0.05)。结论:TMTP1-Dox能选择性地抑制高侵袭能力的宫颈癌细胞的生长增殖,对正常细胞的毒性作用低。提示TMTP1-Dox对于宫颈癌的靶向治疗具有潜在应用价值。