经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血损伤早期运动皮质兴奋性和神经功能的影响

背景：目前认为经颅重频磁刺激对局部脑血流，代谢，神经递质，及神经组织损伤后再塑形等均有调节作用。缺血性脑卒中的预后与损伤同侧和对侧的皮质功能重建有关，经颅重频磁刺激能否对脑缺血后皮质功能有影响，起到保护缺血神经元、促进运动功能恢复的作用？目的：观察经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌注损伤早期运动皮质兴奋性和神经功能的影响。设计：完全随机设计。单位：中国协和医科大学北京协和医院神经电生理实验室。材料：实验于2004-01／06在北京协和医院实验动物中心完成。健康雄性成年Wistar大鼠22只被随机分成实验组和对照组各11只。方法：造模前测定Wistar大鼠正常情况下右后肢运动阈值（平均运动阈值为最大输出的22％），测定后两组动物均制作左侧大脑中动脉栓塞1h再灌注72h模型，对照组不干预，实验组在再灌注即刻，再灌注后12，36，60h分别给予经颅重频磁刺激（20Hz，40％最大输出，每序列5s，序列间隔2min，共10个序列），末次刺激4h后再次测定两组大鼠的运动阈值。于再灌注24和72h时，以姿势反射实验（0分为无明显肢体瘫痪，5分为昏迷，1～3分纳入实验）和前肢放置实验（0：肢体动作迅速完全；1：肢体动作缓慢，不完全，〉2s；2：无肢体动作）进行神经功能评分。再灌注72h麻醉状态下处死取脑，计算脑梗死体积。主要观察指标：①两组动物损伤前后的运动阈值。②再灌注24，72h时的神经功能评分。③再灌注72h时脑梗死体积。结果：13只大鼠进入结果分析。①运动阈值：损伤前实验组和对照组无显著差异。损伤后对照组为实验组的1．49倍，但无统计学差异[（41．62&;#177;24．73）％，（28．00&;#177;9．35）％，t=-1．17，P=0．27]。②神经功能评分：实验组和对照组损伤24h时无差异（P=0．46）；损伤72h时，实验组显著低于对照组（1．60&;#177;1．52，7．75&;#177;3．62，t=-3．57，P=0．004）。③脑梗死体积：损伤72h时，对照组、实验组分别为（62．00&;#177;60．88），（20．00&;#177;12．41）mm^3，做对数转换后比较无差异（t=-1．31，P=0．22），但若将数据做[Log10（梗死体积）]转换后有显著性差异（P=0．045）。结论：①高频、高强经颅重频磁刺激可能参与维持脑缺血再灌注损伤后运动阈值的稳定，防止运动阈值过度升高而干扰运动功能的恢复。②经颅重频磁刺激可能缓解脑缺血再灌注损伤后的神经功能障碍，随损伤时间延长，效应越明显。③经颅重频磁刺激可能缩小脑梗死体积。     

经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌注损伤后运动皮质兴奋性和神经功能的影响

目的:观察经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌注损伤后运动皮质兴奋性和神经功能的影响。方法:实验于2003-10/2004-06在北京协和医院电生理室完成。选择成年健康雄性SD大鼠随机数字表法分为实验组和对照组,各10只。测定右后肢运动阈值和运动诱发电位后,制作左侧大脑中动脉栓塞再灌注模型,实验组动物于再灌注即刻和12h各给予1次经颅重频磁刺激,以后每隔24h重复刺激1次,共8次。刺激部位同运动阈值测定部位,刺激频率20Hz,强度52%(130%平均运动阈值),每序列时间5s,序列间隔2min,共10个序列。对照组不给予刺激,其余一切同实验组。再灌注1周时,重复测定运动阈值和运动诱发电位,以姿势反射实验和前肢放置实验判断神经功能评分。采用图像分析软件测量梗死体积。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①运动阈值:对照组损伤后运动阈值显著高于其损伤前水平(P=0.02),实验组损伤后运动阈值显著低于损伤前水平(P=0.04)。两组动物损伤前运动阈值无显著差异;但实验组损伤后运动阈值显著低于对照组(P=0.02)。②运动诱发电位:对照组和实验组在损伤后的运动诱发电位潜伏期均较损伤前显著延长(P=0.05,0.04)。两组动物损伤前后的运动诱发电位潜伏期均无显著差异(P=0.10,0.91)。对照组潜伏期平均延长约0.34ms,实验组潜伏期平均延长约0.20ms,较前者延长程度减轻,但无显著差异(P=0.37)。③神经功能:所有实验大鼠均出现不同程度以右前肢为主的运动障碍。实验组损伤1周后的功能评分显著低于对照组(P=0.03),功能障碍显著减轻。④脑梗死体积:所有大鼠均出现不同程度的局灶性梗死灶,累及纹体区和/或额颞顶叶皮质,以20g/L三苯氯化四氮唑染色显示为边界较清晰的不着色(白色)区域。实验组平均脑梗死体积显著小于对照组(P=0.02)。⑤相关分析:损伤后运动阈值与脑梗死体积之间存在显著直线正相关(r=0.64,P=0.01)。结论:经颅重频磁刺激对缺血早期脑组织可能提供神经保护作用,损伤后运动阈值水平可提供预后的相关信息。     

经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌注损伤后运动皮质兴奋性和神经功能的影响

目的：观察经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌注损伤后运动皮质兴奋性和神经功能的影响。 方法：实验于2003-10／2004-06在北京协和医院电生理室完成。选择成年健康雄性SD大鼠随机数字表法分为实验组和对照组，各10只。测定右后肢运动阈值和运动诱发电位后，制作左侧大脑中动脉栓塞再灌注模型，实验组动物于再灌注即刻和12h各给予1次经颅重频磁刺激，以后每隔24h重复刺激1次，共8次。刺激部位同运动阈值测定部位，刺激频率20Hz，强度52%（130％平均运动阈值），每序列时间5s，序列间隔2min，共10个序列。对照组不给予刺激，其余一切同实验组。再灌注1周时，重复测定运动阈值和运动诱发电位，以姿势反射实验和前肢放置实验判断神经功能评分。采用图像分析软件测量梗死体积。 结果：纳入动物20只，均进入结果分析。①运动阈值：对照组损伤后运动阈值显著高于其损伤前水平（P=0．02），实验组损伤后运动阈值显著低于损伤前水平（P=0．04）。两组动物损伤前运动阈值无显著差异；但实验组损伤后运动阈值显著低于对照组（P=0．02）。②运动诱发电位：对照组和实验组在损伤后的运动诱发电位潜伏期均较损伤前显著延长（P=0．05，0．04）。两组动物损伤前后的运动诱发电位潜伏期均无显著差异（P=0．10，0．91）。对照组潜伏期平均延长约0．34ms，实验组潜伏期平同程度的局灶性梗死灶，累及纹体区和／或额颞顶叶皮质，以20g／L三苯氯化四氮唑染色显示为边界较清晰的不着色（白色）区域。实验组平均脑梗死体积显著小于对照组（P=0．02）。⑤相关分析：损伤后运动阈值与脑梗死体积之间存在显著直线正相关（r=0．64，P=0．01）。 结论：经颅重频磁刺激对缺血早期脑组织可能提供神经保护作用，损伤后运动阈值水平可提供预后的相关信息。均延长约0．20ms，较前者延长程度减轻，但无显著差异（P=0．37）。③神经功能：所有实验大鼠均出现不同程度以右前肢为主的运动障碍。实验组损伤1周后的功能评分显著低于对照组（P=0．03），功能障碍显著减轻。④脑梗死体积：所有大鼠均出现不     

银杏内酯对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经功能缺失评分、脑梗死体积及皮质神经元凋亡的影响

目的:观察银杏内酯对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经功能缺失评分、脑梗死体积、皮质神经元凋亡的影响及其银杏内酯的脑保护作用。方法:实验于2004-01/09在福建医科大学解剖学研究所完成。将月龄3个月雄性SD大鼠96只随机分为实验组和对照组,采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞局灶缺血模型。实验组在缺血即刻腹腔注射银杏内酯20mg/kg,对照组腹腔注射等量的生理盐水。两组又随机分为再灌注6,24和48h组,每组16只,运用Zea-Longa法进行神经功能缺失评分。在再灌注6,24,48h时间点每组随机取8只采用2,3,5-三苯四氮唑染色法观察梗死灶范围,并计算梗死灶体积占半球体积的百分率。另每组8只大鼠应用原位细胞凋亡检测法计数神经元凋亡数目。结果:实验过程中有4只大鼠因未出现神经功能缺损体征予以剔除,补充4只造模成功大鼠,进入结果分析大鼠保持为96只。①再灌注6,24h实验组神经功能缺损评分明显低于对照组(1.69±0.6,1.25±0.45,2.56±0.51,2.06±0.77,U=37,41,P<0.001),再灌注48h实验组评分与对照组基本一致(0.62±0.50,0.69±0.48,U=120,P=0.714)。②再灌注6,24,48h实验组脑梗死体积占半球体积的百分率明显低于对照组犤(12.27±0.55)%,(15.28±0.45)%,(16.30±0.36)%,(19.06±0.80)%,(24.19±0.57)%,(29.27±1.09)%     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法:利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。治疗组缺血时腹腔注射丹皮酚,缺血2h再灌注24h观察对神经功能缺陷评分、脑组织病理形态改变、脑梗死体积的影响。结果:与对照组犤(2.27±0.70)分犦比较,丹皮酚治疗组犤(1.67±0.72)分犦症状改善,神经功能缺陷评分减少(t=2.302,P=0.029),脑组织病理形态改变减轻。梗死体积治疗组犤(105.25±9.48)mm3犦较对照组犤(117.26±7.94)mm3犦减小,但两者之间差异无显著性意义(t=2.173,P=0.062)。结论:丹皮酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的脑保护作用。     

超声-中频电经颅刺激小脑区对大鼠局灶性脑缺血再灌注的保护作用

目的观察超声-中频电经颅刺激小脑区对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法将实验大鼠随机分为假手术组、对照组及治疗组。用线栓法制备一侧大脑中动脉闭塞再灌注（MCA-OR）模型，造成大鼠左脑缺血2h再灌注24h，采用5级评分法评定神经功能缺损程度并筛选大鼠。采用干重湿重法测定脑含水量，用TTC染色-图像分析仪测定梗死灶体积，并分析缺血侧脑组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的变化。结果与对照组相比，治疗组大鼠（即刻组除外）的脑水肿程度明显减轻（P〈0．05）；治疗组脑梗死体积缩小（P〈0．05），脑组织中SOD含量增加，而MDA值下降（P〈0．05）。结论超声-中频电经颅刺激小脑区对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用，其作用可能与减轻脑水肿、提高SOD活性、降低MDA含量及缩小梗死体积有关。     

阿司匹林、盐酸氟桂利嗪联合预处理对高血糖SD大鼠局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的采用高血糖条件下Sprague-Dawley（SD）大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑组织病理形态改变,探讨阿司匹林联合盐酸氟桂利嗪预处理对高血糖SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否有保护作用。方法36只雄性健康SD大鼠,建立高血糖模型后随机分为2组：对照组（n=18）、阿司匹林＋盐酸氟桂利嗪组（治疗组,n=18）,各组按脑缺血90min再灌注3h（n=6）、6h（n=6）、24h（n=6）分为3个亚组。比较两组在相同再灌注各时间点神经功能缺损评分、脑梗死体积和脑组织病理形态的改变。结果治疗组相同再灌注各时间点神经功能缺损评分好于对照组（P〈0．05）;治疗组脑梗死体积明显小于对照组（P〈0．01）;治疗组与对照组相比,变性、坏死的神经元减少,空泡化改变减轻,组织间水肿减轻。结论阿司匹林联合盐酸氟桂利嗪预处理能减轻高血糖条件下的局灶陛脑缺血再灌注损伤,减轻神经功能缺损症状,缩小梗死体积,减轻神经细胞变性、坏死及组织水肿。     

超短波和旋磁对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨超短波、旋磁治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将52只健康Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、超短波治疗组（超短波组）及旋磁治疗组（旋磁组）。脑缺血再灌注后18h给予治疗，24h取脑，观察各组大鼠脑组织含水量、脑梗死体积及Bcl-2、Bax蛋白表达，进行组间比较。结果 脑缺血再灌注后18h，超短波治疗能减少脑含水量，减小梗死体积；超短波组与旋磁组Bcl-2的表达均提高，Bax蛋白表达降低，Bcl-2／Bax提高，超短波组与旋磁组间差异无统计学意义（P〉0．05）；在减少脑含水量和减小脑梗死体积方面，旋磁组与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 脑缺血再灌注后18h，应用超短波治疗对局灶性脑缺血再灌注损伤有显著疗效；本实验条件下旋磁治疗对改善脑水肿、减小脑梗死体积未见显著疗效，在改善凋亡方面有显著疗效。     

不同物理因子对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用的研究

目的:通过观察不同物理网子对大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积,脑组织中B细胞淋巴细胞瘤-xl及肿瘤坏死因子-a表达的影响,比较小同物理因子脑缺血再灌注损伤后的保护作用并初步探讨其作用机制.方法:用线栓法制备一侧大脑中动脉栓塞再灌注大鼠模型,造成大鼠有脑缺血 2h再灌注24h,采用Zea-Longa 5级评分法评定神经功能缺损程度来筛选实验片用鼠.大鼠按体重随机分成假手术组、对照组及超短波组,电刺激组,旋磁组.所选大鼠均于再灌注24h后断头取脑.分别测定脑梗死灶体积、脑组织中Bcl-xl及TNF-a的表达.结果:与对照组比较,超短波组及电刺激组的梗死体积均缩小,差异有显著性意义(P＜0.05).而旋磁组未见梗死体积的显著缩小.与对照组比较,各治疗组脑组织中Bcl-xl表达增加,TNF-a水平降低,均具有显著性意义(P＜0.05).结论:超短波及电刺激治疗均可通过增加Bcl-xl表达降低TNF-a水平而抑制脑神经细胞凋亡,挽救半暗带,缩小脑梗死灶体积,从而保护脑缺血再灌注后神经损伤,而旋磁治疗抑制凋亡的作用明显,而缩小梗死体积的作用不明显可能与实验动物数量少有关.     

短暂脑缺血再灌注后突触蛋白Ⅰ表达与细胞凋亡

目的观察短暂脑缺血再灌注对与神经元的早期发育和再生相关的突触蛋白Ⅰ及神经细胞凋亡的影响,进一步了解神经系统的可塑性.方法实验于2003年于同济医院神经内科实验室进行.[1]分组取75只Wister大鼠随机分为模型组(n=51)、假手术组(n=18)和正常对照组(n=6)3组.假手术组18只和模型组18只分为再灌注1,3,6,12,24和72 h6个亚组,进行突触蛋白Ⅰ检测;正常对照组6只和模型组剩余的33只大鼠(分为再灌注1,3,6,12,24,48和72 h 7个亚组)分别进行TUNEL阳性细胞检测、形态学观察和流式细胞仪检测,需获取数据时至少检测2只大鼠.[2]造模模型组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血10 min后再灌注;假手术组不插入线栓,其余步骤同模型组;正常对照组不干预.[3]观察指标于相应时间点麻醉状态下处死取脑,应用免疫组织化学的方法观察缺血侧额顶叶皮质突触蛋白Ⅰ表达的动态变化,同时采用荧光显微镜、流式细胞仪和脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,分析两者之间的关系.结果经补充后72只大鼠进入结果分析.[1]缺血侧额顶叶皮质突触蛋白Ⅰ的表达模型组再灌注12 h内无明显变化,再灌注24 h低于假手术组(0.199±0.006,0.238±0.008,P＜0.01),至72 h恢复至假手术组水平.[2]细胞凋亡率模型组再灌注24,48和72 h均高于正常对照组[(12.57±9.83)%,(13.56±2.28)%,(16.68±0.66)%,(4.65±0.03)%,P＜0.05].[3]TUNEL阳性细胞率正常对照组和模型组再灌注0～24h均未见阳性细胞,再灌注48和72 h分别为(47.50±3.85)%和(62.66±13.06)%.结论短暂脑缺血再灌注后存在着突触蛋白Ⅰ表达的短暂降低,且与凋亡细胞的出现在时间上非常吻合,提示短暂脑缺血再灌注后存在失神经及其后的神经再获现象,这可能与DNA的损伤和修复有关.     

参附注射液对大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的探讨参附注射液对脑缺血性损伤的保护作用及量效关系。方法40只雄性SD大鼠,随机分为4组,对照组（n=10）,即缺血再灌注组,在缺血前30分钟经腹腔注射生理盐水20ml/kg;各保护组（Cen5,Cen10,Cen20,各组n=10）在缺血前30分钟经腹腔注射参附注射液(剂量分别为5、10、20ml/kg)及生理盐水(剂量分别为15、10、0ml/kg)。采用右侧颈内动脉丝线栓塞致大脑中动脉阻闭120分钟,术后观察1、3、6、12、16和24小时神经行为学变化并评分,24小时时处死动物,取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。结果24小时神经功能评分,各保护组为Cen5〔(0.6±0.5)分,P<0.05〕,Cen10〔(0.8±0.9）分,P<0.05〕,Cen20〔(0.7±0.4)分,P<0.05〕,均明显低于对照组〔(1.8±1.0)分〕;24小时梗死容积各保护组为Cen5〔(58.7±21.4)mm     

全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达

背景:脑缺血再灌注对中枢神经系统的影响,除了急性期的细胞坏死,还有迟发性的神经元凋亡.目的:观察大鼠全脑缺血不同再灌注阶段海马神经元凋亡率、坏死率及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达情况,并探讨其对全脑缺血再灌注损伤的调节作用.设计:随机对照实验.单位:首都医科大学附属北京天坛医院的神经外科和麻醉科.材料:实验于2003-01/2004-01在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成.选择清洁级成年雄性健康Wistar大鼠33只,随机分5组,缺血再灌注24 h组7只、缺血再灌注48 h组7只、缺血再灌注72 h组7只、缺血再灌注7 d组7只和假手术对照组5只.干预:制备大鼠全脑缺血再灌注模型.分别于再灌注24,48,72 h和7 d取脑海马组织,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,坏死率,Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑海马神经元中的表达情况.主要观察指标:①流式细胞仪检测各组大鼠脑海马组织细胞凋亡率和坏死率.②Bcl-2和Bax蛋白表达百分率.结果:33只大鼠全部进入结果分析.①缺血再灌注7 d组海马神经元的凋亡率最高[(24.59±0.97)%],坏死率峰值出现在缺血再灌注24 h组[(16.67±1.04)%],明显高于假手术对照组[(1.28±0.50)%,(0.90±0.38)%](P＜0.01).②假手术对照组Bcl-2表达极低[(1.07±0.27)%],但Bax有高表达[(46.09±5.37)%].③Bcl-2蛋白峰值出现在缺血再灌注后48 h[(14.41±0.67)%],而Bax蛋白峰值出现在缺血再灌注之后72 h[(77.38±1.52)%].结论:全脑缺血再灌注损伤后海马神经元凋亡率逐渐增高,凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达异常增高,提示Bcl-2和Bax蛋白参与了全脑缺血再灌注损伤的凋亡调节.     

亚低温联合升压治疗对局灶脑缺血再灌注后病灶体积及血脑屏障的影响

背景研究表明,亚低温和适当升压对脑缺血都有一定的保护作用,二者联合应用可能产生协同作用,起到更好的脑保护效果.目的通过升压联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死体积、血脑屏障的影响,探讨脑保护作用机制.设计以实验动物为研究对象,完全随机对照设计.单位两所大学医院的神经科和一所市级医院的皮肤科.材料实验于2001-03/07在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经科实验室和武汉大学人民医院神经科实验室完成.选择64只成年Wistar大鼠由武汉大学人民医院实验动物中心提供.干预制备大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为对照组、升压组、亚低温组及升压联合亚低温治疗组(联合组),每组16只动物,缺血3 h再灌注;对照组常温不予处理,升压组缺血2 h给予升压处理3 h,亚低温组缺血2 h开始亚低温干预,联合组联合应用亚低温组和升压组治疗方法.缺血24 h处死动物. 主要观察指标神经功能缺失评分、脑梗死体积和血脑屏障破坏情况.结果升压组、亚低温组及联合组的神经功能缺失评分分别为(2.12±0.54)分、(2.14±0.69)分、(1.78±0.61)分,脑梗死体积分别为(17.65±4.78)%,(16.21±3.79)%,(11.31±3.64)%,Even's蓝染色体积分别为(56 63±10.70)mm3,(53.52±8.44)mm3,(38.45±5.25)mm3均明显低于对照组[(2.70±0.64)分,(28.34±4.13)%和(94.87±15..34)mm3];而联合组脑梗死体积和Even's蓝染色体积明显小于单独升压组和亚低温组(P均＜0.05).结论升压和亚低温能明显减轻局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑梗死体积和血脑屏障破坏程度,联合应用作用更强.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的组织病理学研究

目的:探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组10只,脑缺血再灌注模型组25只,参芎注射液治疗组25只。线栓法制备大脑中动脉梗塞模型,HE染色和Nissl染色观察病理学变化,TTC染色检测脑梗死体积,TUNEL法原位检测神经细胞凋亡。结果:模型组大鼠脑缺血再灌注后72 hHE染色显示出典型梗死灶和神经元丢失,Nissl染色可见细胞尼氏体肿胀,消失,参芎注射液治疗可以减轻上述损害。模型组梗死灶明显,神经细胞凋亡计数明显增多(P<0.01),参芎注射液治疗可明显减少大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死体积(P<0.05),及其神经细胞凋亡计数(P<0.05)。结论:参芎注射液能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

亚低温对大鼠缺血再灌注脑组织的保护作用

背景:近年来亚低温对脑缺血组织的保护作用以及亚低温治疗对脑缺血再灌注后的炎症反应已越来越引起重视。目的:探讨亚低温对大鼠脑缺血区炎性细胞因子的影响,及其再灌注损伤的脑保护机制。设计:以动物为观察对象的随机对照试验。单位:湖北省人民医院。材料:实验于2004-10/2005-02在武汉大学人民医院实验中心进行,选取健康清洁级SD大鼠50只。方法:将SD大鼠50只,先随机选取10只分正常组和假手术组,每组5只;余下的40只随机分为常温脑缺血组和亚低温脑缺血组,每组20只。除正常组5只外,其余大鼠均采用Longa改良线拴法建立可逆的大鼠左侧大脑中动脉线栓模型。假手术组及常温组置于20℃室温,肛温稳定在37℃左右;亚低温组将大鼠置于4℃环境中,全身采用亚低温方法,控制大鼠肛温在(33.0±1.0)℃,缺血结束后立即自然复温,脑缺血3h后开始再灌注过程。所有造模大鼠均进行神经功能缺失评分(0分为无神经缺损症状;1分为不能伸展对侧前爪;2分为行走时向偏瘫侧转圈;3分为向偏瘫侧倾倒;4分为不能自发行走,意识丧失)。主要观察指标:观察缺血脑组织大鼠的肿瘤坏死因子和白细胞介素-1的表达,脑梗死灶体积百分比和神经功能评分。结果:实验过程中有15只大鼠因颅内出血、麻醉意外、神经功能缺失评分不满足要求而被剔除,随机补充15只造模成功大鼠,进入结果分析大鼠保持50只大鼠。①肿瘤坏死因子免疫组化染色阳性细胞数:正常组和假手术组差异无显著性意义(3.54±1.24,3.71±1.50)个/视野;亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低(31.94±7.23,69.20±9.43)个/视野,F=179.16,P<0.001。②白细胞介素-1免疫组化染色阳性细胞数:正常组和假手术组差异无显著性意义(3.20±1.34,3.89±2.08)个/视野;亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低(28.95±4.97,55.79±7.93)个/视野,F=174.95,P<0.001。③梗死灶体积百分比:亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低(21.06±2.42)%,(30.32±2.71),F=374.87,P<0.001。④神经功能评分:亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低(1.35±0.27)%,(2.04±0.34)%,F=117.17,P<0.001。结论:①亚低温脑缺血组大鼠脑梗死灶体积较常温脑缺血组明显缩小,提示亚低温对缺血神经元具有保护作用。②正常组和假手术组仅见少许肿瘤坏死因子和白细胞介素1阳性表达,而缺血后再灌注24h脑缺血区即有较多阳性细胞表达,提示脑缺血启动了炎性细胞因子表达,诱发炎症级联反应,从而加重脑缺血再灌注损伤,因此对炎症级联反应的抑制是发挥脑保护作用的重要机制之一。     

LRG在脂多糖预处理诱导大鼠脑保护效应中的作用研究

目的:通过测定不同组大鼠脑缺血/再灌注损伤模型中脂多糖应答基因分子(Iipopolysaccharide response gene,LRG)表达水平的变化与血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及大鼠神经功能评分和脑梗死容积之间的关系,探索脂多糖(Iipopolysaccharide,LPS)预处理诱导脑保护效应的核心分子机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血对照组和脂多糖预处理组.采用戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用大脑中动脉栓塞模型制备大鼠脑缺血/再灌注模型.免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算LRG分子表达水平的变化,放射免疫法测定血浆CGRP、ET-1和TNF-α浓度,采用gareia评分法进行神经功能评分,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算脑梗死容积.结果:相比于缺血对照组,脂多糖预处理组大鼠脑缺血/再灌注后72 h LRG表达水平明显上调,血浆CGRP浓度显著增高,而血浆ET-1和血清TNF-α浓度则显著降低,同时,脂多糖预处理组大鼠神经功能评分较缺血对照组明显改善,脑梗死容积也显著缩小.结论:脂多糖预处理可诱导LRG分子表达水平上调,显著降低ET-1、TNF-α而增加CGRP浓度,从而对急性脑缺血再灌注损伤产生一定的保护效应.     

血管生成素样蛋白 2（ANGPTL2）对大鼠局灶性脑缺血 /再灌注损伤的炎症保护机制研究

目的　探讨血管生成素样蛋白2（Angiogenin-like protein 2,ANGPTL2）在大鼠缺血/ 再灌注后脑损伤过程中 的炎症保护机制。方法　选择健康雄性Wister 大鼠60 只,建立大鼠局灶性脑缺血/ 再灌注损伤模型,随机分为假手术 组和ANGPTL2 组。建模后6 , 12 , 24 , 48 和72 h 后,采用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）以及苏木精- 伊 红染色法（hematoxylin-eosin,HE）检测每组大鼠体内ANGPTL2 的表达水平。在建模48 h 后分别记录每组大鼠的神经 功能评分,检测其脑组织含水量、血脑屏障（blood brain barrier,BBB）通透性以及脑梗死体积。采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 在建模前(T0)、建模后2 h(T1)、建模后6 h(T2)、建模后12 h(T3) 和建模后24 h(T4) 分别检测大鼠血清中S-100β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）和白细胞介素-1（interleukin-1, IL-1）的表达水平。结果　在缺血30 和90 min 中的ANGPTL2 组再灌注6,12,24,48 和72 h 的ANGPTL2 mRNA 表 达水平均高于假手术组。ANGPTL2 组大鼠的脑组织含水量、伊水思蓝含量和脑梗死体积均显著低于假手术组,而神经 功能评分高于假手术组,差异均有统计学意义（t =2.431~6.058, 均P ＜ 0.05）。相较于T0,大鼠在T1 时的S-100B 显著 增加,随着建模时间的延长,S-100β 水平逐渐降低,并且与T0 的差异均有统计学意义（t =2.346~3.649, 均P ＜ 0.05）。 相较于T0,ANGPTL2 组大鼠在T1,T2,T3,T4 时血清中的TNF-α 和IL-1 水平均显著升高,且差异具有统计学意义 （t =5.036~9.775, 均P ＜ 0.05）。结论　ANGPTL2 可以降低大鼠局灶性脑缺血/ 再灌注后血脑屏障的通透性,并减轻脑 血管炎症反应,对脑缺血/ 再灌注损伤具有保护作用。     

经颈内动脉冲洗治疗急性脑缺血大鼠的实验研究

目的：观察经颈内动脉冲洗法对急性脑缺血大鼠脑损伤程度的影响。方法：采用改良的MCAO方法造模，MCA梗阻2h后，冲洗组于再灌注超早期经颈内动脉分别注入．3ml生理盐水或中药溶液，对照组于腹腔内注入等体积中药溶液。再灌注12、24和48h，测定大鼠神经功能缺损评分。再灌注48h，测定脑梗死体积。结果：缺血再灌注48h后，和模型组相比，中药冲洗组和腹腔给药组脑梗死体积明显缩小，神经功能缺损明显减轻。中药冲洗组和腹腔给药组相比，两组在脑梗死体积和神经功能缺损评分上有显著差异。结论：(1)经颈内动脉冲洗法减轻急性脑缺血后的脑损伤程度作用要优于腹腔给药法。(2)经颈内动脉冲洗法对于急性脑缺血后的脑损伤保护作用与不同药物有关，祛风通络的中药具有减少急性缺血性大脑损伤程度的作用。     

JAK-STAT通路抑制剂和自由基清除剂联合应用对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究

目的 研究联用Janus激酶信号转导及转录激活因子(JAK-STAT)信号通路抑制剂AG490和自由基清除剂二甲基硫脲(DMTU)对大鼠局灶忭脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及其剂蹙-效应关系.方法 制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型.选择雄性SD大鼠.按照随机数字表法分组,每组10只.实验1 设I/R模型组、二甲亚砜(DMSO)对照组、生理盐水(NS)对照组、AG490组、DMTU组以及AG490联合DMTU(A+D)组;实验2分为模型组及高、中、低剂量联合组.于I/R 24、48和72 h对各组人鼠进行神经行为学评分(NBS);72 h后处死动物,测量其脑梗死体积.结果 I/R 24、48和72 h A+D组、AG490组和DMTU组NBS明显高于I/R模型组,脑梗死体积明显小于I/R模型组,其中A+D组脑梗死体积较AG490组和DMTU组明显减小(P均＜0.05).高、中剂链联合组NBS明显高于低剂量联合组和模型组.脑梗死体积明显小于后两组,其中高剂量联合组脑梗死体积较中剂量联合组明显减小(P均＜0.05).而低剂量联合组与模型组之间差异无统计学意义.结论 AG490和DMTU有明显的协同脑保护作用,并呈现剂量依赖性.     

姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用的机制。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，50只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和100mg／kg、300mg／kg姜黄素治疗组。缺血组和姜黄素治疗组分别在脑缺血再灌注后24h处死，观察大鼠神经功能缺失的评分．应用TTC染色观察梗死体积，应用TUNEL法及免疫组化染色检测脑组织凋亡细胞数及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与损伤模型组比较．姜黄素治疗组改善大鼠神经功能的受损程度和减少脑梗死体积．各剂量姜黄素治疗组均可明显减少TUNEL染色阳性细胞数（P〈0.01），明显增加Bcl-2蛋白表达（P〈0.01），并且姜黄素治疗组Bax表达低于缺血组（P〈0．05）。结论：姜黄素可通过上调Bcl-2蛋白下调Bax蛋白表达而减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡．从而改善受损的神经功能．对脑缺血再灌注损伤起保护作用．