CD55和CD59检测在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义

目的探讨CD55、CD59检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）的临床诊断意义。方法采用流式细胞术检测20例PNH患者、45例AA患者和20例正常人外周血粒、红细胞CD55、CD59表达阳性率。结果正常人外周血粒、红细胞CD55、CD59表达阳性率均〉95%;部分AA患者外周血粒、红细胞CD55、CD59表达阳性率〈95%但均〉90%;PNH患者外周血粒、红细胞CD55、CD59表达阳性率与正常对照组和AA组相比均明显减低,差异具有显著性（P〈0.01）。结论外周血粒、红细胞CD55、CD59检测是诊断PNH较特异而又敏感的方法 ,特别是对表现不典型的PNH及AA-PNH综合征的诊断具有重要意义。     

CD55、CD59、CD34对血液病的早期诊断研究应用

目的探讨CD55、CD59、CD34抗原表达率对血液病的早期诊断及鉴别诊断价值。方法应用流式细胞仪测定血液病患者及对照粒细胞CD55、CD59、CD34抗原表达率,找出相关性。结果AA、PNH、AA—PNH患者CD55、CD59、CD34抗原表达率较其他血液病及正常明显增高。结论粒细胞上CD55、CD59、CD34抗原异常表达率可做血液病患者早期诊断及鉴别诊断指标,特别对AA、AA．PNH综合征、PNH有重要诊断价值。     

流式细胞FS散射光参数在贫血诊断中价值

流式细胞术是近年发展起来，在临床应用逐渐广泛的一种诊断技术，它不仅可以检测细胞表面的荧光信号，还可以多方面分析细胞的物理参数，如激光散射光Fs和ss信号。研究表明，补体调节蛋白CD55和CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）、再生障碍性贫血（AA）、缺铁性小细胞低色素性贫血（IDA）患者细胞上有不同程度的改变。我们在实验中发现，红细胞CD59的缺陷与红细胞的FS激光散射光有一定的相关性，不同的贫血患者其红细胞的CD59／FS特征不同，现将实验结果报告如下：     

CD55、CD59、CD34对贫血的早期诊断研究应用

目的 探讨CD55、CD59、CD34抗原表达率对贫血的早期诊断及鉴别诊断意义,进而达到早期发现、早期诊断、早期预防治疗目的 .方法 应用流式细胞仪测定贫血病人及对照组粒细胞上CD55、CD59、CD34抗原表达率,并同时做相关血液学试验诊断,经过统计学处理,找出相关性.结果 表明PNH、AA、AA-pNH病人CD55、CD59、CD34抗原表达率较其他全血细胞减少症及正常对照组明显增高,而相互间有显著差异,P＜0.01或P＜0.05.结论 粒细胞上CD55、CD59、CD34抗原异常表达率可做贫血病人早期诊断及鉴别诊断指标,特别对血液病的AA、AA-PNI-I综合征、PNH有重要首选、敏感、特异诊断价值.     

CD55、CD59、CD34对PNH早期诊断研究应用

目的探讨CD55、CD59、CD34抗原对阵发性血红蛋白尿(PNH)的早期诊断的价值,寻找PNH早期诊断敏感指标进而达到早期发现、早期诊断、早期治疗的目的。方法应用流式细胞仪测定PNH综合症患者的CD55、CD59、CD34抗原变化关系,并与PNH、AA等疾病组以及正常对照组CD55、CD59、CD34抗原相互变化关系,经过统计学处理,找出相关性。结果结果表明PNH CD55、CD59、CD34抗原较AA及其他疾病组及正常对照组明显减低,并与溶血程度呈正相关,且早于其他溶血指标。结论CD55、CD59、CD34抗原表达率可做PNH早期诊断最敏感指标,并与预后转归密切相关。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿14例诊断

阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是一种后天获得性血细胞膜缺陷的克隆性疾病．因造血于细胞发生X染色体．上PIG－A基因突变，使糖化磷脂酸肌醇（GPI）合成障碍，GPI锚连蛋白缺乏（其中包括一些科体调节蛋白），由此种变异于细胞分化增殖而来的血细胞对补作敏感而易破坏溶解所导致的疾病．本病的主要特征与睡眠有关、间歇发作可伴有全血细胞减少或反复血栓形成．我科1987~01~1997－12共收治PNH患者14例，现对其诊断及治疗情况加以分析．l对象和方法14例中，男9例，女5例，均为我院初诊及住院治疗的患者．年龄，20岁以下者1人，SO岁以…     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的诊治

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)为后天获得性造血干细胞磷脂酰肌醇聚糖A (PIG-A)基因在(Xp22.15)上突变使糖化肌醇磷脂(GPI)连接细胞表面的锚连蛋白缺乏,对补体敏感性异常增高引起的一种慢性血管内溶血病,重者有血红蛋白(Hb)尿发作[1-4].该等锚连蛋白有多种,主要为补体调节蛋白C3转换酶衰变加速因子(DAF,CD55)和反应性溶血膜抑制物(MIRL,亦称膜攻击复合物抑制因子,CD 59)缺乏.不仅红细胞缺乏,CD55/CD59,粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血小板也都缺乏.临床特点有溶血性贫血[贫血,黄疸,网织红细胞增高,非结合或间接胆红素升高,乳酸脱氢酶升高,游离血红蛋白(Hb)增高结合珠蛋白缺减]、血红蛋白尿发作,血细胞减少,易有胆石症和(或)静脉血栓形成及肾功能减低,并有可能向再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征( MDS)甚至白血病转化等[1-4].男性多于女性,发生率占溶血性贫血的25％～50％.PIG-A基因突变不能解释骨髓衰竭和GPI-PNH细胞克隆扩增.可能PNH的自反应CD3+ CD8+ CD57+T细胞选择性攻击正常GPI+造血干细胞,而PNH的GPI -细胞逃过此攻击后渐扩增而发病[5].故PNH为自身免疫性疾病.为提高PNH的诊断水平,探讨PNH的诊断、治疗方面的有关问题.     

流式细胞术对再生障碍性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿患者行CD55、CD59检测的临床意义

阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)是一种造血干细胞基因突变的克隆性疾病糖化磷脂酰肌醇锚连蛋白(GPI-AP) 通过糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚连到细胞表面,其中衰变加速因子(CD55,DAF)和反应性溶血的膜抑制物(CD59, MIRL)参与调节补体介导的溶膜反应。而CD55、CD59是细胞膜上糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的细胞表面分子,故异     

再生障碍性贫血患者外周血淋巴细胞表型分析

采用免疫荧光技术及流式细胞仪检测40例再生障碍性贫血（再障，AA）患者外周血淋巴细胞免疫表型，并与正常对照组相比。结果表明AA患者CD8＋、HLA－DR＋及γδT细胞百分率显著增高（P均＜0．025），且其增高程度与疾病的严重程度相关；重症AA（SAA）患者NK细胞百分率也有不同程度地增高。提示AA患者外周血中可能存在CTL、γδT、NK等不同类型效应细胞的异常增多及活化，并可通过直接或间接作用抑制造血，从而导致AA的发生。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿16例临床分析

目的 研究阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的临床和实验室检查特点,以提高诊断率.方法 对PNH患者进行血常规及网织红细胞计数、溶血方面检查、骨髓细胞形态学检查、流式细胞仪计数(CD55、CD59)等检测和临床表现方面的分析.结果 PNH患者首发症状较典型,几乎所有患者均有不同程度的贫血,以中重度贫血为主,占81.25%;半数患者有血红蛋白尿;所有患者网织红细胞计数均升高;16例患者中有13例骨髓增生活跃,所有患者粒红比减低且倒置;PNH患者CD55、CD59异常表达率高,异常表达率分别为68.75%及100%,敏感性高.结论 流式细胞仪计数(CD55、CD59)用于诊断PNH灵敏度高,是一种有效的值得推广的诊断PNH的实验室方法.     

调节性T细胞在阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常克隆中的免疫机制研究

目的　测定阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者调节性T细胞的变化,探讨其在PNH异常克隆中可能的免疫机制。方法　2018年1月至2022年1月在宁德师范学院附属宁德市医院血液科就诊的31例PNH患者为病例组,其中发作性PNH 15例（男10例、女5例,年龄23～69岁）、再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿（AA-PNH）16例（男11例、女5例,年龄20～68岁）;25例健康体检者为对照组（男14例、女11例,年龄19～56岁）。用流式细胞仪检测各组外周血T细胞和Th细胞亚群变化以及CD4⁺CD25⁺T细胞和Th3细胞数量,用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-PCR）测定转化生长因子-β（TGF-β）和叉头框蛋白P3（FOXP3）的表达水平,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TGF-β和白细胞介素-10（IL-10）浓度。采用F检验、Bonferroni方法、H检验、χ²检验。结果　AA-PNH组CD4⁺/CD3⁺细胞和CD4⁺/CD8⁺比例低于对照组［（44.55±11.91）%比（57.61±6.90）%、0.66（0.38,1.26）比1.32（0.86,1.64）］,CD8⁺/CD3⁺细胞高于对照组［（62.31±10.76）%比（45.51±5.54）%］,差异均有统计学意义（均P<0.05）;AA-PNH组Th1/CD3⁺CD4⁺细胞高于发作性PNH组及对照组［（24.27±4.30）%比（12.61±3.02）%、（4.07±1.93）%］,差异有统计学意义（P<0.05）。AA-PNH组及发作性PNH组CD4⁺CD25⁺ T细胞和Th3细胞的数量高于对照组［（67.82±15.67）×10⁶/L、（97.11±17.10）×10⁶/L比（43.86±9.52）×10⁶/L,（57.15±10.58）×10⁶/L、（82.27±15.15）×10⁶/L比（42.35±9.33）×10⁶/L］,差异均有统计学意义（均P<0.05）。发作性PNH组、AA-PNH组中FOXP3及TGF-β的mRNA的阳性表达率和TGF-β及IL-10浓度均高于对照组［86.67%（13/15）、75.00%（12/16）比40.00%（10/25）,73.33%（11/15）、62.50%（10/16）比36.00%（9/25）,（49.76±2.03）μg/L、（37.29±1.78）μg/L比（17.01±3.27）μg/L,（7.86±1.17）pg/ml、（5.57±1.13）pg/ml比（1.33±0.49）pg/ml］,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论　PNH患者调节性T细胞数量增加,功能亢进,推测其免疫抑制作用可能使其在PNH异常克隆中逃避免疫监视。     

Achievements and limitations of complement inhibition by eculizumab in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: the role of complement component 3

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is a hematological disorder characterized by complementmediated hemolytic anemia, thrombophilia and bone marrow failure. The clinical hallmark of PNH is evident chronic hemolysis due to the absence of the complement regulators CD55 and CD59 on PNH erythrocytes. Intravascular hemolysis drives the major clinical features of PNH, including anemia, hemoglobinuria, fatigue and other hemolysisrelated disabling symptoms, such as painful abdominal crises, dysphagia and erectile dysfunction. A peculiar thromboembolic risk has been associated with the hemolysis in PNH, but its pathophysiologic cause remains unclear. The treatment of PNH has remained supportive until a few years ago, when the first complement inhibitor, designated eculizumab, became available. Chronic treatment with eculizumab results in sustained control of intravascular hemolysis, leading to hemoglobin stabilization and transfusion independence in half of the patients. However, residual anemia may persist in a substantial fraction of patients. Recent observations by different groups, including our own, have demonstrated that residual hemolysis may be due to persistent activation of the early phases of the complement cascade, leading to progressive C3-deposition on PNH erythrocytes and possible subsequent extravascular hemolysis through the reticuloendothelial system. Here we critically review the available clinical results of eculizumab treatment for PNH patients, pointing out the recent insights into the pathophysiology of the disease. We discuss the role of the different components of the complement cascade leading to hemolysis, in both the absence and presence of the terminal effector pathway inhibition by eculizumab. Finally, we provide a theoretical rationale for the development of novel strategies of complement inhibition which could in the future further improve on the already substantial efficacy of eculizumab.     

斑秃患者皮损处T淋巴细胞表型的研究及Fas的表达

目的　研究斑秃患者皮损处浸润T淋巴细胞的表型及Fas的表达情况。方法　应用免疫组织化学技术检测斑秃患者皮损处CD4和CD8T淋巴细胞及Fas的表达。结果　CD4和CD8:活动期和稳定期斑秃患者皮损处无论是毛囊周围还是血管周围CD4T淋巴细胞浸润数量均明显多于CD8T淋巴细胞 (P <0 .0 5 ) ;斑秃活动期的CD4和CD8T淋巴细胞浸润数量与稳定期和对照组相比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。Fas :与对照组相比较 ,斑秃患者皮损处毛囊角质形成细胞Fas的表达例数较多 (P <0 .0 5 )。结论　斑秃患者皮损处浸润T淋巴细胞以CD4T细胞占优势 ;Fas在斑秃皮损处毛囊角质形成细胞异常表达。     

人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞活化的影响

目的探讨人骨髓间充质千细胞在体外对再生障碍性贫血患者T细胞活化的影响。方法从人骨髓分离培养间充质干细胞，用尼龙棉柱分离T淋巴细胞，分别以不同数量间充质干细胞加入到植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞活化体系中，通过流式细胞仪获取数据，计算CD3^＋CD25^＋和CD3^＋CD38^＋T细胞的表达率。结果当间充质干细胞为1×10^4／孔时，与单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞（对照组）相比，间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞CD25及CD38的表达呈明显抑制作用，差异有统计学意义（P〈0．01）。当间充质干细胞为1×10^3／孔时，与对照组相比无统计学意义。结论间充质干细胞在体外抑制再生障碍性贫血患者T细胞的活化，且这种抑制作用具有数量依赖性。     

CD59在艾滋病感染者CD4^＋T细胞表达及凋亡的影响

目的探讨补体调节蛋白CD59在艾滋病（HIV）感染者外周血CD4^＋T细胞上的表达及与凋亡之间的关系。方法收集12例确诊HIV感染者外周血标本（观察组）,同时收集10例健康对照者外周血标本（对照组）。分离外周血单个核细胞（PBMC）,并进行细胞表面染色。使用BDFACSCanto流式仪检测各项指标,采用FACSDiva软件分析CD4^＋T细胞CD59的表达情况,并分析CD59^＋CD4^＋T、CD59^-CD4^＋T细胞的凋亡情况。结果观察组CD4^＋T细胞CD59表达明显高于对照组（t=5．198,P〈0．01）;CD59＋CD4^＋细胞凋亡比率明显升高（t=5．968,P〈0．01）;而CD59^-CD4^＋T细胞的凋亡比例二组间差异无统计学意义（t=0．1353,P=0．8577）。结论HIV感染可引起CD4^＋T细胞补体调节蛋白CD59的表达,而CD59的表达会使CD4^＋T细胞凋亡增加。     

缺失错配修复基因MLH1的结直肠癌HCT唱116细胞对氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的 研究缺失错配修复基因MLH1（MutL homolog 1）的结直肠癌细胞HCT-116对氟尿嘧啶（5-Fu）耐药机制。方法 通过构建MLH1缺失的结直肠癌细胞HCT-116稳定表达MLH1细胞株,CCK-8试剂检测细胞恢复MLH1表达后对化疗药物5-Fu耐药性的影响,并通过流式细胞仪检测细胞表面干细胞标志CD133和分化标志CK20以及CK8的表达变化。结果 HCT-116稳定表达MLH1分子后,其对5-Fu作用的化疗耐受性降低,5-Fu处理后细胞的活率显著降低（P<0.01）;流式细胞仪检测结果显示CD133表达显著降低,并伴随细胞分化标志CK8和CK20表达上调。结论 结直肠癌细胞缺失错配修复基因MLH1引起5-Fu耐药性可能与其促进肿瘤干细胞样特性密切相关。     

Macrophage colony-stimulating factor restored chemotherapy-induced granulocyte dysfunctions: role of IL-8 production by monocytes.

We evaluated the influence of M-CSF treatment on granulocyte functions in patients with ovarian cancer. Eighteen patients with ovarian cancer received two consecutive courses of chemotherapy (16 cases, CAP therapy and two cases, CP therapy) at 4-week intervals. M-CSF (8 million U/day) was infused for 7 days starting from the next day after chemotherapy. Superoxide anion production by isolated peripheral blood granulocytes, their phagocytosis, and expression of cell adhesion molecules such as CD11a, CD11b, and CD18 on granulocytes were measured by flow cytometry. Cytokine (IL-8, G-CSF, and GM-CSF) levels in peripheral blood monocyte (PBM) culture supernatants were measured by enzyme-linked immunosorbent assay in 5 out of 18 cases. The levels of CD11a, CD11b and CD18 expression on peripheral blood granulocytes and superoxide anion production by granulocytes were significantly suppressed by chemotherapy without CSF support. The levels of CD11a and CD18 expression on granulocytes were significantly enhanced by administration of M-CSF. When M-CSF was added to cultured PBM, the level of IL-8 in the supernatant increased with the concentration of M-CSF. When IL-8 was added to cultured granulocytes, the levels of CD18 expression on granulocytes and superoxide anion production by granulocytes were significantly increased. These observations suggest that M-CSF enhances the production of IL-8 from monocytes in vivo, thereby improving chemotherapy-induced granulocyte dysfunction.     

2型糖尿病患者粒细胞和单核细胞CD11b表达与糖尿病微血管病的关系

目的观察2型糖尿病(T2DM)患者粒细胞和单核细胞CD11b表达与糖尿病微血管病发生的关系。方法用流式细胞术检测77例无微血管病的T2DM患者(A组)和67例伴有微血管病的T2DM患者(B组)外周血粒细胞和单核细胞CD11b表达的相对平均荧光强度(RMFI),另以78例非糖尿病标本(C组)为对照。结果 B组粒细胞和单核细胞CD11b表达的RMFI分别为(31.96±8.96)和(177.95±48.38),明显高于C照组的(20.10±12.10)和(150.59±37.15)或A组的(17.64±10.94)和(158.09±25.55)(P<0.01)。微血管病累及部位的数量与粒细胞RMFI密切相关(P<0.01)。结论伴有微血管病的T2DM患者粒细胞和单核细胞表面CD11b的表达异常增高;粒细胞CD11b的表达与微血管病累及部位的多少具有良好的相关性。