卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步分析研究

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系。采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行ｐ５３基因突变蛋白表达检测。结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％。２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８）；卵巢恶性肿瘤第七外显子突变可出现ｐ５３蛋白高表达；第七外显子突变可出现于不同临床分期及组织分型     

肝细胞癌p53基因突变初步研究

本文应用快速银染多了矣酶链反应单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中ｐ５３基因变异情况。结果１３例癌组织中有异常电带，其中２闰于第５外显子，各有３例位于第６和第７外显子，位于第８显子有５例，ｐ５３基因变异的病例乙型肝炎表面抗原均阳性，实验结果表明：本技术能有效检测出基因突变；肝细胞癌中ｐ53基因突变率较高且有多个位点；肝细胞癌ｐ５３基因突变可能与乙型肝炎病毒感染有关     

胆管癌p53基因突变和蛋白表达的研究

目的了解胆管癌ｐ５３基因突变和蛋白表达的变化。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测胆管癌中ｐ５３基因突变，并用亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫组织化学染色方法检测胆管癌ｐ５３蛋白的表达。结果１１例胆管癌中，３例胆管癌样品ＰＣＲ－ＳＳＣＰ单链电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，胆管癌ｐ５３基因５～８外显子的突变率为２７％；６例有ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为５５％。结论导致ｐ５３蛋白异常表达的ｐ５３基因突变是胆管癌的一种分子结构改变，可能在胆管癌的发生和发展中起着一定的作用。     

大肠癌的p53基因点突变

作者以改良的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的ＰＣＲ直接测序方法，分析了２２例大肠癌原发灶和１例转移淋巴结组织中ｐ５３基因第七外显子的基因结构变化。发现２７％（６／２２）大肠癌原发灶和检测的１例转移淋巴结中存在ｐ５３基因第七外显子点突变，突变位点分别为２４５、２５１、２５９和２６０密码子。５０％点突变是２４５密码子中碱基Ｇ∶Ｃ向Ａ∶Ｔ转换，其它突变形式是碱基插入和碱基缺失。本研究ｐ５３点突变阳性标本均为结肠癌，其中低分化腺癌突变率高于高、中分化腺癌（Ｐ＝０．０１７８），ＤｕｋｅｓＣ１期突变率高于ＤｕｋｅｓＡ２、Ｂ期（Ｐ＝０．０３６１）。此结果提示，临床检测大肠癌原发灶和转移淋巴结中是否存在ｐ５３基因第七外显子突变，可有助于识别高度恶性的大肠癌和判断大肠癌病员的预后。     

肺癌组织中p53,K—ras,p53,p16基因的改变

目的 探讨ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ｐ１５、ｐ１６基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。方法 对５９例肺癌组织和１４例肺部良性组织,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测ｐ５３基因第５～８外显子突变情况;应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对Ｋ－ｒａｓ基因突变进行检测;并应用ＰＣＲ法检测ｐ１５、ｐ１６基因纯合缺失情况。结果肺癌组织中ｐ５３、ｐ１５、ｐ１６基因改变频率分别为３７．３％、１１．９％、２３．     

P~(53)基因突变及P~(53)突变蛋白在卵巢上皮肿瘤中表达检测方法的探讨

采用改进的ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术和ＳＰ免疫组化技术检测３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤的Ｐ５３基因的突变和突变蛋白的表达。结果卵巢上皮癌Ｐ５３基因突变率为３０．６％，突变蛋白表达为５８．４％。Ｐ５３基因突变主要发生在外显子５～８上，以第７外显子突变率最高。交界性肿瘤个别出现Ｐ５３基因突变和突变蛋白表达，而在良性肿瘤无一例出现。提示Ｐ５３基因突变是卵巢癌形成过程中的晚期事件。Ｐ５３基因突变可作为肿瘤标记物判定卵巢癌的预后。ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ非同位素基因突变技术克服了常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法的缺陷，可提高准确性。     

乳腺癌p53基因突变规律及其预后意义

目的 探讨ｐ５３基因突变在乳腺癌发生发展中的演变规律及其与预后的关系。方法 应用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法检测５５例原发性乳腺癌患者ｐ５３基因５～８外显子的突变情况。结果 ｐ５３基因突变发生的频率为３６．４％（２０／５５）,Ｉ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中ｐ５３基因突变阳性率分别为４７．２％（１７／３６）和１５．８％（３／１９）,而且突变多发生在５～６外显子。突变阳性患者其无病生     

非小细胞肺癌中p53基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变的情况，应用改良聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测１７例非小细胞肺癌中ｐ５３基因第５～８外显子的突变情况，有８例存在ｐ５３基因突变，突变率为４７．００％（８／１７），其中鳞癌为５５．５６％（５／９），腺癌为３７．５０％（３／８）。本研究结果表明：非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变较为常见；改良后的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对非小细胞肺癌的基因诊断具有潜在性应用价值     

银染PCR—SSCP方法检测恶性纤维组织细胞瘤P53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋恶性纤维组织细胞瘤（ＭＦＨ）中ｐ５３基因点突变。结果显示，１６例ＭＦＨ中，９例ＳＳＣＰ阳性，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中第５、６、７、８外显子ＳＳＣＰ阳性出现的例次数分别为１、４、４、３次（２例转移的病例同时有６、７、８三个外显子异常）。微波处理ＡＢＣ法检测突变型ｐ５３蛋白表达，１０例为阳性，ＳＳＣＰ与ｐ５３蛋白表达的阳性符合率为９０．０％，ｐ５３基因点突变及蛋白表达与ＭＦＨ的组织学亚型无关。ｐ５３基因突变可能在ＭＦＨ的发生发展及转移中起作用。本研究结果表明，银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法。     

肺癌p53基因突变检测及临床意义

目的：检测ｐ５３基因突变在肺癌组织中的表达,探讨其与临床分期与预后的关系。方法;采用银染聚合酶链反应－单链构象多态笥分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）,检测了４８例肺癌组织中ｐ５３基因突变的表达。结果：在４８例肺癌组织中,ｐ５３基因突变的检出率为４７．９％,,ｐ５３基因突变的表达与临床分期和淋巴转移有关。     

食管鳞癌自发细胞凋亡和核增殖抗原p53关系的研究

目的通过对食管鳞癌组织中凋亡细胞的原位观察和核增殖抗原（ＰＣＮＡ）的表达状态的研究,探讨不同增殖情况的食管鳞癌组织细胞凋亡情况,同时研究ｐ５３基因的突变和ｐ５３蛋白的表达对食管鳞癌组织细胞凋亡的影响。方法３０例术前未经任何治疗的食管鳞癌手术标本,分别进行凋亡细胞的原位检测（ＴＵＮＥＬ）、ＰＣＮＡ、ｐ５３蛋白的免疫组化染色和ｐ５３基因５,６,７,８外显子ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测。结果不同增殖能力的癌组织中,细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组中,增殖程度高与增殖程度低者之间癌细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组与非突变组、ｐ５３蛋白表达阳性组与非阳性组癌细胞凋亡的程度差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论食管鳞癌组织中,细胞增殖活跃则自发性凋亡也相应增多     

肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

应用一种敏感的ＡＲＦ免疫组经和ＰＣＲ、银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测了本地区３８例肝细胞癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３的过度表达及点突变，结果发现１６例有ｐ５３蛋白过度表达（４１．２％），７例有ｐ５３基因２４９位密码子点突变，２例２４９位密码子外第７外显子点突变。９例ｐ５３基因有突变的肝癌中８例ｐ５３蛋白阳性，两者符合率为８８．９％，ｐ５３基因蛋白过度表达和点突点与ＨＣＣ分化和转移有关。本组ＨＣＣ ｐ５     

喉鳞癌中人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的关系

目的：探讨抑癌基因ｐ５３突变和人乳头状瘤病毒１６,１８型（ＨＰＶ１６,１８）感染与喉鳞癌的关系及二者在喉鳞癌中的相关性。方法：应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对４０例喉鳞癌组织中ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ及ｐ５３基因第５,７外显子的突变进行检测。结果：ＨＰＶ１６,１８的检出率分别为３５％（１４／４０）和１０％（４／４０）。１２例（３０％）标本ｐ５３基因突变,其中第５外显子     

鼻咽癌中p53例基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同闰素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中Ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子     

结直肠癌内镜活检组织p53基因变异的PCR—SSCP分析

目的 探讨结直肠癌ｐ５３基因变异情况及其意义。方法 采用ＰＣＲ技术扩增内镜下活检的结直肠癌组织中ｐ５３基因第５～９外显子，再以银染色单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术分析其变异情况。结果 ２０例结直肠癌组织ｐ５３基因的ＰＣＲ扩增均获成功；银染色ＳＳＣＰ分析发现其中５例有异常条带，阳性率为２５．０％，主要见于第５、７外显子，第９外显子未见阳性带；３例升结直肠癌中有２例阳性。结论 结直肠癌ｐ５３基因变异率     

肺癌患者癌组织和痰液细胞中p53和K-ras基因突变的研究

目的 检测肺癌组织和肺癌患者痰液脱落细胞中ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,比较联合检测ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ和单一检测ｐ５３或Ｋ－ｒａｓ基因在肺癌诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测了５９例肺癌组织、癌旁肺组织、１４全肺部良性病变肺组织及患者痰液脱落细胞中ｐ５３基因第５～８外显子、Ｋ－ｒａｓ基因第１外显子突变。结果 肺癌组织中ｐ５３基因突变率为３７．３％（２２／５９）,痰液脱落细胞为３     

肾母细胞瘤中p53的基因突变

目的：调查肾母细胞瘤中ｐ５３基因突变，探讨ｐ５３基因突变与肾母细胞瘤发生的关系。方法：采用ＰＣＲＳＳＣＰ分析结合ＤＮＡ直接测序对肾母细胞瘤病人手术标本进行ｐ５３基因第２～１１外显子的突变筛查。结果：２５例肿瘤标本中未检出缺失，７例显示有ＳＳＣＰ电泳迁移率的改变，其中３例经序列分析证实为错义突变，１例合并一同义突变。结论：ｐ５３基因突变涉及肾母细胞瘤的发生     

鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

林县食管癌中p53基因突变与P^53高表达相关性的研究

用免疫组织化学染色和ＰＣＲ直接测序法分别检测了食管癌高发区林县食管癌组织中Ｐ５３蛋白表达水平和基因突变以及二者的相关性。在３３例食管癌标本中，２３例发现有Ｐ５３的高表达，１０例未发现可检测到的Ｐ５３蛋白，其阳性率为６９．７％。Ｐ５３基因第５→８外显子出现点突变和缺失者１２例，其频率为３６％。在１２例ｐ５３基因突变的病例中，９例均有Ｐ５３蛋白的高度表达，提示ｐ５３基因突变与Ｐ５３蛋白的表达密切相关，并是造成Ｐ５３高表达的重要原因之一。Ｐ５３突变和Ｐ５３蛋白表达在食管癌组织中发生的高频率说明：Ｐ５３的改变是食管癌癌变过程中重要的生物学事件之一。     

大肠癌p53抑癌基因突变与组织类型,Dukes‘分期的关系

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３０例大肠癌组织ｐ５３基因突变状况进行了检测。结果表明：３０例大肠癌ｐ５３基因的突变率为２０％（６／３０），其中１例在第４外显子，５例在第５外显子，第２、３外显子未检出突变。高分化和中等分化肠癌ｐ５３基因突变率均为１／８（１２．５％），低分化为３／１０（３０．０％），未分化为１／４（２５．０％）；在Ｄｕｋｅｓ分期中的突变率分别为：Ｂ２期为１／１０（１０．０％），Ｃ１期为２／１２（１６．７％），Ｄ期为３／８（３７．５％）。结果提示ｐ５３基因突变与Ｄｕｃｋｅｓ分期有关，且肠癌的ｐ５３基因突变很少发生在第２、３外显子