散发性结直肠癌中hMLH1及hMSH2基因与p53、PCNA表达关系的研究

目的:研究hMLH1及hMSH2两种错配修复(mismatchrepair,MMR)蛋白在散发性结直肠癌的表达变化,与p53、PCNA表达的关系,并评估其可能的临床意义。方法:采用EnVision免疫组化两步法对150例散发性结直肠癌石蜡切片进行hMLH1、hMSH2、p53及PCNA表达的检测。结果:(1)150例散发性结直肠癌中,hMLH1失表达有24例,占16%(24/150),hMSH2失表达有5例,占3.3%(5/150);两者之和占总散发性结直肠癌病例的19.3%(29/150)。hMLH1或hMSH2蛋白失表达与患者肿瘤部位、组织学类型密切相关。近端结肠、低-未分化腺癌及黏液腺癌MMR蛋白失表达比例高(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大体类型、肿块大小、浸润深度、淋巴结转移与否远处转移与否以及患者的Dukes分期均无显著相关(P>0.05);(2)hMLH1/hMSH2蛋白失表达组p53阳性表达率及PCNA标记指数均低于表达组(P<0.05)。结论:(1)一定比例的散发性结直肠癌中存在MMR基因的缺陷,并具有相对特殊的临床病理特征;(2)hMLH1/hMSH2蛋白失表达与p53表达及PCNA标记指数呈负相关。     

结直肠癌中错配修复蛋白hMLH1和hMSH2的表达及临床意义

目的分析hMLH1、hMSH2两种错配修复（MMR）蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法应用EnVision免疫组化两步法检测80例结直肠癌中hMLH1、hMSH2的蛋白表达,并分析与临床、病理特征及家族史之间的关系。结果480例结直肠癌中,hMLH1表达缺失12例,占2．5％（12／480）,hMSH2表达缺失23例,占4．8％（23／480）,两者之和占所有结直肠癌病例的6．9％（33／480）。MMR蛋白表达缺失与患者年龄、肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移、多原发肿瘤相关,而与患者性别、肿瘤大体类型、组织学类型、浸润深度、有无远处转移无明显相关性。hMLHl表达缺失12例中6例（50．0％）有肿瘤家族史,hMSH2表达缺失23例中8例（34．8％）有肿瘤家族史。结论部分结直肠癌患者中存在错配修复蛋白的表达缺失,且与肿瘤部位及分化程度、淋巴结有无转移及多原发肿瘤等病理特征密切相关,表明可为遗传性非息肉病性结直肠癌的筛选提供重要线索。     

错配修复蛋白的表达与子宫内膜癌发生的关系

目的:探讨错配修复蛋白hMLH1和hMSH2在正常子宫内膜、不典型增生内膜及子宫内膜癌中的表达,及其与子宫内膜癌发生过程中的意义.方法:免疫组织化学法(sp)检测正常子宫内膜14例、不典型增生子宫内膜27例、子宫内膜癌31例中的hMLH1和hMSH2蛋白的表达情况.结果:在正常、不典型增生和癌组织中hMLH1的阳性表达率分别为100%(14/14)、81%(22/27)和61%(19/31),组间差异有显著性(P＜0.05),hMLH1的核表达率分别为14%(2/14)、19%(5/27)和19%(6/31);hMSH2的胞质表达率分别为100%(14/14)、78%(21/27)、81%(25/31),不典型增生组和癌组显著低于正常组(P＜0.05);hMSH2的核表达率分别为43%(6/14)、59%(16/27)、68%(21/31),癌组显著高于正常组(P＜0.05).结论:错配修复蛋白hMLH1和hMSH2的细胞内表达缺失可提示子宫内膜的异常增生,同时检测两种蛋白的表达及表达位置有助于子宫内膜癌的早期发现.     

散发性结直肠癌中MMR与突变p53的表达

目的　探讨错配修复基因MMR(hMSH2与hMLH1基因 )在散发性结直肠癌发生中的作用。方法　采用PCR SSCP和PCR产物直接测序法对 41例散发性结直肠癌患者肿瘤组织及正常组织的hMSH2、hMLH1与p53基因进行检测。结果　41例散发性结直肠癌中,有 2例发生hMSH2基因突变,占 4. 88% (2 /41), 5例发生hMLH1基因突变,占 12. 20% (5 /41), 20例发生p53基因突变,占 48. 78% (20 /41)。hMLH1和hMSH2基因在p53突变患者的突变率 30. 00% (6 /20)显著高于p53未发生突变患者的突变率 4. 76(1 /21) (P<0. 05)。结论　部分散发性结直肠癌患者中存在MMR基因缺陷,其中hMLH1基因的作用大于hMSH2。MMR基因突变与p53突变密切相关。     

hMSH2和MGMT在大肠癌中表达的意义

目的探讨hMSH2和MGMT蛋白表达与大肠癌发生、发展的关系及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测169例大肠癌组织(癌组)、36例癌旁黏膜组织(癌旁组)和36例非肠癌患者肠黏膜组织(正常组)hMSH2和MGMT蛋白的表达。结果癌组、癌旁组及正常组hMSH2蛋白的阳性表达率分别为85.21%(144/169)、75.0%(27/36)和22.22%(8/36);MGMT蛋白的阳性表达率分别为71.60%(121/169)、63.89%(23/36)和8.33%(3/36);前两组与第3组蛋白阳性表达率比较差异极显著(P0.01),且癌组织中hMSH2蛋白与MGMT蛋白的表达呈正相关(r=0.270,P0.01)。结论在大肠癌发生、发展过程中存在hMSH2和MGMT蛋白异常表达,联合监控这两种蛋白表达可能会有助于大肠癌的诊断。     

PTEN在结直肠癌组织中的表达及其与p53和PCNA的关系

【目的】探讨PTEN在结直肠癌变过程中可能作用机制,进一步研究结直肠癌中PTEN、p53、PCNA表达的相互关系。【方法】应用免疫组化法检测78例结直肠癌及其癌旁组织和20例正常结直肠黏膜组织中PTEN、p53、PCNA的表达。【结果】PTEN在正常结直肠黏膜组织、癌旁组织、结直肠癌组织表达阳性率分别为100%、96%、50%。结直肠癌组织中PTEN表达明显高于癌旁组织,差异有显著性(P<0.01)。DukesA、B期PTEN蛋白表达明显高于DukesC、D期,差异有显著性(P<0.01)。PTEN表达与p53表达呈负相关(r=-0.610,P=0.01),与PCNA表达无关(r=-0.145,P=0.207)。【结论】PTEN在结直肠癌组织中表达下调,提示PTEN可能在结直肠黏膜细胞癌变过程中起重要作用。PTEN低表达及p53基因的失活在结直肠癌的癌变过程中起协同作用。     

FMNL2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测FMNL2在结直肠癌组织与癌旁正常组织中的表达情况,初步探讨其与结直肠癌侵袭转移的关系.方法 ①用免疫组化法检测175例石蜡组织标本(癌旁正常组织30例,腺瘤组织25例,结直肠癌组织75例,淋巴结转移癌45例)中的FMNL2的表达.②用Real time PCR法分析FMNL2 mRNA在32对新鲜结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中的表达情况.结果 ①FMNL2蛋白在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(阳性表达百分比为80%与27%,Z=-2.937,P=0.003);在淋巴结转移癌中的表达高于原发癌组织(阳性表达百分比为87%与80%,Z=-2.085,P=0.037);在转移的癌组织中的表达高于未发生转移的癌组织(阳性表达百分比为87%与70%,Z=-2.557,P=0.011).②FMNL2 mRNA的表达与浸润程度、分化程度无关,但在发生转移的癌组织中的表达高于未发生转移的癌组织,是其2.05倍.结论FMNL2可能与结直肠癌的转移有一定的相关性.     

Caspase-9在结直肠正常黏膜和癌中的表达

目的:定量测定Caspase-9基因在人类结直肠癌及癌旁正常组织中的表达,从而探讨其在结直肠癌发病中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR技术测定88例配对的结直肠癌组织及癌旁正常组织中Capase-9 mRNA的表达,并分析表达的变化与临床病理特征的关系。结果:Caspase-9在结直肠癌中相对于癌旁正常组织表达下调(P=0.003)。结直肠癌组织分化程度与Caspase-9表达下调相关(P=0.048),与Dukes分期、年龄、性别及是否淋巴结转移无关。结论:Caspase-9在结直肠癌的发病中可能发挥了重要作用,并参与了肿瘤组织的分化。     

RNA编辑酶在结直肠癌组织标本中的表达

目的探讨RNA编辑酶在结直肠癌组织标本中的表达及其意义。方法收集临床结直肠癌组织标本及癌周正常组织标本12例,应用RT-PCR法检测RNA编辑酶ADAR1、ADAR2在结直肠癌组织及癌旁正常组织标本中的表达并分析。结果编辑酶ADAR1在人结直肠癌组织及癌旁组织中未见明显表达,而编辑酶ADAR2在结直肠癌组织及结直肠癌旁组织中阳性表达,并在结直肠癌组织中表达增强(癌组织中阳性表达率为75%,癌旁组织阳性表达率为41.7%,P0.05)。结论编辑酶ADAR2阳性表达可能与结直肠癌的发生发展有关。     

结直肠癌组织中hTcf-4 mRNA表达的研究

目的:研究hTcf-4mRNA在结直肠癌组织及癌旁正常组织的表达,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用。方法:用荧光定量PCR检测31例结直肠癌标本及相应的癌旁正常组织hTcf-4mRNA的表达。结果:31例癌组织hTcf-4mRNA表达高于癌旁正常组织(P<0.05);Dukes不同分期结直肠癌hTcf-4mRNA表达随着浸润深度的加深其表达有增高趋势(P<0.05)。结论:hTcf-4mRNA在结直肠癌组织中表达增高,并与结直肠癌侵袭转移有关,可作为判定结直肠癌转移及预后的参考指标。     

错配修复蛋白hMLH1、hMSH2在大肠息肉和散发性大肠癌中的表达差异

目的 探讨错配修复基因改变在大肠腺瘤中的表达,探讨其在大肠腺瘤发展至大肠癌过程中所起的作用.方法 采用免疫组化的方法检测炎性息肉、大肠腺瘤和大肠癌组织中hMLH1和hMSH2蛋白表达和突变情况.结果 大肠炎性息肉hMLH1蛋白阴性表达率为4.76%,hMSH2蛋白的阴性表达率为0;大肠腺瘤性息肉组织中,hMLH1蛋白阴性表达率为21.66%;hMSH2蛋白阴性表达率为8.92%;在散发性大肠癌组织中,hMLH1蛋白阴性表达率为27.27%,hMSH2蛋白阴性表达率为13.64%.结论 本文的结果表明hMLH1和hMSH2蛋白阳性表达率从炎性息肉组织、腺瘤组织到腺癌组织逐渐降低,提示早在腺瘤阶段已经有MMR的基因的突变或功能异常,提示MMR基因的突变,尤其是hMLH1和hMSH2的突变可能是大肠癌发生的早期事件之一.     

Hereditary nonpolyposis colorectal cancer

Hereditary nonpolyposis colorectal cancer(HNPCC) is one of the most common cancer predisposition syndromes. Mismatch repair genes, such as hMSH2 and hMLH1, have been identified as causative genes for most HNPCC cases. When we examined the hMLH1 and hMSH2 genes on PCR-SSCP, 9 of the 15(60%) cases satisfying the Amsterdam criteria and 3 of the 22(13.6%) cases with the Japanese clinical criteria showed germline mutations, indicating a significant difference of the detection rate. Interestingly, the mutation frequency of hMSH2(11/12) is much higher than that of hMLH1(1/12). Alterations of TGF-beta RII(A)10 were found in 8(57%) adenomas and 11(85%) cancers, and they were seen at an earlier stage of adenomas, suggesting a strong association of TGF-beta RII alterations with adenoma formation in HNPCC.     

Inactivation of hMLH1 and hMSH2 by promoter methylation in primary non-small cell lung tumors and matched sputum samples

We performed a genetic and epigenetic study of the hMLH1 and hMSH2 mismatch repair genes in resected primary tumors from 77 non-small cell lung cancer (NSCLC) patients. The molecular alterations examined included the loss of mRNA and protein expression as well as promoter methylation, and the allelic imbalance of the chromosomal regions that harbor the genes. We found that 78% and 26% of patients showed at least one type of molecular alteration within the hMLH1 and hMSH2 genes, respectively. Promoter methylation of the hMLH1 gene was present in 55.8% of tumors, and was significantly associated with the reduction in mRNA and protein expression (P = 0.001). A 72% concordance of aberrant methylation in sputum samples with matched resected tumors was found. In addition, a 93% consistency between the promoter methylation and the mRNA expression of the hMSH2 gene was found in 14 female NSCLC patients. However, no correlation was found between the expression of hMLH1 and hMSH2 proteins and the allelic imbalance of five microsatellite markers closely linked to the genes. Our results suggest that hMLH1 is the major altered mismatch repair gene involved in NSCLC tumorigenesis, and that promoter methylation is the predominant mechanism in hMLH1 and hMSH2 deregulation. In addition, promoter methylation of the hMLH1 gene may be identified in sputum samples to serve as a potential diagnostic marker of NSCLC.     

大肠癌错配修复基因hMLH1突变与微卫星不稳二维DNA电泳及DNA测序技术的意义

背景微卫星不稳是一种重要的基因改变方式,在肿瘤的发生中起重要作用,其发生是由于错配修复基因发生缺陷所致.错配修复基因hMLH1突变在遗传性非息肉性大肠癌中的作用已有报道,但在散发性大肠癌的作用尚缺乏深入的研究.目的探讨错配修复基因hMLH1突变在大肠癌发生中的作用及与微卫星不稳的关系.设计单一样本实验.单位解放军第三军医大学西南医院消化科.材料76例大肠癌及相应正常组织均为2001-01/2003-12西南医院外科手术切除标本,所有患者均无肿瘤家族史,并未接受过放疗和化疗,对实验知情同意.方法采用二维DNA电泳和DNA测序技术检测hMLH1突变;采用聚合酶链反应为基础的方法检测微卫星不稳.主要观察指标①大肠癌hMLH1突变及微卫星不稳检出率.②微卫星不稳与hMLH1突变的关系.结果①76例大肠癌中检出hMLH1基因突变8例,突变率为10.5%,检出微卫星不稳20例,检出率为26.3%.右侧大肠癌hMLH1突变和微卫星不稳的检出率显著高于左侧大肠癌(6/26比2/50,x2=4.739,P=0.029;11/26比9/50,x2=5.212,P=0.022),hMLH1突变和微卫星不稳与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移和临床病理分期无显著相关.②将微卫星不稳分为高频率微卫星不稳(≥2个位点)10例、低频率微卫星不稳(仅为1个位点)10例和微卫星不稳阴性56例3组,8例hMLH1基因突变均发生于高频率微卫星不稳组,而低频率微卫星不稳和微卫星不稳阴性组未见有突变者.结论hMLH1基因突变与微卫星不稳多发生于右侧大肠癌,hMLH1突变与高频率微卫星不稳大肠癌的发生有关.     

大肠癌易感基因hMLH1、hMSH2的筛查

目的探讨hMLH1、hMSH2基因多态性与大肠癌发病危险的研究。方法采用大样本随机对照试验,运用PCR和DNA直接测序方法,筛查外周血单个核细胞DNAhMLH1、hMSH2基因多态性。结果 大肠癌组hM-LH1-exon12 1151T→A的突变阳性率为12.20%,与对照组(6.10%)相比,无显著差异(P>0.05);而hMSH2-exon1IVS1+9C→G的突变阳性率为46.70%,与对照组(33.33%)相比差异显著(P<0.05)。在各年龄组间,hMLH1-ex-on12、hMLH1-exon12突变无显著性差异(P>0.05)。危险性分析表明,携带hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变发生大肠癌的相对危险性为无基因突变组的1.75倍,若不携带基因突变,其肠癌发病率将降低42.9%;若在人群中无hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变发生,则大肠癌的发病率将降低20%。结论hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变可作为大肠癌发病的危险因素,并可作为检测指标。     

鼻咽癌中hMLH1基因甲基化及其蛋白表达的临床意义

目的观察鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化状态及其对蛋白表达的影响,并分析甲基化及蛋白表达与临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性定量PCR检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中hMLH1的甲基化状态。应用免疫组化法检测hMLH1蛋白表达情况。结果鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中hMLH1基因甲基化阳性率分别为77.8%(57/63)、8.3%(1/12)(P<0.001)。hMLH1蛋白表达下调/缺失率分别为71.4%(45/63)、8.3%(1/12)(P<0.001)。hMLH1基因甲基化阳性率与鼻咽癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),hMLH1蛋白表达与鼻咽癌的淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论 hMLH1甲基化及其蛋白表达与鼻咽癌关系密切,并且甲基化影响其蛋白表达。     

PTEN及hMSH2在年轻妇女子宫内膜癌中的表达

【目的】探讨抑癌基因PTEN及DNA错配修复基因hMSH2在年轻妇女子宫内膜癌组织中的表达及相关性。【方法】选取因子宫病变行子宫全切的45岁及以下妇女子宫内膜组织标本66例，其中子宫内膜腺癌42例、子宫内膜非典型增生6例、正常子宫内膜18例。采用免疫组织化学SP法测定PTEN及hMSH2在子宫内膜组织中的表达。【结果】①在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌中PT EN的表达率逐渐降低，缺失率分别为16．67％、66．67％、85．71％，且差异均有极显著性（ P ＜0．01）；hMSH2的表达率分别为44．44％、33．33％、73．81％，各组之间相比较差异有显著性（ P＜0．05）；②PTEN及hMSH2在子宫内膜癌中的表达与临床分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴转移无关（rs 值＝0．271， P ＞0．05）。③在子宫内膜癌中，hMSH2蛋白表达与PTEN 蛋白表达无显著性相关关系（ P ＜0．05）；hMSH2蛋白与 PTEN蛋白表达呈不一致（χ2＝23．04，P＝0．000）。【结论】同时检测PTEN及hMSH2在年轻妇女子宫内膜癌的表达有助于早期诊断，并能推测预后。