脑低灌注对大鼠海马胆碱能神经功能指标的变化

目的探讨脑低灌注大鼠海马胆碱能神经功能状态及细胞凋亡的变化。方法SD大鼠40只,随机分为2VO模型组和假手术组,每组20只;永久性阻断双侧颈总动脉制作2VO模型,造成脑部持续性低灌注状态。观察大鼠术后学习记忆能力的改变、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和促凋亡指标Bax在海马的表达,以及海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化。结果大鼠2VO术后14d和21d表现出学习记忆障碍,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);2VO模型组海马ChAT表达和海马AChE活性均较假手术组明显降低(P<0.01),而海马Bax的阳性细胞数较假手术组明显增加(P<0.01)。结论脑低灌注破坏海马胆碱能神经功能,学习记忆能力下降。细胞凋亡可能是胆碱能神经功能障碍的主要原因。     

脑慢性低灌注老龄大鼠海马ε型蛋白激酶C及α分泌酶ADAM17表达的变化

目的观察脑慢性低灌注对老龄大鼠海马组织ε型蛋白激酶C(PKCε)及α分泌酶ADAM17蛋白表达的影响。方法将老龄大鼠随机分为假手术组和低灌注组,低灌注组永久性阻断双侧颈总动脉,制作脑慢性低灌注模型;采用Y型电迷宫分别于术后14和28d检测大鼠学习记忆能力;采用免疫组化法和免疫印迹法检测上述时间点海马组织PKCε和ADAM17的表达。结果低灌注组术后14和28d学习记忆能力较假手术组减退(P<0.01);与假手术组比较,低灌注组术后各时间点大鼠海马PKCε和ADAM17表达明显下降(P均<0.01)。结论脑慢性低灌注损害老龄大鼠学习记忆能力,导致痴呆发生,其机制可能与海马PKCε表达下降有关,而PKCε参与调节α分泌酶的表达,推测PKCε表达的下调,导致ADAM17表达减少,间接促进β淀粉样蛋白(Aβ)生成,损伤脑组织形成痴呆。     

米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响

目的观察米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响,为慢性脑低灌注认知功能障碍的治疗提供依据。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、慢性脑低灌注组、米诺环素治疗组。结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注模型,米诺环素治疗组在慢性脑低灌注模型的基础上连续给予50mg/kg/d的米诺环素灌胃。观察时间点分别为造模后1个月、2个月和3个月。采用Morris水迷宫对大鼠进行定位航行潜伏期和空间探索时间检测后,断头取脑,采用免疫组织化学法检测海马区脑组织BACE-1和Aβ。结果在造模后1个月、2个月和3个月时间点,模型组定位航行潜伏期较假手术组明显延长(P<0.05,P<0.01),空间探索时间明显减少(P<0.01);治疗组潜伏期较模型组明显缩短(P<0.05,P<0.01),空间探索时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。模型组BACE-1和Aβ的表达较假手术组明显增加(P<0.01),治疗组BACE-1和Aβ的表达较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论米诺环素能改善慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制慢性脑低灌注大鼠BACE-1的表达,减少Aβ的产生有关。     

石榴多酚对慢性脑低灌注大鼠认知功能损害的影响

目的 探讨石榴汁中多酚类的抗氧化作用对由慢性脑低灌注引起的认知功能损害的影响. 方法 健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、双侧颈总动脉结扎组(2VO对照组)、双侧颈总动脉结扎+石榴汁组(2VO+PJ组).采用永久性双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑低灌注大鼠模型,术后1周起假手术组、2VO对照组糖水灌胃,2VO+PJ组石榴汁灌胃,均2 mL/d,共7周.给药结束后应用Moms水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,新鲜组织取材检测皮层、海马组织MDA含量与SOD活力,Western blotting检测4-羟基壬烯醛(4-HNE)蛋白表达水平. 结果 与假手术组对比,2VO对照组大鼠的逃离潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05);2VO+PJ组目标象限探索时间[(6.18±1.32)s]与2VO对照组[(3.96±1.65)s]比较明显延长,逃离潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).与假手术组对比,2VO对照组SOD活力明显降低,MDA含量、4-HNE蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);2VO+PJ组SOD活力[皮层(19.79±3.34) U/mg prot,海马(20.87±0.77) U/mg prot]比2VO对照组[皮层(15.79±0.39)U/mg prot,海马(18.90±0.81) U/mg prot]明显增加,2VO+PJ组MDA含量[皮层(1.21±0.29) nmol/mg prot,海马(2.31±0.35) nmol/mg prot]比2VO对照组(皮层(1.74±0.42) nmol/mg prot,海马(2.86±0.51)nmol/mg prot]明显降低,2VO+PJ组4-HNE蛋白表达水平比2VO对照组显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 石榴多酚抗氧化作用可减轻慢性脑低灌注引发的氧化应激所导致的认知功能损害.     

慢性脑低灌注大鼠海马缝隙连接蛋白32和36的表达变化

目的：观察慢性脑低灌注大鼠海马组织中缝隙连接蛋白（Cx）32和Cx36的变化,探讨其在慢性脑低灌注认知功能损害中的作用。方法：双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）制作慢性脑低灌注模型,Morris水迷宫检测2VO大鼠空间学习记忆能力变化,免疫组化检测2VO大鼠海马各区Cx32和Cx36的表达水平。结果：慢性脑低灌注大鼠的空间学习记忆能力较假手术对照组显著下降,海马Cx32和Cx36的表达也有降低。结论：Cx32和Cx36可能参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损害。     

依达拉奉对慢性脑低灌注大鼠脑自由基代谢及海马CA1区HIF-1α表达的影响

目的:观察依达拉奉对慢性脑低灌注大鼠前脑组织SOD、MDA代谢变化及海马CA1区HIF-1α表达的影响,并探讨其意义。方法:实验分假手术组,模型组及依达拉奉组,后两组采用永久性大鼠双侧劲总动脉结扎术(2-vesselocclusion,2VO)制备慢性脑低灌注模型,各组在术后八周后行水迷宫试验后断头,取前脑组织制备成10%脑组织匀浆检测其SOD活性及MDA含量,并采用免疫组化技术观察海马CA1区HIF-1α表达变化。结果:模型组与假手术组相比水迷宫完成时间显著延长(P<0.05),前脑组织SOD活性降低,MDA含量增加(P<0.01),海马CA1区可见HIF-1α少量表达。依达拉奉组较模型组水迷宫结果显著改善(P<0.01),前脑组织SOD活性增加,MDA含量减少(P<0.01),且海马CA1区可见HIF-1α大量表达。结论:慢性脑低灌注可显著损害大鼠空间学习记忆能力,依达拉奉可能通过抑制黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤氧化酶活性,降低羟自由基的浓度,促进HIF-1α表达等多种途径改善血管性认知障。     

20008/慢性脑血流低灌注对大鼠海马β-和γ-分泌酶活性的影响

目的：研究慢性脑血流低灌注条件下海马区域β-和γ-分泌酶活性变化。方法： 5月龄SD雄性大鼠行双侧颈总动脉结扎,随机分为术后10d、30d、90d和180d组。Morris水迷宫实验检测动物行为学改变,直接荧光法检测各组海马组织β-和γ-分泌酶活性。结果：　Morris水迷宫实验结果显示,大鼠在术后30d即出现学习记忆能力下降,该变化持续至术后180d,呈进行性改变,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0. 05);β-分泌酶活性从低灌注术后10d开始升高（P < 0. 05）,持续至180d（P < 0. 01）,平均活性增高14.25%;γ-分泌酶活性与β-分泌酶活性变化趋势一致,平均活性增高10.6%。结论：慢性脑血流低灌注可导致实验动物学习记忆能力下降,海马组织中β-和γ-分泌酶活性升高,可能导致β-淀粉样蛋白产生增多,在老年痴呆早期发病过程中起着重要作用。     

雷公藤多甙对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子和磷酸化tau蛋白表达的影响

目的 探讨雷公藤多甙(TWP)对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化tau蛋白表达的影响.方法 105只SD大鼠随机分为正常对照组、TWP对照组、假手术组、低灌注模型组、生理盐水组、TWP低剂量组和TWP高剂量组.采用永久性结扎双侧颈总动脉建立慢性脑低灌注模型;TWP低、高剂量组及生理盐水组分别予以TWP 10 mg/(kg·d)、30 mg/(kg·d)及生理盐水连续灌胃;TWP对照组予以TWP 30 mg/(kg·d)连续灌胃.用免疫组化染色法测定实验开始后1个月、2个月和3个月时各组大鼠海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达.结果 1个月、2个月时,生理盐水组和低灌注模型组海马CA1区VEGF表达较正常对照组、TWP对照组和假手术组明显增高(均P<0.05),TWP高、低剂量组VEGF表达较生理盐水组和低灌注模型组明显增高(均P<0.05);3个月时各组间表达差异无统计学意义.1个月时各组间磷酸化tau蛋白表达差异无统计学意义;2个月、3个月时,TWP高、低剂量组磷酸化tau蛋白表达水平较正常对照组、TWP对照组和假手术组明显增高(均P<0.05),较生理盐水组和低灌注模型组明显降低(均P<0.05).结论 TWP能促进慢性脑低灌注大鼠海马CA1区VEGF表达,抑制磷酸化tau蛋白表达.     

慢性脑低灌注大鼠海马Arc低表达与其认知功能障碍的相关性研究

目的 探讨慢性脑低灌注大鼠海马活性调节的细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associated protein,Arc)的低表达与其认知功能障碍的相关性。方法 大鼠慢性脑低灌注模型使用持久性双颈总动脉结扎术(2-vessel occlusion,2-VO); 大鼠随机分成假手术组和2-VO组,每组各6只。术后第8周行Morris水迷宫评价其认知功能; 实时定量聚合酶链式反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法检测大鼠海马Arc mRNA及蛋白表达水平。结果(1)2-VO组大鼠第2～5 d的逃逸潜伏期比假手术组明显延长(P<0.01)及其在原平台区域游泳时间明显比假手术组短(P<0.01);(2)2-VO组大鼠海马Arc mRNA水平及免疫反应条带相对灰度值分别比假手术组明显降低(P均<0.01);(3)空间探索实验中2-VO大鼠在原平台区域游泳时间与海马Arc免疫反应条带相对灰度值呈正相关(r=0.7085,P<0.05)。结论 慢性脑低灌注大鼠的认知功能障碍可能与海马Arc的低表达相关。     

脑脉泰对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠脑血流量及海马神经元凋亡的影响

目的研究慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠海马区局部脑血流量(rCBF)改变及细胞凋亡情况,探讨脑脉泰治疗血管性痴呆的疗效及可能机制。方法采用双侧颈总动脉永久结扎法(2VO)制备慢性脑缺血致血管性痴呆的动物模型,随机分为假手术对照组(12只)、模型对照组(12只)、给药组(脑脉泰)(12只)。手术后4周,HE染色观察神经元形态学改变,免疫组化染色检测海马区Caspase-3、bax蛋白表达变化。应用激光多普勒血流仪检测各组大鼠海马局部脑血流量。结果模型对照组大鼠海马Caspase-3、Bax阳性细胞灰度平均值低于假手术对照组、给药组,差异均具有显著性(P0.05);模型对照组海马rCBF低于假手术对照组、给药组,差异均具有显著性(P0.05)。结论VaD模型大鼠海马rCBF下降,海马神经细胞凋亡增加;脑脉泰能增加实验大鼠海马局部脑血流量,抑制海马神经细胞凋亡。     

紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠认知功能的保护作用

目的观察紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠所致认知损害的保护作用。方法雄性SD大鼠经双侧颈动脉结扎建立慢性脑低灌注损伤大鼠模型,将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组和紫草素(SK)治疗组。以Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力;取大鼠海马组织测定其丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力、乙酰胆碱转移酶(ChAT)含量。结果 SK高剂量组0.7mg·100g~(-1)·d~(-1))、低剂量组0.35mg·100g~(-1)·d~(-1)均可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠学习记忆障碍,可增加海马组织中SOD活性、抑制MDA的形成(P0.01);降低TChE含量、提高ChAT活性(P0.01)。结论 SK可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠模型的学习记忆能力,减轻氧化应激损伤、增强中枢胆碱能系统功能。     

EGb761对慢性低氧低糖培养的大鼠海马神经元β分泌酶的影响

目的 研究银杏叶制剂EGb761（金钠多）对慢性低氧低糖培养大鼠海马神经元β分泌酶的影响，探讨其防治痴呆的可能机制。方法 取新生24h的Wistar大鼠海马神经元原代培养，培养第7d行低氧低糖培养和EGb 761（金纳多100ug/ml）药物干预，以荧光法检测β分泌酶活性，Western blot检测β分泌酶BACE1蛋白表达。结果 低氧低糖培养12 h、24 h、36 h组海马神经元较正常培养对照组β分泌酶活性升高（P＜0.05）；金纳多药物干预12 h、24 h、36 h组与相应时间非药物干预组相比海马神经元β分泌酶活性降低（P＜0.05）。低氧低糖培养12 h、24 h、36 h组海马神经元β分泌酶BACE1表达水平升高（P＜0.05）；金纳多药物干预12 h、24 h、36 h组与相应时间非药物干预组相比β分泌酶BACE1表达水平降低（P＜0.05）。结论 金钠多对慢性低氧低糖培养海马神经元β分泌酶活性和表达的影响是其防治痴呆的可能机制之一。     

PKA-CREB信号转导通路在大鼠慢性脑缺血所致认知功能障碍中的作用

目的:观察PKA-CREB信号转导通路在慢性脑缺血所致大鼠认知功能损害中的作用。方法:结扎大鼠双侧颈总动脉,制成慢性脑缺血模型,分缺血8周组和假手术对照组,术后第8周时用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力。用Westernbloting检测大鼠海马胞核内PKAca及pCREB的表达。结果:缺血组与假手术组相比学习记忆能力明显下降(P<0.05),缺血组大鼠海马中PKAca及pCREB的表达与假手术组相比也下降(P<0.05),且两者之间的下降存在正相关关系。结论:PKA-CREB信号转导通路可能参与了慢性脑缺血所致大鼠认知功能的损害。     

脑脉泰对慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠脑血流量及海马神经元凋亡的影响

目的 研究慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠海马区局部脑血流量（rCBF）改变及细胞凋亡情况,探讨脑脉泰治疗血管性痴呆的疗效及可能机制。方法 采用双侧劲总动脉永久结扎法(2VO)制备慢性前脑缺血致血管性痴呆的动物模型,随机分为假手术对照组,模型对照组,给药组（脑脉泰）。手术后4周,HE染色观察神经元形态学改变,免疫组化染色检测海马区Caspase-3,bax蛋白表达变化。应用激光多普勒血流仪检测各组大鼠海马局部脑血流量。 结果 模型组大鼠海马Caspase-3、Bax阳性细胞灰度平均值低于假手术组、给药组,差异均具有显著性（P<0.05）;模型组海马rCBF低于假手术组、给药组,差异均具有显著性（P<0.05）。 结论 VD模型大鼠海马rCBF下降,海马神经细胞凋亡增加;脑脉泰可能通过增加海马局部脑血流量,直接或间接抑制海马神经细胞凋亡从而减轻VD认知功能障碍。     

血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性以及美金刚干预作用的研究

目的研究血管性痴呆(VD)大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体(NR2B)水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的变化以及美金刚的干预作用。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,随机分为VD模型组(VD组)和美金刚治疗组(美金刚组)。于术后4周、8周、12周、16周用Morris水迷宫试验检测VD组和美金刚组大鼠的学习记忆水平,用RT-PCR法检测大鼠海马NR2B水平,用32P掺入法检测大鼠海马CaMKⅡ的活性;并与假手术组比较。结果与假手术组比较,VD组大鼠术后各时间点的学习记忆能力均显著下降(均P<0.01);海马NR2B的水平术后4周时明显增高(P<0.05),术后8～16周显著降低(均P<0.01);海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后8周下降,术后12周、16周明显降低(均P<0.01)。美金刚组术后4周时上述3项检测结果与VD组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),而与假手术组比较,差异均无统计学意义;在其他时间点,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05～0.01);学习记忆水平和NR2B水平术后8周、12周明显高于VD组(P<0...     

β-七叶皂甙钠对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨β-七叶皂甙钠对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护效果。方法用健康雄性Sprague-Dawley大鼠74只,分为假手术组、缺血-再灌注(IR)组、治疗组,制备局灶性脑缺血-再灌注模型,术后2h治疗组予以腹腔注射β-七叶皂甙钠(5.0mg/kg),另2组给予腹腔注射等量生理盐水。再灌注48h时处死检测脑梗死体积、脑水肿、神经功能评分、NISSL染色、TUNEL染色和caspase-3活性。结果予β-七叶皂甙钠治疗后,大鼠的脑梗死体积显著下降(17±8)%。I/R组的脑含水量较正常对照和假手术组的TUNEL显著增加,而七叶皂甙钠治疗后的脑含水量显著下降。与假手术组相比,I/R组皮层和海马阳性细胞显著增加,而β-七叶皂甙钠治疗能显著降低TUNEL阳性细胞数。治疗组的皮层和海马caspase-3活性显著低于I/R组。结论缺血前及再灌注后采用七叶皂甙钠治疗能有效降低脑梗死体积,表现为脑水肿减轻、神经功能得到改善,可能与治疗能增加存活神经元数和抑制神经元凋亡(凋亡酶活性)有关。     

慢性低氧低糖培养影响新生大鼠海马神经元α-分泌酶的实验研究

目的探讨慢性低氧低糖培养对新生大鼠海马神经元α-分泌酶活性及表达的影响。方法取新生24h的Wistar大鼠海马原代培养神经元并予以鉴定,培养第七天予以12h、24h、36h低氧低糖培养干预,MTT法检测海马神经元的活力,荧光法检测α、β-分泌酶活性,Western blot检测α-分泌酶蛋白表达水平。结果低氧低糖培养12小时组海马神经元α-分泌酶活性升高(P<0.01),低氧低糖培养24h、36h组α-分泌酶(TACE)活性无明显变化(P>0.05),低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元β-分泌酶(BACE1)活性升高(P<0.05);低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元α-分泌酶蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论慢性低氧低糖培养降低新生大鼠海马神经元α-分泌酶的表达。     

盐酸法舒地尔对慢性脑低灌注损伤大鼠海马细胞的保护作用

目的 观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔(hydroxy fasudil, HF)对慢性低灌注脑缺血所致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用。方法 采用永久性结扎大鼠双侧颈总动脉(permanent occlusion of the bilateral CCA, 2VO)制备大鼠慢性不完全性全脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组和HF治疗组,运用Morris 水迷宫行为学方法检测大鼠空间学习记忆能力; 用HE染色观察海马组织形态学改变。结果 Morris 水迷宫检测发现模型组大鼠学习记忆能力受损,与假手术组比较逃避潜伏期延长、空间辨别能力下降; 组织学观察模型组大鼠海马CA1细胞发生丢失,组织结构异常。连续给予盐酸法舒地尔30 d能改善大鼠学习记忆功能,减少脑缺血所致的大鼠海马神经细胞丢失。结论 盐酸法舒地尔可减少慢性脑缺血所致的大鼠海马神经元的丢失,改善学习记忆功能。     

脑脉泰对慢性脑缺血大鼠认知功能的保护作用及其机制研究

目的研究脑脉泰影响脑组织神经生长因子(NGF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,进而改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。方法采用大鼠双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)制备慢性脑缺血模型。术后分别给予脑脉泰不同剂量灌胃治疗6 w。应用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力、HE染色观察海马CA1区神经元形态、免疫组化方法检测大鼠脑组织NGF及GFAP的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠的学习能力和记忆能力降低,脑组织中NGF表达减少(P<0.01),GFAP表达增多(P<0.01);脑脉泰给药能够改善大鼠的记忆和学习能力,增加脑组织中NGF表达(与模型组相比,低剂量组P<0.05,高剂量组P<0.01),降低GFAP表达(与模型组相比,低、高剂量均为P<0.01)。结论脑脉泰可能通过提高脑组织NGF和降低GFAP表达来改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。     

脑血流低灌注对大鼠突触后致密物结构及PSD-95蛋白表达的影响

目的研究脑血流低灌注对大鼠学习记忆、脑组织突触后致密物(postsynaptic density,PSD)超微结构及PSD-95蛋白表达的影响。方法利用双侧颈总动脉永久性结扎制备SD大鼠脑血流低灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组和脑血流低灌注模型组。采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆情况。采用透射电镜结合Image Pro Plus图像分析系统定量分析大鼠海马突触数量、PSD长度和厚度。采用免疫组化观察大鼠脑组织PSD-95的表达。结果脑血流低灌注大鼠空间参考记忆及工作记忆能力减退,在第2至4天游泳训练时间段,搜寻隐藏平台路径较假手术组明显增加(P0.05);撤离平台后,在原平台象限游泳时间及路径较假手术组降低,准确穿越原平台所在位置次数减少(P0.05);当平台移动到第Ⅱ、Ⅳ象限时,搜索移动平台路径较假手术组明显延长(P0.05)。与假手术组比较,脑血流低灌注大鼠海马突触数量明显减少,PSD长度变短,厚度变薄(P0.05);海马CA1区、丘脑前内侧核、颞叶皮层PSD-95积分吸光度降低(P0.05)。结论脑血流低灌注所致学习记忆功能减退与海马突触后致密物结构损伤、PSD-95蛋白表达下降有关。