白藜芦醇通过调控NLRP3/caspase-1信号通路抑制H2O2诱导的心肌纤维化

目的 探讨白藜芦醇(RES)通过抑制体外过氧化氢(H2 O2)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)氧化应激而降低心肌纤维化及其与NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)信号通路的关系.方法 从SD乳鼠取心脏进行原代CFs培养,分为对照组,H2 O2(10μmol/L)组、H2 O2(10μmol/L)+RES(5μmol/L)组.采用免疫荧光鉴定CFs,CCK-8法检测CFs存活率,聚合酶链反应检测CFs白细胞介素-1(IL-1)、caspase-1、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)基因表达,Western blot法检测CFs NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达.结果 波形蛋白呈阳性表达,证明提取细胞为CFs;与对照组比较,H2 O2(10μmol/L)组CFs存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);H2 O2(10μmol/L)组IL-1、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与H2 O2(10μmol/L)组比较,H2 O2(10μmol/L)+RES(5μmol/L)组CFs存活率升高;IL-1、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ基因表达明显降低差异均有统计学意义(P<0.05);NLRP3、caspase-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RES可能通过抑制炎症从而有效缓解氧化应激损伤引起的心肌纤维化.     

心肌纤维化时原组成变化的实验研究

以两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型，观察在反应性纤维化和修复性纤维化两阶段中心肌胶原组成的变化。结果发现，在反应性纤维化阶段，偏光镜下呈绿色的细纤维增多伴Ⅰ／Ⅲ比值下降，而在修复性纤维化阶段，偏光镜下呈黄红色的粗纤维增多，并且Ⅰ／Ⅲ比值显著升高。     

Relaxin-3通过抑制HMGB1介导的NLRP3炎性小体活化抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞转分化

目的:探究人松弛素3(relaxin-3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理心肌成纤维细胞的作用及其可能的作用机制.方法:AngⅡ处理心肌成纤维细胞,建立体外心肌纤维化模型,CCK-8检测细胞活力;EdU试剂盒检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞中抗α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved caspase-1)和高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达;间接免疫荧光检测细胞中NLRP3的表达.结果:与空白对照组相比,AngⅡ组细胞活力、EdU阳性细胞数明显升高(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显升高(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显升高(P＜0.05);与AngⅡ组相比,relaxin-3组细胞活力、EdU阳性细胞数明显降低(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显降低(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显降低(P＜0.05);relaxin-3组和relaxin-3+ oe-NC组两组间的各项指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与relaxin-3+ oe-NC组相比,relaxin-3+ oe-HMGB1组胞活力、EdU阳性细胞数明显升高(P＜0.05),细胞中α-SMA、vimentin、collagen Ⅰ和collagenⅢ蛋白表达明显升高(P＜0.05),NLRP3荧光强度和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、HMGB1蛋白表达均明显升高(P＜0.05).结论:relaxin-3通过下调HMGB1的表达抑制NLRP3炎性小体活化,从而抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞转分化.     

心肌纤维化时胶原组成变化的实验研究

以两肾一夹肾血管性高血压大鼠为模型，观察在反应性纤维化（术后4周）和修复性纤维化（术后12周）两阶段中心肌胶原组成的变化。结果发现，在反应性纤维化阶段，偏光镜下呈绿色的细纤维增多伴Ⅰ／Ⅲ比值下降，而在修复性纤维化阶段，偏光镜下呈黄红色的粗纤维增多，并且Ⅰ／Ⅲ比值显著升高。提示在反应性纤维化阶段，主要是Ⅲ型胶原增加为主；而在修复性纤维化阶段，主要是Ⅰ型胶原增加为主。     

罗布麻提取物对AngⅡ诱导的大鼠心肌纤维化中ERK通路的影响

目的:探讨罗布麻提取物对血管紧张素Ⅱ (Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌纤维化模型中ERK通路的影响,并初步探索罗布麻提取物抗心肌纤维化机制。 方法： 采用1×10－6 mol•L^-1 Ang Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分为正常对照组、AngⅡ组、缬沙坦治疗组1×10-6 mg•L^-1)及罗布麻提取物高剂量组（0.8 mol•L^-1）、中剂量组（0.4 mol•L^－1）、低剂量组（0.2 mol•L^－1）。通过对羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、ColⅢ）的检测鉴定模型的成功复制,RT-PCR及 Western blotting方法检测raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白在各组细胞中的表达量。 结果： 成功建立Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化模型。与AngⅡ组比较,不同剂量罗布麻提取物组羟脯氨酸及ColⅠ、ColⅢ的表达量均下调（P<0.05或P<0.01）;RT-PCR及 Western blotting检测发现,罗布麻提取物不同剂量组的raf、ERK、c-fos mRNA 及ERK蛋白表达量较AngⅡ组降低（P<0.05或P<0.01）。结论： ERK信号通路在罗布麻提取物调控心肌纤维化发生和发展的过程中发挥重要作用。     

牛磺酸对心肌肥厚纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的研究牛磺酸对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚纤维化的治疗作用。方法实验分3组,（异丙肾上腺素）Iso组予以皮下注射异丙肾上腺素0.5 mg/（kg.d）,连续10天;牛磺酸组（Iso＋Tau组）予以牛磺酸灌胃300 mg/（kg.d）及异丙肾上腺素皮下注射（同Iso组）;正常对照组皮下注射等量生理盐水。于实验第10、30天处死大鼠取材,测定心重系数、左心室质量指数,RT-PCR对Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA进行半定量测定。结果小剂量异丙肾上腺素可致左心室重量增加,使得Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达升高,而牛磺酸可以减少其表达,并降低心重系数和左心室指数。结论牛磺酸可以缓解异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚和纤维化。     

加味桃核承气汤及不同提取物对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的观察加味桃核承气汤及不同提取物对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响。方法用链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,观察加味桃核承气汤全方煎剂及水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂不同提取处理成分群对糖尿病大鼠心肌纤维化影响,并与达美康对照,共治疗8周。测定心脏湿重/体重比、心肌羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果各组心脏/体重比值与空白组比较,全方组未显示出差异,其余各组均显著增加(P<0.01);心肌羟脯氨酸含量测定也显示出相似的效果;各组心肌Ⅰ型胶原mRNA表达均较空白组下降,但无统计学意义;Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达模型组较空白组显著升高,中药全方、水提醇沉及正丁醇组较模型组显著降低(P<0.05-0.01)。结论加味桃核承气汤全方煎剂及水提醇沉、正丁醇提取物能阻止糖尿病大鼠心肌胶原异常增生,维持Ⅰ/Ⅲ型胶原正常比值,作用似优于达美康。      

NAD对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的作用.方法 提取新生Wistar大乳鼠原代心肌成纤维细胞,传代培养,采用2～4代细胞.实验分为空白对照组,AngⅡ(0.01、0.1、1μmol/L)组,NAD(250 μmol/L)组,AngⅡ(1 μmol/L)+NAD (250 μmol/L)组,FAM组,Sirt1-siRNA+AngⅡ(1μmol/L)组,Sirt1-siRNA组,Sirt1-siRNA+NAD(250 μmol/L)组,Sirt1-siRNA十Ang Ⅱ(1 mol/L)+ NAD(250 μmol/L)组.刺激24h后,提取总RNA,Real time RT-PCR法分别检测SIRT1和Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果 心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA的表达随着AngⅡ浓度升高明显增加(P＜0.05),呈浓度依赖性.与空白对照组比较,NAD(250 μmol/L)组SIRT1 mRNA表达增高(P＜0.05).与AngⅡ(1μmol/L)组比较,AngⅡ(1μmol/L)+NAD(250μmol/L)组Ⅰ型胶原mRNA的表达明显减少(P＜0.01).相对于FAM组,Sirt1-siRNA转染后各组SIRT1 mRNA的表达减少(P＜0.05),而心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达增多(P＜0.05).结论 NAD可以抑制心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA的表达,SIRT1影响Ⅰ型胶原mRNA的表达,它们对Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化有保护作用.     

罗布麻提取物对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的影响

目的探讨罗布麻提取物对血管紧张素II（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）诱导的大鼠心肌纤维化细胞的影响及其可能作用机制。方法采用Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分组为空白对照组（C组）、模型组（Ang Ⅱ组）、罗布麻提取物高剂量组（0.8mg.L-1,Ang Ⅱ＋AVE1）、罗布麻提取物中剂量组（0.4mg.L-1,Ang Ⅱ＋AVE1）、罗布麻提取物低剂量组（0.2mg.L-1,Ang Ⅱ＋AVE1）及阳性药对照缬沙坦组（10-6mg.L-1,Ang Ⅱ＋VL）,给药48h后,通过MTT检测心肌成纤维细胞增殖情况,ELISA法及RT-PCR法检细胞上清及细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β（Transforming growthfactor-β）蛋白及mRNA的表达。结果在Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化模型中,罗布麻提取物可抑制ECM（Extracellularmatrix）胶原成分（Col Ⅰ和Col Ⅲ）的积聚;TGF-β在心肌纤维化大鼠心肌中表达显著增加,罗布麻提取物可降低TGF-βmRNA及蛋白的表达。结论罗布麻提取物可通过对降低TGF-β的表达延缓心肌纤维化的发生发展。     

卡托普利对腹主动脉缩窄大鼠模型心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原及其mRNA表达的影响

目的:探讨卡托普利对腹主动脉缩窄大鼠模型心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原的改变及其mRNA表达改变的干预作用。方法:模型组根据Doering等方法,用银夹造成腹主动脉部分狭窄(银夹内径0.7 mm)。8周后免疫组织化学法进行Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色,并用光密度值作为其含量指标行图像分析,即时PCR扩增后分析并测定胶原mRNA。结果:模型组造模8周时Ⅰ型和Ⅲ型胶原平均光密度及其mRNA表达较假手术组显著升高(P<0.01)。胶原组织化学染色示模型组较假手术组Ⅰ型和Ⅲ型胶原明显增多、增粗及排列紊乱;卡托普利组较模型组胶原明显减少。结论:大鼠腹主动脉缩窄导致反应性纤维化心肌中Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高;卡托普利延缓甚至逆转心肌纤维化进程。     

普伐他汀对慢性心力衰竭患者心肌纤维化的影响

目的:探讨他汀类药物在防治慢性心力衰竭(CHF)患者心肌纤维化、逆转心室重塑的作用.方法:入选CHF患者69例,随机分为治疗组(35例)和对照组(34例).两组均给予ACE Ⅰ、利尿剂、地高辛和β-阻滞剂治疗.治疗组加用普伐他汀20mg 口服,每晚1次,共服12周.治疗前及治疗后12周分别检溯Ⅲ型前胶原氨基末瑞肽(PⅢNP)并评价左审功能指标.结果:治疗12周后治疗组PⅢNP、LVEF、LVMI、LVEDVI、LVESVI均较治疗前有明显改善(P<0.01);对照组PⅢNP、LVEDVI、LVESVI较治疗前有所改善(P<0.05),LVEF、LVMI改善不明最(P>0.05).治疗12周后普伐汀治疗组PⅢNP、LVEF、LVMI、LVEDVI、LVESVI均较对照组有明显改善(P<0.05).结论:短期小剂量普伐他汀治疗有改善CHF患者心肌纤维化的作用,改善患者的左心室重塑.     

虾青素对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的 探讨虾青素对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）胶原蛋白合成的影响。方法 体外培养SD乳鼠的CFs,分为5组,分别为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+虾青素低剂量组（20μmol/L）、AngⅡ+虾青素中剂量组（40μmol/L）、AngⅡ组+虾青素高剂量组（80μmol/L）,干预24h后,采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的含量,RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的含量,活细胞计数试剂盒（CCK8）测定CFs增殖情况。结果 AngⅡ可以使Ⅰ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达上升（P<0.05）,CFs增殖增加,不同浓度的虾青素均可以抑制这种作用（P<0.05）。结论 在一定的浓度范围内,虾青素可抑制心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成,抑制心脏成纤维细胞的增殖。     

NAD对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的   探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 对血管紧张素II（AngII)诱导的大鼠心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达的作用。方法   提取新生Wistar大乳鼠原代心肌成纤维细胞,传代培养,采用2~4代细胞。实验分为空白对照组,AngII (0.01、 0.1、 1μmol／L)组,NAD(250μmol／L)组, AngII(1μmol／L)+ NAD (250μmol／L )组,FAM组,Sirt1-siRNA+AngII(1μmol／L)组,Sirt1-siRNA 组,Sirt1-siRNA+ NAD（250μmol／L）组,Sirt1-siRNA+Ang II(1mol／L)+NAD（250μmol／L）组。刺激24h后,提取总RNA, Real time RT-PCR法分别检测SIRT1和I型胶原mRNA的表达。结果   心肌成纤维细胞I型胶原mRNA的表达随着AngⅡ浓度升高明显增加(P＜0.05),呈浓度依赖性。与空白对照组比较,NAD（250μmol／L）组SIRT1 mRNA表达增高(P＜0.05)。与AngⅡ（1μmol／L）组比较,AngII (1μmol／L)+ NAD(250μmol／L )组I型胶原mRNA的表达明显减少(P＜0.01)。相对于FAM组,Sirt1-siRNA转染后各组SIRT1 mRNA的表达减少(P＜0.05),而心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达增多(P＜0.05)。结论   NAD可以抑制心肌成纤维细胞 I型胶原mRNA的表达,SIRT1影响I型胶原mRNA的表达,它们对Ang II诱导的心肌纤维化有保护作用。     

LncRNA-MEG3在心肌纤维化过程中的表达变化研究

目的研究LncRNA-MEG3在大鼠心肌纤维化及心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖过程中的表达变化。方法用异丙肾上腺素(ISO)腹部皮下注射SD大鼠构造心肌纤维化动物模型为实验组(ISO组),对照组注射等量的生理盐水;提取乳鼠CFs,采用转化生长因子β1(TGF-β1)作用CFs构建细胞水平纤维化模型为实验组(TGF-β1组),对照组为未经TGF-β1作用正常培养的CFs; HE、Masson染色观察心肌组织胶原变化;用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原分子(CollagenⅠ)蛋白的表达;qRT-PCR法检测CollagenⅠ、α-SMA mRNA和MEG3的表达;CCK-8法检测经TGF-β1作用CFs后的吸光度(OD)值。结果与对照组比较,ISO组的心肌细胞体积变大、紊乱,组织胶原面积明显增加;ISO组和TGF-β1组中CollagenⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达都显著增多,LncRNA-MEG3表达显著减少;CCK-8实验结果提示使用TGF-β1刺激CFs 24、48 h后较对照组的细胞OD值明显增加,即细胞增殖活性增强。结论 LncRN...     

卡托普利对压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ和Ⅱ型胶原的影响

目的 进一步观察卡托普利抗心肌纤维化的作用及其可能机制。方法 建立腹主动脉狭窄所致充血性心力／衰竭心肌肥厚大鼠模型，观察左室质量指数（ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ，ＬＶＭＩ）；采用免疫组织化学染色方法观察心肌Ⅰ、Ⅱ型胶原的改变，并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ，ＡｎｇⅡ）水平。结果 模型组ＬＶＭＩ明显高于假手术组（Ｐ〈０．００１）     

心肌纤维化与病毒性心肌炎

病毒性心肌炎各期均见心肌有不同程度的纤维变性,尤其以恢复期与慢性期最为明显,并且这种病变受多种因素的调节.本文综述了心肌纤维化与VMC之间的关系,旨在进一步阐明VMC发病机制,从而为临床治疗VMC提供可靠的依据.     

基于心康冲剂调控慢性心力衰竭大鼠JAK2/STAT3通路抗心肌纤维化的作用机制

目的 探讨心康冲剂抗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的机制。方法 48只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、心康冲剂治疗组（治疗组）、缬沙坦对照组（缬沙坦组）。除正常组外,其余各组经腹腔注射注射用盐酸多柔比星1.5 mg/kg制造慢性心力衰竭大鼠模型。治疗组给与1.2 g/（kg·d）心康冲剂;缬沙坦组给与1.62 mg/（kg·d）缬沙坦胶囊;正常组、模型组给予等体积灭菌注射用水灌胃。每日1次,连续灌胃8周。以超声心动图检测大鼠心功能[左室射血分数（left ventricular ejection fractions, LVEF）、左心室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening, LVFS）],Masson染色观察心肌纤维化,RT-qPCR法检测心肌组织Ⅰ型胶原（collagenⅠ, ColⅠ）mRNA表达水平,Western blot法检测心肌ColⅠ、磷酸化酪氨酸激酶2(phospho-Janus kinase, p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活子3(phoso-signal transducer and activator ...