复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞增殖影响的研究

目的　观察复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞 (CFs)增殖的影响。方法　采用培养的新生大鼠CFs,以MTT作为反映细胞增殖的指标 ,流式细胞仪分析细胞周期。结果　复方鳖甲软肝片能明显抑制CFs增殖 ,并将细胞周期阻抑在G1期 ,强度与氯沙坦相近。结论　复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。     

复方鳖甲软肝片对脂质代谢失调的调控

目的：观察复方鳖甲软肝片对高脂性脂肪肝脂质代谢失调的调控。方法：高脂饮食造脂肪肝模型后，分别给予小、中、大剂量的复方鳖甲软肝片、阳性药物及生理盐水。测定给药前后血中总胆固醇、高密度脂蛋白、甘油三脂的含量。结果：复方鳖甲软肝片可明显降低血清总胆固醇，提高高密度脂蛋白。结论：复方鳖甲软肝片对高脂性脂肪肝脂质代谢失调有明显的调控作用。     

血清药理学与药代动力学整合模型的复方鳖甲软肝片日服用次数合理性研究

该课题通过体外观察大鼠含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,结合复方鳖甲软肝片中芍药苷的药物代谢动力学模型,研究复方鳖甲软肝片合理的日服用次数。大鼠每日不同次数灌胃给药,分别于给药前及第1次给药后各时间点眼眶后静脉取血,用于测定大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响以及大鼠血浆中芍药苷的血药浓度。综合分析时量和时效关系,制定复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化的合理的日服用次数。结果表明,复方鳖甲软肝片含药血清对HSC-T6抑制的效应与芍药苷血药浓度具有良好的相关性,每日给药2次组对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积(AUC)及药代动力学AUC均高于每日给药1次组和3次组。因此,复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化以每日服用2次为佳。     

复方鳖甲软肝片治疗肝纤维化32例

复方鳖甲软肝片主要成分为鳖甲、莪术、当归、三七、赤芍、冬虫夏草、紫河车、黄芪等,具有软坚散结、化瘀解毒、益气养血之功效。动物实验证明,复方鳖甲软肝片具有良好的保肝和预防肝纤维化作用。笔者将复方鳖甲软肝片用于治疗肝纤维化,     

复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的疗效观察

目的:观察复方鳖甲软肝片对肝纤维化的治疗效果.方法:应用复方鳖甲软肝片治疗慢性肝炎30例.结果:治疗后患者血清肝纤维化指标下降.结论:复方鳖甲软肝片具有良好的抗肝纤维化作用.     

复方鳖甲软肝片的鉴别研究

目的：建立复方鳖甲软肝片的鉴别方法。方法：利用显微鉴别和薄层色谱鉴别。结果：通过显微鉴别可鉴别出复方鳖甲软肝片中鳖甲，赤芍，三七，紫河车及冬虫夏草5味药材；通过薄层色谱鉴别可检测出其中冬虫夏草，连翘，三七3味药材。结论：方法简便，快速，重现性好，中用于复方鳖甲软肝片的质量控制。     

复方鳖甲软肝片对高脂性脂肪肝大鼠全血粘度的影响

目的：研究复方鳖甲软肝片对高脂性脂肪肝大鼠全血粘度的影响。方法：采用随机抽样的方法，从60只SD大鼠中随机抽取10只为正常对照组，给予正常饲料喂养，其余50只给予高脂饲料喂养15天后随机分为模型组、阳性药物组、复方鳖甲软肝片低、中、高剂量组。对各组采用配对t检验的方法，观察用药前、后大鼠全血粘度的变化。结果：复方鳖甲软肝片有明显降低全血高切及低切粘度的作用。结论：复方鳖甲软肝片有明显的降低高脂性脂肪肝大鼠全血粘度的作用。     

中西结合治疗乙型病毒性肝炎肝硬化的临床研究

目的：观察拉米夫定联合复方鳖甲软肝片治疗乙型病毒性肝炎肝硬化的临床疗效。方法：对照组单独使用拉米夫定,并采取相应的保肝对症治疗;试验组同时加用拉米夫定和复方鳖甲软肝片口服,观察治疗前后各项指标变化情况。结果：试验组疗效优于对照组。结论：拉米夫定联合复方鳖甲软肝片治疗乙型病毒性肝炎肝硬化疗效肯定。     

复方鳖甲软肝片对乙型肝炎肝硬化患者血清脂联素的影响

目的探讨乙型肝炎肝硬化经复方鳖甲软肝片治疗后血清脂联素浓度的变化。方法选择39例乙型肝炎肝硬化患者,给予复方鳖甲软肝片治疗,用ELISA检测治疗前后患者血清脂联素的浓度。结果治疗后患者血清脂联素的浓度显著降低,与治疗前比较有显著性差异(P<0.05)。结论复方鳖甲软肝片在抗肝纤维化方面有一定作用,脂联素可作为临床肝纤维化进展的检测指标。     

Protocatechuic acid attenuates angiotensin II‐induced cardiac fibrosis in cardiac fibroblasts through inhibiting the NOX4/ROS/p38 signaling pathway

Cardiac fibrosis plays a crucial role in the pathogenesis of myocardial infarction (MI). It has been found that differentiation of cardiac fibroblasts (CFs) into myofibroblasts is a major event in the process of cardiac fibrosis. In the present study, we aimed to investigate the effects of protocatechuic acid (PCA), a cardiac protective agent, on the CFs differentiation in vitro. The results showed that PCA exhibited inhibitory effects on the cell proliferation and migration in angiotensin II (Ang II)‐induced CFs. PCA treatment suppressed the Ang II‐induced expression of α‐smooth muscle actin (α‐SMA), which is a hallmark of myofibroblasts. In addition, the production of extracellular matrix (ECM) proteins, including type I collagen (Col I) and connective tissue growth factor (CTGF), were significantly decreased in the PCA‐treated CFs. The Ang II‐induced increased levels of matrix metalloproteinase (MMP)‐2, and MMP‐9 were reduced by PCA. Furthermore, PCA resulted in decrease in reactive oxygen species (ROS) generation, as well as the expressions of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase enzyme 4 (NOX4) and p‐p38 in Ang II‐induced CFs. These findings showed that PCA treatment prevented the Ang II‐induced cardiac fibrosis by inhibiting the NOX4/ROS/p38 signaling pathway in vitro, suggesting that PCA might be a therapeutic agent for MI.     

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。     

瓜蒌薤白半夏汤对血管紧张素Ⅱ诱发心肌成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的探讨瓜蒌薤白半夏汤抑制心肌纤维化的作用机制。方法采用胰酶消化法进行新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）培养,予CFs 10-6mol/L孵育24h构建离体心肌纤维化病理模型,分别予5%、10%和15%瓜蒌薤白半夏汤含药血清干预24h。采用En-V ision免疫组织化学方法检测组织平滑肌肌动蛋白-α（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）及波形蛋白（VN）,进行心肌成纤维细胞的鉴定;MTT法和3H-TdR掺入法进行细胞增殖和DNA合成检测,羟脯氨酸法进行胶原含量检测。结果 AngⅡ10-6mol/L孵育CFs 24h后,CFs增殖及胶原合成增加;瓜蒌薤白半夏汤含药血清可以抑制CFs增殖及胶原合成。结论瓜蒌薤白半夏汤能够改善心肌纤维化,其作用机制可能与抑制CFs增殖、DNA及胶原合成有关。     

灵丹散对四氯化碳致肝损伤大鼠肝功能及肝纤维化的影响

目的观察中药复方灵丹散对实验性四氯化碳致肝损伤大鼠的疗效。方法健康SD大鼠分为正常对照组、模型组、复方鳖甲软肝片对照组、灵丹散组。采用皮下注射四氯化碳制备细胞毒性肝硬化大鼠模型,各用药组自造模4周起开始灌胃中药,共用药5周。HE染色观察肝组织纤维化病理改变。试剂盒法检测血清AST、ALT、Alb等的活性,放射免疫法法检测肝纤维化指标-透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）。结果与正常组大鼠比较,模型组大鼠血清肝功能异常,肝纤维化四项指标明显升高,肝组织纤维化改变明显,灵丹散显著改善模型组大鼠肝功能及肝组织的纤维化病理改变。结论灵丹散可有效改善四氯化碳致肝损伤大鼠的肝功能及肝组织纤维化。     

降糖通脉片与苯那普利对肾小球系膜细胞抑制作用的对比研究

目的：探讨降糖通脉片与苯那普利对人肾小球系膜细胞(MC)增殖的不同抑制作用强度。方法：采用体外培养的人肾小球系膜细胞技术．观察具有清热化瘀、滋阴补气作用的中药降糖通脉片及苯那普利对MC增殖的影响。结果：降糖通脉片与苯那普利对MC增殖均具有抑制作用,但二者的作用强度有一定的差异。结论：在等效剂量浓度下,降糖通脉片对MC的抑制作用优于苯那普利。     

丹参酮Ⅱ_A对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA(TSN)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:①AngⅡ组OD值高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组OD值低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。②AngⅡ组有促进心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原含量低于AngⅡ组,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。③AngⅡ组Ⅰ型胶原mRNA表达高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原mRNA表达低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接诱导CFs的增殖,促进其分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;TSN对AngⅡ诱导的CFs增殖及Ⅰ型胶原分泌增加,及Ⅰ型胶原mRNA表达增强均有抑制作用。提示:TSN抗心肌纤维化作用的产生可能与丹参酮ⅡA抑制心脏局部的RAS系统有关。     

中药强心饮含药血清对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:研究强心饮对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-ac fibroblasts CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用机制。方法:采用胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNF-α诱导新生大鼠CFs纤维化病理模型,分别采用四氮唑蓝(MTT)比色法、羟脯氨酸法检测不同浓度强心饮含药血清对CFs增殖和胶原含量影响。结果:TNF-α能够刺激CFs增殖和胶原合成,与空白组相比差异显著(P<0.05);强心饮抑制TNF-α诱导CFs增殖和胶原合成(P均<0.05)。结论:强心饮通过抑制TNF-α诱导的CFs增殖和胶原合成,发挥有效的抗心肌纤维化作用。     

中药强心饮含药血清对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究强心饮对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF—α）诱导新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts CFs）增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用机制。方法：采用胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNF—α诱导新生大鼠CFs纤维化病理模型,分别采用四氮唑蓝（MTT）比色法、羟脯氨酸法检测不同浓度强心饮含药血清对CFs增殖和胶原含量影响。结果：TNF—α能够刺激CFs增殖和胶原合成,与空白组相比差异显著（P〈0．05）;强心饮抑制TNF—α诱导CFs增殖和胶原合成（P均〈0．05）。结论：强心饮通过抑制TNF—α诱导的CFs增殖和胶原合成,发挥有效的抗心肌纤维化作用。     

氧化苦参碱抑制p38MAPK磷酸化改善醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:采用胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD新生大鼠CFs做原代培养,建立ALD诱导CFs增殖模型。实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT高、低剂量组(3.78×10-4,7.57×10-4mol·L-1)。波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。采用噻唑蓝(MTT)法分析ALD对CFs增殖的量效与时效关系和OMT的抑制作用。实时荧光定量PCR分析p38MAPK mRNA的表达。Western blot分析p-p38MAPK,p38MAPK的蛋白表达。结果:MTT结果提示1×10-7mol·L-1ALD能够诱导CFs的增殖,且在24 h时增殖作用显著,7.57×10-4mol·L-1OMT可显著抑制CFs增殖。OMT对p38MAPK mRNA的水平无影响。OMT能够抑制p-p38MAPK蛋白的表达。结论:OMT可抑制ALD诱导CFs增殖的作用,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关。