人皮肤慢性光老化成纤维细胞环状RNA的差异表达

目的:构建人皮肤慢性光老化成纤维细胞模型,筛查与光老化相关的环状RNA(circRNA)。方法:分离培养成纤维细胞,利用UVA多次照射,制作人皮肤慢性光老化成纤维细胞模型,采用β-半乳糖苷酶染色及Western印迹法检验p21蛋白验证,以给予与照光时长等同的避光处理的成纤维细胞作为对照。采用RNAseq高通量转录组测序技术检测光老化成纤维细胞中circRNA表达,并分析其差异表达的circRNA。结果:与对照组比较,光老化模型组成纤维细胞中表达显著上调的circRNAs共有7个(P0.05);表达显著下调的circRNAs共有4个(P0.05)。经生物信息学分析,差异表达的circRNA可能与胶原蛋白合成等基因有关。结论:光老化模型组成纤维细胞存在多个差异表达的circRNAs,说明circRNA可能参与光老化的基因调控。     

干细胞外泌体在皮肤光老化作用中的研究进展

外泌体作为干细胞发挥功能的主要途径,在细胞信号转导、细胞间信息传递、组织修复中发挥着重要作用。本文简述了干细胞来源的外泌体的生物学特性与皮肤光老化相关机制,通过干细胞来源的外泌体对皮肤光老化的抗氧化作用、对皮肤成纤维细胞功能的影响、对金属基质蛋白酶调节细胞外基质的影响等三个方面回顾了其可能的作用机制。分析表明,干细胞来源的外泌体具有防治皮肤光老化的潜力,这可能是将来基础研究与临床应用的重要方向。     

印度块菌提取物对长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光损伤的保护作用研究

目的:探讨印度块菌提取物对长波紫外线(UVA)诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)光损伤的保护作用及其相关机制。方法:通过UVA辐射建立细胞光损伤模型。不同剂量印度块菌提取物预处理HSF细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSF细胞活力,于倒置显微镜观察HSF细胞形态变化;采用Hoechst 33342染色观察细胞凋亡形态;应用荧光探针法分别检测活性氧(ROS)及羰基化蛋白的表达水平;应用酶联吸附免疫(ELISA)法检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和透明质酸(HA)含量。结果:应用10 J/cm² UVA辐射后,HSF细胞数量减少,融合度下降,细胞形态皱缩,细胞活力降低,细胞凋亡增加,ROS和羰基蛋白表达水平升高,ColⅠ和HA含量均降低。与模型组相比,100 mg/L和200 mg/L印度块菌提取物预处理后,细胞形态趋于正常,细胞活力分别由61.97%提高为72.27%和73.94%(P<0.05),且细胞凋亡减少,ROS表达水平分别由156.57%降低为133.70%和118.45%(P<0.05),羰基蛋白荧光比值显著降低,同时ColⅠ和HA含量均...     

培养的人皮肤成纤维细胞光老化模型中自噬水平的研究

目的 研究人皮肤成纤维细胞的光老化模型中细胞自噬功能的变化。方法 通过UVB多次照射培养的人皮肤成纤维细胞,制作光老化人皮肤成纤维细胞模型,同时设立不用UVB照射的对照组。用β-半乳糖苷酶法测定未照射的对照组及光老化组细胞的老化程度,并分别测定两组细胞的自噬体表达水平。结果 经UVB重复照射后的光老化人皮肤成纤维细胞大多变形、扭曲,部分细胞死亡。光老化组与对照组β-半乳糖苷酶表达阳性细胞的百分率分别为50.60% ± 5.04%、14.58% ± 2.69%,两组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。光老化组与正常对照组自噬体阳性细胞百分率分别为14.91% ± 4.59%、68.45% ± 8.25%,两组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。结论 人皮肤成纤维细胞光老化模型形态明显异常,生长基本停滞,老化程度明显高于正常细胞,而自噬水平则明显低于正常对照组细胞。     

UVA诱导人皮肤成纤维细胞光老化模型中miR-222的调节作用北大核心CSCD

目的探讨miR-222在长波紫外线(UVA)诱导的光老化模型中的调节作用。方法分离并培养人皮肤成纤维细胞(HDFs),用0,2.5,5.0和7.5J不同剂量UVA辐射诱导光老化模型,用实时定量PCR和Western-blot分别检测miR-222和基质金属蛋白酶1(MMP1)的表达情况。用miR-222的功能模拟物和miR-222的功能抑制物分别转染HDFs,检测MMP1表达情况。对HDFs细胞分别转染miR-222功能模拟物、miR-222阴性对照物、miR-222功能抑制物和miR对照的功能抑制物,转染24h后予UVA辐射诱导光老化模型,检测MMP1表达情况。结果 HDFs经不同剂量UVA辐射后,MMP1表达与对照组相比显著升高(P<0.01),同时miR-222表达与对照组相比显著降低(P<0.01)。miR-222转染HDFs后再予UVA辐射,miR-222转染组MMP1表达显著低于miR对照组(t=5.616,P<0.05),而miR-222抑制物转染组MMP1表达与miR对照组相比无显著的改变。结论人皮肤成纤维细胞光老化模型中UVA辐射可导致miR-222表达降低,从而上调MMP1表达。     

Caspase-3在UVB诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用

目的：评价caspase-3在UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡中的作用。方法：皮肤成纤维细胞经150mJ／cm2 UVB照射后,用MTF法检测细胞活性,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,用抑制剂Z-DEVD-FMK抑制caspase-3活性后,检测凋亡细胞数量。结果：UVB明显抑制成纤维细胞的活性,并导致细胞凋亡,并呈时间-效应关系;加入抑制剂Z-DEVD-FMK抑制了UVB导致的细胞凋亡。结论：Caspase-3在UVB照射诱导皮肤成纤维细胞凋亡中发挥重要作用。     

人参皂甙Rd对培养光老化真皮成纤维细胞影响的实验研究

目的：探讨人参皂甙Rd对培养人类成纤维细胞基质金属蛋白酶（matrix metallo preteinases;MMPs）的MMP-1和MMP-3表达的调节作用及机制,为人参在临床皮肤光老化的预防和治疗以及皮肤美容方面的应用提供实验和理论基础。方法：将体外培养的人体皮肤成纤维细胞通过一定剂量的紫外线（ultraviolet radiation;UV）照射和8-甲氧补骨脂素（8-MOP）处理制造光老化模型。用不同浓度的人参皂甙Rd（G insenoside Rd）,与芳维甲酸乙酯（arotinoid ethyl ester）分别处理不同的试验组,最后免疫组织化学实验显示试验各组的MMP-1、MMP-3。结果：阳性对照组MMP-1和MMP-3表达明显增强,人参皂甙Rd实验组各组与阳性对照组比较,差异有统计学意义,表达明显减弱（P〈0.05）。结论：人参的有效成分提纯品人参皂甙Rd及芳维甲酸乙脂对体外培养成纤维细胞内的MMP-1、MMP-3的表达有抑制作用,其作用相似,说明人参皂甙Rd可以达到与芳维甲酸乙酯相同治疗和预防皮肤光老化的作用。     

紫外线照射对成纤维细胞染色体端粒DNA复制的影响

目的:旨在DNA水平探讨紫外线启动人皮肤光老化的机制,以加深对光老化的理解,并为减缓光老化进程提供新靶点.方法:紫外线照射原代人成纤维细胞,用比色法测定成纤维细胞的增殖活性;用1 000 mJ/cm2紫外线照射细胞,采用实时定量PCR方法测定照射与未照射细胞不同代数的端粒长度;不同剂量紫外线照射同代细胞,并测定端粒长度.结果:紫外线照射与未照射细胞的端粒长度均有随着细胞的复制传代而逐渐缩短趋势;在不同剂量紫外线照射的同一代细胞之间,紫外线剂量越高,端粒长度则越短,高剂量组与未照射组相比有统计学差异(P<0.05).结论:单次大剂量紫外线照射可以使端粒长度变短.急性光损伤可能启动光老化的早期进程.     

UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm~2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm~2时,细胞存活率保持在85%;而UVA剂量≥15J/cm~2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm~2时存活率为50%左右,至25 J/cm~2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。     

SSc患者外周血外泌体通过microRNA-21介导成纤维细胞活化北大核心CSCD

目的比较系统性硬皮病患者(systemic sclerosis,SSc)与正常人外周血外泌体(exosome)中microRNA-21-5p(miR-21-5p)的表达差异,评估外周血中外泌体对人皮肤成纤维细胞功能状态的影响。方法提取SSc患者及正常人外周血外泌体,荧光定量PCR法检测miR-21-5p表达情况;外泌体刺激人皮肤成纤维细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,免疫印迹检测CollagenⅠ,Ⅲ及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。结果 SSc患者外周血外泌体中miR-21-5p显著高于正常人。与正常人相比,患者外泌体可明显增强人皮肤成纤维细胞的增殖能力及上调CollagenⅠ,Ⅲ,α-SMA的水平,上述作用可被转染miR-21-5p抑制剂阻断。结论 SSc患者循环外泌体通过转运miR-21-5p介导人皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。miR-21-5p可能是SSc潜在的生物标记物。     

沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞慢性光损伤的影响

【摘要】 目的 探讨沉默miRNA-23a对UVB照射所致成纤维细胞慢性光损伤的影响。 方法 将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光损伤组、miRNA-23a 沉默组、UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组。SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色测定老化程度,流式细胞仪检测细胞周期,实时PCR法检测p53、p16、p21 mRNA的表达,免疫印迹法检测p53、p16、p21的蛋白表达量。 结果 UVB光损伤组与UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的SA-β-Gal细胞蓝染阳性率分别为（94.60 ± 2.58）%、（48.18 ± 3.70）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。G1期阻滞率分别为（85.06 ± 1.52）%、（57.48 ± 2.01）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的p53、p16、p21 mRNA及蛋白表达量与UVB光损伤组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞衰老有抑制作用,而miRNA-23a对下游衰老相关信号分子的抑制可能是其机制之一。     

UVB对皮肤成纤维细胞相关骨架蛋白表达的影响

目的:确定UVB对皮肤成纤维细胞骨架蛋白的影响.方法:用150 mJ/cm2的UVB照射培养的皮肤成纤维细胞,用MTT法检测细胞活性,用Western blot法检测α-微管蛋白、β-微管蛋白、β-肌动蛋白和波形蛋白的含量.结果:150 mJ/cm2 UVB照射后β-微管蛋白含量逐渐降低,波形蛋白逐渐升高,α-微管蛋白和β-肌动蛋白改变不明显.结论:在UVB诱导人皮肤成纤维细胞光损伤过程中,β-微管蛋白和波形蛋白可能发挥着重要作用.     

UVB照射诱导皮肤成纤维细胞早期衰老的研究

目的 探讨UVB诱导的细胞衰老与肿瘤发生的关系。方法 噻唑蓝（MTT）法检测UVB辐射后的细胞增殖情况,筛选诱导衰老适宜的亚毒性剂量和照射次数。染色法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA β-gal）活性。RT－PCR检测衰老相关基因纤维结合素（FN）、骨结合素（ON）和平滑肌22（SM22）的表达。结果 以10 mJ/cm2的亚毒性剂量连续5次照射人成纤维细胞后,衰老的生物学特征得以明显表现：①MTT法检测显示细胞增生能力的减弱。②照射组具有SA β-gal活性的阳性细胞明显增加,照射组和对照组的阳性率分别为82.0%和33.7%（P < 0.01）。③3种衰老相关基因FN、ON和SM22的表达亦明显增强,分别约为对照组细胞的2.7、2.0、2.3倍（P < 0.05）。结论 反复亚毒性剂量UVB照射人成纤维细胞,初步建立一种UVB诱导的应激诱导的早期衰老（SIPS）模型。     

UVB对人皮肤成纤维细胞自噬影响的初步研究

目的:观察不同照射剂量及不同时间点的UVB照射对人皮肤成纤维细胞自噬功能的影响.方法:分别用不同照射剂量的UVB照射培养的人皮肤成纤维细胞后,用MDC法观察各照射组成纤维细胞的形态及自噬体阳性细胞的数量.同时将照射后的成纤维细胞用MDC法观察各时间点自噬体阳性细胞数量.结果:0、100、200、300、400 mJ/cm2各组自噬体阳性细胞百分数分别为5.975±1.889,21.400±4.286,89.550±4.282,45.500±9.423,36.250±9.996.各组之间除300 mJ/cm2与400 mJ/cm2组之间无显著性差异(P＞0.05)外,其余均存在显著性差异(P<0.05).12、24和48 h自噬体阳性细胞百分比分别为89.550±4.282、50.500±7.328和14.575±4.104.各组之间均存在显著性差异(P＜0.01).结论:UVB在中小照射剂量时可以上调人皮肤成纤维细胞自噬,而进一步加大照射剂量则呈下降趋势.UVB对人皮肤成纤维细胞自噬的影响随时间推移逐渐弱化.     

胎鼠真皮成纤维细胞皮内注射对UV诱导小鼠皮肤光老化的改善作用

目的: 探索体外培养胎鼠真皮成纤维细胞(fibroblasts,FBs)皮内注射对小鼠背部光老化皮肤的改善作用.方法: 分离培养10只第18.5天(E18.5)BALB/c胎鼠皮肤,体外培养FBs两天;用CM-Dil荧光染料进行活细胞标记,以示FBs注射后在体内存活情况.取BALB/c雄性小鼠20只,随机分为:未处理组...     

Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用

目的:评价Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用.方法:72只无毛鼠分为正常对照组(A组)、UVB照射对照组(B组)、外用0.36%Tempol 1 h后照射tNB组(C组)、外用0.36%Tempol 2 h后照射UVB组(D组)、外用0.36%Tempol 4 h后照射UVB组(E组)和外用0.36%Tempol 8 h后照射UVB组(F组).末次UVB照射后取其背部皮肤,在显微镜下观察真皮内胶原纤维和弹力纤维含量的变化及病理形态学改变.以生化分析方法测定丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(HYP)含量.结果:B、C、E和F组真皮胶原纤维及弹力纤维均增粗、断裂、排列紊乱,皮肤丙二醛含量均显著升高,皮肤羟脯氨酸含量均显著下降,与A和D组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:外用0.36%Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化具有防护作用,有效防护时段可能在用药后1-4 h.     

咖啡因可保护UVB致人皮肤成纤维细胞的损伤

目的：确定咖啡因对中波紫外线（UVB）照射致体外培养人皮肤成纤维细胞氧化损伤的防护作用.方法：分离培养人成纤维细胞,分为空白对照组、咖啡因组、UVB照射组、UVB照射＋咖啡因组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2.用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化比色法检测细胞丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性.结果：UVB照射前后用咖啡因处理能使成纤维细胞存活率提高、MDA产生减少,酶的活性增强.结论：咖啡因对UVB照射损伤成纤维细胞具有一定保护性作用,其机制可能与抑制氧化损伤和增强抗氧化能力有关.     

天冬氨酸/半胱氨酸组织蛋白酶在光老化成纤维细胞中的表达变化

目的 探讨天冬氨酸组织蛋白酶（cathepsin D）及半胱氨酸组织蛋白酶（cathepsin K）在光老化成纤维细胞中的表达变化。方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,在50 mg/L的8-甲氧沙林（8-MOP）培养基中避光孵育24 h后,用80 kJ/m2 UVA照射,体外诱导培养细胞光老化。衰老相关-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色证明老化诱导成功。Western印迹及实时定量RT-PCR对比检测光老化成纤维细胞及正常成纤维细胞cathepsin K和cathepsin D蛋白及基因表达。结果 Western印迹结果显示,光老化组表达的cathepsin D的灰度值为3.25 ± 0.33,对照组为14.18 ± 2.25,t = 30.61,P < 0.01,两组间差异有统计学意义;光老化组表达的cathepsin K灰度值为2.39 ± 0.66,对照组为29.38 ± 4.62,t = 12.63,P < 0.01,两组差异有统计学意义。光老化组cathepsin D mRNA的ΔCt值为2.79 ± 0.17,对照组为4.54 ± 0.34,根据2-ΔΔCt值计算得cathepsin D mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.24 ± 0.021（t = 20.78,P < 0.01）;光老化组cathepsin K mRNA的ΔCt值为-0.92 ± 0.06,对照组为2.57 ± 0.13,根据2-ΔΔCt值计算得cathepsin K mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.09 ± 0.005（t = 28.50,P < 0.01）。结论 cathepsin D及cathepsin K在光老化成纤维细胞中表达均下调。     

UVB对成纤维细胞中IFI16表达的影响

目的：检测UVB辐射后成纤维细胞中IFI16的表达水平。方法：用亚毒性UVB诱导成纤维细胞老化,并用real-time PCR和western bolt方法检测IFI16 mRNA 和蛋白质表达水平的变化。结果：UVB照射后诱导的老化成纤维细胞中IFI16 mRNA和蛋白质分别为空白对照组的2.11±0.45倍和1.59±0.23倍。结论： UVB诱导的成纤维细胞中IFI16表达水平升高,IFI16可能参与细胞光老化的进程。